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酶法转化制备L-瓜氨酸 总被引:5,自引:2,他引:5
利用粪链球菌精氨酸脱亚胺酶转化L-精氨酸制备L-瓜氨酸。考察了菌龄、转化温度等多种因素对精氨酸脱亚胺酶活力的影响。酶法制备L-瓜氨酸的最适工艺条件是:菌体发酵时间20 h,转化温度37℃,转化液起始pH为6.0,ρ〔十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)〕=0.3 g/L使酶活提高了414%。c(Co2+)=10-3mol/L使酶活增高约50%,c(Cu2+)=10-2mol/L或c(Zn2+)=10-2mol/L使酶活下降约50%。Ca2+、Mg2+和Mn2+对酶活影响较小。 相似文献
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DL-苯丙氨酸的酶法拆分研究 总被引:9,自引:0,他引:9
利用氨基酰化酶能立体专一地水解氨基酰化物的特点,选择性地水解N-乙酰-L-苯丙氨酸得到L-苯丙氨酸,经分离后再水解N-乙酰-D-苯丙氨酸得到D-苯丙氨酸。研究中分别考察了pH值、温度、酶用量、底物浓度和钴离子对反应的影响。在优选条件下(底物浓度为0.1mol·L-1,pH7.0,温度37℃,酶用量为w(酶)/w(底物)=1∶41.4,加入浓度为1×10-3mol/L的Co2+,将N-乙酰-D-苯丙氨酸用有机溶剂结晶和盐酸水解10h)得到光学纯度OP=98.8%的L-苯丙氨酸,收率70.3%;OP=96%的D-苯丙氨酸,收率63%。 相似文献
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以AB-8、HZ-841、HZ-802三种大孔树脂做载体,采用物理吸附法,制备出固定化南极假丝酵母脂肪酶(CALB),并用其进行了拆分2-辛醇的研究。其中AB-8树脂做载体拆分效果最佳,其蛋白吸附量为37.94 mg/g树脂,吸附率94.86%,转酯化酶活3 000 U/g固定化酶,对映体选择性E=104。单因素优化实验得到的最佳拆分条件为:温度40℃,加酶量2.67 g/L,底物醇浓度3.76 mol/L。在该条件下,产物转化率可达50%,e.ep为97.8%。固定化pH在5.0~9.0内对拆分效果无显著影响。 相似文献
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精氨酸脱亚胺酶发酵条件研究 总被引:2,自引:0,他引:2
对一种新型肿瘤增殖抑制酶类一精氨酸脱亚胺酶的发酵生产工艺进行了研究。运用单因子扫描方法,考察了不同碳源、氮源等影响因子对粪肠球菌(Enterococcus faecalis)NJ402产精氨酸脱亚胺酶的影响。优选出其较佳培养基组分为(g/L);蔗糖15,蛋白胨5,酵母膏5,牛肉膏2.5,NaCl3,KH2PO42,MgSO40.01,MnSO40.0025,L-精氨酸15;接种量以4%~5%为宜,最佳培养温度是37℃,最适起始pH为7.5。100L发酵罐实验表明,发酵到10h时,菌量与比酶活量均为最大,分别为40mg/mL和2.57U/mL。 相似文献
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双水相体系萃取精氨酸脱亚胺酶 总被引:1,自引:0,他引:1
报道了利用聚乙二醇/硫酸铵双水相体系从自溶NJ402菌粗提酶液中分离纯化精氨酸脱亚氨酶(ADI)的研究结果,为精氨酸脱亚氨酶的分离纯化提供了一种方法。在双水相体系中采用聚乙二醇(PEG)与(NH4)2SO4为组成成分,考察了聚乙二醇(PEG)平均相对分子质量、PEG质量分数、(NH4)2SO4质量分数、pH及NaCl质量分数对精氨酸脱亚氨酶分离纯化效果的影响。最佳双水相体系萃取条件为:聚乙二醇(PEG)平均相对分子质量为1 000,w(PEG1000)=15%,w[(NH4)2SO4]=20%,pH=6.5,室温下从自溶NJ402菌粗提酶液中分离纯化精氨酸脱亚氨酶,纯化倍数达到2.35倍,萃取率达91.1%。 相似文献
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报道了青霉素酰化酶法制备D-丙氨酸的研究结果,为D-丙氨酸的制备提供了一种方法。考察了pH、温度、DL-丙氨酸与苯乙酰氯的摩尔比、反应时间对制备结果的影响。确定了制备N-苯乙酰-DL-丙氨酸的最佳反应条件:pH=9.5,n(DL-丙氨酸)∶n(苯乙酰氯)=1.1∶1;酶促反应最佳条件为:pH=7.5,温度37℃条件下反应6h,其产物为N-苯乙酰-D-丙氨酸和苯乙酸的混合物。该混合物用c(HC l)=6 mol/L的盐酸高温回流6 h得D-丙氨酸盐酸盐,再经717阴离子树脂处理得D-丙氨酸。光学纯度为95.3%,总收率为72.5%。 相似文献
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反胶束萃取精氨酸脱亚胺酶 总被引:1,自引:0,他引:1
报道了用反胶束体系萃取精氨酸脱亚胺酶(ADI)的研究结果,为精氨酸脱亚胺酶的分离纯化提供了一种方法。在反胶束体系中采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)作为表面活性剂,正辛烷和丁醇作为溶剂及助溶剂。考察了水相pH、振荡时间、离子强度、表面活性剂浓度及精氨酸脱亚胺酶质量浓度等因素对精氨酸脱亚胺酶分离纯化效果的影响。实验结果表明,当c(CTAB)=0.01 mol/L,pH=7,振荡时间15 min,体系中用于反萃取的c(NaCl)=0.75 mol/L,且起始粗酶质量浓度控制在30 g/L时,通过辛烷/丁醇/CTAB反胶束体系的萃取和反萃取,ADI酶液萃取率E达到85%,比活达到1.107 U/mg,是起始酶液的4.52倍。 相似文献
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A novel Enterococcus faecalis strain designated N J402 was found with high activity of arginine deiminase (ADI). The optimum condition for catalytic activity was determined in terms of temperature (about 40℃), thermostability (available 37℃) and pH (6-7). The effects of substrate and product concentration were studied. The effects of various metal ions added in reaction mixtures on the biocatalyst were investigated and ADI of N J402 was found to exhibit Co^2+ dependence, different from previous reports. Surfactant, cetyl trimethyl ammonium bromide, was one of the most important keys for producing L-citrulline. The enzyme in resting cells possessed the quality of high stability for reuse. 相似文献
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Leilei Zhu Kang Lan Tee Dr. Danilo Roccatano Prof. Dr. Burcu Sonmez Ye Ni Dr. Zhi‐Hao Sun Prof. Ulrich Schwaneberg Prof. Dr. 《Chembiochem : a European journal of chemical biology》2010,11(5):691-697
Arginine deiminase (ADI; EC 3.5.3.6) has been studied as a potential antitumor drug for the treatment of arginine‐auxotrophic tumors, such as hepatocellular carcinomas (HCCs) and melanomas. Studies with human lymphatic leukemia cell lines confirmed that ADI is an antiangiogenic agent for treating leukemia. The main limitation of ADI from Pseudomonas plecoglossicida (PpADI) lies in its pH‐dependent activity profile, its pH optimum is at 6.5. A pH shift from 6.5 to 7.5 results in an approximately 80 % drop in activity. (The pH of human plasma is 7.35 to 7.45.) In order to shift the PpADI pH optimum, a directed‐evolution protocol based on an adapted citrulline‐screening protocol in microtiter‐plate format was developed and validated. A proof of concept for ADI engineering resulted in a pH optimum of pH 7.0 and increased resistance under physiological and slightly alkaline conditions. At pH 7.4, variant M2 (K5T/D44E/H404R) is four times faster than the wild‐type PpADI and retains ~50 % of its activity relative to its pH optimum, compared to ~10 % in the case of the wild‐type PpADI. 相似文献
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(2S)-6-氟-3,4-二氢-4-氧代-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸是合成非达司他(一种口服醛糖还原酶抑制剂)关键中间体。该研究使用脂肪酶Novozym 435,对(±)-6-氟-3,4-二氢-4-氧代-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸甲酯进行拆分,并对拆分反应条件进行了优化,确定了拆分的最适反应条件:乙腈-水溶液为溶剂,V(水)∶V(乙腈)=1∶4,m(酶)∶m(底物)=1∶10,在pH=7.0,温度40℃,时间为6 h条件下,得到的(2S)-6-氟-3,4-二氢-4-氧代-2H-1-苯并吡喃-2-羧酸的总收率为32.5%,对映体过量值为92.1%,为非达司他的制备提供了一条可行途径。 相似文献