加味四逆散对慢性轻度不可预计性心理应激模型大鼠神经内分泌免疫网络调控作用的研究

目的:观察慢性心理应激对模型大鼠神经内分泌免疫(NIM)网络的影响以及加味四逆散的调治作用。方法:大鼠随机分为6组:雌性正常组,雌性模型组,雌性加味四逆散组,雄性正常组,雄性模型组,雄性加味四逆散组。建立慢性轻度不可预计性心理应激模型,采用放射免疫方法检测大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、血清肾上腺酮(CORT)和促肾上腺皮质激素(ACTH)含量,观察肾上腺/胸腺器官形态学改变,流式细胞仪计数外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+。结果:慢性心理应激大鼠下丘脑—垂体—肾上腺皮质(HPA)轴功能亢进,免疫功能受到抑制。加味四逆散可调节慢性心理应激大鼠HPA轴的兴奋性,改善慢性心理应激大鼠免疫功能改变。结论:慢性轻度不可预计性心理应激模型大鼠NIM网络功能发生异常改变,而加味四逆散对其具有一定的调治作用。     

加味四逆散对慢性应激模型大鼠下丘脑单胺类神经递质的影响

目的:观察加味四逆散对慢性应激模型大鼠下丘脑单胺类神经递质的影响。方法:选择OPEN-FIELD法评分相近的40只成年SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀组、加味四逆散小剂量组和加味四逆散大剂量组,每组各8只。应用分养和长期不可预见的中等强度应激造成大鼠慢性应激抑郁状态。以HPLC-EC法对照研究大鼠下丘脑单胺类神经递质的改变。结果:与对照组比,模型组大鼠下丘脑NE升高,5-HIAA和5-HT降低。与模型组比,氟西汀组、加味四逆散组NE降低而5-HIAA和5-HT升高。结论:慢性应激模型大鼠下丘脑单胺能神经功能活动失常,以去甲肾上腺素的升高和5-羟色胺的下降为主,加味四逆散的作用机理可能与平衡下丘脑单胺能神经的功能状态有关。     

逍遥散对慢性应激状态下大鼠海马神经细胞内糖皮质激素受体表达的影响

探讨逍遥散治疗血清对慢性应激大鼠状态下海马神经细胞内糖皮质激素受体蛋白表达的影响。方法：采用免疫印迹法检测慢性应激大鼠模型血清以及逍遥散治疗血清干预体外培养的海马神经细胞后,其胞内糖皮质激素受体（iGR）表达情况。结果：慢性应激大鼠模型血清与谷氨酸（Glu）共同作用于大鼠海马神经细胞对iGR表达下调的作用最明显,MK-801未能完全阻断iGR的表达下调,逍遥散治疗血清能够明显对抗慢性应激引起的iGR表达下调,但与空白组比较还存在差异,当与MK-801共同作用时,这种对抗iGR含量降低的作用倾向更加显著。结论：模型血清中可能存在Glu-NR以外途径的其他信号通路下调GR表达,逍遥散治疗血清对维持海马神经细胞iGR表达量的稳定起到一定作用,与MK-801可能协同性地促进慢性应激状态下海马负反馈调节功能的恢复。逍遥散可能通过包括Glu-NR-Ca2＋-cAMP-iGR细胞信号传导通路在内的多种途径维持海马神经细胞iGR的稳态,以促进过度的应激反应尽快终止。     

逍遥散对应激损伤大鼠糖皮质激素受体(GR)的调控

目的用逍遥散和GR-受体阻滞剂干预慢性应激损伤大鼠,观察其海马区糖皮质激素受体(GR)亚型表达情况。方法以逍遥散(5.265 g.kg-1)和糖皮质激素受体(GR)受体阻滞剂RU-38486(12.5 g.kg-1)为干预药物,应用慢性不可预知应激对大鼠进行为期3周的造模,在造模的同时给予实验药物,3周后停止刺激,于第22天处死大鼠取材。采用荧光免疫组织化学法,测定各组大鼠海马区GR表达。结果 GR受体阻滞剂RU-38486与中药复方逍遥散可显著上调慢性应激损伤大鼠海马区GR阳性表达。结论逍遥散可以通过促进慢性应激损伤大鼠海马区NR表达上调,从而达到部分恢复慢性应激大鼠HPA轴负反馈功能的作用,起到缓减诸应激症状的疗效。     

加味四逆散对慢性轻度不可预计性心理应激模型大鼠海马损伤的影响

目的观察加味四逆散(JWSND)对慢性轻度不可预计性心理应激大鼠海马损伤的影响。方法成年大鼠随机分为6组:雌性正常对照组,雌性模型组,雌性JWSND组,雄性正常对照组,雄性模型组,雄性JWSND组。建立慢性轻度不可预计性心理应激大鼠模型,比较造模前后糖水偏爱度;采用放射免疫方法检测大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、血清促肾上腺皮质激素(ACTH)含量,2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色比色法测定大鼠海马脑片光密度(OD)值,流式细胞仪法检测海马神经元凋亡率。结果慢性心理应激大鼠糖水偏爱度明显下降(P<0.01或P<0.05),下丘脑-垂体轴功能亢进,海马脑片OD值明显低于正常对照组(P<0.01),细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01);JWSND能明显提高心理应激大鼠糖水偏爱度(P<0.01),明显提高心理应激大鼠海马脑片OD值(P<0.05或P<0.01),降低海马神经元凋亡率(P<0.01)。结论 JWSND可有效减轻海马神经元损伤,此作用可能是其抗应激损伤中枢作用的主要机制之一。     

加味四逆散对慢性心理应激抑郁症大鼠海马损伤的保护作用

目的观察加味四逆散对慢性心理应激抑郁症大鼠海马损伤的保护作用。方法采用多种应激源制作慢性心理应激抑郁症大鼠模型。30只Wistar大鼠分为正常组、模型组、中药组。观察各组大鼠海马神经元凋亡率，测定海马脑源性神经营养因子（BDNF）及其受体TrkB蛋白含量及神经元内Ca^2＋浓度。结果模型组大鼠海马神经元凋亡率较正常组增加，海马BDNF及其受体TrkB蛋白表达降低，神经元内Ca^2＋浓度升高（P〈0．05或P〈0．01）。中药组可降低海马神经元凋亡率，增加BDNF与TrkB蛋白表达，降低神经元内Ca^2＋浓度。结论加味四逆散可能通过上调海马BDNF的表达，降低胞内Ca^2＋，实现抗抑郁的作用。     

四逆散对慢性应激大鼠空间学习记忆能力的影响

目的:观察四逆散对慢性应激大鼠空间学习记忆能力的影响.方法:选取SD大鼠40只,随机分为正常对照组、应激模型组、四逆散低剂量组和四逆散高剂量组,每组10只.建立慢性心理应激动物模型,正常对照组给予0.9％氯化钠溶液2 mL· d-1灌胃;应激模型组给予0.9％氯化钠溶液2mL·d 1灌胃;四逆散低剂量组给予四逆散低浓度药液2mL· d-1灌胃;四逆散高剂量组给予四逆散高浓度药液2mL·d-1灌胃.采用Morris水迷宫实验检测大鼠空间学习记忆能力.结果:定位航行实验结果示,各组大鼠逃避潜伏期组间存在显著差异(P＜0.01);与正常对照组比较,应激模型组、四逆散低剂量组和四逆散高剂量组逃避潜伏期明显延长(P＜0.01,P＜0.05);与应激模型组比较,四逆散低剂量组逃避潜伏期明显缩短(P＜0.05).空间探索实验结果示,入水后前20 s,与正常对照组比较,应激模型组及四逆散低剂量组大鼠穿越原平台区域次数明显减少(P＜0.05),四逆散高剂量组无明显变化(P＞0.05);与四逆散高剂量组比较,应激模型组和四逆散低剂量组明显减少(P＜0.01或P＜0.05)入水120 s后各组穿越原平台区域次数高低次序没有变化,仅四逆散高剂量组较四逆散低剂量组穿越原平台区域次数明显增加(P＜0 05),其余各组比较差异均无统计学意义(P均＞0.05).结论:长期慢性应激刺激可引起大鼠空间学习记忆能力损伤,导致空间学习记忆障碍;四逆散可减轻慢性应激对大鼠空间学习记忆能力的损伤,提高慢性应激大鼠空间学习和记忆能力;不同剂量的四逆散对慢性应激大鼠空间学习和记忆能力的保护作用也有变化.     

加味四逆散对慢性心理性应激胃溃疡模型大鼠胃黏膜的保护作用

目的:建立大鼠慢性心理性应激胃溃疡模型,观察加味四逆散(JWSNS)对模型大鼠胃黏膜形态、血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、血清皮质醇(CORT)和黏膜血流量等的影响,探讨其保护胃黏膜的机制.方法:Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,加味四逆散高、中、低剂量(10,5,2.5 g·kg-1)组,奥美拉唑(3.0×10-3g·kg-1)组,除正常组外,其余各组采用10种不可预知刺激法建立慢性大鼠心理性应激胃溃疡模型,灌胃给药4周后,常规HE染色观察胃组织形态学改变及胃黏膜溃疡指数(UI),多道生理记录仪检测胃黏膜血流量(GMBF),放免γ计数器检测血浆ACTH,血清CORT的变化.结果:模型组大鼠胃黏膜弥漫出血、溃疡糜烂,其胃黏膜UI,血浆ACTH,血清CORT与正常组比较均明显升高(P＜0.01),GMBF,胃黏膜修复有效率与正常组比较均明显下降(P＜0.01),加味四逆散高、中、低剂量组大鼠胃黏膜损伤较模型组不同程度减轻,其胃黏膜UI,血浆ACTH,血清CORT与模型组比较均明显下降(P＜0.01或P＜0.05),而GMBF,胃黏膜修复有效率与模型组比较均明显升高(P＜0.01或P＜0.05).结论:慢性心理性应激对大鼠胃黏膜有明显损伤作用,加味四逆散能显著减轻心理性应激导致的胃黏膜损伤,有效减低溃疡指数,调整神经内分泌功能,增加GMBF和提高胃黏膜修复能力.     

加味四逆散对慢性心理性应激胃溃疡模型大鼠胃肠动力影响的实验研究

目的 建立慢性应激性胃溃疡大鼠模型,研究加味四逆散对模型大鼠胃排空率及小肠推进比、血浆胃动素(MTL)、血清胃泌素(GAS)的影响,探讨加味四逆散干预应激性胃肠功能障碍的机制.方法 大鼠随机分为正常组,模型组,加味四逆散大、中、小剂量组,西沙比利组,采用慢性心理性应激方法建立应激性胃溃疡大鼠模型,经加味四逆散等干预后检测胃肠动力、胃肠激素变化.结果 血浆MTL及血清GAS比较:与模型组比较,各治疗组及正常组MTL及GAS水平明显升高(P ＜0.05 ～0.01);与西沙比利组比较,中药中、大剂量组MTL及GAS水平均明显升高(P ＜0.05 ～0.01);与中药小剂量组比较,中药中、大剂量组MTL及GAS水平均明显升高(P ＜0.05 ～0.01);胃排空率及小肠推进比比较:与模型组比较,各治疗组及正常组胃排空率及小肠推进比均明显升高(P＜0.05～0.01);与西沙比利组比较,中药大剂量组胃排空率升高不明显(P＞0.05),而小肠推进比升高明显(P＜0.05);与小剂量组比较,中药中、大剂量组胃排空率及小肠推进比升高明显(P ＜0.05 ～0.01).结论 加味四逆散可提高慢性应激大鼠血浆MTL、GAS含量及促进胃排空和小肠推进.     

固真方对老年大鼠胸腺细胞糖皮质激素受体作用的研究

本研究观察了固真方对老年大鼠胸腺细胞糖皮质激素受体位点数和ＧＣＲ核转位率以及血清胸腺因子功能等的影响。结果表明：老年大鼠胸腺细胞ＧＣＲ位点数，胞浆蛋白、核ＲＮＡ和ＤＮＡ含量、胞腺重／体重比值以及血清胸腺因子功能均显著低于青年对照鼠，ＧＣＲ核转位率则明显高于青年对照鼠，而固真方能明显改善胸腺的上述老年性变化，提示固真方可能是通过抑制老年大鼠胸腺细胞ＧＣＲ由胞浆到核的转位活化能力，从而减弱糖皮质激素对     

加味四逆散对慢性应激所致大鼠雌激素紊乱的调节作用

目的:研究加味四逆散对慢性不可预计性刺激致抑郁雌性大鼠血清皮质酮(Cort)、血清雌二醇(E2)的影响,揭示其对雌性大鼠抑郁模型内分泌紊乱的调节机制。方法:Wistar大鼠按体重和基础糖水消耗量随机分为6组:空白组(不施加任何刺激)、慢性轻度不可预计应激模型组、加味四逆散高、中、低剂量组(315,158,78 mg.kg-1,ig),阳性药氟西汀组(18 mg.kg-1,ig),应激第1天开始每天8:30 ig给药,正常组及慢性应激模型组每次ig蒸馏水。应激第22天取材。放射免疫法检测用药前后雌性大鼠血清Cort,E2的含量变化。结果:大鼠血清Cort空白组(0.05±0.04)μg.L-1,模型组为(0.11±0.08)μg.L-1,较空白组显著升高(P<0.05),加味四逆散各组Cort较模型组低但差异无统计学意义;血清E2含量模型组大鼠的E2水平(0.04±0.02)μg.L-1较空白组(0.12±0.03)μg.L-1明显下降(P<0.05),加味四逆散高、中、低剂量组E2依次为(0.10±0.04),(0.08±0.02),(0.07±0.05)μg.L-1均明显升高,与模型组相比有显著性差异(P<0.01,P<0.05)。结论:加味四逆散抗抑郁作用与其维持E2正常分泌有关。     

加味四逆散对青少期应激模型大鼠行为学和HPA轴的影响

目的:观察加味四逆散对青少期应激大鼠行为学、血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和血清皮质酮(CORT)浓度的影响。方法:32只SPF级雄性Wistar大鼠随机分为正常组,模型组,氟西汀组(0.01 g·kg~(-1)),加味四逆散组(16.9 g·kg~(-1)),采用慢性轻度不可预见性应激方法造模,造模同时ig给药28 d,每7 d称大鼠体重,检测糖水偏爱指数、旷场测试,采用放射免疫分析法检测大鼠血浆ACTH和血清CORT含量的改变。结果:与正常组比较,模型组大鼠出现体重增长缓慢、糖水偏爱指数明显降低,血浆ACTH和血清CORT含量明显升高(P0.05),而旷场测试大鼠的活跃度、总路程和平均速度均有所升高,中央区活动时间有所延长,但差异无统计学意义;与模型组比较,氟西汀组和加味四逆散组糖水偏爱指数明显升高(P0.05),血浆ACTH和血清CORT含量明显降低(P0.05),氟西汀组体重在第28天明显增加(P0.05)。结论:加味四逆散可以有效改善青少期应激大鼠行为学改变,下调其血浆ACTH和血清CORT含量,可能成为防治青少期应激损伤的有效方法。     

四逆散含药血清对大鼠皮层神经元GABAA受体介导Cl-电流的影响

目的:研究四逆散改善失眠作用的机制.方法:四逆散浸膏按21.7 g·kg-1·d-1给SD大鼠连续灌胃7d,腹主动脉取血,分离血清,按10％比例加进原代培养SD大鼠皮层神经元培养基,37℃孵育3h,应用全细胞膜片钳方法,记录四逆散含药血清对原代培养大鼠皮层神经元γ-氨基丁酸A型受体(GABAA)介导的氯离子(Cl-)电流的影响.结果:给予0.3,3,30,300 μmol· L-1γ-氨基丁酸刺激,经10％四逆散含药血清作用3h的皮层神经元,γ-氨基丁酸浓度-效应曲线左移,半效激活浓度降低(P=0.05),氯离子电流的最大峰值(P＜0.05)、快速衰减时间常数(τ2,P ＜0.05)和慢速衰减时间常数(τ1,P＜0.05)明显增大.结论:四逆散作用于皮层神经元的γ-氨基丁酸A型受体,调节其介导的氯离子电流,可能是其改善失眠作用的机制之一.     

加味四逆散药物血清对HSC-T6增殖的影响

目的: 观察加味四逆散含药血清对瘦素刺激肝星状细胞增殖的影响,探讨其抗肝纤维化的机制。方法: SD大鼠30只,随机分为3组:正常血清组、秋水仙碱对照组、加味四逆散组(37.5 g ·kg^-1),每组均10只,将正常血清组大鼠每只按10 mL ·kg^-1给予生理盐水ig,1次/日;秋水仙碱对照组大鼠每只按0.2 mg ·kg^-1给予秋水仙碱ig,1次/日;加味四逆散组给予加味四逆散药液10 mL ·kg^-1ig,1次/日。以上各组均连续ig 7 d,制备各药物含药血清,并将药物血清用培养基配制成5%,10%,20%,40% 4个浓度;培养肝星状细胞,取对数生长期细胞,使用噻唑蓝(MTT)比色法检测药物血清对100 mg ·L^-1的瘦素刺激肝星状细胞-T6(HSC-T6)增殖的影响。结果: 加味四逆散药物血清对瘦素刺激的肝星状细胞增殖有抑制作用(P<0.05或P<0.01), 在5%~40%的血清浓度范围内,抑制作用呈剂量依赖性关系;秋水仙碱对照组亦能抑制HSC-T6细胞的增殖(P<0.05),但在10%~40%的血清浓度范围内加味四逆散组对HSC-T6增殖的抑制率显著高于秋水仙碱对照组(P<0.05)。结论: 加味四逆散药物血清具有抑制瘦素刺激HSC-T6增殖的作用。     

四逆散加味抗大鼠肝纤维化作用机制

目的:探讨四逆散加味对肝纤维化的防治作用机制.方法:80只Wister大鼠随机分为8组:正常对照组、病理模型组、四逆散组、四逆散加味高、中、低剂量组、四逆散预防组.除正常对照组外,其余各组均采用猪血清ip诱发肝纤维化,0.5 mL/只,2次/周,连续10周,5周后即可形成肝纤维化.预防组于造模同时给药(以四逆散加味7 g·kg-1),各治疗组于造模第6周给药,连续4周.四逆散组4 g·kg-1,四逆散加味高、中、低剂量组(14,7,3.5 g·kg-1).采用酸性水解法检测肝组织羟脯氨酸(HYP)含量;放射免疫法(RIA)检测肝组织白介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;原位杂交、免疫组化法分别检测肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA与蛋白表达.结果:与模型组比较,四逆散加味中剂量组大鼠肝组织羟脯氨酸( 478.32±42.35)vs(327.09±39.41)μg·L-1,P＜0.01;IL-1(0.58±0.89) vs(0.35±0.47) μg· L-1(P＜0.05);TNF-α (4.82±0.49) vs (4.21±0.45)μg·L-1(P＜ 0.05),含量均显著降低,TGF-β1mRNA(9.92±2.57)vs(5.27±1.39),(P＜0.01)和α-SMA mRNA(12.87±0.39)vs(6.33±0.72),(P＜0.01)及其蛋白表达显著减弱(均P＜0.01).结论:四逆散加味有明显的抗肝纤维化作用,其机制可能与抑制TGF-β11和α-SMA基因表达有关.     

银蒲四逆四妙散治疗慢性盆腔炎临床观察

目的:观察银蒲四逆四妙散治疗慢性盆腔炎的疗效。方法:治疗组50例用银蒲四逆四妙散内服加外敷下腹部和保留灌肠治疗,对照组40例用红霉素肠溶胶囊口服治疗。结果:总有效率治疗组92.0%、对照组62.5%,两组比较有显著性差异(P0.05)。结论:银蒲四逆四妙散治疗慢性盆腔炎疗效效果显著。     

加味丹栀逍遥散对抑郁模型大鼠海马内盐皮质激素受体和糖皮质激素受体的影响

目的:观察加味丹栀逍遥散对抑郁模型大鼠海马内盐皮质激素受体(MR)和糖皮质激素受体(GR)含量的影响。方法:将50只Wistar雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、氟西汀组、加味丹栀逍遥散低剂量组、加味丹栀逍遥散高剂量组,每组10只;采用孤养结合慢性轻度不可预见性应激的复合模型,除空白组外,其余各组均接受不同应激因子刺激21 d,建立慢性应激抑郁大鼠模型,随后分别按氟西汀组2.5 mg·kg-1、加味丹栀逍遥散低、高剂量组2.04,4.08 g·kg-1,各组均按10 mL·kg-1ig给药,空白对照组和模型组ig 10 mL·kg-1生理盐水1次/d,每天应激前灌胃,从造模第22天开始,至动物处死当天,共21 d,实验周期共42 d;采用蛋白印迹法(Western-blot)测定大鼠海马内糖皮质激素受体(GR)和盐皮质激素受体(MR)的蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠海马内GR的蛋白表达下调而MR的蛋白表达升高;经治疗后,各组大鼠海马内GR的蛋白表达较模型组显著上调(P<0.05),而各组大鼠海马内MR的蛋白表达较模型组显著下调(P<0.05)。结论:加味丹栀逍遥散可以通过调节海马内GR和MR的蛋白表达而起到抗抑郁的作用,经过药物干预后的模型大鼠海马内GR表达升高而MR的表达下调,其抗抑郁的作用机制可能与海马内GR和MR之间的比例关系失调有关。     

四逆散传统饮片汤剂和配方颗粒对两种因素致小鼠肝损伤模型的药效比较

目的:四逆散传统汤剂和配方颗粒是在临床中同时存在的两种用药形式,本研究拟对比研究四逆散传统汤剂和配方颗粒的疏肝解郁药效作用,为四逆散配方颗粒的临床使用提供实验依据.方法:昆明种小鼠随机分为空白组、应激模型组、阳性药组、四逆散传统汤剂低、高剂量(600,1200 mg·kg-1)组、四逆散配方颗粒汤剂低、高剂量(600,1200 mg·kg-1)组共7组,每组10只.小鼠连续灌胃给药1周,实验第6天时给予小鼠一次性拘束应激18h,测定血浆丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平.昆明种小鼠随机分为空白组、粉刺杆菌-脂多糖(Propionibacterium acne-LPS)致肝炎模型组、阳性药组、四逆散传统汤剂低、高剂量(600,1200 mg· kg-1)组、四逆散配方颗粒汤剂低、高剂量(600,1200 mg· kg-1)组共7组,每组10只.小鼠尾静脉注射20 mg·kg-1热灭活粉刺杆菌生理盐水溶液5d后,尾静脉注射5μg· kg-1脂多糖生理盐水溶液,5h测定血浆ALT,AST水平.结果:与正常对照组相比,应激模型组和P.acnes-LPS的血浆ALT均显著增高(43.4±2.0)U·L-1vs (12.2-2.8) U·L-1,P ＜0.05;(114.9±23.3) U·L-1vs (18.8±5.2) U·L-1,P ＜0.05,AST水平也显著增高.与模型组相比,四逆散传统饮片汤剂和配方颗粒均能显著降低应激负荷和粉刺杆菌-脂多糖升高的血浆ALT和AST水平,但是两药药效没有统计学差异.结论:四逆散传统饮片汤剂和配方颗粒均有较好的保肝作用.