microRNA-145对TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞上皮间充质转化的影响

目的研究micro RNA-145(miR-145)对转化生长因子(TGF)-β1诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)上皮间充质转化(EMT)的影响。方法人工合成miR-145基因序列,构建真核重组质粒p CMVmiR-145。以未处理HK-2细胞为对照组;以TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1组;以p CMV-myc空白质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1空白质粒组;以p CMV-miR-145质粒转染后经TGF-β1处理HK-2细胞为TGF-β1+miR-145组。采用实时荧光定量PCR检测miR-145表达。采用Western blot检测TGF-β/Smad信号传导蛋白TGF-β1、Smad3、Smad2/3、p-Smad2/3,以及EMT生物标记物蛋白α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)和I型胶原蛋白(ColⅠ)的表达水平。采用ELISA法检测培养细胞上清液中FN和Col I的含量。结果miR-145表达质粒构建成功,重组质粒有效转染TGF-β1诱导HK-2细胞。与对照组比较,TGF-β1+miR-145组细胞中miR-145表达上调(P0.01);与对照组和TGF-β1+miR-145组比较,TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组细胞中miR-145表达均下降(P0.01)。与TGF-β1组和TGF-β1空白质粒组比较,TGF-β1+miR-145组细胞内TGF-β1、Smad3、Smad2/3和p-Smad2/3蛋白表达量减少(P0.05);α-SMA、FN、ColⅠ蛋白表达亦明显减少(P0.05);TGF-β1+miR-145组培养液上清中FN、ColⅠ含量减少(P0.05)。结论 miR-145参与TGF-β1处理HK-2细胞EMT的调控。miR-145可能通过抑制TGF-β依赖的Smad信号通路活性,从而抑制肾小管EMT。     

干扰素α对乙型肝炎病毒X蛋白诱导小鼠足细胞系凋亡的影响及分子机制研究

目的 观察干扰素α（INF-α）对乙型肝炎病毒X （HBx）蛋白诱导的小鼠足细胞系（MPC5）凋亡的影响及其分子机制。方法 以携带HBx基因的pEX质粒转染MPC5细胞,采用逆转录PCR检测不同时间点HBx mRNA表达水平。将MPC5细胞分为对照组：正常条件下培养的MPC5细胞;INF-α组：正常MPC5细胞与INF-α共培养;HBx组：HBx诱导的MPC5细胞;HBx+INF-α组：HBx诱导的MPC5细胞与INF-α共培养。不同实验条件下干预48 h后,采用流式细胞术检测各组MPC5细胞凋亡情况;采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测足细胞裂孔隔膜相关蛋白（nephrin、CD2AP、synaptopodin）和细胞骨架相关蛋白（TRPC6）的mRNA及其蛋白的表达。结果 pEX-HBx转染MPC5细胞后48 h HBx mRNA表达最高（P < 0.05）。HBx组MPC5细胞凋亡率显著高于对照组、INF-α组和HBx+INF-α组（P < 0.05）。与对照组和INF-α组相比,HBx组nephrin、synaptopodin、CD2AP mRNA及其蛋白的表达水平明显降低,TRPC6 mRNA及其蛋白的表达水平明显增高（P < 0.05）。与HBx组相比,HBx+INF-α组nephrin、synaptopodin、CD2AP mRNA及其蛋白的表达水平明显增高,TRPC6 mRNA及其蛋白的表达水平明显降低（P < 0.05）。结论 INF-α可抑制HBx诱导的MPC5细胞凋亡,其机制可能与INF-α可调节HBx诱导的足细胞裂孔隔膜相关蛋白（CD2AP、nephrin、synaptopodin）和细胞骨架相关蛋白（TRPC6）的异常表达恢复正常有关。     

转化生长因子β1对高体积分数氧暴露早产新生大鼠肺纤维化的调控作用（英文）

目的探讨转化生长因子（TGF-β1）对高体积分数氧（高氧）暴露早产新生大鼠肺纤维化的调控作用。方法将80只早产新生SD大鼠随机分为空气组和高氧组,每组40只;每组又随机分为3、7、14、21d4个亚组。采用原位杂交法检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达与分布;采用免疫组织化学法检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1蛋白、Ⅰ型与Ⅲ型胶原表达与分布;并用图像分析方法检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白与Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达的PU值。结果高氧第3天,肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白呈现弱阳性表达,第7、14、21天呈强阳性表达,其表达量于第7天开始增高,第14天达高峰;肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白阳性表达的PU值在第7、14、21天均高于空气组（Pa〈0.01）。Ⅰ型胶原在第3、7天时呈弱阳性表达,第14、21天时呈强阳性表达,其表达量从第14天开始增加,第21天时达高峰;Ⅲ型胶原表达强度在第3天时呈弱阳性,第7天时开始增强呈中等阳性表达,第14、21天时呈强阳性表达,其表达量在第7天时开始增加,第14天时达高峰,表达量高于Ⅰ型胶原;肺组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达的PU值在第14、21天时均明显高于空气组（Pa〈0.01）。高氧组肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白与Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达均分布于支气管和血管周围结缔组织及肺间质中;在第14、21天高氧组肺组织TGF-β1蛋白表达与Ⅰ型胶原呈显著正相关（r=0.881,0.793 Pa〈0.01）,与Ⅲ型胶原亦呈显著正相关（r=0.866,0.891 Pa〈0.01）。结论TGF-β1过度表达而介导的细胞外基质（ECM）过度合成是肺纤维化发生的重要机制,在肺纤维化形成过程中TGF-β1对Ⅰ型、Ⅲ型胶原等ECM的沉积发挥重要的调控作用。     

槐杞黄对哮喘大鼠模型的作用及其机制研究

目的 探索槐杞黄在哮喘大鼠模型中的作用及相关机制。方法 将40只Sprague-Dawley大鼠随机分为对照组、哮喘模型组、布地奈德组和槐杞黄组（n=10）。通过卵白蛋白致敏并激发建立哮喘大鼠模型,布地奈德组在每次激发前以布地奈德2 mg雾化,槐杞黄组在每次激发前以槐杞黄4 g/kg溶于水中灌胃。苏木精-伊红染色观察各组大鼠肺组织病理变化;计数肺泡灌洗液（BALF）中嗜酸性粒细胞比例;ELISA法检测各组BALF中细胞因子IL-3、IL-4、IL-5、IL-10、INF-γ及IgE浓度;流式细胞术检测外周血及脾脏中Th1/Th2细胞比例;RT-PCR法检测肺组织中T-bet、GATA-3 mRNA表达;应用Western bolt检测肺组织中T-bet、GATA-3蛋白表达。结果 与对照组相比,哮喘组大鼠气道炎症程度明显增加;BALF中嗜酸性粒细胞比例显著升高;IL-3、IL-4、IL-5、IgE浓度显著升高,而IL-10、INF-γ浓度明显下降;外周血及脾脏Th1细胞比例明显降低,Th2细胞比例明显升高;肺组织T-bet mRNA及其蛋白表达水平明显降低,GATA-3 mRNA及其蛋白表达水平明显升高（P < 0.05）。槐杞黄及布地奈德均能明显改善哮喘大鼠气道炎症及上述指标水平（P < 0.05）,且效果相当;但与对照组比较,差异仍有统计学意义（P < 0.05）。结论 槐杞黄能改善哮喘大鼠气道炎症,缓解哮喘症状,其机制可能与调节相关细胞因子水平及Th1/Th2比例有关,这一作用可能经T-bet和GATA-3通路进行调控。     

注意缺陷多动障碍患儿药物治疗前后microRNA表达量与临床症状的关系

目的 探讨注意缺陷多动障碍（ADHD）儿童药物治疗前后microRNA表达量与临床症状的关系。方法 选取2017年5月至2018年10月初诊为ADHD儿童80例为研究对象,将愿意接受药物治疗的儿童随机分为盐酸哌甲酯治疗组（n=31）和盐酸托莫西汀治疗组（n=33）,不愿接受治疗的作为未治疗组（n=16）,随访中盐酸哌甲酯组脱落10例,盐酸托莫西汀组脱落13例。另随机选取同时期行健康体检儿童60例作为健康对照组。ADHD儿童在首诊、随访3个月、6个月时进行SNAP-V评分,并采集ADHD及健康对照组儿童血清样本以荧光定量PCR法检测miR-4655-3p和miR-7641的相对表达量。结果 重复测量方差分析结果显示,注意力不足症状SNAP-V评分在两治疗组和未治疗组中,以及两种miRNA相对表达量在两治疗组和健康对照组中均存在分组与时间因素差异,且分组与时间因素均存在交互作用（P < 0.05）。多动冲动症状SNAP-V评分在两治疗组和未治疗组中存在时间因素差异（P < 0.05）,而分组因素差异无统计学意义,且时间因素与分组因素无交互作用（P > 0.05）。经药物治疗的ADHD儿童注意力不足症状SNAP-V评分与miRNA-4655-3p和miRNA-7641相对表达量均呈负相关（分别r=-0.314、-0.495,P < 0.05）。结论 药物治疗可显著改善ADHD儿童的临床症状;血清中miR-4655-3p和miR-7641的表达水平可能作为ADHD的诊断及疗效评估的分子指标。     

表没食子儿茶素-3-没食子酸酯对宫内生长受限大鼠肝脏脂代谢的影响和机制

目的 探讨表没食子儿茶素-3-没食子酸酯（EGCG）对宫内生长受限（IUGR）大鼠肝脏脂代谢的影响和机制。方法 采用母鼠孕期全程限食法建立IUGR大鼠模型,随机分为IUGR组和EGCG组,EGCG组大鼠在离乳后用含EGCG的饮用水喂养至10周,同时设立正常对照组,每组8只。13周龄时,测量各组大鼠体重后,采集大鼠血液及肝脏组织标本,检测各组大鼠血清空腹总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、游离脂肪酸（FFA）、血糖（FPG）、胰岛素（FINS）和肝脏脂质水平,计算稳态模型评估胰岛素抵抗（HOMA-IR）和脂肪组织胰岛素抵抗（adipo-IR）,观察肝脏组织病理切片,并采用实时荧光定量PCR法检测肝脏相关基因的相对表达水平。结果 13周龄时,各组大鼠体重比较差异无统计学意义（P=0.067）。各组间的FPG、FFA、FINS、HOMA-IR和adipo-IR水平比较差异均有统计学意义（P < 0.05）。各组间的血清TC和TG水平比较差异无统计学意义（P > 0.05）,但在肝脏中IUGR组TC和TG水平均明显高于EGCG组（P < 0.05）。油红染色结果提示,IUGR大鼠的肝脏脂肪储积明显增加,而EGCG能够改善该现象。PCR结果显示,与对照组相比,IUGR组的Ampk mRNA及Adipor1 mRNA表达水平降低,Srebf1 mRNA表达水平增加（P < 0.05）,EGCG能逆转IUGR大鼠Ampk mRNA及Srebf1 mRNA的表达水平,且与对照组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 早期EGCG干预可能通过Ampk/Srebf1通路下调脂肪酸的从头合成,并通过改善肝细胞的胰岛素抵抗,从而降低IUGR大鼠的肝脏脂肪积累。     

探讨3种评分系统对儿童严重脓毒症预后的评估价值

目的 探讨儿童年龄适应性序贯器官衰竭评分（pSOFA）、儿童死亡危险评分（PRISM Ⅲ）、儿童危重病例评分（PCIS）在儿童严重脓毒症中的预测价值和使用价值,以期为临床工作提供借鉴。方法 分析收治的193例严重脓毒症患儿的临床资料,根据最终结局将患儿分为存活组（n=151）和死亡组（n=42）。根据入院24 h内各指标的最差值进行pSOFA、PRISM Ⅲ、PCIS评分。受试者工作特征曲线（ROC）分析各评分系统预测脓毒症死亡风险的效能,平滑曲线拟合分析各评分系统的相关性和阈值效应,决策曲线分析（DCA）各评分系统的使用价值。结果 ROC分析示PCIS与pSOFA预测价值相当（P=0.182）,PRISM Ⅲ与pSOFA预测价值相当（P=0.210）,但PRISM Ⅲ优于PCIS （P=0.045）。3种评分系统与预后的拟合程度为PRISM Ⅲ > pSOFA > PCIS。DCA分析显示当严重脓毒症患儿死亡风险分别为0.4和0.6时,使用3种评分系统作为紧急干预决策依据,患儿的标准净受益（SNB）为SNB （pSOFA） > SNB （PRISM Ⅲ） > SNB （PCIS）。结论 3种评分系统对严重脓毒症患儿预后均有一定的预测价值,作为临床决策辅助工具可使患儿从中受益,pSOFA优于PRISM Ⅲ和PCIS。     

福辛普利对肾小球系膜细胞 TGF-β1/Smad 信号通路的干预作用

目的观察新型血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)--福辛普利(fosinopril,FOS)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)Ⅰ型胶原(ColⅠ)蛋白分泌和Smad2、Smad7mRNA表达量的影响。方法建立体外培养的大鼠GMC,鉴定后3～10代用于实验。实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组(加5ng/L TGF-β1和5%的胎牛血清)和FOS组(加5ng/L TGF-β1、10μmol/L FOS和5%的胎牛血清)3组,分别于6、24和48h后ELISA法测定细胞培养上清液中ColⅠ蛋白表达量,荧光定量PCR法检测Smad2、Smad7 mRNA表达量的变化。结果①正常培养的大鼠GMC均有一定量的ColⅠ蛋白表达;TGF-β1刺激组在各时间点ColⅠ蛋白分泌均高于对照组(P<0.01),FOS各组ColⅠ蛋白分泌均低于TGF-β1刺激组(P<0.05)。②正常培养的大鼠GMC可表达一定量Smad2、Smad7 mRNA,TGF-β1刺激组在各时间点Smad2、Smad7 mRNA表达量均高于对照组,FOS治疗组Smad2 mRNA表达量均低于TGF-β1刺激组;Smad7 ...     

转化生长因子β1对高体积分数氧暴露早产新生大鼠肺纤维化的调控作用

目的 探讨转化生长因子(TGF-β1)对高体积分数氧(高氧)暴露早产新生大鼠肺纤维化的调控作用.方法 将80只早产新生SD大鼠随机分为空气组和高氧组,每组40只;每组又随机分为3、7、14、21 d4个亚组.采用原位杂交法检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达与分布;采用免疫组织化学法检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1蛋白、Ⅰ型与Ⅲ型胶原表达与分布;并用图像分析方法 检测各亚组早产大鼠肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白与Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达的PU值.结果 高氧第3天,肺组织TGF-β1mRNA及其蛋白呈现弱阳性表达,第7、14、21天呈强阳性表达,其表达量于第7天开始增高,第14天达高峰;肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白阳性表达的Pu值在第7、14、21天均高于空气组(Pa<0.01).Ⅰ型胶原在第3、7天时呈弱阳性表达,第14、21天时呈强阳性表达,其表达量从第14天开始增加,第21天时达高峰;Ⅲ型胶原表达强度在第3天时呈弱阳性,第7天时开始增强呈中等阳性表达,第14、21天时呈强阳性表达,其表达量在第7天时开始增加,第14天时达高峰,表达量高于Ⅰ型胶原;肺组织Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达的PU值在第14、21天时均明显高于空气组(Pa<0.01).高氧组肺组织TGF-β1 mRNA及其蛋白与Ⅰ型、Ⅲ型胶原阳性表达均分布于支气管和血管周围结缔组织及肺间质中;在第14、21天高氧组肺组织TGF-β1蛋白表达与Ⅰ型胶原呈显著正相关(r=0.881,0.793 P.<0.01),与Ⅲ型胶原亦呈显著正相关(r=0.866,0.891 Pa<0.01).结论 TGF-β1过度表达而介导的细胞外基质(ECM)过度合成是肺纤维化发生的重要机制,在肺纤维化形成过程中TGF-β1对Ⅰ型、Ⅲ型胶原等ECM的沉积发挥重要的调控作用.     

内皮细胞微粒在过敏性紫癜患儿中的表达及意义

目的 探讨内皮细胞微粒（EMPs）在过敏性紫癜患儿中的表达及意义。方法 100例初治过敏性紫癜患儿分为紫癜性肾炎组（HSPN组,40例）和非肾炎组（60例）,并以30例健康体检儿童为对照组。采用流式细胞术或ELISA方法检测各组血清EMPs、Th17及IL-17的表达或含量。结果 Th17及IL-17在HSP的肾炎组和非肾炎组均高于对照组,以HSPN组最高,差异有统计学意义（P < 0.05）。HSP肾炎组和非肾炎组的EMPs水平较对照组升高,以HSPN组最高,差异有统计学意义（P < 0.05）。紫癜性肾炎组的Th17、IL-17水平与EMPs水平呈正相关（r=0.830、0.644,P < 0.05）。结论 EMPs在过敏性紫癜的发病机制中起一定作用,EMPs升高可能是过敏性紫癜患儿肾脏受累的原因之一。     

川芎嗪对哮喘大鼠气道壁胶原沉积和TGF-β1表达的影响

目的　上皮下胶原沉积及纤维化是哮喘气道重建的典型特征 ,转化生长因子 β1(TGF β1)在此过程中发挥了重要作用。该研究旨在观察川芎嗪对大鼠哮喘模型气道壁胶原及TGF β1含量的影响。 方法　 4 0只SD大鼠随机分成对照组 (A)、哮喘组 (B)、激素干预组 (C)、小剂量 (D)和大剂量 (E)川芎嗪干预组 ,以卵蛋白致敏并长期吸入激发制备哮喘模型 ,C ,D ,E组分别在每次激发前腹腔注射地塞米松 0 .5mg 只 ,川芎嗪 4 0mg kg及川芎嗪 80mg kg。 4周后处死大鼠 ,收集肺组织标本观察病理改变 ,并采用免疫组化半定量测定气道壁I ,III型胶原和TGF β1的含量。 结果　B组气道壁III型胶原和TGF β1含量均显著高于A组 ,C ,D ,E组均较B组降低 ,差异有显著性 (均P <0 .0 1) ,E组与A组、C组含量接近 (均P >0 .0 5 ) ,D组III型胶原和TGF β1含量高于E组 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;气道壁TGF β1表达与III型胶原含量呈显著正相关 (rs =0 .70 6 3,P <0 .0 1)。各组间I型胶原含量差异无显著性 (均P >0 .0 5 )。结论　川芎嗪减少哮喘大鼠气道壁III型胶原沉积和TGF β1的表达 ,对III型胶原的抑制可能部分通过抑制TGF β1的表达而实现。     

整合素β3受体信号途径在结缔组织生长因子调控肺动脉平滑肌细胞增殖与迁移和细胞外基质基因表达中的作用

目的 探讨整合素β3受体信号途径在结缔组织生长因子(CTGF)促进肺动脉平滑肌细胞增殖、迁移和细胞外基质基因表达中的作用机制研究.方法 分离并培养SD大鼠肺动脉中膜平滑肌细胞,实验使用第3～7代细胞;细胞分为3组:(1)空白组:不加任何刺激因子;(2)CTGF组:培养体系中加入CTGF(50 ng/ml);(3)CTG...     

LeftyA蛋白对转化生长因子β1所致肾小管上皮细胞纤维化的影响

目的 观察LeftyA蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)纤维化的影响,并初步探讨其作用机制.方法 体外培养人肾小管上皮细胞(HK-2)细胞,通过LipofectamineTM2000介导基因转染及药物筛选构建LeftyA蛋白稳定表达HK-2细胞系;TGF-β1(10ng/ml)刺激此细胞系,于0、6、12、24、48h通过Western blot分别检测E-钙粘蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及p-Smad2/3的表达变化,通过Real-time PCR检测Ⅰ型胶原(ColⅠ)及结缔组织生长因子(CTGF)基因的表达变化.结果 不同浓度的TGF-β1刺激24 h后HK-2细胞内E-eadherin、α-SMA蛋白的变化均表现出明显的剂量效应,而当TGF-β1浓度达到10ng/ml时,α-SMA蛋白合成达到平台期(P＞0.01),因此本实验中以10ng/ml的TGF-β1作为刺激剂量;TGF-β1(10 ng/ml)刺激HK-2细胞6 h可引起E-cadherin表达下降(P＜0.01),刺激24 h后可诱导其合成表达α-SMA(P＜0.05),同时细胞内ColⅠ基因转录增加(P＜0.01);正常HK-2细胞内没有p-Smad2/3的表达,TGF-β1(10 ng/ml)刺激30min即可诱导其激活表达,并在1 h时迅速达到高峰,其后开始下降;高表达LeftyA蛋白能够减轻TGF-β1所致上皮细胞转分化(EMT)及纤维化的程度,降低p-Smad2/3的表达高峰,并抑制CTGF的表达(P＜0.01).结论 LeftyA蛋白能够通过抑制TGF-β1所致Smad2/3磷酸化及CTGF表达发挥抗肾小管上皮细胞纤维化的作用.     

孕期和哺乳期1，25-（OH）2D3干预对子代哮喘大鼠肺组织TGF-β1和Smad3表达的影响

目的：探讨孕期和哺乳期1,25-二羟维生素D3［1,25-（OH）2D3］干预对子代哮喘大鼠肺组织中转化生长因子β1（TGF-β1）及Smad3表达的影响。方法：雌性Wistar大鼠32只,随机分为4组（n=8）：低剂量、中剂量及高剂量1,25-（OH）2D3干预组和对照组。受孕第7天起,以隔天灌胃的方式分别给予低、中剂量及高剂量组2、10、20 μg/mL 1,25-（OH）2D3,对照组以生理盐水代替,直到子代大鼠生后21 d断乳为止。制备子代大鼠哮喘模型。采用RT-PCR和免疫组织化学方法分别从mRNA和蛋白水平检测TGF-β1和Smad3的表达变化。结果：(1)各组仔鼠哮喘模型支气管炎症程度不同,与对照组相比,低、中剂量组炎症反应减轻,而高剂量组则加重。(2)免疫组织化学结果显示,与对照组相比,TGF-β1及pSmad3在低、中剂量组表达明显降低（P<0.05）,而在高剂量组则表达明显增高（P<0.05）。(3) 荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,低、中剂量组TGF-β1和Smad3 mRNA表达降低（P<0.05）,而高剂量组两者的mRNA表达增高（P<0.05）。结论：在大鼠哮喘模型中,1,25-（OH）2D3可能通过维生素D受体信号通路,进而调节TGF-β/Smad信号通路相关蛋白的表达而发挥免疫调节作用。     

HGF对TGF-β1诱导尿道瘢痕成纤维细胞α-SMA及细胞外基质过度合成的保护作用

目的 探讨HGF对TGF-β1诱导尿道瘢痕成纤维细胞α-SMA及细胞外基质过度合成的保护作用.方法 收集尿道下裂术后瘢痕组织的标本,进行尿道瘢痕成纤维细胞的分离和培养.待细胞生长成单层后,以胰蛋白酶消化传代.取第四代成纤维细胞用于实验,当细胞达到80%融合时,培养液中加入TGF-β1(5ng/ml)及HGF(10～40ng/ml).培养72 h后,用RT-PCR检测各组α-SMA mRNA的变化;ELISA测定细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维结合素的表达.结果 TGF-β1能显著诱导α-SMA m-RNA表达.随HGF的加入,α-SMA m-RNA的表达则明显受到抑制(P＜0.05),且随HGF浓度的升高其阻抑作用呈逐渐增强趋势.对照组、单纯TGF-β1组、加入TGF-β1与10、20、40ng/ml HGF组的Ⅰ型胶原A值分别为0.51±0.04、0.78±0.05、0.71±0.02、0.63±0.03、0.57±0.02,Ⅲ型胶原A值分别为0.12±0.01、0.29±0.02、0.21±0.02、0.14±0.01、0.08±0.01,纤维结合素A值分别为0.24±0.03、0.51±0.02、0.49±0.01、0.38±0.02、0.28土0.01.表明TGF-β1同样能诱导Ⅰ、Ⅲ型胶原及纤维结合素的表达(P＜0.01),而HGF则可以有效地阻抑其表达,其效应呈剂量依赖性(P＜0.05).结论 HGF对TGF-β1诱导的尿道瘢痕成纤维细胞α-SMA及细胞外基质过度合成具有抑制作用.这为临床预防和治疗尿道瘢痕狭窄提供了理论依据.

Abstract：

Objective To examine the inhibitory effects of HGF on TGF-β1 induced a-SMA and extracellular matrix synthesis in cultured fibroblasts derived from urethral scar. Methods Fibroblasts isolated from urethral scar were cultured ex vivo. After the fibroblasts reached confluence, cells were detached using trypsin/ethylenediamine tetra-acetic acid. All experiments were performed using the cells at the fourth passage. At 80% confluence, TGF-β1 (5 ng/ml) and HGF (10-40 ng/ml) were added to the culture medium. After 72 hours co-incubation, the mRNA of a-SMA was studied by RTPCR. The productions of collagen Ⅰ, Ⅲ and fibronectin in supernatants were also examined using ELISA. Results TGF-β1 markedly induced a-SMA mRNA expression in cultured fibroblasts. However, HGF could abrogated TGF-β1-induced a-SMA mRNA expression in a dose-dependent manner (P＜0. 05). The levels of collagen type Ⅰ were 0. 51 ± 0. 04,0. 78 ± 0. 05,0. 71 ± 0. 02,0. 63 ± 0. 03, and 0. 57 ± 0. 02 in control, TGF-β1, TGF-β1 + 10 ng/ml HGF, TGF-β1 + 20 ng/ml HGF, and TGF-β1 +10 ng/ml HGF group, respectively. The levels of collagen type Ⅲ were 0. 12 ± 0. 01,0. 29 ± 0. 02,0. 21 ± 0. 02,0. 14 ± 0. 01, and 0. 08 ± 0. 01 in control, TGF-β1, TGF-β1 + 10 ng/ml HGF, TGF-β1 +20 ng/ml HGF, and TGF-β1 + 10 ng/ml HGF group, respectively. And the levels of fibronectin were 0.24±0.03,0.51 ± 0.02,0.49 ± 0.01,0.38 ± 0.02,0.28 ± 0.01 in control, TGF-β1, TGF-β1 +10 ng/ml HGF, TGF-β1 + 20 ng/ml HGF, and TGF-β1 + 10 ng/ml HGF group, respectively. TGF-β1 significantly stimulated collagen Ⅰ, Ⅲ and fibronectin production in fibroblasts (P＜0. 01 ). However,HGF could reduced abrogated the up-regulation of collagen Ⅰ, Ⅲ and fibronectin induced by TGF-β1 in a dose-dependent manner (P＜0. 05). Conclusions HGF can effectively inhibit TGF-β1 induced aSMA and extracellular matrix synthesis in cultured fibroblasts derived from urethral scar.     

急性脑缺血小鼠脑组织中转化生长因子-β1的表达及意义

目的：转化生长因子-β1(TGF-β1)在脑损伤的发生、发展等过程中发挥着重要作用,实验性脑损伤动物可有TGF-β1的高表达。本文探讨急性脑缺血小鼠脑组织中TGF-β1的表达情况及其意义。方法：20只小鼠随机分为正常对照组和脑缺血模型组。通过结扎小鼠左侧颈总动脉制备脑缺血模型。原位杂交方法检测脑组织中TGF-β1 mRNA的表达。结果：模型组小鼠脑组织中TGF-β1的表达程度较高,其中8例为Ⅲ级,2例为Ⅱ级;而在正常对照组小鼠脑组织中基本不表达TGF-β1,仅1例表达为Ⅰ级。结论：TGF-β1可能与动物缺血性脑损伤的发生有关。