下调UHRF1的表达在抑制肝癌进展中的作用

目的 探讨UHRF1的异常表达在肝癌（hepatocellular carcinoma, HCC）进展中的作用机制。方法 采用RT-PCR和Western blot法检测UHRF1在20例HCC标本中的mRNA和蛋白表达水平, Western blot法检测不同转移潜能的肝癌细胞HepG2、SMMC7721、MHCC97L和HCCLM3中的UHRF1 的表达水平;siRNA技术干扰HCCLM3细胞中UHRF1表达后,MTT法检测细胞增殖,Western blot 法检测BAX和BCL-2表达水平的改变,流式细胞术检测HCCLM3细胞周期和细胞凋亡的变化。结 果 UHRF1在肺癌组织中的表达水平较癌旁组织显著上调（P<0.05）,随着肝癌细胞转移潜能升高而UHRF1表达水平也依次升高（P<0.01）;siRNA技术干扰HCCLM3细胞中UHRF1表达后,HCCLM3细胞生长速度明显下降（P＜0.05）,HCCLM3细胞的促凋亡蛋白BAX表达水平明显上升,而抑凋亡蛋白BCL-2表达水平明显下降;UHRF1-siRNA干扰HCCLM3细胞48 h时,细胞周期分布无明显影响（P＞0.05）;但UHRF1表达下调有促凋亡作用,与对照组相比,干扰组的细胞凋亡率显著升高,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 UHRF1基因在肝癌组织中表达上调,下调UHRF1的表达能够抑制肝癌进展,可能是通过诱导肿瘤细胞凋亡来实现的。     

腺病毒介导人VEGF-siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的抑制作用

目的: 研究腺病毒介导人VEGFsiRNA对裸鼠移植骨肉瘤的治疗作用。方法：利用腺病毒重组技术将VEGFsiRNA基因克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中，构建重组腺病毒AdVEGFsiRNA，重组腺病毒体外感染骨肉瘤MG63细胞，RT-PCR检测MG63细胞VEGF的表达水平。建立荷人骨肉瘤MG63裸小鼠动物模型，以Ad-VEGFsiRNA瘤组织注射治疗，检测移植瘤组织中VEGF的表达情况及Ad-VEGFsiRNA对肿瘤生长和肺转移的抑制作用。结果：成功构建了表达VEGFsiRNA的重组腺病毒载体AdVEGFsiRNA；体外与体内实验检测Ad-VEGFsiRNA转染骨肉瘤细胞MG63后显著抑制VEGF表达。荷人骨肉瘤裸鼠经Ad-VEGFsiRNA治疗后，显示其对移植骨肉瘤生长有明显抑制作用（P<0.05），并且对骨肉瘤的肺转移有显著的抑制作用（P<0.05）。结论：所构建的Ad-VEGFsiRNA可以有效抑制骨肉瘤中VEGF表达，使裸鼠移植骨肉瘤生长减慢，并且显著抑制荷瘤裸小鼠肺转移的发生。     

腺病毒介导Her2／neu siRNA对卵巢癌细胞的生长抑制作用

目的观察腺病毒介导的针对Her2／neu基因RNAi表达载体对Her2／neu的抑制及抑制后对卵巢癌SKOV-3细胞的生长的影响。方法通过构建的针对Her2neu的siRNA重组腺病毒（滴度为1．6×10^8PFU／mL）感染卵巢癌细胞SKOV-3后，采用Western—blot法观察Her2／neu基因的沉默效果，流式细胞仪分析细胞周期变化，cell Proliferation法检查细胞体外增殖能力。结果构建的重组腺病毒Adeno—Her2siRNA感染卵巢癌细胞SKOV-3后Her2／neu的蛋白表达降低；S期细胞较对照组未感染细胞比例增加；肿瘤细胞胞增殖速度缓慢（P〈0．05）。结论成功构建的重组腺病毒Adeno-Her2siRNA感染后可有效降低Her2／neu蛋白水平表达，阻滞细胞感染于S期，造成感染细胞生长速度减慢，有望为卵巢癌的基因治疗提供一种选择手段。     

重组腺病毒载体介导人LASS2基因在肝癌细胞转移中的抑制作用

目的:探讨人源性长寿保障基因(homo-sapiens longevity assurance homologue 2 of yeast LAG1,LASS2)对人肝癌HCCLM3细胞体外转移的影响及可能的作用机制.方法:构建含人LASS2基因的重组腺病毒并转染入HCCLM3细胞;采用蛋白质印迹法检测HCCLM3细胞中LASS2蛋白的表达水平;划痕实验及体外侵袭实验检测LASS2基因过表达对HCCLM3细胞在迁移和侵袭等转移能力上的改变;免疫共沉淀法验证LASS2蛋白与V-ATPase(vacuolar H+-ATPase)质子泵中的c亚基(ATP6L)在细胞内相互结合的情况;通过对细胞内外H+浓度的测定,探讨LASS2过表达对V-ATPase功能抑制的情况.结果:成功构建了含人LASS2基因的重组腺病毒,LASS2基因在HCCLM3细胞中能有效表达;LASS2过表达可使HCCLM3细胞的侵袭和迁移能力均明显下降(P＜0.01),其中侵袭能力下降达(48.3±7.6)％,穿过划痕的细胞个数从对照组的(59.00±6.87)个下降至(10.83±3.75)个;LASS2蛋白与ATP6L蛋白在HCCLM3细胞内特异性结合;LASS2过表达后,细胞内外H+浓度发生明显变化,表明V-ATPase质子泵功能受到抑制.结论:LASS2基因在HCCLM3细胞中过表达可抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力,其机制可能与LASS2蛋白结合ATP6L,抑制其分泌H+功能相关.     

骨桥蛋白下调对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响

目的观察骨桥蛋白(osteopontin, OPN)下调后对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响.方法构建针对OPN的siRNA(small interference RNA)表达质粒, 用脂质体方法转染PC3细胞.RT-PCR和Western blot检测转染后PC3细胞OPN 的表达; MTT比色法和流式细胞仪检测PC3细胞OPN下调对细胞的生长和细胞周期的影响;软琼脂生长实验检测OPN下调后对PC3细胞集落形成的影响.结果 RT-PCR和Western blot证实经RNA干扰介导的PC3细胞存在OPN表达下调,转染的细胞生长受抑制,出现细胞周期S期阻滞和细胞凋亡,在软琼脂上的细胞集落形成率下降.结论经RNA干扰的选择性OPN下调可使PC3细胞在S期阻滞并出现细胞凋亡,细胞的恶性程度下降.     

介导反义cyclin D1的重组腺病毒的构建及其对人肺腺癌细胞的作用 *

目的:构建介导反义cyclin D1的重组腺病毒,研究其对人肺腺癌细胞内的细胞周期、增殖和凋亡的影响.方法:将cy-clin D1基因反向克隆于穿梭质粒载体pAdCMV中,通过脂质体与pJM17共转染293细胞,经同源重组产生编码反义cyclin D1的重组腺病毒.体外观察和检测重组腺病毒感染人肺腺癌细胞系GLC-82和SPC-A-1以及人胚肺二倍体细胞2BS后,细胞周期的改变、凋亡的发生和相关基因表达的变化.结果:构建并扩增、纯化得到编码反义cyclin D1的重组腺病毒Ad-AS cyclin D1,滴度达1×10~(10)pfu/ml.肿瘤细胞感染Ad-AS cyclin D1后,RT-PCR分析显示cyclin D1基因表达下调;同时出现了明显的G1期阻滞和凋亡,凋亡相关基因bcl-2和bax基因的表达分别出现下调和上调;人胚肺二倍体细胞感染Ad-ASmyc后无上述变化.肿瘤细胞体外克隆形成能力Ad-AS cyclin D1抑制.结论:反义cyclin D1的重组腺病毒感染肿瘤细胞可使cyclin D1基因表达下调,继而诱导肿瘤细胞G1期阻滞和凋亡,使肿瘤细胞致瘤能力和肿瘤生长被抑制,但不影响正常细胞.     

腺病毒介导microRNA-99a过表达抑制肝癌细胞生长

目的:利用腺病毒介导microrRNA-99a(miR-99a)的过表达,观察miR-99a对肝癌细胞生长的抑制作用,探讨一种腺病毒介导miRNA治疗肿瘤的新方法。方法:qRT-PCR检测正常肝细胞系L-02和肝癌细胞系HepG2、SMMC-7721、Hep3B和Huh7细胞中miR-99a的表达,构建含miR-99a的重组5型腺病毒Ad5-miR-99a。用空载腺病毒Ad-blank和Ad5-miR-99a分别感染Huh7细胞,MTT法和集落形成实验检测miR-99a过表达对Huh7细胞生长的抑制作用。结果:与正常肝细胞L02和其他肝癌细胞相比,miR-99a在肝癌Huh7细胞中表达量相对最低(P<0.01)。成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,Ad5-miR-99a感染Huh7细胞后,miR-99a可在Huh7细胞中稳定高表达。集落形成实验和MTT实验显示,相对于Ad-blank组,Ad5-miR-99a可显著抑制Huh7细胞的生长和集落形成(P<0.01)。结论:成功构建重组腺病毒Ad5-miR-99a,miR-99a能有效抑制肝癌细胞的增殖,Ad5-miR-99a有可能成为治疗肝癌的新药物。     

小RNA干扰沉默CD147基因对膀胱癌T-24细胞生物学行为的影响

目的:探讨重组腺病毒介导的小RNA干扰(small interfering RNA,siRNA)沉默CD147基因表达对人膀胱癌T-24细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响.方法:构建针对CD147基因的siRNA重组腺病毒表达载体Ad-CD147 siRNA,感染人膀胱癌T-24细胞.实验设空白对照组(Mock)、阴性对照组(Ad-siControl)和干扰组(Ad-CD147 siRNA).采用RT-PCR检测CD147和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF) mRNA的表达水平;蛋白质印迹法检测CD147蛋白的表达水平;MTT法检测细胞增殖的情况,Transwell小室法和划痕实验检测对细胞侵袭和迁移能力的影响;明胶酶谱实验检测基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和MMP-9的分泌情况;ELISA法检测VEGF蛋白分泌水平.结果:成功构建了Ad-CD147 siRNA腺病毒表达载体,Ad-CD147 siRNA可使T-24细胞CD147 mRNA和蛋白表达量下调＞90％(P＜0.01),细胞增殖速率下降＞40％(P＜0.01),细胞侵袭力和迁移力明显下降(P＜0.01),MMP-2和MMP-9的分泌量分别下降了68.5％和37.1％(P＜ 0.01),VEGF mRNA和蛋白表达水平分别下降了57.2％(P＜ 0.01)和56.5％(P＜0.01).结论:Ad-CD147 siRNA能有效抑制T-24细胞中CD147基因的表达,继而降低细胞增殖、迁移及侵袭能力.因此,CD147有可能成为膀胱癌基因治疗的一个新靶点.     

胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA表达载体的构建及其对胃癌细胞的影响

目的探讨胃癌相关基因GCRG213小干扰RNA(siRNA)转染对胃癌细胞MKN45的影响。方法设计两对针对GCRG213可转录为siRNA的DNA片段,退火后插入siRNA表达载体IMG-800。测序正确的重组子IMG-800-1(含干扰片段1)、IMG-800-2(含干扰片段2)和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。采用半定量RT-PCR及Western免疫印迹法,比较转染不同质粒的MKN45细胞中GCRG213在mRNA和蛋白质水平上的表达差异。选取稳定转染不同质粒的MKN45细胞,采用细胞计数法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪分析细胞的增殖状态,Annexin V FITC/PI双标记法检测凋亡细胞,平板克隆形成实验、裸鼠移植瘤实验分析转染细胞成瘤性。结果经测序证实,干扰片段退火后正确插入小干扰RNA表达载体IMG- 800,组成重组子IMG-800-1和IMG-800-2。重组子IMG-800-1、IMG-800-2和空载体经脂质体转染人胃癌细胞系MKN45细胞,G418筛选获得稳定转染的细胞株。与对应的空载体比较,RT-PCR结果显示,转染siRNA的MKN45细胞中,mRNA的表达分别下调44.9%和49.5%;Western印迹法结果显示,转染siRNA的MKN45细胞中,蛋白的表达分别下调55.3%和64.2%。与转染空载体的细胞相比,转染siRNA的MKN45细胞生长增殖速度明显减慢,细胞周期表现为处于G0～G1期的细胞有所增加,G2/M期和(或)S期的细胞比例减少,细胞凋亡率增加,细胞克隆形成数量减少,裸鼠体内成瘤性降低。结论胃癌相关基因GCRG213 siRNA转染,可抑制肿瘤细胞的生长和增殖,促进肿瘤细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞的成瘤性。     

腺病毒介导入VEGF—siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的抑制作用

目的：研究腺病毒介导入VEGF-siRNA对裸鼠移植骨肉瘤的治疗作用。方法：利用腺病毒重组技术将VEGF—siRNA基因克隆入增殖缺陷型腺病毒基因组中，构建重组腺病毒Ad—VEGF-siRNA，重组腺病毒体外感染骨肉瘤MG63细胞，RT-PCR检测MG63细胞VEGF的表达水平。建立荷人骨肉瘤MG63裸小鼠动物模型，以Ad-VEGF—siRNA瘤组织注射治疗，检测移植瘤组织中VEGF的表达情况及Ad．VEGF—siRNA对肿瘤生长和肺转移的抑制作用。结果：成功构建了表达VEGF—siRNA的重组腺病毒载体Ad—VEGF-siRNA；体外与体内实验检测Ad—VEGF—siRNA转染骨肉瘤细胞MG63后显著抑制VEGF表达。荷人骨肉瘤裸鼠经Ad—VEGF—siRNA治疗后，显示其对移植骨肉瘤生长有明显抑制作用（P〈0．05），并且对骨肉瘤的肺转移有显著的抑制作用（P〈0．05）。结论：所构建的Ad—VEGF—siRNA可以有效抑制骨肉瘤中VEGF表达，使裸鼠移植骨肉瘤生长减慢，并且显著抑制荷瘤裸小鼠肺转移的发生。     

The role of RhoC in the proliferation and apoptosis of hepatocellular carcinoma cells

In this study, we examined the effects of RhoC expression on the growth and apoptosis of human hepatocellular carcinoma cells (HCCs) in vitro in order to gain more understanding of its potential as a therapeutic target gene. We knocked down the endogenous expression levels of RhoC in human HCCs, BEL-7402, using siRNA and ectopically expressed RhoC in untransformed hepatocytes, HL7702. Stable cell lines were established, and cell growth was examined by MTT and colony formation assays, cell proliferation examined by silver nitrate staining of AgNORs, and cell cycle distribution examined by flow cytometry. RT-PCR analysis was performed to determine the mRNA expression levels of RhoC and cell cycle-related genes. Finally, the effect of RhoC expression on apoptosis was also examined by flow cytometry, agarose gel electrophoresis of fragmented DNA, Wright staining, and RT-PCR analysis for genes regulating apoptosis. Compared to the parental and control siRNA (siCtrl)-transfected BEL-7402 cells, the siRhoC-transfected cells exhibited significantly reduced cell growth, cell proliferation, percentage of cells in the S-G2/M phase, and expression of Cyclin D1, CDK4, and Bcl2. Knockdown of RhoC expression in BEL-7402 cells also significantly increased the percentage of cells in the G0/G1 phase, cellular apoptosis, and expression of p21, p16, and Bax. Furthermore, ectopic expression of RhoC in HL7702 cells led to a significant increase in cell growth compared to parental or siCtrl-transfected cells. These data suggest that RhoC is a key regulator of cell growth and apoptosis in HCC cells, making it a potential target for gene therapy.     

Tripartite motif-containing 3 (TRIM3) inhibits tumor growth and metastasis of liver cancer

Background:Reduced expression of tripartite motif-containing 3 (TRIM3) has been reported to be involved in the pathogenesis of human glioblastoma.In our previous research,we found that TRIM3 expression was markedly reduced in human primary hepatocellular carcinoma (HCC) tissues and that low TRIM3 expression was associated with short survival of HCC patients.However,the role of TRIM3 in liver cancer remains unknown.This study aimed to investigate the function of TRIM3 in liver cancer cells.Methods:The protein levels of TRIM3 in five liver cancer cell lines (SK-Hep1,Hep3B,Huh7,HepG2,Bel-7402) and one normal liver cell line (L02) were detected with Western blotting.HepG2 and Bel-7402 cells with IowTRIM3 expression were infected with recombinant lentiviruses overexpressing TRIM3 (LV-TRIM3),whereas Huh7 and Hep3B cells with high TRIM3 expression were transfected with TRIM3-targeted small interfering RNA (siTRIM3).The functions of TRIM3 in the proliferation,colony formation,cell cycle,migration,invasion,and apoptosis of the above cell lines were examined.The effect of TRIM3 on tumor growth and metastases in nude mice was also investigated.Results:TRIM3 was overexpressed in HepG2 and Bel-7402 cells with LV-TRIM3 infection,which further reduced proliferation,colony formation,migration,and invasion of both cell lines.Cell cycle analysis showed thatTRIM3 overexpression induced G0/G1 phase arrest in HepG2 and Bel-7402 cells.Moreover,apoptosis was not increased in HepG2 or Bel-7402 cells overexpressing TRIM3.Contrarily,silencing TRIM3 expression in Huh7 and Hep3B cells by siTRIM3 led to significantly decreased percentages of both cells in the G0/G1 phase and promoted cell proliferation,colony formation,migration,and invasion.In vivo experiment results confirmed thatTRIM3 overexpression suppressed tumor growth and metastasis.Conclusions:TRIM3 plays a tumor-suppressing role in the regulation of liver cancer development by reducing cell proliferation through cell cycle arrest at the G0/G1 phase.     

siRNA沉默HepG-2细胞B7-H3对细胞行为学影响的研究

目的:探讨siRNA方法沉默HepG-2细胞中B7-H3基因表达对细胞周期、增殖及迁移能力的影响.方法:设计合成针对B7-H3基因的siRNA及无关干涉siRNA序列,并分别构建干涉载体pSilencer4.1-CMV neo/B7-H3及无关干涉载体pSilencer4.1-CMV neo/NC;采用脂质体LipofectamineTM 2000转染对数生长期肝癌细胞HepG-2,经G418筛选后获得相应细胞模型;利用RT-PCR和Western blot方法分别检测空白对照组(WT)、无关干涉组(si-NC)和B7-H3干涉组(si-B7-H3)细胞中B7-H3 mRNA及蛋白表达水平;利用CCK-8细胞增殖实验及克隆形成实验评价各组细胞增殖情况;利用碘化丙锭(PI)染色流式细胞术检测各组细胞周期分布情况;利用细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力.结果:成功构建了pSilencer4.1-CMV neo/B7-H3干涉载体.RT-PCR及Western blot结果显示,B7-H3干涉组较空白对照组、无关干涉组mRNA及蛋白水平明显下降;CCK-8增殖、克隆形成实验、细胞划痕实验及流式结果表明B7-H3干涉组增殖受到明显抑制,克隆较小且克隆数减少,细胞周期阻滞于G0/G1期,细胞迁移能力受抑制.结论:利用siRNA靶向干涉B7-H3表达可抑制HepG-2细胞增殖并诱导细胞周期阻滞,降低细胞迁移能力,实验结果为开发针对B7-H3靶点的肝癌免疫治疗提供了初步实验及理论基础.     

siRNA 干扰胰岛素样生长因子1 受体表达对缺氧环境下肝癌HepG2 细胞周期及凋亡的影响

目的：探讨siRNA技术干扰胰岛素样生长因子-1受体（insulin-like growth factors-1 receptors, IGF-1R）表达对缺氧环境下肝癌HepG2 细胞周期和凋亡的影响。方法：采用氯化钴处理制备实验所需的肝癌缺氧细胞模型。设计并合成3 对siRNA序列和1 对阴性对照序列,转染缺氧的肝癌HepG2 细胞24 h 后以荧光显微镜观察转染效果,采用WB法检测IGF-1R蛋白表达筛选出干扰效率最高的siRNA序列。选用该序列再次转染缺氧肝癌细胞,以流式细胞术、MTT法检测细胞的周期、凋亡和增殖变化,以WB法检测HepG2 细胞中CDK1、CDK2 和Caspase-3 蛋白的表达。结果：成功建立缺氧HepG2 细胞模型,siRNA转染缺氧HepG2 细胞后以IGF-1R-siRNA-2 转染效率最高且敲减IGF-1R表达最明显（均P<0.01）。IGF-1R-siRNA-2 转染的HepG2 细胞的增殖被明显抑制（P<0.05 或P<0.01）、细胞周期被阻滞在G0/G1（P<0.05）、细胞凋亡率明显增加至（25.3±1.3）%（P<0.01）,同时发现敲减IGF-1R后缺氧HepG2 细胞中CDK1、CDK2 蛋白表达明显降低而Caspase-3 表达则明显增加（P<0.05或P<0.01）。结论：siRNA干扰IGF-1R表达通过调控细胞周期和凋亡相关蛋白而抑制缺氧环境中HepG2细胞的恶性生物学行为,IGF-1R可能是HCC潜在的治疗靶点。     

Up-regulation of NICE-3 as a Novel EDC Gene Could Contribute to Human Hepatocellular Carcinoma

The epidermal differentiation complex (EDC) contains a large number of gene products which are crucialfor the maturation of the human epidermis and can contribute to skin diseases, even carcinogenesis. It isgenerally accepted that activation of oncogenes and/or inactivation of tumor suppressor genes play pivotalroles in the process of carcinogenesis. Here, NICE-3, a novel EDC gene, was found to be up-regulated in humanhepatocellular carcinoma (HCC) by quantitative real-time RT-PCR. Furthermore, overexpression of exogenousNICE-3 by recombinant plasmids could significantly promote cell proliferation, colony formation and soft agarcolony formation in Focus and WRL-68 HCC cell lines. Reversely, NICE-3 silencing by RNA interference couldmarkedly inhibit these malignant phenotypes in YY-8103 and MHCC-97H cells. Moreover, cell cycle analysis ofMHCC-97H transfected with siRNA by flow cytometry showed that NICE-3 knockdown may inhibit cell growthvia arrest in G0/G1 phase and hindering entry of cells into S phase. All data of our findings indicate that NICE-3may contribute to human hepatocellular carcinoma by promoting cell proliferation.     

腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞瘤苗对HepG2.2.15肝癌细胞的免疫效应

目的研究腺病毒介导的HBsAg基因修饰树突状细胞(DC)体外诱导对HepG2.2.15肝癌细胞特异性的细胞毒效应。方法将HBsAg基因亚克隆到pIND和pShuttle载体中,构建重组载体pShuttle-S。将用PI-SceⅠ和Ⅰ-CeuⅠ双酶切后所获得的HBsAg基因片段与线性化的腺病毒载体pAdeno-X连接,构成腺病毒表达载体AdVHBsAg。经HEK293细胞包装腺病毒后,收获病毒并做滴度测定,再将AdVHBsAg转染人单核细胞来源的DC构建AdVHBsAg-DC肝癌瘤苗。采用Western blot法鉴定转染基因表达;流式细胞仪检测表面分子;3H-胸腺嘧啶核苷(3H-TdR)法检测T细胞增殖反应的能力;乳酸脱氢酶(LDH)法检测CTL活性。结果穿梭质粒插入片段为HBsAg基因;包装的腺病毒载体具有良好的感染性,可在HEK293细胞中形成病毒颗粒;HBsAg基因表达于AdVHBsAg- DC中,表明腺病毒介导的HBsAg基因转染的有效性;AdVHBsAg-DC可高表达CD1a、CD11c、CD80、CD86和HLA-DR;AdVHBsAg-DC刺激自体T细胞增殖功能明显高于AdVLacZ-DC组和未转染的DC组(P<0.05);AdVHBsAg-DC体外诱导CTL能够对表达HBsAg肝癌细胞起到特异性杀伤作用。结论AdVHBsAg可在DC中表达HBsAg肝癌相关抗原;AdVHBsAg-DC瘤苗可诱导T细胞产生高效的针对HepG2.2.15肝癌细胞的细胞毒效应。     

阿克替苷通过调控ERK1/2信号通路抑制肝癌细胞上皮间质转化

目的探讨阿克替苷(ACT)通过调控ERK1/2通路抑制人肝癌HCCLM3细胞上皮间质转化(EMT)的作用及其机制。方法CCK-8法检测肝癌细胞的增殖能力;划痕实验和Transwell实验检测肝癌细胞侵袭及迁移能力;实时定量PCR和蛋白质印迹实验检测ACT对ERK1/2信号通路和上皮间质转化相关基因(E-cadherin、N-cadherin)mRNA和蛋白的表达。结果CCK-8法检测结果显示,ACT可降低肝癌HCCLM3细胞的活性,抑制肝癌细胞的增殖能力,并与药物浓度和时间有一定的相关性。划痕实验和Transwell实验结果显示,ACT能抑制肝癌HCCLM3细胞迁移和侵袭能力,并呈浓度依赖性。荧光定量PCR和蛋白质印迹实验表明,ACT可下调ERK1/2信号通路相关基因mRNA和蛋白的表达,上调EMT相关基因E-cadherin mRNA和蛋白的表达,下调N-cadherin mRNA和蛋白的表达。结论ACT可抑制人肝癌HCCLM3细胞EMT、侵袭及迁移,其作用机制与下调ERK1/2信号通路密切相关。     

siRNA下调Ets2对肾癌786-0细胞增殖的影响

目的:探讨E26转录因子2(E-twenty six2,Ets2)在肾癌细胞中的表达及其对肾癌细胞786-0增殖的影响及机制.方法:Westem Blot检测各肾癌细胞内Ets2的表达,并合成特异性siRNA下调肾癌细胞系786-0中Ets2的表达,利用MTT、平板克隆形成实验及流式细胞术检测其增殖能力的变化,通过Western Blot检测细胞周期相关分子表达水平变化.结果:Ets2在肾癌细胞内的表达比正常肾小管上皮细胞明显增高,siRNA能有效下调肾癌786-0细胞系中Ets2的表达.下调Ets2后786-0细胞增殖能力及克隆形成能力减弱(P＜0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期;Ets2-siRNA介导的Ets2基因沉默下调了786-0细胞内CDK4与CyclinD1的表达,而上调了p21的表达.结论:Ets2可通过调节CDK4、CyclinD1及p21的表达影响肾癌细胞786-0的增殖能力.