缺血预处理对大鼠肝大部切除后肝再生基因表达谱的影响

目的应用基因芯片研究大鼠肝缺血预处理后残存肝组织再生过程中基因表达谱的动态变化。方法Sprague—dawley（SD）大鼠肝在缺血再灌注前行缺血预处理（10min缺血后10min再灌注）,再灌注期间行70％肝叶切除建立余肝再生模型．用affmetrix RAT GeneArray 1．0ST基因表达谱芯片筛选大鼠再生肝组织中差异表达基因进行功能分析及归类。结果再生肝组织有差异表达基因1103条,涉及代谢相关基因、细胞周期调控基因、炎症反应相关基因、凋亡相关基因、信号传导相关基因、细胞因子相关基因、生长因子基因等,差异表达基因显著性的表达趋势有7种。结论缺血预处理后肝再生的过程是多基因调控的动态变化过程,用基因芯片有助于研究肝再生的机制,为促进肝再生提供治疗的潜在靶点。     

大鼠角膜碱烧伤后热休克蛋白70的表达

背景：角膜碱烧伤后损伤修复受许多因素的影响,热休克蛋白可促进变性、损伤蛋白质的迅速恢复或清除。 目的：观察大鼠角膜碱烧伤后热休克蛋白70的表达及其与角膜损伤修复的关系。 方法：检查大鼠眼无炎症及其他病变后,奥布卡因滴眼液点眼2次,棉签吸除结膜囊液体,将统一规格直径5 mm的滤纸片浸泡于1 mol/L NaOH溶液中10 s,然后置于大鼠角膜中央30 s制作大鼠角膜碱烧伤模型。分别于碱烧伤后6 h,1,3,7,14,21 d取材。 结果与结论：RT-PCR、免疫组织化学染色、Western blot结果均显示热休克蛋白70 mRNA和蛋白在角膜碱烧伤后1 d即开始升高,7 d时达高峰,14 d后开始下降。苏木精-伊红染色及电镜观察显示角膜损伤在烧伤后6 h即较明显,烧伤后7 d逐渐恢复。提示大鼠角膜碱烧伤后热休克蛋白70的表达与碱烧伤后角膜损伤修复过程一致,参与了大鼠角膜碱烧伤后细胞的自我保护及修复过程。     

应用流式细胞计对大鼠肝大部切除后肝细胞增殖周期动态的研究

本文报道应用激光流式细胞计(FCM)研究大鼠肝大部切除后肝细胞增殖周期的动态,并计数了肝细胞分裂指数和双核肝细胞数。正常大鼠4倍体(4n)肝细胞占76％,肝再生过程中也以4n肝细胞增殖为主。术后12～20小时,部分4n肝细胞迅速分裂,2n肝细胞比例增多,双核肝细胞比例减少。术后24小时,出现4n肝细胞S期和8n肝细胞比例高峰,直至120小时仍可见8n肝细胞峰。术后36小时,肝细胞分裂达高峰。此后,双核肝细胞明显减少。术后48～72小时,出现第2次肝细胞DNA合成峰和分裂峰,但在出现的时间和细胞比例上个体差异较大。     

热休克对大鼠再灌注性心律失常及心肌动作电位的影响

55只SD大鼠随机分为热休克组（H组,n=29)和对照组（Co组,n=26)。H组予以热休克预处理,Co组则否。两组先各取16只大鼠行Langendorff离体心脏灌注。以心电图记录模拟缺血后复灌时心律失常情况,并测定复灌时心脏流出液CK的活性,同时检测两组心脏组织中HSP70的含量和抗氧化酶的活性。接着对其余H组13只和Co且10只大鼠进行离体心脏乳头肌动作电位的测定。结果显示H组再灌注性心律失常明显减轻,心肌CK的释放量显著减少（P＜0．001）。同时H组心脏组织HSP70表达量显著增多,抗氧化酶活性也明显增强。H组台氏液灌流时心肌动作电位Vmax显著降低（P＜0．01）。以台氏液复灌后,心肌动作电位恢复时间也明显以H组为短。结果提示热休克预处理可以减轻大鼠心肌再灌注性损伤和再灌注性心律失常,此作用与心脏组织中HSP70含量的增加和抗氧化酶性的增强有关,同时还可能与热休克对心肌快Na^ 通道的抑制作用有关。     

热休克对小白鼠肾中碱性磷酸酶的影响

本文用酶组织化学方法研究了热休克对不同发育时期小鼠肾组织中碱性磷酸酶（ALP）的影响。结果表明，热休克处理后ALP活性有明显增高．提示ALP活性的增强是提高细胞的热耐受力、维持细胞正常生理功能的重要途径。     

热休克蛋白70在高脂血症大鼠肾脏中表达及意义

目的探讨高脂血症大鼠肾脏内热休克蛋白70(HSP70)的表达变化。方法 10只健康大鼠适应性喂养一周后随机分成正常组和高脂血症组。12周后取血,检测血脂;取肾组织分别进行HE染色和HSP70免疫组织化学染色,应用计算机图像分析系统检测HSP70的平均光密度变化。结果血脂检测结果显示:正常组TG、TC和HDL-C与高脂血症组存在差异。HE染色结果显示:高脂血症组部分肾小管上皮细胞破碎,核固缩,胞浆轻微肿胀变性,细胞排列紊乱。肾小囊周围有少量炎性细胞浸润,肾小囊内细胞有空泡形成。免疫组化结果显示:高脂血症组肾小管HSO70表达强于正常组。图像分析结果显示:与正常组HSP70的平均光密度值(0.1185±0.0078)比较,高脂血症组HSP70平均光密度值(0.3106±0.0484)增高,有统计学差异(P0.05)。结论高脂血症可导致大鼠肾组织内HSP70表达增高,高脂血症大鼠肾组织形态学损伤与HSP70含量的增高具有一致性。     

脂肝宁对大鼠脂肪性肝炎肝细胞热休克蛋白表达的影响

目的： 观察脂肝宁在预防大鼠脂肪性肝炎过程中热休克蛋白(HSP) 60、70在肝细胞中的表达。方法: 将SD大鼠随机分为脂肝宁大、小剂量组、熊去氧胆酸组、病理模型和正常对照组。除正常对照组外，其余大鼠给予高脂饲料和35%乙醇 10 mL/kg，2次/d灌胃，防治组同时给予药物预防。于第9周末处死大鼠，分别进行 ⑴ 肝组织切片常规HE染色，观察炎症反应；⑵ 免疫组化法观察肝组织热休克蛋白60、70的表达情况；⑶ 透射电镜下观察肝细胞及炎细胞的超微结构。结果: ⑴ 光镜下脂肝宁大剂量组和熊去氧胆酸组的肝组织炎症活动度显著低于病理模型组 (P<0.05)。⑵ 脂肝宁大剂量组和熊去氧胆酸组中肝组织HSP70的阳性细胞数显著多于病理模型组和正常对照组（分别为P<0.05，P<0.01），脂肝宁大剂量组中HSP60的表达显著多于模型组及正常对照组（分别为P<0.05，P<0.01）。⑶ 脂肝宁大剂量组和熊去氧胆酸组肝细胞超微结构较模型组明显改善，内无明显脂滴，线粒体嵴排列较整齐。结论: 脂肝宁、熊去氧胆酸对乙醇加高脂饮食诱发的大鼠脂肪性肝炎有较好的防治作用。提高热休克蛋白60、70的表达可能是其防治机制之一。     

鼠肝癌细胞的热休克蛋白诱导及其抗瘤机理研究

摸索鼠肝癌Ｈ２２细胞膜热休克蛋白７０最适的话导条件，并明确其体内外的抗瘤机理。方法用免疫荧光及ＦＣＭ光检测热休克Ｈ２２细胞膜ＨＳＰ７０蛋白的动态表达。并用ＭＭＣ灭活，热休克后的Ｈ２２细胞作抗原进行体内肿瘤免疫保护试验及体外肿瘤杀伤试验。     

热休克诱导小鼠肝细胞表达热休克蛋白70的研究

目的：研究热休克恢复期小鼠肝细胞热休克蛋白（ＨＳＰ７０）的表达。方法：小鼠分别为４０、４２、４４、４６℃热休克处理３０ｍｉｎ,恢复８ｈ;４６℃热休克处理３０ｍｉｎ,然后分别于热休克后２－７２ｈ取肝,以免疫组化方法观察ＨＳＰ７０的表达,并用体视学方法对阳性肝细胞体密度进行定量分析。结果：４２、４４、４６℃均能诱导肝细胞表达ＨＳＰ７０,以４６℃组小鼠阳性肝细胞密度最大;４６℃热休克后８－１２ｈ为ＨＳＰ     

小鼠不同组织器官热休克蛋白70表达的研究

目的　研究热休克恢复期小鼠大脑、垂体、肾、肾上腺中HSP70的表达规律。　方法　昆明系小鼠随机分为对照组和实验组。实验组动物 :1 分别以 40℃ ,42℃ ,44℃ ,46℃热休克处理 30min ,恢复 2h和 8h ;2 以46℃热休克处理 30min ,恢复 2、4、6、8、12、2 4、48、72h ,以免疫组织化学结合图像分析技术观察HSP70的表达。　结果　 1 42℃ ,44℃ ,46℃均能诱导肾、肾上腺表达HSP70 ,44℃、46℃可诱导大脑、垂体表达HSP70 ,但均以 46℃组阳性免疫反应面积最大 (P <0 0 1) ;2 HSP70的合成高峰在大脑和垂体为热休克恢复期 4～ 8h(P <0 0 1) ,肾和肾上腺为 8～ 12h(P <0 0 1) ;3 HSP70阳性免疫反应定位于大脑神经膜和郎飞结 ,垂体神经膜 ,肾小管、肾上腺网状带和束状带细胞质 ,肾中HSP70阳性免疫反应肾小管较肾小球强 ,肾髓质较肾皮质强。　结论　热休克反应中不同组织器官HSP70的表达存在明显差异性 ;HSP70合成迅速且降解缓慢 ;大脑和垂体有较强的耐热能力     

血管成形术后平滑肌细胞癌基因产物Fos及热休克蛋白—70的表达及意义

目的:研究血管成形术后平滑肌细胞中Fos、热休克蛋白—70的表达及意义.方法:将10只新西兰家兔随机分为正常对照组(血管数为n=4),血管成形术组(n=8),血管成形术+低分子量肝素组(n=8),以2F PTCA导管对两侧髂动脉进行血管成形术,术后1小时、2小时取血管成形后血管进行Fos、热休克蛋白—70免疫组化染色.结果:正常动脉内未见Fos表达,血管成形术后1小时部分平滑肌细胞阳性,2小时表达增多;正常动脉内热休克蛋白—70位于平滑肌细胞胞浆内,血管成形术后1、2小时平滑肌细胞核呈阳性;血管成形术+低分子量肝素组与单纯血管成形术组结果相同.结论:Fos于血管成形术后早期出现,与SMC增生迁移有关,低分子量肝素不影响此过程.首次发现血管成形术后热休克蛋白—70迅速增加,可能是一种对抗血管成形术损伤的保护机制.     

旋毛虫Hsp70与Ts87融合蛋白的构建表达及鉴定

本文构建并表达了旋毛虫热休克蛋白70（Ts－Hsp70）与排泄分泌抗原Ts87的融合蛋白,并对融合蛋白进行纯化和免疫学鉴定。本研究采用限制性内切酶EcoRⅠ酶切位点将目的基因Ts－Hsp70与Ts87相连接,插入pET28－a （＋）质粒,转入大肠埃希菌BL21（DE3）中诱导表达、纯化,获得的融合蛋白rTs－Hsp70－Ts87用Western blot的方法鉴定。经PCR、酶切鉴定、测序分析,结果显示,目的基因片段大小为2721 bp,构建的重组质粒与预期相符。经IPTG诱导表达,通过镍离子柱层析纯化复性后得到可溶的融合蛋白rTs－Hsp70－Ts87,其相对分子质量约为100 kDa; Western blot结果显示,该蛋白可被抗His标签单抗、 rTs－Hsp70免疫血清、 rTs87免疫血清识别。以上结果表明,本研究成功构建并表达了融合蛋白rTs－Hsp70－Ts87,为进一步研究rTs－Hsp70－Ts87的免疫保护性,开发新的有效抗旋毛虫病的疫苗奠定基础。     

VP-16诱导细胞凋亡及其细胞核基质中热休克蛋白表达的研究

目的　研究VP 16诱导HL 6 0细胞凋亡的变化特点以及凋亡细胞及核基质中热休克蛋白 (HSP)表达的变化。　方法　琼脂糖凝胶电泳观察凋亡细胞基因组DNA断裂 ;TUNEL法观察凋亡细胞的形态学变化 ;用免疫印迹方法显示凋亡细胞核基质蛋白、细胞总蛋白中HSP表达的差异。　结果　VP 16作用HL 6 0细胞 0 5h出现早期凋亡特征。作用 4h可见明显的DNA梯状条带。与未凋亡的细胞比较 ,凋亡细胞核基质蛋白中HSP70和HSC70表达明显上调 ;VP 16作用 2、3及 4h细胞总蛋白中HSP70的表达随时间延长略显增加 ;诱导 2 2h比诱导 4h时去除VP 16后孵至 2 2h凋亡细胞总蛋白HSP70表达量增强了 3 4倍。　结论　 1 HL 6 0细胞早期凋亡形态出现在DNA梯状条带形成之前。 2 凋亡细胞核基质中HSP70、HSC70的表达明显增加 ,经 2、3及 4h作用的细胞总蛋白中HSP70表达差异不显著。这提示细胞凋亡后HSP70的活性位点主要位于核基质上。 3 VP 16作用细胞时间增长至2 2h ,HSP的保护作用可能消失     

核糖体相关基因在大鼠再生肝及肝肿瘤中表达异同的比较

目的在基因转录水平了解核糖体相关基因在大鼠再生肝(RL)和肝脏肿瘤(LT)中的表达异同。方法用搜索网站资料和查阅相关论文等方法获得核糖体发生、组装和功能相关基因及它们在肝脏肿瘤中的表达变化,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中的表达情况,用统计学方法比较上述基因在再生肝和肝脏肿瘤中的表达异同。结果初步证实上述基因中75个基因与肝再生相关。其中,18个基因在再生肝和肝脏肿瘤中表达上调,6个基因在两者中表达下调,51个基因在肝脏肿瘤中未发生有意义的表达变化。结论再生肝的核糖体相关基因表达谱与肝脏肿瘤有相同之处,也有不同之处,前者的基因表达更具阶段性和复杂性。     

细胞表面受体介导的信号通路相关基因对大鼠肝再生的调控作用分析

目的在基因转录水平了解12条细胞表面受体介导的信号通路相关基因对大鼠肝再生的调控作用。方法用搜集网站资料和查阅相关论文等方法获得上述基因,用大鼠基因组230 2.0芯片检测它们在大鼠再生肝中的表达情况,用比较手术和假手术中基因的表达差异性确定肝再生相关基因。结果初步证实上述基因中491个与肝再生相关,其中226个基因之间有742种直接作用关系。细胞因子和趋化因子介导的酶联受体、G蛋白耦联受体、谷氨酸;抗原受体介导的,整合素介导的,脂多糖介导的,Notch、Osmosensory、Smoothened、Toll、Wnt等12条信号通路中与肝再生相关的上调基因数和下调基因数,分别为26和23、164和54、59和51、5和1、22和14、21和10、1和1、4和11、23和11、32和17。肝再生中基因上调表达次数和下调表达次数分别为188和128、464和190、308和207、13和5、88和46、123和50、2和1、20和43、148和30、174和62。结论除Osmosensory和脂多糖介导的信号通路在肝再生中作用较小,Smoothened信号通路作用减弱外,其他9条信号通路在肝再生中作用增强。     

施万细胞对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响

目的：探讨移植的施万细胞对大鼠脊髓半横切后背核神经元存活及其表达NOS的影响。方法：50只成年SD大鼠被分为实验组和对照组。在胸11脊髓段半横切后立即在损伤处移植入施万细胞。结果：脊髓半横切后，15d和25d对照组L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数均比未损伤侧的明显减少。存活的神经元胞体出现明显皱缩，有些神经元呈现NADPH－d阳性。15d和25d施万细胞组L1脊髓段损伤侧背核神经元的存活数则比同期对照组的明显增加，表达NOS的存活神经元数也随之增多。但存活的神经元胞体仍然是皱缩的。结论：移植的SCs可促进受损伤的背核神经元存活及其表达NOS，但不能阻止其胞体出现皱缩。     

突触内与突触外NMDA受体在β-淀粉样蛋白减少海马神经元突触后密度蛋白-95表达中的作用

目的 研究可溶性Aβ寡聚体在海马神经元中对突触蛋白表达的影响.方法 用免疫细胞化学方法检测在NMDA拮抗剂与激动剂作用下,Aβ25～35对突触后密度蛋白(PSD-95)表达的影响.结果 Aβ25～35引起的PSD-95减少具有时间、剂量依赖性.PSD-95的减少可被非特异性NMDA受体拮抗剂(MK801)缓解;突触外NMDA受体被阻断时,也可显著缓解;而在突触内NMDA受体被阻断时,无显著性改变.结论 Aβ引起的PSD-95减少依赖NMDA受体活性,突触外NMDA受体可能参与Aβ诱导突触蛋白降解.