高糖化力米根霉的筛选和鉴定

为了筛选一株适用于糯米酒纯菌种酿造的高糖化力根霉,以不同酒曲为筛选源分离出19株根霉,经高糖化力测试从中筛选出一株28℃糖化3天产还原糖[(64.4±0.6)g/100g米、产葡萄糖(48.1±1.4)g/100g米]最高的根霉8-3M。通过对形态学和26SrDNA D1/D2区、ITS区序列进行分析鉴定,8-3M为米根霉(Rhizopus oryzae)。酶活力测试和酒精发酵测试表明:R.oryzae 8-3M在YPS液体培养基中28℃培养4天的粗酶液淀粉酶活力最高为(69.6±1.7)U/mL,在糯米饭中28℃培养96h的糖化酶活力最高为(36.8±2.0)U/mL、酒精度为(1.0±0.1)%(V/V)。因而R.oryzae 8-3M既能分泌淀粉酶,将绝大部分淀粉转化为可发酵性糖,又能将可发酵性糖转化为少量酒精,具有适用于糯米酒纯菌种酿造的潜力。     

孝感凤窝酒曲中根霉的分离及特性研究

采用马丁孟加拉红培养基对孝感凤窝酒曲中的根霉进行分离,得到2株根霉M1和M2。M1和M2的糖化酶活力分别达到2015．48mg/h·g和D2125．61mg／h·g经形态学鉴定,它们分别是黑根霉（Rhizopu nigricans）和米根霉（Rhizopus oryzae）。同时,将这2株根霉分别接入糯米饭中进行发酵,测定酒酿的糖化酶活力、还原糖含量、总酸和总糖,并对酒酿进行了感官评定。     

不同类型丝状真菌发酵产酶性能比较及其混菌发酵性能研究

比较了实验室前期从福建红曲黄酒酿造用曲中分离及台湾生物资源研究及保存中心(BCRC)的不同丝状真菌菌株(黑曲霉AN19、黄曲霉AF20、米曲霉AO35、米根霉RO45、黑曲霉BCRC31494、黄曲霉BCRC31654、米曲霉BCRC30222和米根霉BCRC32229)的产酶性能,从中筛选出产液化酶、糖化酶和蛋白酶活力较高的4株菌株:黄曲霉AF20、米根霉RO45、黑曲霉BCRC31494和米曲霉BCRC30222。将此4株丝状真菌菌株分别进行单一和两两混合发酵糯米,研究其产酶及产糖性能。结果表明:接种纯种米根霉RO45到糯米培养基中,测得的液化酶活力和还原糖产量最高,然而整个发酵过程蛋白酶活力始终较低;米根霉RO45与米曲霉BCRC30222混合发酵,不仅保持较高的液化酶活力和还原糖产量,还能够显著提升发酵体系中的蛋白酶活力。本研究结果对于黄酒传统酿造工艺的改进和优良产酶菌株的筛选提供了重要的基础数据。     

基于风味和产酶性能的霉菌M_2的筛选及制曲工艺优化

基于风味和产酶性能,从清香型白酒酒醅中分离获得1株能赋予白酒酱香风格且产糖化酶能力较高的菌株M_2。通过菌体和菌落形态特征及分子生物学鉴定,确定该菌株为米根霉(Rhizopus oryzae)。以糖化酶活力为检测指标,通过单因素及响应面试验优化制曲工艺,确定菌株M_2最佳制曲工艺条件为:水分含量60%,孢子接种量3×10~7～10~8cfu/mL,培养时间84 h,培养温度40℃。该条件下菌株M_2纯种麸曲糖化力达到最大值,为917 U/g,液化力为0.72 U/g,水分含量为8.34%,酸度为0.84 g/L。     

甜酒曲根霉的筛选及发酵特性研究

采用马铃薯琼脂固体培养基(PDA)，对贵阳及江西的地方特色甜酒曲中的根霉分离纯化，得到菌株Rhi-1(贵阳)和Rhi-2（江西）。以优良根霉菌株Q303为对照，探究其发酵性能。结果表明，Q303、Rhi-1(贵阳)和Rhi-2（江西）的糖化酶活力分别为238.6 mg/h·g、243.3 mg/h·g、195.4 mg/h·g，液化酶活力分别为0.237 g/g·h、0.253 g/g·h、0.178 g/g·h,Rhi-1的糖化力和液化力水平都高于Q303，是一株拥有良好发酵性能的菌株。将Rhi-1、Q303制成纯种根霉曲，接入蒸熟的糯米饭中，定时取样，测定不同阶段酒酿糖化酶活力、液化酶活力、总糖及总酸的变化趋势。通过GC-MS分析根霉的发酵产物发现Rhi-1的发酵产物里富含β-苯乙醇和乙偶姻，以及特征物质异己酸乙酯。     

豆渣固态发酵过程中主要营养成分及抗氧化特性变化

目的：研究豆渣固态发酵过程中主要营养成分及抗氧化特性的动态变化,为利用豆渣开发功能性食品或配料提供理论参考。方法：分别以米根霉、少孢根霉为发酵菌种对豆渣进行固态发酵,测定发酵过程中还原糖含量、可溶性蛋白含量、纤维素酶活力、糖化酶活力、蛋白酶活力及还原力、2,2’-联氮-二3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸二铵盐（2,2’-azinobis-(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid),ABTS）自由基清除能力、Fe2＋螯合能力为评价指标的抗氧化活性的变化。结果：与未发酵豆渣相比,还原糖含量、可溶性蛋白含量、纤维素酶活力、糖化酶活力、蛋白酶活力均随着发酵时间的延长而增加。豆渣经米根霉发酵24 h,其还原力、ABTS＋·清除活性、Fe2＋螯合能力分别提高了1.63、1.48、2.82 倍;经少孢根霉发酵24 h,分别提高了1.88、1.63、3.18 倍。结论：用米根霉和少孢根霉发酵豆渣可以提高豆渣的营养成分及抗氧化活性。     

米根霉液态发酵产糖化酶工艺条件研究

米根霉具有较强的产淀粉糖化酶能力。本研究通过对米根霉液态发酵工艺条件的研究来提高其产糖化酶能力,为红曲黄酒纯种酿造技术奠定基础。以米根霉为出发菌株,大米液化液作为碳源进行摇瓶发酵,通过正交试验优化液态培养基配方,并通过单因素试验得出米根霉的培养条件。优化的摇瓶发酵最佳培养基为:液化液浓度50%,NH4Cl 5 g/L,KH2PO41 g/L,MgSO4·5H2O 0.3 g/L,FeSO4·7H2O 0.4 g/L,CaCO38 g/L;发酵条件为:初始pH6.0,装液量50 mL,摇床转速150r/min,接种量6%,发酵温度为32℃。该发酵条件下,菌株摇瓶发酵液的糖化酶活力达到196.6 U/mL±8.1 U/mL。     

高糖化力米根霉G1培养条件优化

该研究以糖化力和糖化酶酶活为评价指标,通过单因素和正交试验对米根霉（Rhizopus oryzae）G1一级种的培养条件进行优化。结果表明,米根霉一级种的最佳培养条件为在麸皮汁琼脂培养基的基础上添加蛋白胨3 g/L、葡萄糖30 g/L和CaCl2 2.5 g/L,培养温度为30 ℃。经过优化后的米根霉一级种糖化性能得到提升,制成麸曲后糖化力达到33.97 g/100 g,糖化酶酶活为5 536.64 U/g。     

米酒糖化菌的分离筛选鉴定及其性能研究

为获得在米酒酿造中淀粉糖化能力强的菌株,该研究采用孢子纯化法从9种不同酒曲中初筛得到13株霉菌,通过测定其所制酒曲的液化力和糖化力,复筛得到糖化能力突出的菌株1M5、5M2和7M1,其液化力依次为(1315±46.54)、(1868±92.74)、(1929±94.55)mg/(g·h),糖化力依次为(1252±63.78)、(1556±15.56)、(1054±21.11)mg/(g·h);经形态学及分子生物学鉴定确定菌株1M5、5M2和7M1依次为小孢根霉、棒曲霉和黑曲霉;经糖化试饭,菌株1M5、5M2和7M1试饭糖化率依次达到62.55%、55.61%和67.04%;对蛋白酶活力突出的菌株5M2进行发酵风味物质分析,检出13种主要风味物质,其中3-甲基戊酸、苯甲醇、苯乙醇、苯乙酸和十五酸乙酯具有花香、果香等令人愉悦的香味。综上可知,菌株1M5、5M2和7M1具有良好的糖化性能,展现出在米酒酿造中的巨大应用潜力。     

浙江传统玫瑰醋醅中霉菌的分离及其应用

该文对浙江传统玫瑰醋酿造过程中的主要霉菌进行了分离、纯化和应用试验.共获得不同形态的霉菌43株,其中15株属于曲霉属,8株属于青霉属,3株属于毛霉属,2株属于根霉属,2株属于红曲霉属,另外13株尚未能鉴别.这表明传统米醋酿造过程的发花阶段微生物区系结构复杂.经酶活力测定,所得43株霉菌具有不同程度的糖化酶和蛋白酶活力,菌株M1糖化酶活力最高,达6288U,M17蛋白酶活力最高,达1620.1U.采用Biolog全自动微生物鉴定仪对M1和M17进行分析,结合形态学实验结果,M1与米根霉相似性(sim值)为71.2％,M17与米曲霉相似性(sim值)为68.0％.以M1和M17菌种制米曲,混合接种500kg发酵缸进行发花对比试验,结果表明M1和M17混合接种发花可明显缩短玫瑰醋酿造过程发花时间.     

柠檬酸发酵过程中黑曲霉α-葡萄糖苷酶和糖化酶变化的研究

以目前柠檬酸生产菌为出发菌株,进行N+注入诱变得到一株柠檬酸高产菌株黑曲霉LD20,将其在500m3发酵罐上进行发酵,分别对发酵过程中α-葡萄糖苷酶、糖化酶、总糖、总酸、还原糖、葡萄糖和pH进行了跟踪测定,结果表明糖化酶GA在20h达到最高酶活895.16U/mL,α-葡萄糖苷酶TGA在24h达到最高酶活322.52U/mL,在整个发酵过程中GA的平均酶活力是TGA的2.9倍,说明在柠檬酸发酵过程中,发酵液的糖化作用主要依赖于GA;在柠檬酸发酵后期TGA比GA对酸有更强的耐受性,主要起到转苷作用,将发酵液中的还原糖转化为非发酵性的糖类,从而生成不能被黑曲霉所利用的残糖。     

酒曲根霉的分离纯化及淀粉酶活力测定

本试验采用直接分离法和单菌落挑选法从酒曲中分离纯化得到30株根霉,测定其液化酶、糖化酶和麦芽低聚糖活力,根霉Rhizopus RN-1,Rhizopus RA-1,Rhizopus RS-1,RhizopusRQ-1具有低聚糖酶产生能力,且产糖化酶和液化酶活力比传统的Q303都高.     

酿酒根霉高糖化力菌株的筛选

通过比较试验,确定了淀粉水解琼脂培养基作为平板筛选培养基,浓度为1/64×105u/ml的糖化酶溶液作为对照,将收集到的30株根霉菌株进行平板法初筛,得到6株透明圈直径较大的根霉菌,并用Munson-Walker法比较糖化力进行复筛,得知RH-14的试饭糖化力最高(18.06mgG/g·h),而其产酸能力适中(0.81ml/g),因此,初定为豉香型白酒的酿酒小曲根霉试验菌株。     

米根霉F6生长和发酵特性的研究

研究米根霉F6的生长和生产特性。以菌体生长情况和菌株的糖化力为主要评价指标,以单因子试验评价主要营养因素对F6菌株生长的影响,并分析了用F6与其他常用米根霉菌株酿造的甜酒中的氨基酸含量。结果表明,F6对各种元素的需求从高到低的顺序依次为:磷、镁、钾、硫、铁、锌;在PDA培养基中菌体生长较好;经察氏麸皮培养基培养后糖化力明显提高;32℃下糖化力最高;可耐受温度范围为-18~65℃;与F14和Q303菌株相比,其甜酒中18种氨基酸总含量(1.7 g/100 mL)和人体中8种必需氨基酸的总含量(0.53 g/100 mL)均达最高。PDA适合做F6的传代或保存培养基;察氏麸皮培养基做米根霉F6的生产活化培养基为佳;32℃是根霉F6的最适生长和产酶温度;F6菌株具有较好的发酵特性。     

贵州黑糯米酒曲优良霉菌分离筛选与鉴定

从贵州黑糯米酒曲中分离筛选出霉菌86株,其中包括根霉属37株、毛霉属35株、青霉属6株、地霉属4株、链格孢属2株、明枝霉属1株以及木霉属1株。采用淀粉平板透明圈法初筛,麸皮培养及黑糯米酿酒实验复筛,得到1株糖化力较强的菌株,编号为Q8-M7。并提取菌株Q8-M7的ITS序列进行分子学鉴定。最终鉴定糖化力较强菌株Q8-M7为米根霉(Rhizopusoryzae)。     

青稞酒曲微生物多样性分析及米根霉制曲条件优化

采用高通量测序和分离培养相结合的方法对青稞酒曲进行微生物多样性分析,分离培养酒曲中的优势微生物,制作青稞酒纯种曲。结果表明,酒曲中真菌主要有根霉属、曲霉属、线虫草属和酵母属,其中米根霉是酒曲中真菌的优势菌株,同时也是主要糖化菌;细菌主要有库克菌属、球菌属、芽孢杆菌属、微球菌属等。随后,在利用米根霉制作纯种曲时发现,培养温度30℃、麸皮青稞粉配比2∶1、料水比40%、培养时间72 h、种曲接种量3.5%时糖化酶活力为1 246.9 U/g,液化酶活力为61.4 U/g,比原曲酶活力分别提高了9.2、2.4倍。     

酿造糯米酒优良根霉与酵母菌株的筛选

为开展纯菌种液态曲糯米酒酿造工艺研究,对九种传统糯米酒曲进行优良菌种筛选试验.经液化力、糖化力测试选取3种酒曲,从中分离纯化出9株根霉,对其进行糖化试验,筛选出一株30℃糖化70h产总糖(354.0g/L)、葡萄糖(153g/L)最高的根霉E-2.经产酒精能力测试选取4种酒曲,从中分离纯化出10株酵母,对其进行发酵力试验,筛选出一株30℃发酵80h产酒精量最大,发酵效率(92.9％)最高的酵母Y-1Y.     

Isolation of Giucoamylase-producing Rhizopus Strains and Study on Their Enzyme Properties

从五粮液酒厂周边采集土样中分离出6株产糖化酶且酶活较高的菌株,选取酶活最高的1株K-1为出发菌,进行发酵实验和酶学性质研究,结果表明,糖化酶酶活在50～55℃较高,最适作用温度为55℃;糖化酶在pH5.5～6之间酶活力较高。酶对玉米粉、小麦粉、木薯粉、苦荞粉、黄豆粉有较强的液化能力,其中对玉米粉的糖化能力最强。在酶的动力学实验中测得Km=1.446 mg/mL,Vm=0.269 mg/mL.min。     

应用响应面法对产糖化酶菌株M1制曲工艺的优化研究

为了获得清香型白酒强化发酵用优质麸曲,本研究以从清香型白酒酒醅中分离的产糖化酶菌株M1为研究对象,以糖化酶活力为检测指标,通过单因素及响应面试验优化制曲工艺。确定菌株M1最佳制曲工艺条件为:水分含量60%,孢子接种量3×10~7~10~8cfu/mL,培养时间84h,培养温度35℃。该条件下菌株M1纯种麸曲糖化力达到最大值,为847U/g,液化力为0.79U/g,水分含量为9.24%,酸度为0.76g/L。     

产糖化酶根霉菌的分离及其酶学性质研究

从五粮液酒厂周边采集土样中分离出6株产糖化酶且酶活较高的菌株,选取酶活最高的1株K-1为出发菌,进行发酵实验和酶学性质研究,结果表明,糖化酶酶活在50～55℃较高,最适作用温度为55℃;糖化酶在pH5.5～6之间酶活力较高。酶对玉米粉、小麦粉、木薯粉、苦荞粉、黄豆粉有较强的液化能力,其中对玉米粉的糖化能力最强。在酶的动力学实验中测得Km=1.446 mg/mL,Vm=0.269 mg/mL.min。