人牙龈和牙周韧带成纤维细胞的体外培养及生物学特性研究——细胞形态、生长曲线及碱性磷酸酶活性测定

目的 :建立人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外培养模型并对其生物学特性作初步探讨。方法 :采用组织块法常规条件下分别进行牙龈和牙周韧带成纤维细胞的培养 ,通过光镜、透射电镜、生长曲线及碱性磷酸酶测定等手段对其部分生物学特性进行研究。结果 :两种培养的原代及传代细胞在光镜下细胞排列及结构无明显差别 ,传代培养时牙龈成纤维细胞有接触抑制现象 ,而牙周韧带成纤维细胞则可呈复层生长 ,牙周韧带成纤维细胞排列方向性较明显 ,生长曲线表明牙周韧带成纤维细胞增殖活性高于牙龈成纤维细胞 ;碱性磷酸酶活性测定及染色法显示两者有明显的差别。结论 :体外培养的两种细胞在形态及排列上相似 ,但在细胞亚型的组成上存在差异。     

人牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞的培养和生物学特征

目的：探讨采用不同方法建立体外培养人牙龈成纤维细胞和人牙周膜成纤维细胞并对其生物学特性作初步探讨。方法：分别采用消化培养法和组织块培养人的牙龈和牙周膜成纤维细胞。通过倒置显微镜活体观察，以及光镜、透射电镜、免疫组化和生长曲线等方法对其生物学特性作初步观察。结果：消化培养法成功率低于组织块培养法。光镜下和透射电镜下观察两种细胞在形态和结构上相似。免疫组化染色证实此两种细胞均来源于中胚层的纤维母细胞。生长曲线表明牙龈成纤维细胞的倍增时间比牙周膜成纤维细胞稍短，而牙周膜成纤维细胞的增殖活性比牙龈成纤维细胞高。结论：组织块培养法适用于此二种细胞的培养。细胞生物学特征方面有许多相似形，提示这两种细胞来于同一个细胞群。     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力的比较研究

目的：研究人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力的差异。方法：用组织块法培养同一患者的牙龈和牙周韧带成纤维细胞，取第4-8代细胞用矿化培养液长期培养，倒置显微镜下观察矿化情况，von Kos-sa染色显示钙盐沉积，生化法测定各组碱性磷酸酶活性，扫描电镜及X线能谱法分析矿化结节中钙磷比例。结果：倒置显微镜下观察牙周韧带成纤维细胞可呈复层生长，形成肉眼可见的白色结节，von Kossa染色显示结节内有钙盐沉积，碱性磷酸酶活性测定表明随着矿化培养时间的延长牙周韧带成纤维细胞组ALP活性比牙龈成纤维细胞组增高明显，扫描电镜下表明结节处电子反射增强，X射线能谱分析显示钙化结节内的钙磷比例与矿化组织相似；牙龈成纤维细胞及对照组体外不能形成钙化结节。结论：人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力不同。     

α-平滑肌肌动蛋白在牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中的表达及意义

目的 研究α—平滑肌肌动蛋白在体外培养的牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞中的表达并探讨其意义。方法 利用细胞培养和免疫细胞化学技术检测α—平滑肌肌动蛋白在体外培养的牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞中的表达。结果 α—平滑肌肌动蛋白在两种成纤维细胞中的免疫细胞化学染色均为阳性。结论 α—平滑肌肌动蛋白在牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞中稳定表达，可能在细胞收缩与基质改建中起重要作用。     

维甲酸诱导牙周韧带细胞分化的研究

目的研究并比较维甲酸对牙周韧带细胞和牙龈成纤维细胞向成骨样细胞分化潜能的影响。方法体外培养牙周韧带细胞与牙龈成纤维细胞,通过生化法、原位杂交及RT- PCR分别检测维甲酸作用前后碱性磷酸酶（ALP）活性的变化及其mRNA的表达情况。结果正常牙周韧带细胞与牙龈成纤维细胞的ALP活性有明显差别,前者高于后者;原位杂交及RT- PCR均检测到牙周韧带细胞有mRNA表达而牙龈成纤维细胞无表达。维甲酸作用后牙周韧带细胞ALP活性明显升高,mRNA表达信号相应增强,且在5×10- 6 mol/L组效果最明显;牙龈成纤维细胞ALP活性亦有升高,在mRNA水平仅RT- PCR检测到5×10- 6 mol/L组有较弱的表达,其他组及原位杂交均未见表达。结论牙周韧带细胞和牙龈成纤维细胞在向成骨方向的分化潜能上存在差异。     

冻融前后人牙髓等成纤维细胞生物学特征的比较

本研究对体外培养的第5代人牙髓牙周牙龈成纤维细胞进行了冷冻和复苏,三种细胞复苏的存活率分别为14%、19%和24%,复苏后细胞的生长曲线和倍增时间等生物学特征与冻存前基本一致,提示冻融后的人牙髓牙周牙龈成纤维细胞基本保持冻融前的生物学特征.     

SD大鼠类成牙骨质细胞体外培养的实验研究

目的 探讨体外培养源于SD人鼠磨牙牙骨质的类成牙骨质细胞的可行性。方法：仔细取得12周龄SD大鼠第一磨牙，使用组织块结合酶消化的二步法体外培养源于牙骨质的类成牙骨质细胞，进行形态观察，测定其生长曲线、贴壁率，并以牙周韧带成纤维细胞为对照进行骨钙素免疫组化染色测定。结果：SD大鼠的类成牙骨质细胞约任第14～18天从根面长出；生长曲线呈“S”形；接种后12小时约有94％的细胞贴壁。骨钙素在体外培养的类成牙骨质细胞中被强烈表达，在成纤维细胞中几乎不表达。结论：SD大鼠的类成牙骨质细胞可以在体外成功培养。     

口腔黏膜上皮细胞及成纤维细胞与PGA的生物相容性研究

目的：观察口腔黏膜上皮细胞与成纤维细胞在聚羟基乙酸(PGA)上的粘附生长情况，在体外形成活的黏膜样组织的能力。方法：口腔黏膜上皮细胞无血清、无饲养层体外培养、扩增至第二代，与PGA混合培养形成细胞一生物材料复合物；口腔黏膜成纤维细胞体外培养、扩增至第二代，与PGA混合培养形成细胞一生物材料复合物；①光镜、扫描电镜下观察两种细胞分别与PGA的粘附生长情况；②用MTT法检测口腔黏膜上皮细胞及成纤维细胞在PGA上的增殖情况，绘制细胞生长曲线。结果：口腔黏膜上皮细胞与成纤维细胞能够在PGA上粘附生长，其生长增殖能力优于平皿培养。结论：PGA与口腔黏膜上皮细胞或成纤维细胞具有良好的生物相容性，其降解产物无毒。不影响细胞生长及分泌基质。     

Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞和牙周韧带细胞中表达的比较研究

目的比较人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞在胶原基质合成方面的差别,并探讨其意义。方法采用组织块法体外培养人牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞,利用免疫细胞化学技术检测Ⅰ、Ⅲ型胶原在两种细胞中的表达,通过图像分析探讨其表达的差异。结果Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙周韧带细胞中表达阳性,在牙龈成纤维细胞中染色较弱。统计学分析显示,Ⅰ、Ⅲ型胶原在牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞的免疫细胞化学染色结果具有显著性差异(P<0.01)。结论牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞胶原基质的合成或分泌存在差异,这种差异可作为鉴别两种细胞的标志之一。     

人牙周组织中三种细胞的培养、形态学及增殖性研究

目的：研究牙周组织中三种主要细胞的形态、生长方式、增殖能力等生物学特性。方法：对人牙龈成纤维细胞(GFs)、牙周韧带细胞(PDLSs)及牙槽骨细胞(ABCs)进行分离、培养、传代，在倒置显微镜下观察其形态学及生长方式，用MTT法检测细胞的增殖活性。结果：三种细胞在镜下均表现出成纤维细胞的特征，但具有不同的增殖活性，GFs的增殖能力显著高于PDLSs和ABCs(P＜0．01)。结论：由于它们来源于不同的解剖部位，在体外培养中表现出不尽相同的特性，从而表明其在体内会发挥不同的作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周细胞生物学活性的影响

目的：观察基因重组入碱性成纤维细胞生长因子（rh-bFGF)牙龈成纤维细胞（GF）、人牙周韧带成纤维细胞（PDLF）及人牙槽骨细胞（ABC）的增殖、碱性磷酸酶活性、总蛋白含量及对3种细胞矿化结节形成能力的影响。方法：采用细胞培养、MTT比色测定、碱性磷酸酶测定法、考马宙蓝法及茜素红染色法。结果bFGF能促进3种细胞的增殖,但对PDLF和ABC的ALP活性,蛋白含量及矿化结节的形成有抑制作用。结论bFGF可促进细胞的增殖,抑制细胞的分化成熟,从而促进牙周再生。     

人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞生物学活性的研究

目的:体外原代培养人牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,并对其生物学活性作初步探讨.方法:采用组织块法原代培养牙周膜细胞和牙龈成纤维细胞,绘制生长曲线,测定二者碱性磷酸酶活性;流式细胞术和免疫组化染色法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原、骨形成蛋白的表达情况,观察对比两种细胞的生物学特性的异同.结果:牙龈成纤维细胞原代培养成功率及细胞增殖活性明显高于牙周膜细胞.在牙周膜细胞中,Ⅰ、Ⅲ型胶原均为阳性表达,棕黄色颗粒克满整个胞浆内.在牙龈成纤维细胞中Ⅰ型胶原为弱阳性表达,Ⅲ型胶原阳性表达更弱.牙周膜细胞的ALP水平明显高于牙龈成纤维细胞.牙周膜细胞BMP2表达为强阳性,而牙龈成纤维细胞表达弱阳性.结论:牙周膜细胞具有较强的成骨能力,是理想的牙周组织工程的种子细胞.牙龈成纤维细胞易于培养成活,增殖力强,具有牙周膜细胞的一些特点,组织取材方便,也可作为牙周组织工程的种子细胞.     

同一个体成骨细胞和牙周韧带成纤维细胞的原代培养

目的：探索用简单，高效的方法对同一个体的成骨细胞和牙周韧带成纤维细胞进行原代培养，以便迅速建立相关的体外研究模型，为进一步研究两种细胞的相互作用奠定基础。方法：实验用酶消化法结合组织块培养法获取大鼠牙周韧带成纤维细胞，用组织块移行生长法培养成骨细胞，并对细胞培养中取材的对象和部位，酶消化时间，污染的控制等进行探讨。结果：发现所获得的细胞符合成骨细胞和成纤细胞的形态特征和生物学特性，且生长良好。结论：用酶消化法结合组织块培养法培养大鼠牙周韧带成纤维细胞，其方法可行，结果可靠。     

骨形成蛋白在狗牙周组织中的分布及其意义

本研究首次应用bBMP-McAb免疫组化染色法，观察BMP在狗的牙周组织中的分布。结果显示：BMP主要分布于牙周韧带中，尤其是牙槽骨和牙骨质附近染色更深，并发现牙槽骨外侧BMP阳性区经过牙槽嵴与牙周韧带BMP阳性区相连续。而牙龈组织染色阴性．表明牙周韧带细胞与牙龈成纤维细胞不同，前者其有骨母样细胞的特性，并可参与牙周硬组织的形成；未分化细胞是否含有BMP，可作为评价该细胞是否具有骨母样细胞特性的参考标准之一．     

Scleraxis在牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞中的表达

目的研究碱性螺旋-环-螺旋转录因子 Scleraxis 能否在人牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞、骨髓基质细胞中表达,及其与牙周韧带细胞分化能力的关系。方法体外培养人牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞和骨髓基质细胞,RT-PCR 法检测牙龈成纤维细胞、骨髓基质细胞及不同代次牙周韧带细胞中 Scleraxis 的表达。结果 Scleraxis 在牙周韧带细胞、骨髓基质细胞及牙龈成纤维细胞中的表达差异有统计学意义(P<0.05)。其 Scleraxis 与β-肌动蛋白吸光度比值分别为0.877±0.024,0.438±0.031,0.313±0.083。Scleraxis 在牙周韧带细胞中的表达最强,在牙龈成纤维细胞中表达最弱。牙周韧带细胞中 Scleraxis 的表达随培养代次的增加而减弱。结论 Scleraxis 可表达于体外培养的牙周韧带细胞、牙龈成纤维细胞和骨髓基质细胞,Scleraxis 可能在牙周韧带细胞的分化过程中起重要作用。     

hBMP2基因转染对人牙龈成纤维细胞生物学特性的影响

目的分析hBMP2基因转染人牙龈成纤维细胞的生物学特性.方法用脂质体转染法将hBMP2基因转入人牙龈成纤维细胞内,经G418筛选后,获得阳性克隆.以原位杂交和免疫组化对转染细胞进行鉴定;进一步观察细胞形态、生长特性、碱性磷酸酶活性、骨钙素合成以及体外形成矿化结节的能力.结果hBMP2基因转染后,人牙龈成纤维细胞有hBMP2 mRNA的转录和蛋白表达;部分细胞由原来的长梭形转化为多角形,碱性磷酸酶活性和骨钙素合成均明显高于对照组(两组均P＜0.01);在矿化液作用下,能形成体外矿化结节.但细胞的增殖特性无明显变化.结论外源性hBMP2基因能够在人牙龈成纤维细胞表达,并促进其向成骨细胞方向转化,而对细胞的生长特性无明显影响.     

bFGF对成骨细胞和成纤维细胞生物学特性的影响

目的：明确bFGF埘体外成骨细胞和牙周膜成纤维细胞迁移、矿化相关蛋白合成的影响，以探讨bFGF促进牙周组织再生的内任机制以及在牙种植体组织界面局部应用bFGF诱导类牙周膜形成的可行性。方法：同一只SD大鼠米源的两种细胞经传代培养至第四代，建立细胞迁移模型，分别在普通培养基和含bFGF的培养基中培养，观察测量细胞迁移速度，并分别测试两种细胞在普通培养基和含bFGF的培养基中的碱性磷酸酶（ALP）活性歧Ⅰ型胶原的含量。结果：普通培养基培养时，成骨细胞迁移速度快于成纤维细胞；但牙周膜成纤维细胞加bFGF培养辽移速度明显高于其他各组；bFGF抑制成骨细胞的Ⅰ型胶原的合成和ALP的活性。结论：bFGF能日月硅促进牙周膜成纤维细胞的移行；bFGF能抑制成骨细胞的碱性磷酸酶活性。     

矿化相关蛋白在牙周组织中的分布及意义

目的：研究矿化相关蛋白在牙周组织中的分布并探讨其意义。方法：取正常成年杂种狗第二磨牙及其牙周组织,利用免疫组化SP法对矿化相关蛋白在牙周组织中的表达进行定位研究。结果：骨桥素OPN在牙周韧带基质及细胞中表达阳性,牙龈结缔组织中表达弱阳性,牙槽骨中邻近牙周韧带的部位表达阳性,其余部位及牙骨质中表达阴性;骨钙素OC在牙周韧带中表达阳性,牙龈结缔组织中表达弱阳性,牙槽骨中染色较弱且不均匀,牙骨质中表达阴性;骨唾蛋白BSP在牙周韧带中表达阳性,牙槽骨中染色集中在哈佛氏管周围,牙骨质和牙龈表达阴性。结论：矿化相关蛋白在牙周韧带基质及细胞中阳性表达,提示牙周韧带细胞在矿化组织的形成与再生中具有重要作用;矿化相关蛋白在牙周韧带细胞和牙龈成纤维细胞中的不同表达可作为鉴别牙龈成纤维细胞与牙周韧带细胞的标志。     

牙髓成纤维细胞传代培养与冻存复苏后生长情况比较

目的：比较牙髓成纤维细胞在体外传代培养及冻存复苏后细胞生长情况的差异,探讨其应用价值。方法：采用组织块培养法对牙髓组织标本进行体外成纤维细胞的原代及传代培养,观察成纤维细胞形态及生物学特性,选取第4代处于对数生长期的细胞梯度降温后置入液氮中（196℃）保存3个月,比较经传代培养细胞与复苏后成纤维细胞的生长情况,用MTT法分别绘制细胞生长曲线,比较细胞生长情况。结果：经冻存保存3个月后牙髓细胞复苏率超过80%,而细胞形态未见明显的改变。复苏后细胞生长较对照组慢,进入对数生长期的时间较对照组略长。但两者生长曲线基本一致。结论：牙髓成纤维细胞传代培养与冷冻复苏后形态及生长特性基本相同,冻存的成纤维细胞可以成功的复苏。     

牙骨质基质提取物促进牙周细胞在牙根表面附着的研究

目的 明确附着的牙根表面的牙骨质基质提取物具有促进牙周细胞附着的方法。方法 采集健康的牙龋组织和牙周膜,体外培养牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞。从因正畸需拔除的健康牙体表面获得牙骨质基质提取物,分别观察不同作用时间,不同浓度的牙骨质基质提取物对牙龈成纤维细胞和牙周膜成纤维细胞在牙体表面附着的影响,结果 牙龈成纤维细胞,牙周膜成纤维细胞均对牙骨质基质提取物有浓度和时间依赖性,最佳作用时间为２小时,