细胞周期G2/M期调控与神经变性疾病

神经变性疾病是一种进行性神经功能缺失及严重影响生活质量的神经系统疾病,主要病理特征为神经元变性丢失,病因未明。近来神经元的细胞周期异常调控机制引起广泛重视,尤其细胞周期停滞在G2/M期走向凋亡,该机制有助于对神经变性疾病细胞周期机制的理解以及为其提供治疗靶点。变性神经元在细胞周期G2/M期会发生阻滞,并与CDK家族和cyclin B等调控蛋白密切相关,从而揭示G2/M期阻滞、核内复制及相关细胞周期蛋白调控异常导致神经元变性死亡的病理过程。     

CDK5在鱼藤酮诱导的多巴胺能神经元凋亡中的作用

目的探讨CDK5在鱼藤酮介导的SH-SY5Y细胞凋亡中的作用以及通过干预CDK5表达对细胞凋亡的影响。方法使用鱼藤酮处理多巴胺能神经元SH-SY5Y细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,Annexin-V/PI染色,流式细胞仪检测不同实验组细胞凋亡率,采用Western blot法检测不同实验组CDK5的表达以及p25/p35蛋白的表达比。结果经鱼藤酮处理后细胞活力呈浓度依赖性下降,细胞凋亡率增高,且CDK5表达增高,p25/p35比值增高。CDK5抑制剂MDL28170或Olomoucine预处理细胞能够降低CDK5的表达水平,降低p25/p35蛋白的表达比,同时可以减轻鱼藤酮诱导的细胞损伤。结论 CDK5在鱼藤酮介导的SH-SY5Y细胞凋亡中可能发挥着重要作用,抑制CDK5的活性可能具有神经保护作用。     

细胞周期蛋白在局灶性脑缺血中作用机制研究的新进展

局灶性脑缺血对脑神经元损伤的机制是多种因素参与的过程，其中细胞周期相关蛋白有重要作用。研究发现在局灶性脑缺血模型中，许多细胞周期相关蛋白表达增加，且多分布在半暗带。多数学者倾向认为细胞周期相关蛋白参与细胞凋亡过程，并在此过程中起到重要的作用。例如Timsit等认为脑缺血后半暗带神经元内Cyclin D1和CDK4的表达是评估缺血神经元是否再次进入细胞周期的关键标志。本文就目前细胞周期相关蛋白在局灶性脑缺血损伤机制中的研究进展进行综述。     

P16、 CyclinD1、CDK4在肺纤维化鼠肺组织的动态表达及意义

背景：已有众多文献证实肺纤维化进程中肺组织肺泡上皮细胞进行性减少,但并未深究其原因。在肺纤维化进程中可能存在P16、CyclinD1、CDK4蛋白异常表达,P16-CyclinD1/CDK4细胞周期调控通路异常可能参与肺纤维化肺泡上皮细胞减少过程。 目的：研究P16、CyclinD1、CDK4在博来霉素（BLM）诱导小鼠肺纤维化肺组织中的动态表达及其意义。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2009-03/2009-09在江苏大学医学院实验室完成。 材料：健康雌性KM小鼠68只,体重(20±2) g,用于制备小鼠肺纤维化模型。 方法：68只小鼠随机分为博来霉素模型组(n=36)和生理盐水对照组(n=32),模型组气管内注射3.5 mg/kg的博莱霉素,对照组气管内注射相同体积的生理盐水,每组分别于造模后的3, 7, 14和28天随机选取8只小鼠处死, 取出左肺组织,常规制成4μm石蜡切片,取出右肺组织置于-70℃冰箱中留作Western blot。 主要观察指标：病理形态学观察;免疫组化定位和半定量检测肺组织P16、CyclinD1、CDK4蛋白表达;Western blot检测P16、CyclinD1、CDK4蛋白表达。 结果：小鼠64只进入结果分析,死亡4只,模型组小鼠分别于第14、20、22、26天各死亡1只。（1）HE染色：模型组病理组织切片示肺纤维化组肺损伤明显,出现典型肺纤维化改变。（2）免疫组化结果显示：①模型组肺组织P16、CDK4蛋白表达随时间增加而增强,CyclinD1蛋白表达随时间增加而减弱。②与对照组相比,P16、CDK4蛋白阳性细胞数量增多;CyclinD1蛋白3、7、14天阳性细胞数量多于同时间点对照组,28天则明显少于同时间点对照组。（3）Western blot结果显示：①模型组P16蛋白从7天起表达逐渐增加,P < 0.05;CDK4蛋白表达随时间增加而逐渐增加, P < 0.05;CyclinD1 蛋白表达随时间增加而逐渐减少,P < 0.05,但14天与28天无显著性差异。②与对照组相比,14、28天肺组织P16蛋白表达增多,P < 0.01;7、14、28天 CDK4蛋白表达增多,P<0.05;3、7天 CyclinD1 蛋白表达增多,P < 0.05;14、28天 CyclinD1 蛋白表达减少,P < 0.05。 结论：在肺纤维化进程中存在P16、CyclinD1、CDK4蛋白异常表达,P16-CyclinD1/CDK4细胞周期调控通路异常可能是肺纤维化肺泡上皮细胞减少的重要原因。     

吡咯喹啉醌与神经干细胞的增殖

背景：目前国内外学者主要应用生长因子样物质来促进神经干细胞的分裂与增殖,所以作者推测吡咯喹啉醌小分子化合物也能促进神经干细胞的分裂增殖。 目的：体外观察氧化还原酶辅酶吡咯喹啉醌促进鼠成体神经干细胞增殖的作用。 方法：体外培养Wistar胎鼠成体神经干细胞成球体后,于培养液中加入1×10-8 mol/L吡咯喹啉醌,对照组加入同等剂量的Hanks溶液。应用流式细胞仪测细胞周期增殖率,应用免疫组化法和Western Blot测周期蛋白激酶(CDK2)和周期蛋白激酶抑制剂(P27)的表达。 结果与结论：与对照组相比,吡咯喹啉醌处理16 h和24 h后,S期和G2期细胞数的比例显著增高,而细胞的凋亡率降低;CDK2蛋白的表达显著增强,而P27的表达显著降低。结果显示低浓度的吡咯喹啉醌即能促进鼠成体神经干细胞的增殖。     

神经生长相关蛋白GAP-43与精神疾病

生长相关蛋白(growthassociatedprotein,GAP43)又称B50、F1、PP46、神经调素,是80年代初由Skene等人首先从兔再生的外周神经中获得,是一种突触前蛋白[1]。它广泛存在于神经组织中,尤其是在生长、分化和再生的轴突末端以及突触前膜含量极高。GAP43在神经纤维的生长、发育、轴突再生以及突触功能的维持等方面起着重要作用,并参与神经递质释放的调节,被认为是神经元发育和再生的一个内在决定因子[2]。1GAP43的结构及生化特性GAP43基因在脊椎动物进化过程中十分保守。编码GAP43蛋白的基因位于小鼠的16号染色体和人的3号染色体,包括2个启…     

miR-7沉默表皮生长因子受体对胶质瘤细胞周期的影响

目的 研究miR-7阻遏脑胶质瘤细胞增殖周期由G1期向S期转化的内在机制.方法 脂质体转染miR-7表达质粒进入人脑胶质瘤细胞株U251,原位杂交和RT-PCR方法检测外源miR-7基因的整合效果;流式细胞术检测细胞周期变化,Western blot方法检测EGFR、CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4、CDK6、P16、P21和P27的蛋白表达;SPSS13.0软件进行统计学分析.结果 RT-PCR结果显示miR-7基因被成功整合入U251胶质瘤细胞,原位杂交结果示miR-7主要定位于细胞核和细胞质;转染后瘤细胞增殖速度减慢,且大部分阻滞于G1期,处于分裂期S期的细胞比例明显减少(P＜0.05);miR-7转染组EGFR、CyclinD1、CyclinE、CDK2、CDK4和CDK6蛋白表达水平均有不同程度下降(P＜0.05),其中EGFR、CyclinD1、CDK4和CDK6的降低程度更为显著(P＜0.01),P16水平显著升高(P＜0.01),P21和P27的表达没有明显变化(P＞0.05).结论 miR-7可能通过有效沉默癌基因EGFR的表达途径,抑制细胞周期G1期调节蛋白复合体CyclinD1/CDK4/6的活性,并接受P16的协同作用,共同阻遏胶质瘤由G1期向S期转化,进而抑制肿瘤增殖;miR-7有望成为一种新的胶质瘤治疗候选药物.     

p57^kip2 与脑胶质瘤研究进展

脑胶质瘤严重危害人类的健康，其发生系多因素、多阶段、多基因异常累计的过程。基因异常主要表现为原癌基因活化，抑癌基因失活和DNA损伤修复基因的突变或丢失。细胞周期控制系统由细胞周期蛋白（cyclin）、细胞周期蛋白依赖性激酶（ cyclin-dependent kinase, CDK） 和CDK抑制因子（cdk inhibitor, CKI） 组成。cyclin与CDK以cyclin-CDK复合物的形式发挥作用，cyclin为调节亚单位，CDK为催化亚单位。CKI能竞争性地与CDK结合，抑制其活性，从而调整细胞周期。CKI作为细胞周期调控中的主要成员，分为两类：     

CDK4/6抑制剂在治疗脑胶质母细胞瘤中的研究进展

细胞周期素依赖性蛋白激酶在临床上已用于乳腺癌的治疗,其机制是促使抑癌基因Rb磷酸化,使细胞从G1期进入S期。CDK4/6抑制剂可以抑制乳腺癌、头颈癌、非小细胞肺癌等多种恶性肿瘤的活性。胶质母细胞瘤具有复发率高、生存期短、预后差等特点,治疗难度大,而CDK4/6理论上作为胶质母细胞瘤(GBM)治疗的靶点,CDK4/6抑制剂作用于cyclin D-CDK4/6-INK4-Rb通路,也同样可以抑制胶质母细胞瘤。作为有希望治疗胶质母细胞瘤药物,CDK4/6抑制剂在动物实验,肿瘤细胞系等研究中展示了大量的证据证明其对胶质母细胞瘤能产生抑制作用。同时CDK4/6抑制剂其研发方向是寻找预测标志物,探索联合治疗,以试图解决神经胶质母细胞瘤治疗中的耐药性和复发性中的关键问题,为治疗神经胶质瘤的研究提供新方向和思路。     

糖尿病大鼠海马组织中周期素依赖性激酶5表达的实验研究

目的：分析糖尿病大鼠海马组织中周期素依赖激酶5（CDK5）蛋白表达情况，探讨糖尿病影响学习与记忆的机制。方法：Y-迷宫评估大鼠学习与记忆成绩，用免疫组化法和Western blot检测海马区CDK5蛋白表达。结果：DM组大鼠第4周迷宫作业错误反应次数和全天总反应时间分别为（3．43±2．20）次、（115．42±36．64）s，对照组为（2．17±1．34）次，（90．83±20．27）s；CDK5蛋白表达相对水平为15．62±7．07，对照组为20．61±5．63，两组间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：糖尿病大鼠CDK5蛋白表达水平下降，学习记忆能力下降，提示CDK5可能参与了学习记忆过程。