成年小鼠室管膜下区神经干细胞分离及培养方法改良

目的:改良成鼠神经干细胞(NSCs)分离培养方法,优化培养条件,为系统研究成体干细胞增殖与分化特性以及利用成体干细胞进行细胞治疗奠定基础。方法:视交叉前1.5 mm处离段脑组织,分离前脑室管膜下区(SVZ),通过机械性消化与化学性消化相结合的操作方法制备细胞悬液,应用改良无血清培养基悬浮培养NSCs。nestin免疫荧光染色鉴定NSCs,1%胎牛血清诱导分化后免疫荧光染色鉴定NSCs多向分化潜能。系列稀释实验和5-溴脱氧尿核苷(BrdU)掺入实验比较改良培养与常规培养NSCs自我更新能力和增殖潜能。结果:改良培养条件,NSCs 7～9 d可形成nestin阳性神经球。应用1%FBS诱导后,NSCs分化为形态各异的细胞,包括神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞,分化比例分别是(18.6±3.5)%、(73.2±5.2)%和(3.6±0.4)%。系列稀释实验结果显示当细胞接种数量为500、1000和2000个,改良培养NSCs形成次代神经球数量较常规培养对照组明显增多(P<0.05),并且8 h BrdU掺入率也显著增高达(42.4±6.2)%(P<0.05),表明改良培养条件下NSCs自我更新能力和增殖活力良好。结论:本研究建立了一种简便、操作性强、重复性高的成鼠NSCs分离培养方法。     

人参皂苷Rg1对帕金森病模型小鼠室管膜下区神经干细胞的作用

目的：探讨人参皂苷Rg1促进帕金森病模型小鼠原住神经干细胞增殖分化的作用。方法：C57BL／6小鼠随机分成正常组、模型组和人参皂苷Rg1治疗组。采用MPTP腹腔注射建立帕金森病小鼠模型,利用免疫组化单标和双标技术观察人参皂苷Rg1对小鼠侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖分化的影响。结果：人参皂苷Rg1治疗5d,侧脑室室管膜下区的5-溴脱氧尿苷（BrdU）、神经上皮干细胞蛋白（Nestin）阳性细胞较模型组明显增多,并可见大量从背外侧角沿胼胝体排列的BrdU、Nestin阳性细胞;人参皂苷Rg1治疗20d,BrdU／Nestin双标细胞的数量较模型组明显增多。结论：人参皂苷Rg1可促进帕金森病模型小鼠脑内神经干细胞的增殖和迁移。     

Ⅰ型糖尿病脑病大鼠学习记忆及侧脑室室管膜下区神经发生的变化

目的观察Ⅰ型糖尿病脑病对学习记忆及侧脑室室管膜下区神经发生的影响。方法建立Ⅰ型糖尿病大鼠模型及胰岛素治疗糖尿病模型,用免疫组织化学方法计数侧脑室室管膜下区BrdU阳性细胞数,并用Morris水迷宫测定大鼠的学习记忆能力。结果糖尿病大鼠SVZ的BrdU细胞数以及学习记忆能力明显下降(P<0.01);用胰岛素治疗,可使上述指标明显上升(P<0.01),并接近正常水平。结论胰岛素治疗对糖尿病大鼠神经干细胞增殖及学习记忆能力均有相似的促进作用。     

PGRN在室管膜下区神经干细胞及其细胞分化中的表达

目的探讨颗粒蛋白前体(PGRN)在室管膜下区(SVZ)神经干细胞及分化细胞中的表达和意义。方法体外原代培养新生大鼠SVZ神经干细胞,免疫荧光细胞化学法检测PGRN在神经干细胞及其分化的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞中的表达。结果成功培养新生大鼠SVZ神经干细胞,神经干细胞可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。神经干细胞及其分化的神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞均表达PGRN。结论 SVZ神经干细胞及分化细胞均表达,提示PGRN可能参与神经干细胞的分化过程。     

液化石油气中毒对小鼠齿状回及室管膜下区神经发生的影响

目的:探讨液化石油气急性中毒对小鼠海马齿状回及侧脑室室管膜下区神经发生的影响。方法:选择健康成年昆明小鼠随机分三组,分别为对照组,液化石油气(LPG)高、低剂量中毒组。使用密闭中毒箱行染毒实验。用Morris水迷宫训练测试其空间学习与记忆能力;腹腔注射5-溴脱氧尿苷(BrdU)后通过免疫组织化学方法来显示BrdU阳性细胞。结果:两个中毒组动物的学习记忆能力均弱于对照组(P<0.01),齿状回和室管膜下区内BrdU阳性细胞数目也低于对照组(P<0.01)。结论:液化石油气急性中毒通过抑制齿状回和室管膜下区的神经发生,影响小鼠的学习记忆能力和脑损伤后修复。     

全脑照射后对小鼠血脑屏障通透性和室管膜下区细胞增殖的影响

目的:探讨60Co-γ射线(Gy)全脑照射后对小鼠血脑屏障通透性和室管膜下区神经干细胞增殖的影响。方法:112只健康小鼠随机分成0 Gy组(对照组),5 Gy照射组(小剂量照射组),15 Gy照射组(中等剂量照射组)和30 Gy照射组(大剂量照射组),每组28只。各组随机取出7只分别于照射后1周和4周测定各组小鼠脑组织伊文思蓝的含量,7只观察室管膜下区的BrdU+细胞形态和数量。结果:(1)照射后1周,15 Gy组和30Gy组脑组织伊文思蓝含量明显升高(P<0.05),室管膜下区的BrdU+细胞数明显降低(P<0.05);(2)照射后4周,15 Gy剂量照射组脑组织伊文思蓝含量和室管膜下区的BrdU+细胞数均恢复到对照组水平(P>0.05),而30Gy剂量照射组脑组织伊文思蓝含量仍明显升高(P<0.05),BrdU+细胞数也未见恢复(P<0.05)。结论:全脑照射后血脑屏障破坏可能对室管膜下区的细胞增殖有进一步抑制作用。     

~(60)Co-γ射线照射对小鼠SVZ神经干细胞增殖的影响

目的:探讨60Co-γ射线照射对成体小鼠侧脑室室管膜下区(SVZ)神经干细胞增殖的影响。方法:28只昆明小鼠随机分成4组,每组7只,分别以0 Gy、5 Gy(小剂量)、15 Gy(中剂量)、30 Gy(大剂量)剂量进行照射,于照射后1周观察侧脑室室管膜下区(SVZ)的5-溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)阳性细胞形态和数目。结果:照射后1周,各照射组SVZ的BrdU阳性细胞形态与对照组无差别,呈圆形、椭圆形以及梭形等;15 Gy、30 Gy照射组SVZ的BrdU阳性细胞数明显降低(P<0.01),5 Gy照射组SVZ的BrdU阳性细胞数无差别(P>0.05)。结论:大中剂量60Co-γ照射会抑制SVZ神经干细胞的增殖分裂能力。     

自然衰老小鼠室管膜下区神经干细胞增龄性改变

目的 探讨自然衰老小鼠室管膜下区（SVZ）神经干细胞（NSCs）在衰老过程中生物学特点的改变。 方法 2月龄、28月龄小鼠,各10只,体外分离、培养、鉴定NSCs,5-溴-2-脱氧尿苷（BrdU）染色比较两组细胞的增殖水平;β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色检测细胞衰老水平;细胞内活性氧（ROS）试剂盒检测细胞ROS表达水平;Western blotting 检测细胞周期蛋白D1（cyclin D1）、p16及p19蛋白表达水平;体内用巢蛋白（Nestin）/性别决定基因高迁移率组蛋白-2（Sox2）检测两组小鼠SVZ区厚度的差异。 结果 年轻、年老小鼠的神经干细胞能表达Nestin及Sox2,符合神经干细胞的表达特性。与年轻小鼠相比,年老小鼠神经干细胞的BrdU阳性细胞比例显著下降,SA-β-Gal阳性细胞百分比显著升高,细胞活性氧水平显著升高,SVZ区厚度明显变薄,差异具有统计学意义（P<0.05）。在分子水平上表现为cyclin D1蛋白表达水平明显下降,p16、p19蛋白表达水平显著升高。 结论 年老小鼠NSCs出现增龄性变化,这些变化可能在大脑衰老中起重要作用。     

奥美沙坦对ob/ob小鼠血浆脂联素水平影响的研究

目的 观察ob/ob小鼠不同组间血浆脂联素浓度的变化以及奥美沙坦干预后脂联素浓度的变化.方法 以ob/ob小鼠为对象,分为三组:①ob/ob小鼠空白组;②ob/ob小鼠高脂组;③ob/ob小鼠奥美沙坦组,①喂以普通饲料;②③喂以高脂饮食,10周后,早期动脉粥样硬化成模后,给与①②组安慰剂及③组奥美沙坦分别进行干预,10...     

去松果体后成年大鼠学习记忆及侧脑室室管膜下区神经干细胞增殖的变化

目的观察松果体切除对学习记忆及侧脑室室管膜下区(SVZ)神经干细胞增殖的影响。方法将30只成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为非手术、假手术及去松果体组,每组大鼠10只。在建立动物模型16d后,连续5d测定大鼠在Morris水迷宫的学习记忆能力,继之用免疫组织化学方法观察SVZ的增殖细胞核抗原(PCNA)阳性细胞的变化。结果去松果体组大鼠在Morris水迷宫泳游的逃避潜伏期及在原平台象限游泳距离的百分比均较非手术组或假手术组大鼠的明显延长或减少(P<0.01)。去松果体大鼠SVZ的PCNA阳性细胞数也明显低于非手术组或假手术组大鼠(P<0.01)。结论本研究首次观察到,去松果体使体内褪黑素减少,可导致学习记忆功能及SVZ神经干细胞增殖能力出现相似的明显下降趋势,说明褪黑素是确保学习记忆及神经发生得以正常进行的重要激素之一;提示褪黑素可能直接通过作用于神经干细胞上的相应受体以及间接通过提高基底前脑胆碱能系统功能来促进神经干细胞增殖,进而提高嗅觉记忆功能。     

大鼠室管膜下区和齿状回神经前体细胞增殖的衰老性变化

为了观察大鼠脑内神经前体细胞增殖的增龄性变化、探讨其在脑老化机制中的作用 ,本研究取不同年龄的大鼠经腹腔注射 Brd U标记处于增殖状态的神经前体细胞 ,用抗 Brd U抗体进行免疫组化反应 ,镜下观察脑内神经前体细胞的分布 ,并计数作定量分析。结果发现 ,各年龄组的室管膜下区及齿状回颗粒下层有 Brd U阳性细胞分布 ;上述各部位 Brd U阳性细胞数和标记率均呈明显的增龄性下降 ,幼年组和青年组之间 ,以及青年组和老年组之间的差异均有非常显著性意义 (P<0 .0 1)。结果表明 ,神经前体细胞的增殖能力随衰老而明显下降。这可能与衰老脑的神经元补偿能力及神经可塑性降低有关     

脑缺血大鼠大脑皮层和室管膜下区细胞增殖及巢蛋白表达

目的:探讨脑缺血损伤对大鼠脑皮层和室管膜下区细胞增殖及巢蛋白表达的影响。方法:采用大鼠局灶性脑缺血模型,观察大脑皮层和室管膜下区的细胞增殖及巢蛋白阳性细胞表达。结果:脑缺血大鼠室管膜下区细胞增殖明显增加,巢蛋白阳性细胞表达也显著增加;大脑皮层细胞增殖无明显改变,但巢蛋白阳性细胞表达则明显增加。结论:脑缺血损伤可激活室管膜下区与大脑皮层神经干细胞。提示脑缺血大鼠室管膜下区与大脑皮层的神经干细胞可能参与脑缺血损伤的神经修复过程。     

成年小鼠海马齿状回存在有别于室管膜区神经干细胞的定向祖细胞种群

目前关于在成年哺乳动物海马区是否存在神经干细胞仍存在争论。同源细胞集落形成测定可观察单细胞发展成具有干细胞自我更新功能和多潜能的细胞的过程。在体外实验中,加拿大科学家发现来自成年小鼠侧脑室室管膜下区(SEZ)的单细     

18α-甘草次酸通过抗氧化作用促进成年小鼠室管膜下区神经干细胞增殖

目的 探讨18 α-甘草次酸(18α-GA)对成年小鼠室管膜下区(SVZ)神经干细胞(NSCs)增殖的影响及其机制.方法 100只6月龄BALB/c小鼠随机平均分为18α-GA组(腹腔注射18α-GA 40 mg/kg两个月,以DMSO为溶解介质)和DMSO对照组(腹腔注射含等体积DMSO溶解介质的PBS溶液),每组5...     

氯化锂对成年小鼠海马神经发生的影响

目的：观察氯化锂(LiCl)对成年小鼠海马细胞增殖与神经发生的影响。方法：用5-溴-2-脱氧尿核苷(BrdU)标记新生细胞,免疫组化染色后统计新生细胞数量;应用BrdU与抗微管蛋白单克隆抗体(JuJI)／抗胶质纤维酸性蛋白多克隆抗体(GFAP)双标记,鉴别出BrdU阳性细胞的细胞类型。结果：LiCl组小鼠海马齿状回细胞增殖与神经发生明显强于对照组;新增殖的细胞约有70％为神经元,5％左右为神经胶质细胞。结论：LiCl增强了成年小鼠海马齿状回的细胞增殖与神经发生,这一功能对于中枢神经系统退行性疾病的预防与治疗可能有重要的意义。     

NDRG2对成年大鼠室管膜下区神经干细胞增殖的影响

目的:探讨NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)对成年大鼠侧脑室室管膜下区(subventricular zone,SVZ)神经干细胞增殖的影响。方法:成年雄性Sprague-Dawley大鼠20只,随机分为对照组(n=10)、实验组(n=10)两组。实验组给予侧脑室注射过表达NDRG2的腺病毒,对照组给予侧脑室注射腺病毒空载体。采用Brd U免疫荧光染色法检测细胞增殖情况,Tunel染色检测细胞凋亡情况。结果:Brd U染色结果显示:实验组大鼠侧脑室室管膜下区Brd U阳性细胞显著少于对照组(P0.05);Tunel染色提示:两组大鼠侧脑室室管膜下区凋亡的细胞数未见明显差异(P0.05)。结论:上调NDRG2在成年大鼠脑内的表达,会抑制其侧脑室室管膜下区神经干细胞的增殖,但不影响其细胞的存活。     

用组织块法培养成年和老年鼠神经干细胞

目的　探索体外培养扩增成年及老年动物室管膜下区 (SVZ)神经干细胞的实用方法。方法　取 8、14及 2 4三个月龄SD大鼠SVZ组织块置含bFGF的DMEM/F12 +B2 7培养液培养 ,Nestin免疫组化法鉴定细胞表型。结果　各月龄的SVZ组织块均能长出Nestin阳性的神经小球及神经干细胞 ,培养 7～ 10天产生的神经球最多 ,神经干细胞状态最佳。结论　用含bFGF的培养基培养成年和老年大鼠SVZ组织块能产生较多的神经干细胞 ;此法是一种具有实用价值的培养、扩增神经干细胞的手段。     

去大脑皮质血管对成年大鼠侧脑室室管膜下层神经干细胞增殖的影响

目的:研究去大脑皮质血管对成年大鼠侧脑室室管膜下区(subependymal ventricular zone,SVZ)干细胞增殖的影响。方法:成年大鼠随机分为正常组和模型组,通过免疫组织化学的方法检测去大脑皮质血管后成年大鼠侧脑室前角、中央部、下角室管膜下BrdU标记细胞。结果:去皮质血管后大鼠侧脑室各部SVZ的BrdU阳性细胞的数目明显增多,去大脑皮质血管15d、30d大鼠侧脑室各部外侧壁和前角上壁SVZ的BrdU阳性细胞核计数均明显多于正常组。结论:去大脑皮质血管损伤可诱导大鼠脑内侧脑室室管膜下细胞的增殖。     

神经发生对小鼠学习记忆能力的影响

本研究探讨神经发生对学习记忆能力的影响。选择健康成年昆明小鼠随机分7组,分别为生理盐水对照组,酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)高、中、低剂量组,甲氨喋呤(MTX)高、中、低剂量组。使用脑立体定位仪行侧脑室埋管手术及侧脑室微量注射。用Morris水迷宫训练测试其空间学习与记忆能力;腹腔注射5-溴脱氧尿苷(BrdU)后通过免疫组织化学方法来显示Br-dU阳性细胞。结果表明,aFGF各剂量组学习记忆能力均强于生理盐水对照组;MTX高剂量组学习记忆能力显著低于生理盐水对照组。免疫组织化学结果显示aFGF各剂量组齿状回内BrdU阳性细胞数目显著高于对照组;而MTX高剂量组齿状回BrdU阳性细胞较之显著减少。结果提示,aFGF和MTX可能通过促进或抑制齿状回的神经发生,从而影响小鼠的学习与记忆能力。