IL-1RA对绿脓杆菌所致的角膜基质细胞胶原降解的作用

目的:探讨白细胞介素1受体拮抗剂(IL-1RA)在绿脓杆菌引起的角膜基质细胞胶原降解中的作用,为临床上绿脓杆菌性角膜炎的治疗提供新的理论依据。方法:角膜基质细胞胶原凝胶及无角膜基质细胞胶原凝胶与绿脓杆菌培养液共同培养24h,测定培养上清液中羟脯氨酸的含量。同时检测IL-1RA对胶原降解的抑制作用。结果:绿脓杆菌培养液能直接降解Ι型胶原,在角膜细胞存在的情况下降解作用更强。角膜细胞存在时,IL-1RA可以明显抑制绿脓杆菌所致的胶原降解作用。结论:IL-1RA具有抑制绿脓杆菌引起的角膜基质细胞胶原降解的作用。     

转化生长因子β_1对兔角膜基质细胞胶原降解代谢的影响

目的 :观察转化生长因子β1对角膜基质细胞胶原降解作用的影响。方法 :角膜基质细胞三维胶原凝胶表面分别添加含纤溶酶原 ( 10 0 mg/ L)及不同浓度 ( 0、0 .1、1.0和 10 .0μg/ L )转化生长因子β1的MEM液 ,培养 2 4 h,测定培养液中羟脯氨酸含量做为胶原降解活性。结果 :转化生长因子β1以剂量依赖关系减少角膜基质细胞胶原降解。结论 :转化生长因子β1抑制角膜基质细胞胶原降解 ,可能有助于角膜溃疡的治疗。     

胶原-壳聚糖和角膜基质细胞复合膜的构建及其生物相容性

目的：探讨以胶原-壳聚糖为生物支架构建角膜基质细胞复合膜及其生物相容性。方法：兔和人角膜基质细胞分离培养后种植到胶原-壳聚糖共混膜上,构建成复合膜后移植到异体大耳白兔角膜基质囊袋中,术后1、2和4周时分别于活体进行前节OCT、Cs-4检查和离体组织学及免疫组化检测,观察复合膜中角膜基质细胞生长状态、生物支架对正常角膜细胞的影响及生物膜的降解情况。结果：活体前节OCT、Cs-4检查和离体组织学及免疫组化观察结果显示,兔和人角膜基质细胞在胶原-壳聚糖共混膜上生长良好,移植后复合膜逐渐发生降解,角膜组织未发生坏死和溶解,角膜上皮、基质和内皮细胞形态结构正常。结论：胶原-壳聚糖可作为角膜基质构建的生物支架,角膜共焦显微镜及前节OCT作为新的手段可活体观察构建后的角膜基质生物学活性。     

转化生长因子β1对兔角膜基质细胞胶原降解代谢的影响

目的：观察转化生长因子β1对角膜基质细胞胶原降解作用的影响。方法：角膜基质三维胶原凝胶表面分别添加含纤溶酶原（100mg/L）及不同浓度（0、0.1、1.0和10.0ug/L）转化生长因子β1的MEM液,培养24h,测定培养液中羟脯氨酸含量做为胶原降解活性。结果：转化生长因子β1以剂量依赖关系减少角膜基质细胞胶原降解。结论：转化生长因子β1抑制角膜基质细胞原降解,可能有助于角膜溃疡的治疗。     

化云宁治疗角膜瘢痕的实验研究

用化云宁治疗116只家兔角膜创伤及瘢痕模型的研究证明,化云宁不影响角膜创伤的愈合,对角膜云翳疗效明显,远优于狄奥宁和碘化钠。根据病理、组织化学和电镜检查表明化云宁的作用机理是抑制角膜基质中纤维母细胞的异常增殖及胶原合成,促使纤维母细胞成熟,使角膜基质中的细胞、纤维及间质恢复正常或接近正常。     

肿瘤坏死因子-α对兔角膜基质细胞胶原降解代谢的影响

目的 :观察肿瘤坏死因子 - α(TNF- α)对角膜基质细胞胶原降解作用的影响。方法 :角膜基质细胞三维胶原凝胶表面分别添加含纤溶酶原及不同浓度 TNF- α的 MEM液 ,培养 2 4 h,测定培养液中羟脯氨酸的量做为胶原降解活性。结果 :TNF- α以剂量依赖关系增加角膜基质细胞胶原降解。结论 :TNF-α促进角膜基质细胞胶原降解 ,TNF- α可能在角膜溃疡发生中具有重要作用     

准分子激光原位角膜磨镶术后角膜瓣的黏附机制

目的:研究准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK )角膜瓣复位后的黏附机制.方法:实验组24只新西兰兔分为8组,每组3 只;对照组3只.左眼按近视-10. 00 D行LA SIK术.分别于术后即刻、24 h、1周、2周、1月、3月、6月及12月行裂隙灯显微镜检查, 并取角膜行光镜观察及免疫组织化学染色,检测细胞外基质(extracellular matrix, ECM)成分,包括I型胶原、Ⅲ型胶原、Ⅵ型胶原、纤维连接蛋白(cellular fibronection , cFN)、细胞黏合素(tenascin ,TN)、Ⅳ型胶原及层黏连蛋白(laminin, LN). 结果:裂隙灯显微镜检查术后角膜瓣贴附紧密;光镜观察角膜瓣交界面早期存在缝隙 ,晚期贴附紧密;免疫组织化学检测角膜瓣交界面术后早期有cFN的明显表达及Ⅲ型胶原、Ⅵ型胶原的表达,无I型胶原、Ⅳ型胶原、LN及TN的表达.结论:LASIK术后早期, 角膜瓣与其下的基质层之间的黏附由FN、Ⅵ型胶原及Ⅲ型胶原完成.     

肿瘤坏死因子—α对兔角膜基质细胞胶原降解代谢的影响

目的：观察肿瘤坏死因子－α（TNF-α）对角膜基质细胞胶原降解作用的影响。方法：角膜基质细胞三维胶原凝胶表面分别添加含纤溶酶原及不同浓度TNF－α的MEM液，培养24h，测定培养液中羟脯氨酸的量做为胶原降解活性。结果：TNF－α以剂量依赖关系 增加角膜基质细胞胶原降解。结论：TNF－α促进角膜基质细胞胶原降解，TNF－α可能在角膜溃疡发生中具有重要作用。     

准分子激光原位角磨镶术后角膜瓣的黏附机制

目的：研究准分子激光原位角膜磨镶术（laser in situ keratomileusis,LASIK)角膜瓣复位后的黏附机制。方法：实验组24只新西兰兔分别为8组,每组3只;对照组3只。左眼按近视－10．00D行LASIK术。分别于术后即刻、24h、1周、2周、1月、3月、6月及12月行裂隙灯显微镜检查,并取角膜行光镜观察及免疫组织化学染色,检测细胞外基质（extracellular matrix,ECM）成分,包括I型胶原、Ⅲ型胶原、Ⅳ型胶原、纤维连接蛋白（cellualr fibronection,cFN）、细胞黏合素（tenascin,TN)、Ⅳ型胶原及层黏连蛋白（laminin,LN)。结果： 裂隙灯显微镜检查术后角膜瓣贴附紧密;光镜观察角膜瓣交界面早期存在缝隙,晚期贴附紧密;免疫组织化学检测角膜瓣交界面术后早期有cFN的明显表达及Ⅲ型胶原、Ⅳ型胶原的表达,无Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、LN及TN的表达。结论：LASIK术后早期,角膜瓣与其下的基质层之间的黏附由FN、Ⅳ型胶原及Ⅲ型胶原完成。     

白细胞介素1α对兔角膜基质细胞胶原降解代谢的影响

观察白细胞介素１α对兔角膜基质细胞胶原降解作用的影响。方法：应用分光光度法测定体外三维胶原凝胶培养的角膜基质细胞的胶原降解活性。结果：ＩＬ－１α以剂量依赖关系促进角膜基质细胞的胶原降解。     

脂肪干细胞构建组织工程化角膜基质组织

 目的 探讨以可降解高分子材料聚羟基乙醇（polylactic-co-glycolic acid,PLGA）为支架,复合自体脂肪干细胞构建组织工程角膜基质修复角膜基质层缺损的可行性。方法 兔脂肪干细胞（rabbit adipose derived stem cells,rASCs）培养至第4代接种在PLGA载体支架上,扫描电镜观察细胞在支架上生长黏附情况。体外培养7天后将rASCs-PLGA复合物回植到角膜基质缺损模型的兔角膜基质层间,术后第12周和24周取材行组织学和透射电镜超微结构观察。未接种细胞的PLGA材料移植基质层间作为对照组。结果 细胞在PLGA支架上生长增殖良好,实验组移植术后12周材料降解,角膜基本恢复透明。组织学检查显示移植后24周新生角膜基质样组织与正常角膜基质组织相似,电镜下胶原纤维直径与正常角膜基质组织比较,差异无统计学意义（P>0.05）。结论 脂肪干细胞可作为种子细胞来源用于构建组织工程角膜基质。     

In vivo biological stability of chemically pretreated silicone gel inserts intended for use in keratoprostheses

Background The previous study showed that pretreatment with chemical agents could alter the surface chemistry of the silicone gel making it suitable for epithelial migration onto its surface and enhancing the cytobiocompatibility. The Purpose of this study was to evaluate the biological response of the cornea stroma to porous silicone gel pretreated with different chemical agents in vivo. Methods The porous silicone gels were treated with mixed acid solution containing 23.2% H2SO4 and 0.8% K2Cr2O7 for 10 or 15 minutes or with 30% H2O2 for 15 minutes. Discs (4 mm in diameter) were inserted into interlamellar stromal pockets of New Zealand white rabbits and followed for a period of 3 months. Clinical evaluations such as corneal infiltration, oedema and neovascularisation were performed daily. At 3 months, the fibroplasias and collagen deposition were examined under light and scanning electron microscopy (SEM) and by immunohistochemical analysis. Results Pretreatment of the discs obviously decreased conjunctival congestion, discharge, cornea oedema, and the extent of neovascularization. More fibroblasts migrated into the pretreated discs than into the control, and collagen was deposited, indicating that the biocompatibility of the corneal replacements was enhanced by the chemical pretreatments. From immunohistochemical analysis, Type I collagen deposition in the pretreated silicone discs was greater than that in the control. Conclusions Chemical treatment of silicone gel is effective in decreasing rabbit corneal inflammation, encouraging fibroblast ingrowth and enhancing tissue compatibility, thus the pretreated gels show good biological stability when used as a skirt material in Keratoprosthesis (Kpros).     

基质金属蛋白酶-8对角膜基质胶原的作用研究

目的 探讨基质金属蛋白酶-8(MMP-8)对角膜的作用.方法 选取健康C57BL/6J小鼠15只,右眼角膜基质内注射10μL MMP-8作为实验组,左眼给予等量生理盐水作为对照组.于0、4、8h使用双光子显微镜二次谐波成像技术对活体小鼠角膜逐层扫描,Imaris软件对所得图像三维重建,计算图像信号强度.4、8h在裂隙灯下评价角膜混浊度.8h角膜取材,测定各角膜羟脯氨酸水平.结果 0h实验组及对照组小鼠角膜基质纤维信号强度分别为89.7±11.2、85.3±7.0,4h分别为14.5± 3.4、46.6±14.0,8h分别为11.0±4.6、34.6±12.5,4h及8h,实验组较对照组角膜基质信号强度明显降低(P<0.05);4h及8h,实验组较对照组角膜明显混浊(P<0.05);8 h测得实验组与对照组角膜羟脯氨酸水平分别为(0. 433±0.090)、(0. 590± 0. 133)μg/mg,实验组明显低于对照组(F=7. 193,P=0. 014).结论 MMP-8对小鼠角膜基质胶原有明显的降解破坏作用,导致角膜透明度下降.     

In vivo biological stability of chemically pretreated silicone gel inserts intended for use in keratoprostheses

Background  Pretreatment with chemical agents could alter the surface chemistry of the silicone gel, which makes it suitable for epithelial migration onto its surface and thus enhances the cytobiocompatibility. This study aimed to evaluate the biological response of the corneal stroma to porous silicone gel pretreated with different chemical agents in vivo.

Methods  The porous silicone gels were treated with a mixed acid solution containing 23.2% H₂SO₄ and 0.8% K₂Cr₂O₇ for 10 or 15 minutes or with 30% H₂O₂ for 15 minutes. Discs (4 mm in diameter) were inserted into interlamellar stromal pockets of New Zealand white rabbits and followed up for a period of 3 months. Clinical evaluations such as corneal infiltration, edema and neovascularization were performed daily. At 3 months, the fibroplasias and collagen deposition were examined under light and scanning electron microscopy (SEM) and by immunohistochemical analysis.

Results  Pretreatment of the discs obviously decreased conjunctival congestion, discharge, cornea edema, and the extent of neovascularization. More fibroblasts migrated into the pretreated discs than into the control, and collagen was deposited, indicating that the biocompatibility of the corneal replacements was enhanced by the chemical pretreatments. From immunohistochemical analysis, Type I collagen deposition in the pretreated silicone discs was greater than in the control.

Conclusions  Chemical treatment of silicone gel is effective in decreasing rabbit corneal inflammation, encouraging fibroblast in-growth, and enhancing tissue compatibility. Pretreated gels show good biological stability when used as a skirt material in Keratoprosthesis (Kpros).

     

皮肤成纤维细胞构建组织工程化猪角膜基质样组织

目的探讨以皮肤成纤维细胞为种子细胞,在猪角膜微环境中构建组织工程化角膜基质组织的可行性。方法分离获取胎猪皮肤成纤维细胞经体外培养、扩增。通过转染绿色荧光蛋白(GFP)基因标记细胞,示踪细胞的转归。选取第3代的细胞接种于可吸收生物材料聚羟基乙酸(PGA),形成细胞-生物材料复合物,体外培养1周后,移植于猪的角膜基质层内,于第8周取材进行大体、组织学检查及超微结构观察。以角膜基质细胞为种子细胞构建的组织工程化角膜基质组织作为对照。结果术后8周,实验组角膜逐渐恢复透明,与对照组角膜无明显差别。组织学检查显示形成新生的角膜基质样组织,呈板层状,排列较规则,与对照组角膜组织相似。超微结构观察及胶原纤维直径检测显示,实验组与对照组角膜组织差异无统计学意义。荧光显微镜观察到GFP阳性细胞存在。结论皮肤成纤维细胞可能替代角膜基质细胞,在猪角膜内构建角膜基质样组织。     

电镜下胃癌细胞周围的基板和成纤维细胞的变化

在电镜下观察了胃癌组织内基板和成纤维细胞的变化。从胃癌细胞周围基板的改变看来,成纤维细胞合成并分泌原胶原,而粘多糖则由成纤维细胞或胃癌细胞产生,两种成分在癌细胞周围聚合成基板。基板的形成过程如下:最初,一小段基板出现在癌细胞一侧。以后 几小段基板连接形成完整的基板,围绕在癌细胞团周围。基板形成后,仍然可被癌细胞分解破坏。基板可能只是连系癌细胞和间质的一种结构,而不具有限制癌细胞浸润的作用。在胃癌组织中,成纤维细胞增生,胶原生成明显。     

兔不同切削量的LASIK术后角膜细胞明胶酶的表达

目的 研究不同切削量的准分子激光原位角膜磨镶术(laser in situ keratomileusis,LASIK )后 6个月角膜明胶酶MMP-2,MMP-9的表达,以探讨LASIK手术的切削深度不同对角膜的胶原结构的影响. 方法 选取成年新西兰白兔16只(32眼)随机分成A(n= 8,正常对照组)、B、C、D四个组.B、C、D组分别行LASIK手术使残留的基质床厚度为整体角膜厚度的70%、50%、30%.术后6个月行明胶酶谱法检测角膜组织的明胶酶活性. 结果 术后6个月各组角膜组织均有明胶酶MMP-2(72 000,原酶) 及MMP-2(62 0 00,活性酶)的表达,且各组相比差异均无统计学意义(F=2.273,P>0.05).各组均无 MMP-9(92 000,活性酶)的表达;且角膜地形图检测都没出现圆锥角膜或角膜后圆锥. 结论 单纯切削过量在LASIK术后6个月并未引起角膜主要胶原降解发生改变,也并非必然引起圆锥角膜.     

积雪草提取物溶液治疗兔眼角膜瘢痕实验研究

目的：通过动物实验研究积雪草提取物溶液在兔眼角膜瘢痕治疗中的作用,为积雪草在眼科临床应用提供实验依据。方法：取30只兔（60只眼）,用烧灼法制作角膜瘢痕的动物模型,随机分为3组：A组生理盐液对照组（20只眼）;B组1%积雪草提取物溶液治疗组（20只眼）;C组0.2%透明质酸钠溶液对照组（20只眼）。60天后随机数字表法,分别观察兔眼角膜瘢痕的变化,并结合病理学和光镜结构变化。结果：积雪草提取物溶液组治疗后,角膜瘢痕面积、厚度与透明质酸钠溶液对照组及生理盐液对照组相比较明显减小,有显著性差异（P〈0.05）。组织病理学显示积雪草提取物溶液组角膜基质层成纤维母细胞排列较透明质酸钠溶液对照组及生理盐液对照组规则。结论：积雪草提取物溶液能有效抑制胶原形成细胞的增殖及胶原的合成,是一种有效的治疗角膜瘢痕的药物。     

脱细胞异种角膜基质的制备及细胞相容性

目的用牛角膜制备脱细胞基质,作为组织工程角膜的载体,为细胞提供贴附生长的支持物.方法选取新鲜牛角膜9个,每个分层剥离为2片组织.用0.25%胰蛋白酶,37℃下分为20、40、60min消化,漂洗.每组取样本分别做扫描电镜观察和HE染色观察.其余冻干处理后消毒备用.将消毒后冻干牛角膜基质常规培养基浸泡24 h,取浸提液原液,稀释101、102、103倍培养人成纤维细胞,观察细胞生长情况.将冻干牛角膜基质复水,常规培养基浸泡24 h,以2×l05个/cm2接种兔角膜缘细胞,培养7 d后,标本扫描电镜检查、HE染色观察.结果电镜观察各组牛角膜片表层细胞均被脱去,60min组基质胶原间细胞碎片残留较少,20 min组较多,胶原纤维有序排列以60 min组破坏最大.浸提液的各稀释倍数及原液所培养人成纤维细胞生长良好,各组间差异无显著性.电镜及HE染色观察复合材料培养的兔角膜缘干细胞,均见细胞在材料表面贴附生长,材料部分表面呈多层生长.结论以酶消化法和冻干处理的脱细胞牛角膜基质可以作为细胞的载体在体外与细胞复合培养.