转几丁质酶基因烟草遗传稳定性研究

从转几丁质酶基因烟草株系(NPTII基因是选择标记基因)对卡那霉素的抗性,及外源几丁质酶基因表达蛋白的活性(Western Blot检测)两个方面对转基因株系的遗传稳定性进行了分析研究。在卡那霉素抗性检测试验中,检测了13个T₂转基因株系,其中9个株系被检测种子100%对卡那霉素(100 mg/L)具有抗性;T₃和T₄转基因株系各检测了10个,100%被检测种子在含卡那霉素100 mg/L的MS培养基上长成了烟苗。Western Blot检测了11个T₂株系,检测结果表明,6个株系被检测植株100%含有外源几丁质酶蛋白,2个株系被检测植株80%含有外源几丁质酶蛋白,2个株系被检测植株50%含有外源几丁质酶蛋白,1个株系被检测植株19.05%含有外源几丁质酶蛋白。在温室内将转基因烟草与未转基因烟草密植在一起,种植2代,烟株开花期模仿自然风力对烟株吹风,进行了转基因烟草是否可以通过花粉进行基因漂移的研究。研究结果表明,在自然风媒条件下未发现转基因烟草可进行基因漂移。      

细菌几丁质酶基因转化烟草的研究

为了提高烤烟品种K 32 6对真菌病害的抗性 ,以烟草再生植株的叶片为受体 ,采用农杆菌介导法将细菌几丁质酶基因导入烟草 ,获得了抗卡那霉素的转化植株 ,经PCR检测 ,初步证明了细菌几丁质酶基因已整合到烟草的基因组中 ;同时研究了再生烟草叶片的耐卡那霉素水平、受体预培养对转化的影响以及促进转化植株的生根等。结果表明 :培养基中卡那霉素浓度为 5 0mg/L时 ,能完全抑制烟草叶片的再生 ;烟草叶片预培养 2d的转化率提高 ;添加 0 .2mg/LIAA(吲哚乙酸 )能显著地提高转化植株芽梢的生根率。     

半嵌套式PCR检测转几丁质酶基因烟草研究

用含卡那霉素的培养基首先对转几丁质酶基因烟草种子和烟苗进行初步筛选鉴定,再用Western Blot进一步证实抗卡那霉素的转基因烟苗中外源转几丁质酶基因的表达。然后研究半嵌套式PCR(Semi-nested PCR)检测转几丁质酶基因烟草植株及其烤后烟叶中的所转目的基因;利用限制性内切酶Hind Ⅲ对半嵌套式PCR产物进行酶切,从而验证半嵌套式PCR产物是否为真正的目的基因。研究结果表明,半嵌套式PCR是一种快速、灵敏的检测转几丁质酶基因烟草植株及烤后烟叶的方法。      

Vibrio natriegens几丁质酶基因的异源表达及酶学性质研究

几丁质是自然界中除纤维素外第二多的多糖聚合物,在几丁质酶的作用下生成的几丁寡糖具有较好的生物活性及应用价值.通过分子生物学手段获得高活性重组几丁质酶,有利于实现虾壳等几丁质资源的高值化利用.对来源于Vibrio natriegens中的几丁质酶基因进行克隆及诱导表达,获得重组几丁质酶VnChit4,然后通过亲和层析对该...     

哈密瓜中几丁质酶基因的克隆及表达分析

几丁质酶是一种重要的病程相关蛋白,在植物抗病中发挥积极作用。为研究哈密瓜中几丁质酶对青霉菌侵染的抗性作用,本研究采用RT-PCR的方法,克隆一段哈密瓜中几丁质酶基因的cDNA,并采用相对荧光定量法(SYBR Green)分析其表达量。克隆得到的几丁质酶基因片段HmCHI长1153 bp,最大开放阅读框为445个核苷酸,编码145个氨基酸,属于18家族Class Ⅲ几丁质酶基因;推测其所编码蛋白分子量为15.04 ku,理论等电点8.82,为疏水性蛋白;预测其有一个信号肽,为非跨膜蛋白,定位于细胞间隙;HmCHI氨基酸序列与黄瓜的亲缘关系最近。荧光定量分析显示,实验组的表达高峰出现时间较晚,维持高表达量的时间相对较长,上调幅度明显大于对照组。研究结果表明HmCHI可能在哈密瓜果实真菌胁迫响应中发挥重要作用。     

产几丁质酶菌拮抗烟草黑胫病菌研究

从烟草根际土中分离筛选到两株产几丁质酶能力较高、对烟草黑胫病菌有稳定拮抗作用的菌株ZY-9-1和ZY-19-2。将两菌株发酵液用于烟草黑胫病菌的拮抗试验和初步大田防治试验并研究其对烟叶品质的影响,结果表明:在培养基平板上,量菌株发酵液对烟草黑胫病菌的生长有较好的抑制作用;菌株ZY-9-1和菌株ZY-19-2发酵液应用于大田后,对烟草黑胫病有一定的防治效果,防效分别达到56%和50%;试验样品经过常规化学分析和感官评吸,结果表明菌株发酵液对烟叶品质无不良影响。     

转几丁质酶-葡聚糖酶双价基因水稻稻米毒理试验

通过小鼠急性毒性试验、小鼠致突变试验、大鼠90d毒性试验,对转几丁质酶-葡聚糖酶双价基因水稻稻米的毒理进行了初步的评价。转基因大米粉MTD≥37.5g/kg灌胃给予小鼠,连续观察7d,动物全部存活,表现正常,未见中毒反应。致突变灌胃给予小鼠,未发现对小鼠骨髓细胞微核和精子畸形发生率有不良影响。转基因大米粉分别以15、7.5g/kg/d,90d灌胃大鼠,其行为活动、外观体征、饮食、粪便、体重,结果均无异常,5项血液学检查和13项生化指标检测及尸体解剖观察、脏器系数、脏器病理学检查,结果均属正常,与空白对照无显著差异。转基因大米粉结果提示携带几丁质酶基因、葡聚糖酶基因、NPT-II标记基因等外源DNA的转基因大米无明显的毒性和致畸作用。     

微生物几丁质酶及其在食品领域的应用

摘要几丁质酶（Chtinase，EC3．2．1．14）能够催化水解N-乙酰-D-葡萄糖胺糖苷键，降解几丁质，得到用途广泛的几丁二糖或N-乙酰葡萄糖胺。通过对几丁质酶的特点、理化性质及其在食品领域的应用等方面的介绍，展望了其良好发展前景。     

产几丁质降解酶菌株的筛选及其产酶条件

采用平板透明圈法从土壤中分离筛选到一株产几丁质降解酶菌株L12酶活力为0．63U／mL。通过产酶条件优化，初步确定了该菌株较适产酶培养基和摇瓶发酵条件。条件优化后酶活力提高约1．6倍，达到1．06U／mL。     

烟草过氧化氢酶基因CAT1的克隆及表达特征分析

基于GeneBank中已有的植物Catalase 1（CAT1）基因序列设计烟草CAT1的特异性引物,通过RT-PCR扩增克隆获得Nicotiana tabacum var. NC89 CAT1全长mRNA序列,可编码492个氨基酸残基。遗传进化分析显示NC89 CAT1中与N .benthamiana CAT1基因亲缘关系最近。利用real-time RT-PCR技术对CAT1基因在烟草中的组织表达特异性和烟草NC89应对生物和非生物胁迫的表达差异进行了分析。结果表明CAT1基因在烟草NC89的根、茎、叶、花瓣、花萼、种子中均有表达,其中在根部表达量最低,在叶中相对表达量最高。生物和非生物胁迫处理烟株,其CAT1诱导表达分析显示,机械损伤、渗透压、低温和高温、干旱、和感染TMV CAT1表达量上调,紫外胁迫下表达量下调。上述研究表明烟草CAT1基因可能参与了植物的生长发育、应对非生物和生物胁迫的过程。      

烟草BELL基因家族鉴定及其温室条件下的表达模式分析

BELL基因是植物中普遍存在的一类基因,其编码的同源异型结构域转录因子参与调控了植物叶片、花序等多个组织的发育过程。为明确烟草BELL基因的结构和功能,通过同源序列比对和功能域分析鉴定了普通烟草BELL基因,结合系统进化和基因表达模式分析对烟草BELL基因的功能进行了初步预测。结果表明,从普通烟草基因组中共鉴定出28个NtBELLs基因,分布于15条不同的染色体上。系统进化分析表明,烟草NtBELLs基因可分为4组,每组参与调控烟草不同的发育过程。NtBELLs基因在6个烟草组织中呈现不同的表达模式,且具有明显的组织特异性。干旱和盐胁迫能显著诱导部分NtBELLs基因的表达,表明该基因家族可能参与了植物抵御非生物胁迫的过程。     

烤烟新品种K346、RG11引种试验

1995年引进美国育成的烤烟新品种K346、RG11,经两年引种试验、区域试验和生产示范,表现产量、产值、均价和上等烟比例均较高;高抗黑胫病、青枯病,抗根结线虫病,中抗赤星病,适应性强,分层落黄好,耐成熟,易烘烤。原烟外观质量好,化学成分协调,评吸香吃味俱佳,和土栽品种K326、NC89相当,适宜作高中档卷烟原料。1997年12月通过全国烟草审定委员会认定,推广种植。      

抗赤星病烟草的防卫基因的表达与基因组DNA结构的变化

用赤星病菌（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ａｌｔｅｍａｔａ）毒性菌株产生的ＡＴ毒素诱导烟草,可使寄主获得对赤星病８０．４％的系统抗性,比病菌弱毒株ＴＢＡ１６孢子诱导的效果高约２０％。烟草品种ＮＣ８９心叶叶碟在含ＡＴ毒素６０％和７０％的ＭＳ培养基上经２轮胁迫筛选和植株再生,得到抗病品系ＮＣ８９－ＴＴ。用５种防卫基因的ｃＤＮＡ探针检测了不诱导、受ＡＴ毒素诱导、受病菌弱毒株激发子诱导的ＮＣ８９和诱导与不诱导的ＮＣ８９－ＴＴ第４代植株５种基因的转录活性,结果表明,苯丙氨酸氨裂解酶（ＰＡＬ）基因在ＮＣ８９中不能组成型表达,可被ＡＴ毒素诱导激活,但不受激发子诱导;病程相关蛋白（ＰＲ蛋白）ＰＲ－ｌａ、查尔酮合成酶（ＣＨＳ）、脂氧合酶（ＬＯＸ）基因在ＮＣ８９中表现为诱导转录或诱导后转录活性增强;这４种基因都在ＮＣ８９－ＴＴ中组成型表达     

几个烤烟新品种在内蒙古的引种试验

烤烟新品种云烟85、云烟87、RG11、VA116和中烟99于1998—2000年引进内蒙古试种。试验表明。中烟99的产量、产值、均价和中上等烟比例均高于对照NC89，该品种抗逆性强。适应性广，分层落黄好，耐成熟。易烘烤，所产烟叶中上等烟比例高于对照NC89。尤其是中烟99大田生育期比NC89短，这在无霜期较短的内蒙古烟区种植具有极其重要的意义。中烟99和云烟85的综合性状显著优于其它供试品种。建议扩大中烟99和云烟85的种植面积，逐步替代NC89。     

不同品种烤烟衰老期碳氮代谢及相关基因表达的差异分析

  目的  研究不同品种烤烟叶片衰老期碳氮代谢及相关基因表达的差异及关系。  方法  以田间成熟落黄表现不同的4个烤烟品种中部叶为材料,分析叶片成熟衰老过程中质体色素、碳氮代谢中间产物含量的变化,检测了相关基因的表达量。  结果  ① 豫烟10号叶片叶绿素和类胡萝卜素的含量较低,并随着叶龄的增加降低的幅度最大,CCD表达量较高,NC89的降低的幅度较小,含量较高,CCD表达量较低。②叶片淀粉含量在叶龄50~60 d时达到峰值后开始下降,从峰值到叶龄70 d,降幅较大的豫烟10号（38.65%）,淀粉合成相关基因GBSS1和SBE的表达量相应较低,总糖和还原糖含量从峰值至叶龄70 d也表现较大的降幅。③ NC89的淀粉、总糖、还原糖和总碳含量均相对较高,云烟87和K326的碳代谢指标则居豫烟10号和NC89之间。④豫烟10号叶片成熟衰老过程中总氮、碳氮比、烟碱含量显著低于NC89,这与豫烟10号氮素转移相关的GS1-3基因表达量在叶龄40 d之后显著高于NC89,参与氮同化相关的GS2、GDH1和NR基因表达量相对较低的特征一致。  结论  叶片衰老速度快的品种具有淀粉合成代谢弱,淀粉含量较低,氮素同化代谢较弱而再利用和再转移代谢能力较强,总氮、碳氮比较低的碳氮代谢特征。      

几个烤烟种质的抗病性比较鉴定

对9个抗花叶病烤烟品种进行综合农艺性状比较与抗病性鉴定.结果表明,9个品种对烟草普通花叶病表现出较强的抗性,其中Coker176、NC567、CV85、CV87为高抗(发病率与病情指数均为0).农艺性状与原烟外观质量以HT-5最为理想,可在生产上示范种植.     

引进美国烤烟品种对海拔高度的敏感性研究

为研究烤烟品种的生育期及综合性状对海拔的敏感性,通过大田试验对种植在海拔1690m、1960m两个试验点的8个从美国引进的烤烟品种进行了对比试验。结果表明:(1)各品种种植在低海拔区时苗期和大田生育期均比高海拔区短,现蕾期推迟,对中心花开放期的影响因品种而异;(2)种植在低海拔区时株高和叶数均比高海拔区有所增加;(3)种植在低海拔区时烟叶产量和产值均比高海拔区高,但对上中等烟比例的影响不明显;(4)种植在低海拔区时烟叶烟碱、总氮和蛋白质含量均比高海拔区低,总糖含量、糖碱比和施木克值则比高海拔区高;(5)品种对海拔的敏感性不完全相同。     

烟草品种对TMV抗性差异的比较研究

对不同遗传类型的7个烟草品种设计水杨酸（SA）预处理与对照,而后进行TMV接种和挑战接种,调查这些品种的响应程度,发现对TMV侵染的响应可分为花叶和枯斑反应2种类型,在两个对TMV侵染具有系统获得抗病性（SAR）特性的烟草品种中,品种HZNH在病斑数量、形态及大小等方面与前人已沿用多年的品种Xanthi-nc存在明显差异,且两者对于SA预处理后再接种的响应也不一样。