硒化壳聚糖对栉孔扇贝血细胞中部分免疫因子的影响

取人工养殖栉孔扇贝(Chlamys farreri)的血淋巴,体外加入不同浓度的硒化壳聚糖,作用1h后采用生化方法分别测定栉孔扇贝血细胞中的髓性过氧化物酶(MPO)和非特异性酯酶(NSE)的活力,以及过氧化氢(H2O2)和活性氧的含量。结果表明:加入硒化壳聚糖后,栉孔扇贝血细胞中依赖卤素的MPO、不依赖卤素的MPO、α-醋酸萘酯酶和α-丁酸萘酯酶的活力均为实验组显著高于对照组,过氧化氢和活性氧的含量也为实验组显著高于对照组。说明硒化壳聚糖对栉孔扇贝血淋巴中多种参与免疫防御的酶的活力和具有杀菌作用的免疫因子的含量均具有明显的提高作用,因而硒化壳聚糖对栉孔扇贝的免疫功能具有明显的增强作用。     

硒化卡拉胶和酵母葡聚糖对栉孔扇贝血淋巴中两种水解酶活力的影响

对栉孔扇贝分别注射硒化卡拉胶和酵母葡聚糖后，采用生化方法，于1h,15h和30h分别测定栉孔扇贝血清和血细胞中2种参与免疫防御的水解酶酸性磷酸酶（ACP）和溶菌酶的活力，结果表明，注射硒化卡拉胶后，栉孔扇贝血清和血细胞中ACP活力在1h和30h时均为实验组显著高于对照组，溶菌酶活力也均在1和30h时实验组显著高于对照组，注射酵母葡聚糖后，ACP活力在1h,15h和30h时均为实验组极显著地高于对照组，溶菌酶活力则均为实验组与对照组差异不显著，说明硒化卡拉胶对栉孔扇贝血淋巴中ACP和溶菌酶的活力均有增强作用，而酵母葡聚糖仅对其ACP活力有增强作用。     

富硒海洋球石藻(Emiliania huxleyi)的培养及其硒蛋白的初步分离纯化

在不同浓度亚硒酸钠(Na2SeO3)条件下培养海洋球石藻,分析其生长和富集硒情况,并采用(NH4)2SO4分级盐析、DEAE-Sepharose离子交换柱层析和SephacrylS-200凝胶过滤层析方法,对球石藻硒蛋白进行了初步分离纯化。结果表明,在本实验条件下,不添加外源硒的f/2培养基本底硒浓度(约3.2nmol/L)为海洋球石藻最佳生长和富硒的硒浓度,其细胞内硒含量可达到6475?g/g干重。离子交换和凝胶层析分离的含硒蛋白结合的最高硒含量分别达到392.3ng/mg和663.5ng/mg蛋白。SDS-PAGE纯度鉴定显示,在分子量分别约为41.3kDa和30.1kDa处各有单一电泳条带。结果提示,海洋球石藻能在环境硒浓度极低的条件下大量吸收硒并将大部分无机硒转化为硒蛋白。富硒能力较强的海洋球石藻有望作为一种新的有机硒资源,对开发含硒安全性食品具有很大的应用潜力。     

扇贝碱性磷酸酶中Zn的作用

以华贵栉孔扇贝Chlamys nobilis(Reeve)为材料,获得聚丙烯酰胺凝胶电泳为单一蛋白区带的酶制剂。用凝胶过滤法测得该酶的分子量为159000,由20种氨基酸组成,共1118个氨基酸残基。每个酶蛋白含有4个Zn原子。将该酶的酶制剂制成脱Zn酶后,与相同浓度过度性两价金属离子作用,其活力回升以Zn最强,Co次之。若向脱Zn酶蛋白分别加入一定量Zn原子或Co原子,根据实验结果初步推测:每个酶蛋白的4个Zn原子中有2个Zn原子先与该酶结合,与酶的催化作用有密切关系;另外2个Zn原子与酶结合,则起维持酶结构的作用,与哺乳动物和Eschericha coli来源的碱性磷酸酶研究结果一致。此外,本实验采用可见吸收光谱和圆二色谱(CD)来确证Co能很好地取代该酶蛋白内的Zn,与Simpon报道相比较,得知当Co原子加入脱Zn酶时,先加2个Co~(2 )离子结合到该酶的结构部位,而后加2个Co~(2 )离子才结合到催化部位。     

几种海洋生物中硒存在形式初探

采用不同提取分离方法，分析几种海洋生物中硒的存在形式。结果表明，贻贝、扇贝及海藻中硒有相似的分布特点，大部分硒是以蛋白质和氨基酸形式存在。     

硒对华贵栉孔扇贝碱性磷酸酶的酶动力学及理化性质研究

探讨了微量硒(Se~(4+))对华贵栉孔扇贝(Chlamys nobilis(Reeve))碱性磷酸酶(AKP)的作用。以催化动力学原理研究了不同缓冲系统中微量硒时AKP的影响。结果表明,Se~(4+)对谈酶的作用与酶所处的环境有关。在0.05 mol/L Na_2CO_3-NaHCO_3(pH 9.0)缓冲溶液中Se~(4+)浓度小于12.5 mmol/L时呈现出激活作用;Se~(4+)浓度大于12.5 mmol/L时呈现出非竞争性的抑制作用,其抑制常数为6.81×10~(-2)mol/L。在0.05 mol/L Tris-HCl缓冲系统(pH 9.0)中,微量Se~(4+)对AKP具有强烈竞争性抑制作用,其抑制常数为3.79×10~(-1)mol/L。经紫外吸收光谱、荧光发射光谱和圆二色谱的实验表明,微量Se~(4+)与AKP作用后,该酶的构象已发生了变化。研究发现海水环境中若含有微量Se~(4+)(SeO_3~(2-)),可以促进扇贝AKP的水解。利于贝类的生长发育和外壳的形成,并有益于贝类的繁殖。     

扇贝多肽在体外对免疫细胞活性的影响及其抗紫外线的氧化损伤作用

采用噻唑盐（MTT）比色方法研究在紫外线辐射损伤条件下扇贝多肽对免疫细胞的保护作用，并探讨扇贝多肽对胸腺细胞和脾细胞活性的影响，结果表明，扇贝多肽具有抗紫外线氧化损伤的作用，可减轻或抑制紫外线对胸腺细胞和脾细胞的氧化损伤，并且呈剂量依赖性，扇贝多肽在0.5%-10.0%的浓度范围内，其抗氧化能力随浓度的增高而增强，在正常条件下可显著增强免疫细胞的活性，并且可拮抗雌激素对免疫细胞的抑制作用。提示扇贝多肽不仅具有抗氧化损伤作用，而且具有免疫增强使用。     

应用酵母双杂交系统筛选虾夷扇贝FOXL2的相互作用蛋白

FOXL2是脊椎动物的雌性决定基因,在多种无脊椎动物中也被认为是雌性决定与分化的关键基因,但其在无脊椎动物中的作用机制目前尚不清晰。本文利用Clontech酵母双杂交系统筛查虾夷扇贝FOXL2的相互作用蛋白。研究首先构建诱饵质粒pGBKT7-FOXL2,并检测诱饵蛋白的毒性及自激活活性,结果显示诱饵蛋白对酵母菌株无毒,也无自激活活性。利用该诱饵质粒,本研究从虾夷扇贝酵母双杂交cDNA文库筛选得到17个阳性克隆,测序验证得到12个读码框正确的阳性克隆,它们来自4种蛋白:COP9信号复合体亚基5、钠/钾ATP酶β3、哺乳动物室管膜相关蛋白1和胰脂肪酶相关蛋白2。研究进一步将诱饵质粒与4种蛋白的猎物质粒进行共转化验证,结果均为阳性,表明这4种蛋白与虾夷扇贝FOXL2都可能存在相互作用。本文为研究FOXL2在无脊椎动物性别决定与分化中的作用提供了参考。     

几种海洋生物体内硒含量的测定

本文用石墨炉原子吸收光谱法直接测定几种海洋生物体内的硒含量。本方法的最低检出限为３０ｐｇ，变异系数低于５．９％，回收率９４％－９９％。测定发现；褐藻含硒量比红藻和绿藻低，紫贻贝和海湾扇贝的外套膜中硒含量远远高于肌肉组织。     

栉孔扇贝糖蛋白的制备及其抗肿瘤活性初步研究

近年,对海洋贝类药用研究较多。80年代末日本报道虾夷扇贝(Patinopectenyessoensis)中的糖蛋白有很强的肿瘤抑制作用;国内对扇贝边氨基多糖的抗凝作用[1,2],扇贝边提取物对药物性肝损伤的保护作用[3]以及对大鼠血脂水平的影响[4]作过研究。本文首次从栉孔扇贝边中分离获得糖蛋白,并对其抗肿瘤活性进行了初步研究。1　材料与方法1.1　材料扇贝边鲜品系从栉孔扇贝Chlamysfarreri中剥离获得,于1995年5月采自青岛麦岛海珍品养殖场;昆明种小鼠由山东省医科院动物中心提供;S180腹水瘤由山东省医科院药物研究所提供;其他试剂均为A.R.级。1.2　方…     

栉孔扇贝大规模死亡问题的对策与应急措施

在对山东沿海栉孔扇贝大规模死亡原因进行分析的基础上,从理论和技术上提出了解决栉孔扇贝死亡问题的对策和应急措施,包括坚持可寺续发展,产业结构调整,加强科技意识,实施“外延稀养”战略等对策和改良种质,增强抗逆能力,切实合理降低养殖密度,研究死亡原因和防病措施,开展多元化养殖,建立浅海持续养殖示范区,保护栉孔扇贝自然种群和建立扇贝良种场等应急措施。     

一株从栉孔扇贝病贝体内分离到的分类地位待定的特殊微生物

从典型患病栉孔扇贝(Chlamys farreri)体内分离到一株特殊微生物，光镜下可见的粒子为革兰氏染色阴性；电镜观察为圆形、近似圆形，已经发现的粒子大部分直径在300nm以下，最小为50nm左右，最大可达4000nm以上。该细菌在人工培养基上形不成肉眼可见的菌落，倒置显微镜下其菌落为无色透明、圆形、小点状菌落。生化特性测试表明该细菌能利用吐温-40与吐温-80。其分类地位尚待进一步分析和证实。     

栉孔扇贝精子形成过程的超微结构研究

通过电镜观察,描述了栉孔扇贝精子形成过程的超微结构变化。栉孔扇贝的精子过程可分成为早期,中期和后期３个阶段。（１）早期：细胞核呈团块状,近端中心粒移向精子细胞的后端并嵌在核的凹窝处,在被观察的视野内,可见到大量与精子细胞分离的成熟鞭毛。（２）中期：核由团块状向流线型转变。顶体泡向帽状顶体转变,顶体下间隙开始出现。近端中心粒分化出中心粒卫星体。（３）后期：精子细胞核变成上窄下宽的长柱状,形成帽状顶体     

一种栉孔扇贝寄生虫——车轮虫的初步研究

2000年夏季，对在胶南、蓬莱、烟台三个养殖区采集到的发生大面积死亡前后的栉孔扇贝进行组织学研究，发现鳃丝和外套腔内寄生有大量的车轮虫，并伴随有大量的黏液产生。车轮虫和黏液的平均检出率分别为18％和12％。本对此类车轮虫进行形态学、病理学等方面的研究，并指出了其对栉孔扇贝的危害作用。     

脂多糖对栉孔扇贝血清和血细胞中7种酶活力的影响

实验于１９９８年１￣１０月进行。栉孔扇贝注射脂多糖后,分别于１,１５和３０ｈ测定了其血清和血细胞中７种参与免疫防御的水解酶、氧化酶和抗氧化酶的活力。结果表明,血清实验组的酸性磷酸酶（ＡＣＰ）活力在１,１５和３０ｈ时,血细胞实验组在１ｈ时显著高于对照组。血清和血细胞实验组的碱性磷酸酶（ＡＫＰ）活力仅在１ｈ时,溶菌酶活力分别在１ｈ和１５ｈ时显著高于对照组。血细胞中无酚氧化酶（ＰＯ）活性。血清实验组的Ｐ     

栉孔扇贝消化管的组织学观察

运用石蜡切片法和组织化学方法，对栉孔扇贝的消化管进行了研究，结果表明，整个消化管从腔内到腔外，都由黏膜上皮、黏膜肌层、结缔组织和外膜组成。黏膜上皮层由纤毛柱状细胞和杯状细胞组成，基膜很薄，皮下有一层有肌纤维，结缔组织中有丰富的血腔隙，除直肠的外膜为浆膜外，其余皆为纤维膜。纤毛和黏液在食物的运输中起重要作用。胃和晶杆囊上皮能分泌消化酶。胃上上有较弱的碱性磷酸酶和脂酶活性。胃和晶杆囊上皮及纤毛有酸性磷酸酶活性，晶杆囊上皮的核前细胞质中含铁，各部位不含钙。     

栉孔扇贝胚胎超低温液氮保存

选用两种低温保护剂配方，Ａ：１０％甘油＋４％葡萄糖；Ｂ：１５％ＤＭＳＯ（二甲基亚铜）＋４％葡萄糖＋２％柠檬酸盐，利用微机控制生物降温仪，对栉孔扇贝胚胎进行液氮低温保存。似１℃／ｍｉｎ由室温降温至－２０℃，接着以２０℃／ｍｉｎ降温至－８０℃，然后样品直接入液氮保存（－１９６℃），１周后，经４５℃水浴解冻，栉孔扇贝胚胎（发育６ｄ）的存活率达６５．１％（Ａ配方）和５６．５％（Ｂ配方）；而采用６℃／ｍｉｎ     

栉孔扇贝精子超微结构的研究

利用电镜研究栉孔扇贝精子的超微结构。精子包括头部、中段与末段三部分。头部由顶体和细胞核组成。锥形顶体位于细胞核的前端;亚顶体腔内包含疏松的低电子密度物质;细胞核致密,有不规则的囊泡位于其中。４个卵圆形的线粒体围绕着中心粒复合体形成了精子的中段。末段细长,轴丝为典型的“９＋２”结构。