miR-126 对结肠癌细胞生物学行为的影响及其在调控结肠癌EMT 转化中的作用

目的:观察miR-126 在不同转移潜能的人结肠癌细胞系中的表达情况及其对结肠癌细胞增殖、侵袭转移能力的影响并探讨可能的作用机制。方法:采用实时荧光定量PCR 检测结肠癌细胞系(SW480、SW620 及HCT116)中miR-126 的表达量。通过脂质体瞬时转染法将miR-126 过表达(miR-126 mimics),并设置阴性对照组,然后采用CCK8 法检测细胞的增殖能力,细胞划痕实验检测细胞的迁移能力,Transwell 侵袭小室实验检测细胞的侵袭能力,Western blot 实验检测E-cadherin 和Vimentin 蛋白表达量的变化。结果:相对于低转移潜能的结肠癌细胞株SW480,miR-126 在高转移潜能的SW620 和HCT116细胞中的表达降低。过表达miR-126 可使SW620 细胞增殖、迁移和侵袭能力降低,E-cadherin 蛋白表达增加,Vimentin 蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:低表达的miR-126 与结肠癌的转移密切相关,miR-126 影响结肠癌细胞生物学行为的作用可能是通过调控EMT 进程实现的。     

miR-377靶向ZEB2调节结肠癌细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化北大核心CSCD

目的:探讨miR-377对结肠癌细胞迁移、侵袭的影响及潜在作用机制。方法:RT-qPCR检测结肠癌细胞系HT29、SW480、SW620和HCT116和人小肠上皮细胞HIEC miR-377表达。将miR-377 mimic、阴性对照物、pmirGLO-wt-ZEB2、pmirGLO-mut-ZEB2转染至HCT116细胞,双荧光素酶报告实验检测miR-377与ZEB2的靶向作用,伤口愈合实验、Transwell、Western blot检测miR-377和ZEB2对细胞迁移、侵袭、上皮-间质转化相关蛋白表达的影响。结果:与HIEC细胞相比,结肠癌细胞系miR-377表达降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-377 mimic和pmirGLO-WT-ZEB2共转染的HCT116细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05),但ZEB2结合位点突变逆转了miR-377 mimic对荧光素酶活性的抑制作用(P>0.05);miR-377 mimic显著降低了HCT116细胞ZEB2蛋白表达(P<0.05)。与NC+Vector组相比,miR-377+Vector组细胞划痕愈合率、侵袭细胞数显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著升高(P>0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.05)。与miR-377+Vector组相比,miR-377+ZEB2组细胞划痕愈合率、侵袭细胞数显著高于miR-377+Vector组(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著降低(P<0.05),N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著升高(P<0.05),miR-377+ZEB2组与NC+Vector组上述指标差异无统计学意义(P>0.05)。结论:miR-377通过靶向作用于ZEB2调节结肠癌细胞上皮-间质转化相关蛋白表达,进而影响结肠癌细胞迁移、侵袭,为结肠癌临床治疗提供了新的策略。     

高迁移率族蛋白B1促进结肠癌细胞增殖、迁移与侵袭的机制探讨

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在结肠癌细胞中的表达和对结肠癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:采用qPCR与Western blot法检测人结肠癌SW620细胞与正常结肠上皮细胞FHC中HMGB1的mRNA和蛋白表达。通过Lipofectamine 3000转染质粒构建稳定下调HMGB1表达(shHMGB1)的SW620细胞,同时设置阴性对照(shNC)细胞和空白对照(blank)细胞;采用CCK-8、平板集落形成实验和Transwell实验检测细胞的增殖、迁移及侵袭能力。采用Western blot检测HMGB1表达下调对p-ERK、ERK、c-Myc、基质金属蛋白酶(MMP)-2/9、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、Bcl-2及Bax的蛋白表达水平的影响。结果:SW620细胞中HMGB1在mRNA及蛋白水平表达均高于正常结肠上皮细胞FHC(P0.05)。经qPCR与Western blot验证,HMGB1低表达细胞构建成功。与blank组和shNC组相比,shHMGB1组细胞增殖、迁移和侵袭能力受到显著抑制(P0.01)。Western blot结果表明,同blank组和shNC组比较,shHMGB1组细胞的MMP-2、MMP-9、N-cadherin、c-Myc、Bcl-2及ERK磷酸化蛋白表达显著下调,Bax蛋白表达显著上调(P0.05)。结论:HMGB1可促进结肠癌SW620细胞的增殖、迁移和侵袭能力,ERK/c-Myc信号通路参与了这一过程。     

CARMA3基因敲减对结肠癌细胞HCT116生长和侵袭转移的抑制

目的:探讨CARMA3基因在人结肠癌细胞HCT116生长和侵袭转移中的作用及其机制。方法:选取高表达CARMA3的人结肠癌细胞株。应用慢病毒技术敲减CARMA3基因,puromycin筛选后构建稳定转染的HCT116-sh CARMA3细胞株。Real-time PCR和Western blot鉴定mRNA和蛋白表达的抑制情况。WST-1法和RTCA S16系统分析细胞增殖情况。集落形成实验观察集落形成。流式细胞术检测细胞周期。显微镜下观察上皮-间充质转化(EMT)形态变化。划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力的改变。Western blot分析相关分子变化,探讨可能机制。结果:4株人结肠癌细胞株中HCT116细胞的CARMA3 mRNA和蛋白表达量最高,构建稳定沉默CARMA3的HCT116-sh CARMA3细胞株,其中HCT116-sh CARMA3-93细胞中CARMA3的mRNA和蛋白受抑制最明显,将其作为细胞模型。相比于对照组,HCT116-sh CARMA3-93细胞形态发生EMT逆转,其增殖、集落形成、迁移和侵袭能力明显下降(P0.01)。HCT116-sh CARMA3-93的G_0/G_1细胞所占比例明显升高,S期细胞比例相应下降(P0.05)。信号通路分子Bcl10和NF-κB表达明显下调,MALT-1变化不明显;细胞周期相关蛋白cyclin D1显著下调,cyclin A表达略有下降;侵袭转移相关分子MMP-2和MMP-9的表达下调,MMP-7未见改变,TIMP-1和TIMP-2的表达上调;EMT相关分子E-cadherin的表达水平升高,N-cadherin、Snail、Slug和Twist的表达水平呈不同程度降低。结论:CARMA3可通过改变细胞周期和侵袭转移分子的表达、调控EMT来影响结肠癌细胞HCT116的生长和侵袭转移。这可能与NF-κB信号通路发生改变有关。     

SphK1和FAK对人结肠癌HCT116细胞上皮间质转化的影响

 目的: 研究鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase l,SphK1)和黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)对人结肠癌HCT116细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响。方法: 将人结肠癌HCT116细胞分成3组:采用SphK1抑制剂N,N-二甲基鞘胺醇(N,N-dimethylsphingosine,DMS)、FAK抑制剂PF573228和相同体积的培养基分别处理细胞。MTT法检测细胞活力,Western blot方法检测SphK1、FAK、E-cadherin、N-cadherin、vimentin和基质金属蛋白酶2(MMP2)蛋白的表达,real-time PCR检测SphK1、鞘氨醇1-磷酸(S1P)、FAK、E-cadherin和vimentin mRNA的表达,并应用细胞划痕实验检测肿瘤细胞的迁移能力。结果: PF573228和DMS均明显抑制人结肠癌HCT116细胞的活力,并呈时间剂量依赖性。DMS抑制SphK1的表达,同时下调FAK、N-cadherin、vimentin和MMP2蛋白的表达,而上调E-cadherin蛋白表达上调。PF573228明显抑制FAK的表达,同时抑制SphK1、N-cadherin、vimentin和MMP2的表达,上调E-cadherin蛋白的表达(P<0.01)。划痕实验显示PF573228和DMS显著抑制HCT116细胞的迁移能力(P<0.01)。与对照组比较,PF573228组和DMS组FAK、SphK1、S1P以及vimentin mRNA的表达明显下调,而E-cadherin mRNA的表达则明显上调(P<0.05)。结论: SphK1和FAK信号通路可能在结肠癌HTC116细胞上皮间质转化过程中发挥重要作用。     

MTA1基因调节神经胶质母细胞瘤细胞U-87-MG侵袭与迁移

目的评价沉默MTA1基因对神经胶质瘤细胞U-87-MG侵袭与迁移能力的影响。方法应用慢病毒转染技术沉默MTA1基因的表达,通过Western blot实验与荧光共聚焦实验检测MTA1蛋白与F-actin蛋白的表达;通过Transwell实验评估细胞侵袭与迁移能力;Western blot实验检测E-cadherin,N-cadherin蛋白的表达。结果沉默MTA1基因可下调F-actin蛋白的表达水平,抑制U-87-MG细胞的侵袭与迁移能力,并且上调N-cadherin蛋白,下调E-cadherin蛋白的表达。结论沉默MTA1基因抑制胶质母细胞瘤细胞系U-87-MG的侵袭与迁移能力与影响F-actin的集聚与EMT相关蛋白N-cadherin与E-cadherin表达相关。     

小分子干扰RNA 沉默RhoGDI2 基因表达对结肠癌细胞增殖侵袭的影响及其机制

目的:应用小分子干扰RNA(siRNA)沉默RhoGDI2 基因的表达,初步探讨其对结肠癌细胞增殖、迁移能力的影响及可能的机制。方法:分别运用Western blot 和RT-qPCR 检测结肠癌细胞株RKO、HT29、SW620、SW480、HCT116 基因RhoGDI2 的表达情况。设计并合成RhoGDI2 siRNA 干扰序列,按照LipofectamineTM2000 转染方法将siRNA 干扰序列转染到目的细胞,设置实验干扰组、空白对照和阴性对照组;CCK-8 实验检测细胞增殖能力,细胞划痕试验和Transwell 实验检测细胞迁移、侵袭能力。结果:人结肠癌细胞株RhoGDI2 表达量由高到低依次是RKO、HT29、SW620、SW480、HCT116;RKO 细胞siRNA干扰后RhoGDI2 表达抑制率大于70%:实验干扰组、阴性对照组、空白对照组细胞增殖率分别是(0.683±0.013)、(0.866±0.088)、(0.905±0.008),P<0.05;实验干扰组细胞迁移、侵袭速率较对照组均减慢。沉默RhoGDI2 基因的表达,实验组细胞E-Cadherin 较对照组表达量高,Vimentin 蛋白表达下降。结论:结肠癌RhoGDI2 基因沉默可能通过抑制EMT 进程阻止肿瘤恶性生物学行为。     

橙皮素对结肠癌HCT116细胞凋亡、迁移与侵袭的影响及机制研究

目的观察橙皮素对结肠癌HCT116细胞凋亡、迁移与侵袭的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用不同浓度的橙皮素(100、200、400、600、800μM)处理结肠癌HCT116细胞和正常结肠上皮NCM460细胞,作用24、48h后,CCK-8检测细胞增殖。选取200μM和400μM橙皮素处理HCT116细胞24h后,采用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3和细胞迁移与侵袭相关蛋白MMP-2、MMP-9以及AKT和p-AKT的表达水平。结果橙皮素对结肠癌HCT116细胞增殖有显著抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;而对正常结肠上皮NCM460细胞增殖抑制作用影响不大。与对照组相比,橙皮素(200μM、400μM)能明显诱导HCT116细胞发生凋亡,能够有效抑制HCT116细胞的迁移和侵袭能力。橙皮素明显下调HCT116细胞中Bcl-2、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平,上调Bax和cleaved caspase-3蛋白表达水平,同时橙皮素可以下调p-AKT水平,但对总AKT水平无明显影响。结论橙皮素抑制结肠癌HCT116细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低迁移和侵袭能力,与抑制AKT的活化相关。     

紫草素对HGF诱导的人肺癌细胞上皮-间充质转化的逆转作用

目的:探讨紫草素(shikonin)对肝细胞生长因子(HGF)诱导的人非小细胞肺癌PC9细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法:用HGF诱导PC9细胞建立EMT模型,采用不同剂量的shikonin干预24 h后,MTT法检测细胞活力;划痕愈合实验检测细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测细胞的侵袭能力;Western blot法检测细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的蛋白表达水平。结果:Shikonin可显著抑制PC9细胞的活力(P0.01),随着给药剂量的增加,shikonin对细胞的生长抑制率显著上升,并呈一定的剂量依赖关系,IC_(50)为9.364μmol/L。HGF可诱导PC9细胞发生迁移和侵袭;划痕愈合实验和Transwell小室实验显示,shikonin能明显抑制由HGF诱导的肺癌PC9细胞迁移和侵袭(P0.01)。Western blot检测结果显示HGF可诱导PC9细胞的EMT标志物E-cadherin蛋白表达下调,N-cadherin和vimentin蛋白表达上调,使其发生EMT;shikonin则可逆转由HGF诱导的PC9细胞E-cadherin蛋白表达下调及N-cadherin和vimentin蛋白表达上调(P0.01)。结论:Shikonin能逆转由HGF诱导的肺癌PC9细胞EMT,同时抑制其迁移和侵袭。     

过表达Oct4B1 诱导结直肠癌SW480 细胞发生上皮间质转化

目的:探讨Oct4B1 基因过表达是否诱导人结直肠癌SW480 细胞发生上皮间质转化(EMT)及其可能的机制。方法:用带G418 抗性的Oct4B1 基因过表达质粒及阴性对照质粒转染人结直肠癌SW480 细胞株,分别称为实验组(SW480-Oct4B1)及对照组(SW480-NC),转染成功后用G418 筛选建立稳定转染的细胞株,对两种稳定转染细胞进行如下检测: RT-qPCR 检测Oct4B1 的mRNA 水平;于划痕实验和Transwell 小室实验检测迁移和侵袭能力;盂Western blot 检测EMT 相关标记物E-cadherin、N-cadherin 及Vimentin 蛋白表达; RT-qPCR 和Western blot 检测EMT 转录因子Twist 的mRNA 及蛋白表达。结果:稳定转染细胞株建立后,实验组与对照组比较:Oct4B1 基因表达水平明显升高(P<0.01);细胞迁移明显增强(P<0.01);细胞侵袭能力明显提高(P<0.01);上皮标记物E-cadherin 蛋白表达量明显下降(P<0.01);而间质标记物N-cadherin 及Vimentin蛋白表达量明显上调(P<0.01);Twist 的mRNA 及蛋白表达量均明显升高(P<0.01)。结论:过表达Oct4B1 基因可诱导人结直肠癌SW480 细胞发生EMT,增强细胞迁移及侵袭能力,其分子机制可能与提高Twist 表达有关。     

硫酸寡糖复合物对人结肠癌SW620细胞迁移与侵袭能力的影响

目的 探讨硫酸寡糖复合物(PI-88)对结肠癌SW620细胞迁移与侵袭的影响及机制。方法 培养人结肠癌SW620细胞,分为对照组、溶媒组和药物组;对照组细胞不做任何处理,药物组细胞给予5 μL的0.5 mol/L的PI-88,溶媒组给予细胞5 μL的磷酸盐缓冲液(PBS)。各组细胞处理后继续培养24 h,采用划痕实验检测结肠癌SW620细胞迁移距离;Transwell小室检测结肠癌SW620细胞迁移数量与侵袭数量;Western blot检测结肠癌SW620细胞中乙酰肝素酶(HPA)、血管内皮生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)蛋白的表达。结果 划痕实验结果显示,药物组SW620细胞迁移距离(35.49±6.89)μm小于对照组(216.75±21.43)μm、溶媒组(227.52±17.72)μm,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。Transwell小室细胞迁移、侵袭实验结果显示,药物组SW620细胞迁移数目(226±37)个和侵袭数目(89±11)个均少于对照组(875±93、321±28)个和溶媒组(843±116、331±43)个,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。Western blot实验结果显示,药物组PHA、VEGF、bFGF蛋白相对表达量均明显低于对照组和溶媒组,差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。结论 PI-88具有抑制结肠癌SW620细胞迁移与侵袭的作用,其作用机制可能与PI-88抑制结肠癌SW620细胞HPA、VEGF、bFGF蛋白的表达有关。     

miR-489通过调控TWIST1的表达抑制结肠癌干细胞表型和上皮间质转换

目的探讨miR-489在结肠癌干细胞表型和上皮间质转换中的作用和调控机制。方法 RT-q PCR检测多个人结肠癌细胞系(HT29、SW480、SW620和HCT116)和正常肠道上皮细胞HIEC中miR-489表达;采用基因转染技术提高结肠癌细胞中miR-489表达,Western blot检测过表达miR-489对结肠癌干细胞标志物CD133、CD44、Ep CAM、ALDH1和上皮细胞标志物E-cadherin、间质细胞标志物vimentin和N-cadherin的表达;RT-q PCR和Western blot检测TWIST1 mRNA和蛋白表达水平。结果 4个结肠癌细胞系中的miR-489相对表达量显著低于正常肠道上皮细胞HIEC中的表达(P<0.05)。在HT29和HCT116细胞中过表达miR-489,4个结肠癌干细胞标志物表达降低(P<0.05);上皮细胞标志物表达增加(P<0.05);间质细胞标志物表达减少(P<0.05)。TWIST1是miR-489潜在靶基因,在2个细胞系中过表达miR-489,TWIST1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 miR-489在结肠癌细胞中低表达,过表达miR-489可能通过调控TWIST1抑制结肠癌干细胞表型和上皮间质转换。     

miR-186上调Dicer1抑制结肠癌细胞侵袭转移的分子机制

为探讨miR-186通过Dicer1影响结肠癌细胞侵袭转移及其作用机制,RT-qPCR检测miR-186在结肠癌组织及正常癌旁组织、人结肠癌细胞及正常人肠上皮细胞HIEC中的表达;荧光显微镜观察稳定过表达/下调miR-186细胞系GFP荧光并采用RT-qPCR检测miR-186表达效率;Transwell及划痕实验检测miR-186对结肠癌细胞SW620和HT29侵袭、迁移能力的影响;免疫荧光法检测上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition, EMT)相关分子N-cadherin表达;生物信息学预测及双荧光素酶报告基因实验验证miR-186和Dicer1的靶向关系;免疫组织化学法检测Dicer1在结肠癌组织及正常癌旁组织中的表达;Western blotting检测Dicer1在各细胞株中的表达。结果显示,肿瘤组织中miR-186的表达水平显著低于正常癌旁组织(P0.05);miR-186在肿瘤细胞中的表达水平显著低于HIEC(P0.05)。转染过表达/下调miR-186慢病毒阳性质粒及阴性对照的SW620和HT29细胞均出现大量绿色荧光;RT-qPCR显示稳定过表达细胞SW620-mimic-miR-186中miR-186水平显著升高,HT29-inhibitor-miR-186中miR-186水平显著下降,分别与SW620和SW620-mimic-NC、HT29和HT29-inhibitor-NC相比差异有统计学意义(P0.05)。过表达miR-186能显著降低SW620的侵袭迁移能力,同时抑制N-cadherin水平,而下调miR-186能显著增加HT29的侵袭迁移能力。经www.microRNA.org网站预测发现miR-186和Dicer1有互补结合序列,双荧光素酶报告实验证实两者的靶向结合关系。SW620中Dicer1表达水平显著低于HIEC(P0.05);稳定过表达细胞系SW620-mimic-miR-186中Dicer1表达水平明显升高,分别与SW620和SW620-mimic-NC相比差异有统计学意义(P0.05)。由此,miR-186通过靶向正调控Dicer1的表达降低N-cadherin水平从而抑制EMT进程,最终抑制结肠癌细胞的侵袭迁移能力。     

二苯乙烯苷通过PI3K/AKT通路抑制TGFβ诱导的结直肠癌上皮间质转换

目的:探讨二苯乙烯苷(2,3,5,4'-tetrahydroxy stilbene-2-Ο-β-D-glucoside,THSG)对TGFβ诱导的结直肠癌细胞上皮间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响及可能的分子机制.方法:通过转化生长因子(transforming growth factorβ,TGFβ)诱导HCT116细胞发生EMT,倒置显微镜观察细胞形态变化,Western印迹检测EMT相关分子标志物的表达;划痕实验、细胞迁移实验、倒置显微镜观察不同浓度THSG干预TGFβ刺激对HCT116细胞运动、迁移能力以及形态学的影响,Western印迹检测EMT相关标志物及PI3K/AKT通路的改变.结果:TGFβ刺激HCT116细胞后,细胞由圆形变为长梭形,E-cadherin表达降低,vimentin和N-cadherin表达增加;与对照组相比,THSG可增加E-cadherin和PTEN的表达,降低vimentin和N-cadherin和p-AKT表达,同时抑制细胞的迁移及运动(F=454.723,P<0.001;F=412.161,P<0.001).结论:THSG可通过PI3K/AKT通路抑制TGFβ诱导的HCT116细胞EMT,并降低其运动迁移能力.     

川芎嗪通过调控PI3K/Akt信号通路抑制三阴乳腺癌的增殖侵袭和EMT

目的探讨川芎嗪对三阴乳腺癌细胞系MDA-MB-231细胞增殖、侵袭和EMT的影响及可能机制。方法不同浓度川芎嗪处理MDA-MB-231细胞后,采用CCK8方法检测细胞增殖活性;Transwell法检测细胞的侵袭能力;Western blot检测EMT相关标志物E-cadherin, Vimentin, N-cadherin, Snail的表达变化;裸鼠移植瘤实验观察川芎嗪对瘤体增殖的影响;Western blot检测Akt, p-Akt, PI3K和p-PI3K蛋白的表达。结果 CCK8证实川芎嗪能抑制三阴乳腺癌细胞增殖,且呈现剂量依赖性;裸鼠成瘤实验证实川芎嗪在体内抑制乳腺癌细胞生长;Transwell实验表明川芎嗪可抑制细胞侵袭;Western blot结果显示川芎嗪上调E-cadherin表达,下调Vimentin,Ncadherin和Snail蛋白表达;同时发现川芎嗪显著抑制PI3K和Akt蛋白的磷酸化水平。结论川芎嗪能显著抑制乳腺癌细胞增殖,侵袭和EMT,该作用可能与抑制PI3K/Akt信号通路激活有关。     

SCUBE2过表达通过Wnt/β-catenin抑制结直肠癌细胞上皮-间质转化

目的:研究信号肽-CUB-EGF结构域蛋白2(SCUBE2)对结直肠癌细胞上皮-间质转化(EMT)的影响及可能的分子机制。方法:首先,用real-time PCR与Western blot法检测人结直肠癌HCT116细胞和正常人结直肠上皮FHC细胞SCUBE2的表达;HCT116细胞转染GV144-SCUBE2质粒过表达SCUBE2后,MTT、Transwell和流式细胞术分别检测其对细胞活力、迁移和凋亡的影响。转染GV144-SCUBE2质粒6 h后加入10μg/L重组转化生长因子(TGF)-β1蛋白继续培养48 h,real-time PCR或者Western blot法检测EMT标志物[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和Snail]、β-catenin、c-Myc和细胞周期蛋白(cyclin)D1的表达。随后,在HCT116细胞中使用Wnt/β-catenin通路激活剂氯化锂(Li Cl)或抑制剂XAV93920并加入TGF-β1且过表达SCUBE2,检测Wnt/β-catenin通路激活或阻断后对HCT116细胞EMT的影响。结果:HCT116细胞中SCUBE2的表达明显低于FHC细胞;过表达SCUBE2能够抑制HCT116细胞的活力与迁移,但是对其凋亡影响不大;SCUBE2增加了E-cadherin的表达,降低了TGF-β1诱导的vimentin、Snail、β-catenin、c-Myc和cyclin D1的表达,XAV93920增强了SCUBE2对EMT的影响,而Li Cl阻碍SCUBE2对EMT的影响。结论:过表达SCUBE2能够抑制结直肠癌细胞的生长与迁移,抑制其EMT的发生,这一过程可能是通过抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥作用的。     

大黄酚介导AMPK 依赖性信号通路抑制结肠癌SW480 细胞的增殖、侵袭和裸鼠体内肿瘤形成

目的:以体外培养SW480细胞和体内荷瘤裸鼠为研究对象,探讨大黄酚(Chr)对结肠癌SW480细胞增殖、侵袭和裸鼠体内肿瘤形成的影响。方法:分别在结肠癌细胞SW480中加入25、50和100μmol/L大黄酚,Brdu染色法检测细胞增殖情况,Western blot检测增殖相关蛋白Ki67和PCNA表达水平;划痕实验和Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力;Western blot检测VEGF、E-cadherin和N-cadherin等上皮间充质转化相关蛋白表达,免疫荧光法检测波形蛋白表达情况;Western blot检测信号通路AMPK、mTOR和cyclin D1表达;建立移植瘤裸鼠模型,分别腹腔注射12.5、25和50 mg/kg大黄酚,检测荷瘤小鼠存活率、肿瘤重量,采用免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki67和PCNA表达水平,Western blot检测信号通路AMPK、mTOR和cyclin D1活化情况。结果:体外实验表明,大黄酚能剂量依赖性地抑制人结肠癌SW480细胞增殖和Ki67、PCNA蛋白表达(P0.05或P0.01),降低细胞划痕闭合率和侵袭细胞数量(P0.05或P0.01),调节E-cadherin、VEGF、N-cadherin、Vimentin、AMPK、mTOR和cyclin D1在SW480细胞中的表达水平(P0.05或P0.01);体内实验表明,与对照组(0.45±0.09)g相比,大黄酚各剂量组肿瘤组织重量分别为(0.32±0.06)g、(0.24±0.07)g和(0.15±0.04)g,差异具有统计学意义(P0.05或P0.01),且大黄酚剂量依赖性地抑制Ki67和PCNA表达(P0.05或P0.01),调控AMPK、p-mTOR和cyclin D1在肿瘤组织的表达(P0.05或P0.01)。结论:大黄酚通过AMPK信号通路抑制结肠癌SW480细胞的增殖、侵袭及荷瘤小鼠肿瘤形成。     

上皮-间质转化在蒿甲醚逆转结直肠癌细胞放化疗抵抗中的作用

目的:探讨上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)在蒿甲醚(artemether,ARE)对同期放化疗抵抗人结直肠癌细胞HCT116(HCT1 16CRR)的逆转作用中的作用.方法:实验分为四组:1)对照组;2)单纯放化疗组;3)ARE联合放化疗组;4)ARE组.采用Real-time PCR和Westernblot,检测各组EMT相关指标E-cadherin,N-cadherin,vimentin,snail mRNA及其蛋白的表达情况.结果:Real-time PCR和Western blot结果显示E-cadherin mRNA及其蛋白的表达情况,单纯放化疗组＜ARE联合放化疗组＜对照组＜ARE组;N-cadherin,vimentin,snail mRNA及其蛋白的表达情况,单纯放化疗组＞ARE联合放化疗组＞对照组＞ARE组.结论:EMT在ARE逆转同期放化疗抵抗人结直肠癌细胞HCT116CRR细胞系的放化疗抵抗作用中有重要的作用,即上调E-cadherin mRNA及其蛋白的表达,下调N-cadherin,vimentin,snail mRNA及其蛋白的表达.     

miR-320a靶向KLF5抑制结肠癌HCT116细胞增殖和侵袭的分子机制

目的 探讨过表达miR-320a对结肠癌HCT116细胞的生物学行为的影响,并初步分析miR-320a对KLF5的调控机制.方法 将miR-320a模拟物转染结肠癌HCT116细胞,建立过表达miR-320a结肠癌HCT116细胞系,采用CCK-8方法检测转染后HCT116细胞增殖能力,Transwell实验检测转染后HCT116细胞侵袭能力.通过网站Targetscan7.2预测KLF5是否为miR-320a的靶基因,双荧光素酶实验进行验证.Western blot检测转染后各组HCT116细胞中KLF5蛋白表达.结果 CCK-8实验结果显示,miR-320a过表达抑制HCT116细胞增殖能力,Transwell实验结果显示,miR-320a过表达抑制HCT116细胞的侵袭能力,Western blot结果显示,上调miR-320a可使HCT116细胞中KLF5蛋白表达下降,TargetScan7.2网站分析及双荧光素酶实验证实KLF5为miR-320a的靶基因.结论 过表达miR-320a可以抑制结肠癌HCT116细胞增殖及侵袭能力,其机制可能与下调KLF5的表达有关.     

Dickkopf-1沉默通过下调β-catenin水平抑制胃癌细胞侵袭及上皮-间充质转化

目的:探讨分泌蛋白Dickkopf-1(DKK1)在人胃癌细胞中的表达及其对胃癌细胞侵袭能力的影响。方法:以real-time PCR和Western blot法检测DKK1在人胃黏膜细胞(GES-1)和胃癌细胞(MKN-45和SGC-7901)中的表达水平;以RNA干扰法沉默DKK1,沉默效果以real-time PCR、Western blot及ELISA法验证;Transwell实验检测细胞侵袭能力,以丝裂霉素C抑制细胞增殖;real-time PCR及Western blot法检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)及β-连环蛋白(β-catenin)水平。结果:DKK1在MKN-45和SGC-7901细胞中的表达明显高于GES-1细胞,表明DKK1在胃癌细胞中表达显著升高;DKK1在MKN-45和SGC-7901细胞中被成功沉默后,细胞侵袭能力显著下降,并具有时间依赖性,同时伴随E-cadherin表达增高及N-cadherin和vimentin表达下降,表明DKK1沉默能够显著抑制胃癌细胞侵袭和上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT);经外源性重组DKK1(r DKK1)转染肿瘤细胞后,进一步证实DKK1具有促胃癌细胞侵袭的作用,并可促进EMT进程;DKK1沉默通过下调β-catenin水平来实现其对胃癌细胞侵袭及EMT的抑制作用。结论:DKK1在人胃癌细胞中表达显著增高,且DKK1沉默能够通过下调β-catenin水平抑制胃癌细胞侵袭及EMT过程。