载脂蛋白E基因敲除小鼠在动脉粥样硬化研究中的应用

载脂蛋白E基因敲除小鼠是目前在动脉粥样硬化（AS）研究领域中应用最多的基因工程动物。参考国内外应用载脂蛋白E基因敲除小鼠研究AS的有关文献，就其AS病灶形成的规律及形态学改变，有氧运动和饮食对该小鼠AS病灶的影响，关于调脂药物和其它药物研究情况，骨髓移植和基因治疗对该种小鼠AS病灶的影响等方面作一综述，以期将这种基因工程小鼠动物模型更广泛地应用于中西医药研究。     

脂欣康胶囊抗载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化形成作用

为观察脂欣康胶囊对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠动脉粥样硬化 (As)的影响 ,将 6周龄ApoE基因敲除小鼠随机分为模型组与脂欣康组 ,相同遗传背景的同龄正常C57BL/6J小鼠为正常对照组。脂欣康组灌服脂欣康胶囊内之药粉 ,模型组、正常对照组均灌服生理盐水。连续灌胃 14周后 ,用 10 %福尔马林灌注后 ,取主动脉做形态学观察及图像分析。结果表明 ,正常对照组主动脉壁正常 ,无As病灶。模型组动脉粥样硬化 (As)病变显著 ,多为粥样硬化期病灶 ,可见由大量泡沫细胞形成的脂纹脂斑期病变 ,也可见由大量泡沫细胞及胆固醇结晶形成的粥样斑块期病灶。脂欣康组As病变较模型组明显减轻 ,多为早期粥样硬化 ,斑块面积显著小于模型组 ,P <0 .0 5。结果提示脂欣康有减轻ApoE基因敲除小鼠As的作用。     

载脂蛋白E基因敲除小鼠冠状动脉内粥样硬化病灶的研究

目的：研究载脂蛋白E基因敲除( apoE-/-)小鼠冠状动脉内粥样硬化病灶的分布和组成；探讨病灶发生和发展的机理。方法：取60周龄和112周龄的apoE-/-小鼠心脏作连续切片，从冠状动脉在主动脉开口处连续追踪冠状动脉主干和心肌内冠状动脉小分支，行Movat特殊染色，寻找病灶。根据组织切片数计算病灶离冠状动脉开口处的距离和病灶的长度；根据病灶的长度将病灶分为大、中、小3类病灶；用图像分析仪测量血管口径；根据Movat染色结果观察病灶内组成成分。结果：在apoE-/-小鼠冠状动脉内发现从主动脉内直接延续的延伸病灶和在冠状动脉分支内形成的原位病灶；在60周龄和112周龄小鼠冠状动脉延伸病灶的发生率分别为60%和80%；有延伸病灶的冠状动脉外膜有大量炎性细胞浸润。每只apoE-/-小鼠均有原位病灶；原位病灶多发生在左室壁心肌内血管分支处和乳头肌附近；随着原位病灶增大，蛋白聚糖成分减少，细胞内外脂质成分增多；增大的原位病灶可堵塞小血管；在有原位病灶的冠状动脉外膜常可发现有增多的炎性细胞。112周龄apoE-/-小鼠大原位病灶多于60周龄小鼠 (P＜0.05)。结论：apoE-/-小鼠冠状动脉主干和心肌小分支内分别存在着延伸和原位的粥样硬化病灶，随着小鼠周龄增加，病灶增大。动脉外膜炎症和心肌收缩对血管的挤压与病灶的发生和发展有密切关系。     

载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化早期血管外膜成纤维细胞增殖活性增强

目的:探讨动脉外膜成纤维细胞增殖与早期动脉粥样硬化病灶形成的关系。方法:选择6周龄载脂蛋白E基因敲除[apoE(-/-)]小鼠和野生型C57BL/6小鼠,高脂喂养2、4和10周后,在各个时点处死动物前24 h经腹腔注射5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU),后选取升主动脉制备连续切片,通过HE染色观察组织形态学的变化,用免疫组化方法观察不同时点血管外膜及内膜BrdU的表达变化。体外培养高脂喂养2周的apoE(-/-)小鼠和C57BL/6小鼠动脉外膜成纤维细胞,通过BrdU掺入法测定细胞增殖活性,流式细胞术测定细胞周期。结果:体内实验发现apoE(-/-)小鼠高脂喂养2周后,在无可见内膜病灶形成之前,首先在主动脉外膜发现BrdU标记的阳性细胞,之后才在损伤内膜观察到BrdU标记细胞。而C57BL/6小鼠在任何时点都未检测到BrdU标记的细胞。体外实验观察到apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞BrdU标记的细胞数显著多于C57BL/6小鼠(P0.01),apoE(-/-)小鼠血管外膜成纤维细胞S期及G2/M期所占百分比明显高于对照组(P0.05)。结论:血管外膜成纤维细胞增殖可能参与早期动脉粥样硬化病灶形成。     

载脂蛋白E基因敲除鼠不同部位动脉粥样硬化病变病理形态学分析

目的 通过建立载脂蛋白E基因敲除鼠动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)动物模型,分析其不同部位AS病变的病理形态学特征.方法 用高脂高胆固醇饲料喂养载脂蛋白E基因敲除鼠,并行右颈总动脉套环术建立AS动物模型.连续石蜡切片,HE染色观察套环侧和未套环侧颈总动脉及主动脉粥样硬化病变,进行病变分型.结果 未套环侧颈总动脉未见病变,套环侧颈总动脉粥样硬化病变明显,属于Ⅰ、Ⅱ型病变的共10例,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型病变的共14例;主动脉无病变的共8例,属于Ⅰ、Ⅱ型病变的共10例,Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型病变的共6例.结论 载脂蛋白E基因敲除鼠套环形成的AS病变严重且发生、发展迅速,主动脉自发形成的AS病变发展缓慢.     

构建不同周龄载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠血脂和病理学观察

背景：载脂蛋白E基因敲除小鼠形成的动脉粥样硬化病变与人类全身动脉粥样硬化好发处相近,是目前建立动脉粥样硬化理想的动物模型。 目的：研究载脂蛋白E基因敲除小鼠不同周龄动脉粥样硬化的病理进程,探讨不同饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生发展的影响。 方法：将8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠,随机分为2组,分别给予高脂饮食和普通饮食喂养8,12,16,20,24周。 结果与结论：血清学指标检测显示,不同周龄的高脂饮食组血清中总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平显著高于普通饮食组(P < 0.05),呈时间依赖性。大体和冰冻切片油红O染色结果显示,高脂饮食组动脉粥样硬化管腔斑块面积显著高于普通饮食组(P < 0.05),呈时间依赖性,此时两组各周龄小鼠管腔斑块面积相比均有显著性意义(P < 0.05),小鼠在高脂饮食16周时主动脉可见明显的脂质斑块。结果表明,实验成功构建了载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠,此模型形成脂质条纹和纤维增生病变的时间较普通饮食组更快。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：肾移植;肝移植;移植;心脏移植;组织移植;皮肤移植;皮瓣移植;血管移植;器官移植;组织工程全文链接：     

应用基因敲除鼠研究动脉粥样硬化

ApoE和LDL-R基因敲除鼠可自发形成动脉粥样硬化斑块,是动脉粥样硬化研究的常用模型。在此基础上应用基因打靶技术建立的白介素-1、C反应蛋白、清道夫受体、IgGFc、补体C1q及CD44等模型对研究动脉粥样硬化中炎症和免疫因子的作用机制起了重要作用。     

扫描电镜观察脂欣康胶囊对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化主动脉内膜超微结构的影响

为观察扫描电镜下脂欣康胶囊对载脂蛋白E(ApoE)基因敲除小鼠动脉粥样硬化(As)主动脉内膜超微结构的影响，随机将6周龄ApoE基因敲除小鼠分为模型组与脂欣康组，以有相同遗传背景的同龄正常C57BL／6J小鼠为正常对照组。脂欣康组灌服脂欣康粉剂，模型组、正常对照组均灌服生理盐水。连续灌胃14周后，取新鲜的主动脉用2．5％戊二醛固定，扫描电镜观察并拍照。结果表明，模型组主动脉内膜病变显著且多样化，脂欣康组对主动脉内膜超微结构有良好的修复和保护作用。     

载脂蛋白E基因敲除模型小鼠转化生长因子β1表达与尼古丁的刺激

背景：研究表明尼古丁可以诱导动脉粥样硬化,但其具体作用机制尚不明确。 目的：探讨不同剂量尼古丁刺激下,载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉粥样斑块形成与外周血转化生长因子β1水平的关系。 方法：载脂蛋白E基因敲除小鼠腹膜下注射2种不同剂量的尼古丁[2 mg/(kg•d)及0.5 mg/(kg•d)]12周,对照组注射等量生理盐水。用ELISA法检测外周血转化生长因子β1水平,苏木精-伊红染色观察动脉粥样斑块的病理变化。 结果与结论：尼古丁干预12周后,低剂量尼古丁组的外周血转化生长因子β1水平低于对照组(P < 0.05),高剂量尼古丁组的外周血转化生长因子β1水平低于对照组及低剂量尼古丁组(P < 0.05)。高剂量尼古丁组的血管狭窄程度最严重,低剂量尼古丁组次之,对照组最低,各组间比较差异均具有显著性意义(P < 0.05)。低剂量尼古丁组及高剂量尼古丁组的斑块个数多于对照组(P < 0.05),高剂量尼古丁组的斑块个数与低剂量尼古丁组比较差异无显著性意义 (P > 0.05);血管狭窄率与转化生长因子β1水平呈负相关(r=-0.920,P =0.000)。结果提示尼古丁刺激增加载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块数量,这种作用可能与尼古丁抑制转化生长因子β1水平相关。     

Stat 3信号通路蛋白在基因敲除小鼠方面的研究进展

Stat 3是信号转导和转录激活蛋白家族(Stat)成员.它是家族中唯一一个在小鼠胚胎期进行基因敲除导致死亡的转录因子,暗示了它在个体发育中所处的重要地位.文章阐述了Stat3蛋白的结构和相关的信号通路,以及在小鼠T细胞、巨噬细胞、皮肤、乳腺和神经系统等的组织特异性敲除对Stat3进行的功能研究,揭示了Stat 3在细胞分化、增殖、凋亡等方面重要的生理作用.     

基因敲除技术现状及应用

功能基因组学的研究进展使基因敲除技术显得尤为重要。基因敲除技术从载体构建到细胞的筛选到动物模型的建立各方面都得到了发展。其中Cre-LoxP系统可以有效的控制打靶的发育阶段和组织类型,实现特定基因在特定时间和(或)空间的功能研究;转座子系统易于操作,所需时间短,具有高通量的特点,可以携带多种抗性标记,方便了同时进行多基因功能研究;基因捕获技术提供了获得基因敲除小鼠的高效方法,方便了进行小鼠基因组文库的研究。此外,进退策略、双置换法、标记和交换法、重组酶介导的盒子交换法也从不同方向发展了基因敲除技术。     

Masticatory HyperMuscularity is not Related to Reduced Cranial Volume in Myostatin‐Knockout Mice

It has been suggested recently that masticatory muscle size reduction in humans resulted in greater encephalization through decreased compressive forces on the cranial vault. Following this logic, if masticatory muscle size were increased, then a reduction in brain growth should also occur. This study was designed to test this hypothesis using a myostatin (GDF‐8) knockout mouse model. Myostatin is a negative regulator of skeletal muscle growth, and individuals lacking this gene show significant hypermuscularity. Sixty‐two [32 wild‐type (WT) and 30 GDF‐8 ‐/‐ knockout], 1, 28, 56, and 180‐day‐old CD‐1 mice were used. Body and masseter muscle weights were collected following dissection and standardized lateral and dorsoventral cephalographs were obtained. Cephalometric landmarks were identified on the radiographs and cranial volume was calculated. Mean differences were assessed using a two‐way ANOVA. KO mice had significantly greater body and masseter weights beginning at 28 days compared with WT controls. No significant differences in cranial volumes were noted between KO and WT. Muscle weight was not significantly correlated with cranial volume in 1, 28, or 180‐day‐old mice. Muscle weights exhibited a positive correlation with cranial volume at 56 days. Results demonstrate that masticatory hypermuscularity is not associated with reduced cranial volume. In contrast, there is abundant data demonstrating the opposite, brain growth determines cranial vault growth and masticatory apparatus only affects ectocranial morphology. The results presented here do not support the hypothesis that a reduction in masticatory musculature relaxed compressive forces on the cranial vault allowing for greater encephalization. Anat Rec, 2011. © 2011 Wiley‐Liss, Inc.     

载脂蛋白E基因多态性与疾病的相关性研究

载脂蛋白E（ApoE）是一种重要的血浆脂蛋白,由3种等位基因构成：E2、E3和E4。ApoE作为一种载脂蛋白,在脂质运输和代谢过程中发挥重要作用,而目前越来越多的研究表明：ApoE在免疫调节方面发挥重要作用,从而参与到多种疾病的发生发展中。近年来发现,ApoE及其基因多态性与高脂血症、动脉粥样硬化、Alzheimer病、神经系统病变及脓毒血症等人类疾患的发生发展有着密切关系。     

冠状动脉外膜炎症在动脉粥样硬化病灶形成中的作用

目的：探讨动脉外膜炎症诱发载脂蛋白E基因剔除（apoE-/-）小鼠冠状动脉粥样硬化病灶发生的机制。 方法： 取apoE-/-小鼠心脏做连续切片，选择冠状动脉外膜有炎性细胞浸润的3类部位代表粥样硬化病灶形成过程中的3个阶段：①未发现粥样硬化病灶；②有直接从主动脉延伸的病灶顶端和③成熟粥样硬化病灶的冠状动脉。分别采用HE染色、Movat染色、免疫组化和透射电镜方法鉴定3个病变阶段的冠状动脉外膜中炎细胞类型。 结果： ①未发现粥样硬化病灶；②有直接从主动脉延伸的病灶顶端和③成熟粥样硬化病灶的冠状动脉外膜分别以巨噬细胞、中性粒细胞和淋巴细胞浸润为主，其构成比分别为60.00%、57.65%和66.67%，各组构成比分别与其它两组比较均有显著差异（P<0.01）。 结论： 动脉外膜炎症可能是诱发动脉粥样硬化发生的早期事件之一，ApoE-/-小鼠冠状动脉粥样硬化病灶形成过程中，动脉外膜经历了一个从急性炎症到慢性炎症的过程。     

Transgenic and Knockout Mice in Research on Prion Diseases

Since the discovery of the prion protein (PrP) gene more than a decade ago, transgenetic investigations on the PrP gene have shaped the field of prion biology in an unprecedented way. Many questions regarding the role of PrP in susceptibility of an organism exposed to prions have been elucidated. For example mice with a targeted disruption of the PrP gene have allowed the demonstration that an organism that lacks PrP^c is resistant to infection by prions. Reconstitution of these mice with mutant PrP genes allowed investigations on the structure-activity relationship of the PrP gene with regard to scrapie susceptibility. Unexpectedly, transgenic mice expressing PrP with specific amino-proximal truncations spontaneously develop a neurologic syndrome presenting with ataxia and cerebellar lesions. A distinct spontaneous neurologic phenotype was observed in mice with internal deletions in PrP. Using ectopic expression of PrP in PrP knockout mice has turned out to be a valuable approach towards the identification of host cells that are capable of replicating prions. Transgenic mice have also contributed to our understanding of the molecular basis of the species barrier for prions. Finally, the availability of PrP knockout mice and transgenic mice overexpressing PrP allows selective reconstitution experiments aimed at expressing PrP in neurografts or in specific populations of hemato- and lymphopoietic cells. Such studies have shed new light onto the mechanisms of prion spread and disease pathogenesis.     

载脂蛋白E基因多态性与血管性痴呆关系的研究

为探讨载脂蛋白Ｅ（ＡｐｏＥ）基因多态性与血管性痴呆（ｖａｓｃｕｌａｒｄｅｍｅｎｔｉａ，ＶＤ）的关系，采用单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）检测了３７例ＶＤ患者的ＡｐｏＥ基因型，并与４０例同龄对照组及４０例非痴呆脑梗塞组比较，同时检测血脂、脂蛋白及部分载脂蛋白。结果表明，ＶＤ组ε４基因频率明显高于对照组（Ｐ＜０．０１）和非痴呆脑梗塞组（Ｐ＜０．０５），ＶＤ患者中携ε４等位基因者血ＴＣ及ＬＤＬ－Ｃ水平显著高于携ε２、ε３者。提示：ε４基因可能是ＶＤ的危险因子，其机理可能与大脑血管性和变性性损害有关。