缺氧培养的肺动脉平滑肌细胞的增殖与内皮素自分泌关系的探讨

缺氧培养的肺动脉平滑肌细胞的增殖与内皮素自分泌关系的探讨第三军医大学高原医学研究室病理生理教研室（重庆６３００３８）王培勇１刘健２曾强３罗德成孙秉庸缺氧是否通过影响血管平滑肌细胞的自分泌功能而参与缺氧性肺动脉高压的发生尚不清楚，本实验探讨内皮素－１...     

缺氧内皮细胞介导肺动脉平滑肌细胞血小板源性生长因子mRNA表达

目的探讨缺氧时肺动脉内皮细胞对肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ自分泌的影响。方法实验分３组：无血清培养组、常氧性内皮细胞条件培养液组及缺氧性内皮细胞条件培养液组。应用原位杂交和图像分析技术检测猪肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ表达。结果无血清培养的肺动脉平滑肌细胞有ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ弱表达;内皮细胞条件培养液明显增加肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦＡ和ＰＤＧＦＢ链ｍＲＮＡ表达,两者分别为无血清培养组的１．８倍和１．７倍（Ｐ＜０．０１）,为常氧内皮细胞条件培养液培养组的１．４倍和１．５倍（Ｐ＜０．０１）。结论缺氧时肺动脉内皮细胞可以介导肺动脉平滑肌细胞ＰＤＧＦ的自分泌,可能在缺氧性肺动脉高压血管构形改建中具有重要作用     

缺氧对肺动脉内皮细胞和肺动脉平滑肌细胞分泌心钠素的影响

缺氧对肺动脉内皮细胞和肺动脉平滑肌细胞分泌心钠素的影响第三军医大学新桥医院心内科（重庆６３００３７）刘健王培勇许蜀闽１高文祥１孙秉庸本实验应用细胞培养、放免测定法观察缺氧对培养的小牛肺动脉内皮细胞（ＰＡＥＣ）和肺动脉平滑肌细胞（ＰＡＳＭ）自分泌心钠素...     

VEGF和PCNA在慢性低氧性肺动脉及高压大鼠主动脉、肺动脉平滑肌细胞中表达

目的研究慢性低氧性肺动脉高压(PAH)发生过程中,血管内皮生长因子(VEGF)及细胞核增殖抗原(PCNA)在体循环血管、肺循环血管平滑肌细胞中的表达。方法利用低压缺氧舱建立大鼠缺氧性肺动脉高压模型。实验分为3组即正常氧组、缺氧2wk组和缺氧3wk组。用免疫组化染色和图像分析,检测主动脉、肺动脉主干及肺内小动脉平滑肌细胞中VEGF及PCNA的表达量。结果VEGF在正常氧组大鼠的主动脉、肺动脉主干及肺内小动脉平滑肌内均有表达;缺氧组大鼠肺动脉主干及肺内小动脉平滑肌细胞内VEGF的表达明显增强并随着缺氧时间的延长而增加;主动脉平滑肌内VEGF的表达量无明显变化。PCNA在正常氧组大鼠的主动脉、肺动脉主干及肺内小动脉平滑肌内均有微弱表达;但缺氧时只有肺小动脉平滑肌内其表达量增加;主动脉、肺动脉主干平滑肌内PCNA的表达量无明显差别。结论在缺氧性肺动脉高压的发生过程中,VEGF在体循环血管、肺循环血管平滑肌细胞中的表达量具有差异性,提示其可能在肺动脉高压形成过程中起重要作用。     

缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞~(45)Ca~(2 )跨膜内流及细胞内钙含量的影响

为探讨缺氧时血管平滑肌细胞的钙动力学改变及其在HPV发生中的意义,我们研究了:(一)肺泡性缺氧对大鼠灌流肺的肺动脉压和肺动脉平滑肌细胞~(45)Ca~(2 )跨膜内流的影响:Wistar大鼠22只,随机分为缺氧组     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞相互作用对细胞内环核苷酸的影响

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞相互作用对细胞内环核苷酸的影响第三军医大学高原医学研究室病理生理教研室（重庆６３００３８）王培勇１刘健２于中和３许蜀闽王俊元孙秉庸血管内皮细胞和血管平滑肌细胞在结构和功能上关系密切，二者的相互作用参与血管舒缩和...     

缺氧对兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的: 观察缺氧对培养的兔胸主动脉平滑肌细胞增殖的影响及其可能的机制。方法: 采用析因实验设计, 测定在正常或缺氧环境下, 不同浓度的胎牛血清对培养的血管平滑肌细胞数量、[³H]-TdR掺入量、MTT比色以及细胞cGMP水平的影响; 透射电镜观察细胞超微结构。结果: 缺氧组平滑肌细胞的数量、[³H]-TdR掺入量以及MTT比色显著多于常氧组(P<0.01); 电镜下可见缺氧组较正常组细胞器发达, 可见大量分泌胞, 少量髓样变线粒体; 缺氧组平滑肌细胞内的cGMP浓度明显高于常氧组。结论: 缺氧可促进血管平滑肌细胞DNA合成, 促进细胞增殖, 可能与提高细胞内的cGMP水平有关。     

缺氧大鼠肺内动脉壁FN及LN的改变

目的　利用大鼠常压缺氧模型 ,采用形态计量学方法 ,系统观察缺氧大鼠肺动脉壁FN及LN的改变 ,进一步探讨缺氧性肺血管组织重建的机制。　方法　利用常压缺氧舱建立大鼠缺氧模型 ,取肺分别进行免疫组织化学染色和电镜观察。　结果　缺氧后肺动脉壁上FN及LN均增加 ,这一变化在缺氧 7d时最明显 ,且FN增加的程度及含量远远高于LN。电镜观察显示 ,肺动脉中膜平滑肌细胞有由收缩表型转化为合成表型的倾向。　结论　肺动脉壁上FN及LN增加 ,不仅可以增加血管紧张性及血管壁厚度 ,同时也为诱导中膜平滑肌细胞表型转换及增生提供了条件     

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互影响

缺氧时肺动脉内皮细胞与肺动脉平滑肌细胞增殖的相互影响第三军医大学新桥医院心内科（重庆６３００３７）刘健何作云王培勇于中和１许蜀闽２王俊元２孙秉庸２血管内皮细胞和血管平滑肌细胞在结构和功能上关系密切，二者的相互作用参与血管舒缩和血管壁结构的调节。本文...     

钙敏感受体在缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用

目的:观察钙敏感受体(CaSR)在缺氧诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用。方法:Ⅱ型胶原酶消化法提取、培养大鼠肺动脉平滑肌细胞。应用Western blotting技术及免疫荧光染色分析CaSR蛋白在肺动脉平滑肌的表达;采用激光共聚焦扫描技术检测不同处理因素对细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,应用MTT法分析不同处理因素对细胞存活率的影响。结果:大鼠肺动脉平滑肌细胞有CaSR蛋白表达。缺氧能够增加CaSR和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达、细胞存活率及[Ca2+]i(与对照组比较,P0.05)。GdCl3(CaSR激动剂)能够增强缺氧的上述作用,NPS2390(CaSR抑制剂)则能够减弱缺氧的作用。结论:缺氧诱导的CaSR表达增加参与了缺氧性肺动脉平滑肌细胞增殖。     

缺氧时肺动脉内皮细胞对平滑肌细胞胞浆游离钙的影响

本文应用Ca~(2 ) 荧光探针Fura-2/AM,研究猪肺动脉内皮细胞条件培养液对猪肺动脉平滑肌细胞胞浆游离钙浓度([Ca~(2 )]_i)的影响;同时观察缺氧对肺动脉内皮细胞[Ca~(2 )]_i的直接作用。实验发现:1.常氧培养的内皮细胞培养液可使平滑肌细胞[Ca~(2 )]_i升高,而缺氧培养的内皮细胞培养液较常氧培养的内皮细胞培养液作用显     

大鼠肺内动脉平滑肌细胞分离及穿孔膜片钳记录

目的 :肺动脉平滑肌细胞钾离子通道活性与缺氧性肺动脉高压关系是近年研究热点 ,改变这些钾离子通道活性能直接影响血管张力。缺氧可阻断延迟整流性钾通道或 /和钙离子激活性钾通道 ,引起肺动脉平滑肌细胞收缩 ,使肺动脉压升高。目前 ,国内有关肺动脉平滑肌细胞钾离子通道活性与缺氧性肺动脉高压关系的研究还很初浅 ,主要与肺动脉平滑肌细胞的急性分离以及膜片钳实验时细胞封接、破膜十分困难有关。大鼠肺内动脉平滑肌细胞电生理研究尚无报道 ,原因与其细胞分离困难更大有关。方法和结果 :利用胶原酶、木瓜蛋白酶酶解消化的方法 ,成功地急性…     

缺氧大鼠肺动脉壁FN及LN的改变

目的：利用大鼠常压缺氧模型,采用形态计量学方法,系统观察缺的氧肺动脉壁FN及LN的改变,进一步探讨缺氧性肺血管组织重建的机制。方法：利用常压缺氧舱建立大鼠缺氧模型,取肺分别进行免疫组织化学染色和电镜观察。结果：缺氧后肺动脉壁上FN及LN均增加,这一变化在缺氧7d时最明显,且FN增加的程度及含量远远高于LN。电镜观察显示,肺动脉中膜平滑肌细胞有由收缩表型转化为合成表型的倾向。结论：肺动脉壁上FN及LN增加,不仅可以增加血管紧张性及血管壁厚度,同时也为诱导中膜平滑肌细胞表型转换及增生提供了条件。     

低氧肺微血管内皮细胞培养液对肺动脉平滑肌细胞的作用

慢性阻塞做肺病作为临床上的常见病，严重危害人们健康，对其病理进程已有多年研究，认识到低氧可以导致肺血管平滑肌细胞增生，肺腺泡及微血管的构型改建。既往人们注意到肺内皮细胞可以分泌一些物质调节一滑肌细胞增生。关于肺做血管内皮细胞（pulmonarymicrovascularendotheliacell，PMEC低氧状态下与平滑肌细胞的关系研究甚少，然而，肺做血管内皮细胞却是最早感受低氧的细胞之一。本研究通过离休培养的大鼠PMH：和大鼠肺动脉平滑肌细胞（pulmonaryarterialsmoothmusclecellPASMC），从细胞相互作用的角度研究低氧对PASMC的作用…     

埃他卡林对原代培养人肺动脉平滑肌细胞转化生长因子β1mRNA表达的影响

目的研究新型ATP敏感性钾（KATP）开放剂埃他卡林（IPT）对缺氧诱导原代培养人肺动脉平滑肌细胞转化生长因子β1（TGF—β1）mRNA表达的影响。方法分离3～4级人肺小动脉,按照组织贴块法原代培养人肺动脉平滑肌细胞,应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RQ-RT—PCR）技术检测细胞TGF—B,mRNA表达情况。结果缺氧使原代培养人肺动脉平滑肌细胞TGF—β1 mRNA表达增加;相同条件下,在缺氧的同时,分别在培养基中加入IPT 10^-7、10^-6、10^-5 mol·L^-1,IPT呈浓度依赖性地抑制细胞TGF—β1 mRNA表达;加入IPT 10^-5 mol·L^-1前30min,预先加入格列本脲（GLI）10^-7、10^-6、10^-5 mol·L^-1,GLI呈浓度依赖性地拮抗IPT的作用。结论IPT通过激活细胞KATP通道,浓度依赖性地抑制缺氧诱导的原代培养人肺动脉平滑肌细胞TGF-β1 mRNA表达增加。     

缺氧内皮细胞培养液对肺动脉平滑肌细胞表型的影响

用细胞培养和形态定量分析方法观察缺氧对肺动脉平滑肌细胞表型的影响。结果显示，缺氧性内皮细胞条件培养液组肺动脉平滑肌细胞的二倍体细胞和α－ｓｍ－ａｃｔｉｎ含量均少于常氧性内皮细胞条件培养液组（Ｐ＜０．０５），尤以肌丝成份减少最明显；粗面内质网和线粒体却显著增多。而直接缺氧组与常氧组无明显差异。提示：缺氧可促使内皮细胞产生和释放某种促平滑肌细胞表型转化的物质或因子，从而改变了肺动脉管壁细胞之间的正常调控关系，导致平滑肌细胞肥大，合成细胞外基质增多。     

缺氧促进猪肺动脉内皮细胞sis／PDGF－B链基因的表达

应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｓｌｏｔ一ｂｌｏｔ杂交技术研究了缺氧对猪肺动脉内皮细胞血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）基因表达的影响。结果表明，缺氧能明显增加肺动脉内皮细胞ＰＤＧＦ一Ｂ链ｍＲＮＡ的表达，而ＰＤＧＦ一Ａ链ｍＲＮＡ表达无明显影响。提示缺氧可能是体内刺激肺动脉内皮细胞ｓｉｓ／ＰＤＧＦ一Ｂ链基因表达的因素之一，通过控制肺动脉平滑肌细胞增生和收缩，在肺动脉高压血管改建中可能具有重要作用。     

15-HETE与ERK1/2在大鼠缺氧性肺动脉收缩中的作用

目的:为揭示缺氧性肺血管收缩机制,探讨细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)是否参与15-羟基二十碳四烯酸（15-HETE）收缩缺氧大鼠肺动脉的过程以及15-HETE对 ERK1/2活性的影响。 方法: 将大鼠置于氧气分数为12.0％的低氧箱中连续9 d形成缺氧模型。完整取出心肺，在显微镜下分离直径0.8-1.0 mm肺动脉剪为3 mm长的动脉环在组织浴槽内进行张力研究。比较15-HETE给药前后肺动脉环张力变化；用ERK1/2上游激酶抑制剂U0126孵育肺动脉环，比较U0126孵育前后15-HETE对缺氧性肺动脉环的收缩作用；机械法去除动脉环内皮，再比较U0126孵育前后15-HETE的收缩作用。酶法分离培养大鼠肺动脉平滑肌细胞。Western blotting方法检测15-HETE作用时间（5-90 min）及浓度（10^-9-10^-6 mol/L）对 ERK1/2 的表达及活性的影响。 结果: 15-HETE对缺氧大鼠肺动脉环有收缩作用，呈浓度-效应关系，与正常对照组比较差异显著（P<0.05）；内皮完整和内皮去除的肺动脉环，U0126孵育前后，15-HETE的缩血管作用都受到抑制，差异显著（均为P<0.05）。Western bloting结果显示，15-HETE明显增强肺动脉血管平滑肌细胞ERK1/2的活性，随时间延长而降低，随浓度增加而增加，但对ERK1/2的蛋白表达无影响。 结论:15-HETE能上调大鼠肺动脉血管平滑肌细胞ERK1/2的活性，提示ERK1/2的活化是15-HETE收缩慢性缺氧大鼠肺动脉的一个重要环节。     

低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞中细胞因子信号转导负调控因子3基因表达的影响

目的：研究低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞（PASMC）中细胞因子信号转导负调控因子3（SOCS3）基因表达的影响。方法： 低氧处理体外培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞，采用半定量RT-PCR，免疫细胞化学法和Western blotting法检测常氧组，低氧2 h、6 h、10 h、16 h、24 h组SOCS3 mRNA和蛋白表达水平。结果：常氧培养肺动脉平滑肌细胞SOCS3 mRNA表达呈阴性，低氧培养2 h组肺动脉平滑肌细胞中SOCS3 mRNA表达升高，6 h组达高峰，10 h组开始下降，24 h检测不到其表达；免疫细胞化学定位分析示SOCS3蛋白仅于肺动脉平滑肌细胞胞浆内表达；Western blot定量分析示SOCS3蛋白与SOCS3 mRNA表达的改变基本一致。 结论： 低氧刺激肺动脉平滑肌细胞中SOCS3表达，提示SOCS3在低氧所致肺血管重建过程中可能发挥重要调节作用。     

内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞环氧合酶血栓素A_2合成酶表达的影响

内皮细胞条件培养液对平滑肌细胞环氧合酶血栓素Ａ２合成酶表达的影响同济医科大学病理生理教研室（武汉４３００３０）于江洲王迪浔本研究旨在初步探讨内皮细胞对平滑肌细胞的旁分泌调节作用。我们应用内皮细胞常氧及缺氧条件培养液分别在常氧下培养平滑肌细胞，经分子杂...