Notch1信号通路与肿瘤的发生发展

Notch1信号通路作为一种进化保守的细胞间相互作用机制,在细胞的发育、增殖、分化、生存凋亡、和肿瘤的发生发展中起着重要的作用。近年来发现研究Notch1信号与各种肿瘤的关系已成为医学界研究的热点之一。作者就该信号通路在肿瘤中研究进展作一综述。     

糖尿病肾病中Notch信号通路调控机制的研究进展

Notch信号通路为生物细胞重要的信息通路,在生物的进化过程起关键作用。近年来,肾脏病领域的研究证实Notch信号通路与糖尿病肾病有关,参与肾间质纤维化、肾小球硬化的发生。本文以理论探析为研究方法,以既往文献及报道为核心数据,旨在介绍Notch信号通路在糖尿病肾病的调控机制,为创新糖尿病肾病理论提供依据。     

Notch1信号通路在乳腺癌中的研究进展

乳腺癌是女性最常见、死亡率最高的恶性肿瘤之一,近年来其发病率不断升高。研究发现Notch1信号通路在乳腺癌中起着重要的作用。研究发现Notch1在正常乳腺组织和乳腺良性病变以及乳腺癌中均有表达,在乳腺浸润性导管癌中的表达率明显高于导管原位癌,其表达与乳腺癌HER-2亚型有关,在HER-2阳性型中的Notch1的阳性表达率明显高于其他亚型。研究认为Notch1阳性表达率高与其乳腺癌的分化程度低、分期晚、淋巴结转移阳性率高以及脑转移有关,预示着乳腺癌的预后差,并被认为可作为判断预后的临床指标。此外研究发现Notch1的高表达可导致乳腺癌对阿霉素与紫杉醇的耐药。研究发现Notch1高表达与乳腺癌侵袭强、凋亡抑制有关。研究还发现Notch1的表达影响乳腺癌干细胞的数量,是维持乳腺癌干细胞恶性表型的重要因子。且Notch1与VEGF、c-myc、CCL2、TRB3、MMP2等相关基因表达及肿瘤微环境相关。针对Notch1的靶向治疗的研究有Notch1单克隆抗体、三氧化二砷以及金雀异黄素等药物,以及Notch1相关通路的靶向治疗药物,均可抑制乳腺癌细胞的生长,对乳腺癌有抗肿瘤作用。     

JQ1诱导SUP-B15细胞凋亡的Notch1通路机制研究

目的:本研究观察布罗莫结构域抑制剂JQ1诱导人Ph阳性急性淋巴细胞白血病细胞株(SUP-B15)凋亡的Notch1通路可能机制。方法:用不同浓度JQ1在不同时期处理SUP-B15细胞,用四甲基偶氮唑蓝试验(MTT法)检测细胞增殖情况;用流式细胞术检测细胞周期;实时定量PCR法检测MIS2、Notch1、Hes1、BCR-ABL mRNA的表达水平。结果:JQ1在0-4μmol/L的浓度范围内能抑制SUP-B15细胞的生长,并呈现剂量-时间依赖性;JQ1在1、2、4μmol/L处理SUP-B15细胞48 h后,诱导细胞S期阻滞,并呈剂量依赖性,与同时间对照组比较有统计学差异(P0.05);与同时间对照组相比,JQ1能够降低MIS2、Notch1、Hes1、BCR-ABL mRNA的表达。结论:JQ1可以有效抑制SUP-B15细胞生长增殖,而Notch1通路凋亡途径很可能是JQ1促进Ph+ALL细胞凋亡的多途径之一。     

针刺治疗缺血性脑卒中的Notch信号通路研究进展

Notch信号通路是一种进化上高度保守的信号通路途径,缺血可激活该通路,在细胞凋亡、血管生成、神经发生、免疫炎症等方面发挥作用.缺血性脑卒中后针刺治疗,可以影响Notch信号通路相关因子的表达,促进缺血脑组织的神经发生,增强缺血耐受性,抑制细胞凋亡,促使血管生成等.     

Notch信号通路与慢性淋巴细胞白血病的研究进展

慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphocytic leukemia,CLL）是一种惰性B淋巴细胞肿瘤,临床病程异质性较大.Notch信号通路是进化上十分保守的一条信号通路,参与调控正常细胞的生存、增殖、分化、凋亡等生理过程.近年来,越来越多学者研究Notch信号通路与CLL的关系,发现CLL细胞中存在Notch分子高表达或突变,与患者预后相关,参与肿瘤细胞抗凋亡及耐药机制等等.本文就近年来CLL与Notch信号通路的研究进展作一综述,包括CLL细胞Notch分子表达水平,CLL细胞Notch分子抗凋亡和耐药,CLL细胞中Notch分子突变,Notch分子与CL预后关系和Notch分子抑制剂应用前景等.     

Notch和Hedgehog信号通路与垂体发育及垂体瘤的相关性研究进展

垂体瘤为最常见的颅内肿瘤,以压迫周围组织及激素分泌过多为主要临床表现。其治疗方案的选取依赖肿瘤的类型及对临近组织压迫的程度。阐明垂体瘤的发病机制是在亚细胞水平治疗的至关重要的一步。一些信号通路参与了垂体瘤的发生和发展,如Notch、Wnt和Hedgehog(Hh)通路等,它们在垂体的器官发生和生长激素、泌乳素、甲状腺激素、促皮质激素分泌细胞的形成中也起重要作用。本文重点综述了Notch和Hh信号通路与垂体发育及垂体瘤的相关性研究进展。     

Notch信号通路与间充质干细胞分化

间充质干细胞(MSC)是具有多向分化能力的成体干细胞,在体外培养中可以被诱导分化为骨、软骨、脂肪、肌肉细胞;另外,MSC也可跨系分化为神经细胞、心肌细胞、肝脏细胞等多种其他组织细胞。Notch信号通路广泛存在于各种动物细胞中,在调节细胞分化、增殖和凋亡中发挥重要作用,它的配体和受体都是细胞膜表面蛋白,因此是介导细胞间通讯的一种重要方式。现有研究表明:在MSC多条分化途径中都有Notch通路存在。本文针对Notch信号通路在MSC分化中的影响做一综述。     

Notch信号通路在神经精神领域的研究进展

Notch信号通路是一条进化上十分保守的信号转导系统,是少数能够反复调节细胞增殖和凋亡的信号转导系统,与细胞的增殖、分化、凋亡、黏附以及干细胞的自我更新有密切的联系。在中枢神经系统,Notch蛋白不仅在胚胎阶段表达,并且持续存在于成年动物的神经系统中,调控了神经干细胞的自我更新和分化过程。研究显示Notch与神经发育缺陷、脑缺血损伤、阿尔茨海默病等神经系统疾病及抑郁症、精神分裂症等精神疾病密切相关。本文拟对Notch信号通路在神经精神领域的研究进展作一介绍。     

shRNA干扰AKT基因对Jeko-1细胞增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响

目的:探讨RNA干扰沉默AKT基因对套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞株的增殖、凋亡及Notch1信号通路的影响。方法:设计针对AKT基因短发夹RNA,将其连入pGPU6/GFP/Neo质粒中,构建AKT shRNA真核表达载体,经脂质体转染入Jeko-1细胞,应用RQ-PCR及Western blot鉴定其干扰效果,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞术检测细胞凋亡的变化,Western blot检测凋亡相关蛋白信号及通路相关蛋白p-AKT、Notch1、HES1的变化。结果:AKT shRNA转染Jeko-1细胞后,AKT的mRNA和蛋白表达均明显下降,有统计学意义(P0.05);转染组细胞增殖率明显低于Neg-shRNA组和空白对照组(P0.05),AKT shRNA传染48 h后,凋亡率为(37.72±4.39)%,而NegshRNA组和空白对照组分别为(2.62±1.53)%、(1.57±0.42)%,差异有统计学意义(P0.01);凋亡相关蛋白BCL-2表达下降,而BAX、caspase-3、caspase-9表达上升;PI3K/AKT信号通路相关蛋白p-AKT磷酸化水平下降、Notch1信号通路相关蛋白Notch1、HES1表达下调。结论:干扰沉默AKT基因可抑制套细胞淋巴瘤Jeko-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能是特异性抑制PI3K/AKT信号通路也能下调Notch1信号通路的活性。     

SIRT1/FOXO1信号通路对小鼠脑缺血再灌注损伤的调控作用

目的 探讨沉默信号调节器1(SIRT1)/叉头转录因子(FOXO1)信号通路对小鼠脑缺血再灌注损伤的调控作用。方法 24只清洁级C57雄性小鼠随机分为假手术组、缺血/再灌注组(I/R组)、SIRT1FOXO1信号通路抑制组(实验组),每组8只小鼠。I/R组与实验组采用夹闭、开放双侧颈总动脉法建立脑缺血再灌注损伤小鼠模型,同时实验组给予EX527(SIRT1抑制剂)腹腔注射,I/R组和假手术组腹腔注射等剂量的生理盐水。比较三组的神经功能缺损评分、脑组织含水量、感觉功能和行走协调能力评分,血浆中白介素-6(IL-6)、白细胞介素1(IL-1β)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,SIRT1、FOXO1、NF-E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达量,B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、BCL-2关联蛋白X(Bax)和半胱氨酸蛋白酶-9(Caspase-9) mRNA表达,超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量。结果与假手术组相比,I/R组经功能缺损评分、行走协调能力评分和感觉功能、脑组织含水量、炎症因子水平、FOXO1蛋白表达、BAX、Caspase-3和Caspase-9 mRNA表达以及氧化应激指标NO和MDA含量均显著增加(P <0. 05),Nrf2、SIRT1和HO-1蛋白表达、Bcl-2 mRNA表达以及SOD和GSH含量均显著降低(P <0. 05);与I/R组相比,实验组所有指标变化更显著。结论 抑制SIRT1/FOXO1信号通路后,脑缺血/灌注小鼠神经功能降低,脑损伤程度均加重,由此推测SIRT1/FOXO1信号通路的激活与抑制脑缺血/灌注后的炎症反应、减轻氧化应激作用以及减缓细胞凋亡进程相关。     

内皮抑素通过Notch1/血小板源生长因子信号通路对小鼠肺纤维化的抑制作用

目的研究内皮抑素通过Notch1/血小板源生长因子（Notch1/PDGF）信号通路对小鼠肺纤维化的抑制作用。 方法将30只小鼠分为对照组、模型组和内皮抑素组,每组各10只。模型组和内皮抑素组小鼠给予气管内注射博莱霉素（5 mg/kg）以建立肺纤维化模型,对照组小鼠仅注射等量等渗NaCl溶液;内皮抑素组小鼠每天腹腔注射内皮抑素（2.3 mg/kg）,对照组和模型组小鼠每天腹腔注射等量等渗NaCl溶液,所有小鼠均持续注射21 d。21 d后处死所有小鼠,取左肺组织行病理学染色;取右肺组织,应用Western-blotting法检测Collagen I,Notch1/PDGF信号通路相关蛋白转化生长因子β1（TGF-β1）、Hes1、Hey1、PDGF-B、PDGF受体β（PDGFR-β）及周细胞相关蛋白Desmin、神经元-胶质细胞抗原2（NG2）及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达水平。 结果光镜下,可见对照组小鼠肺泡结构完整,未见异常胶原蛋白;模型组小鼠肺泡结构被破坏,有大量胶原蛋白沉积;内皮抑素组小鼠可见肺组织结构相对完整,而胶原蛋白明显减少。3组小鼠间Collagen I、TGF-β1、Hes1、Hey1、PDGF-B、PDGFR-β、Desmin、NG2及α-SMA蛋白表达水平的比较,差异均有统计学意义（F = 12.068、30.603、29.757、35.451、16.059、16.420、24.512、19.084、28.102,P均<0.001）。进一步两两比较发现,内皮抑素组小鼠的Collagen I、TGF-β1、Hes1、Hey1、PDGF-B、PDGFR-β及α-SMA蛋白表达水平均显著低于模型组小鼠,Desmin及NG2蛋白表达水平均显著高于模型组小鼠（P均<0.05）;而内皮抑素组与对照组小鼠间Collagen I、TGF-β1、Hes1、Hey1、PDGF-B、PDGFR-β、Desmin、NG2及α-SMA蛋白表达水平的比较,差异均无统计学意义（P均>0.05）。 结论内皮抑素可通过Notch1/PDGF信号通路抑制周细胞向肌成纤维细胞转化,从而影响小鼠肺纤维化。     

Notch信号通路在低声压次声促进骨髓间充质干细胞增殖中的作用

目的:探讨Notch信号通路在低声压次声对骨髓间充质干细胞(BMSCs)生物活性影响中的作用。方法:应用全骨髓培养法获取BMSCs,取第3代对数生长期的细胞,分为四组,分别为第1组(抑制剂+无次声组)、第2组(抑制剂+次声组)、第3组(无抑制剂+无次声组)、第4组(无抑制剂+次声组),按分组要求分别用γ-分泌酶抑制剂DAPT和低声压次声进行相应处理,利用MTT方法检测各组中骨髓间充质干细胞的增殖情况。结果:低声压次声作用后的24h、48h、72h和96h时,第3组(无抑制剂+无次声组)的OD值比第1组(抑制剂+无次声组)较大,第4组(无抑制剂+次声组)的OD值也大于第2组(抑制剂+次声组),比较均有显著性差异(P0.05)。另外,低声压次声作用后24h、48h和72h时,第2组的OD值显著大于第1组的OD值(P0.05);第4组的OD值也显著大于第3组的OD值(P0.05)。随着作用时间的延长,四组细胞的OD值均呈递增趋势;在次声作用后24h、48h、72h、96h时,第4组的OD值均大于其他三组(4321)。结论:低声压次声可促进BMSCs的增殖活性,Notch信号通路被抑制后会影响低声压次声对BMSCs的增殖作用,说明低声压次声促进骨髓间充质干细胞增殖的机制可能是通过激活Notch信号通路实现。     

基于Notch1通路探讨不同频率重复经颅磁刺激改善大脑中动脉闭塞大鼠学习记忆能力的机制

摘要目的：观察不同频率重复经颅磁刺激（repetitive transcranial magnetic stimulation, rTMS）对大脑中动脉闭塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）大鼠学习记忆能力的影响及探讨其作用机制。方法：将造模成功的MCAO模型大鼠随机均分为模型组、低频组、高频组,同时另设假手术组,每组12只。低频组和高频组均予采用CCY-I型经颅磁刺激仪刺激,2次/日,连续14d;低频组：1Hz,部位：大鼠颅部左侧前额叶;高频组频率：10Hz,部位：大鼠颅部右侧前额叶。模型组和假手术组不予治疗仅同等情况下抓取束缚后归笼。神经行为学评分在术后第1天和第14天进行;水迷宫测试于术后3—7天进行;TTC染色、PCR及Western blot检测关键基因（Notch1、Hes1、Hes5）的mRNA及蛋白表达均在术后第14天干预结束后进行。结果：①神经功能缺损评分：与模型组相比,干预治疗14d后,高频组、低频组两组神经功能评分出现降低的情况（P<0.05）,模型组与高频组之间无明显差异（P>0.05）。②Morris水迷宫实验：定向航行实验平均逃避潜伏期：低频组、高频组、假手术组均相比于同组前一天缩短,具有显著性差异（P<0.05）;每天逃避潜伏期比较,高频组较模型组短,低频组较高频组短,具有显著性差异（P＜0.05）。空间探索实验穿越平台次数：低频组和假手术组比较、高频组和模型组比较无显著性差异（P>0.05）;高频组、模型组次数比假手术组少,低频组比模型组、高频组次数多,具有显著性差异（P<0.05）。③TTC染色：低频组、高频组梗死灶面积小于模型组。④PCR检测及Western Blot检测：高频组、低频组与模型组相比,Notch1、Hes1、Hes5的mRNA及蛋白表达量升高,具有显著性差异（P<0.05）;低频组与高频组相比,Notch1、Hes1、Hes5的mRNA及蛋白表达无显著性差异（P>0.05）。结论：高/低频rTMS均能改善MCAO大鼠的学习记忆能力,且可能都予激活提高海马组织中的Notch1通路表达,提高海马突触可塑性有关。     

肠道病毒71型激活人横纹肌肉瘤细胞中JNK1/2信号转导通路

目的探讨c-Jun N端激酶(JNK)信号转导通路在肠道病毒71型(EV71)感染中的作用。方法台盼蓝染色法检测不同浓度抑制剂SP600125对人横纹肌肉瘤细胞(RD)活性的影响;实时荧光定量PCR及western blot检测EV71感染RD细胞后VP1 mRNA及蛋白质的表达水平;western blot检测JNK1/2、c-Fos、c-Jun蛋白及其磷酸化水平,并分析JNK1/2抑制剂SP600125对EV71复制及JNK1/2信号通路的影响。结果台盼蓝染色结果表明,与空白对照组比较,5和10μmol/L实验组存活率差异无统计学意义(P均0.05),而20μmol/L抑制剂组细胞存活率明显降低(P0.05);实时荧光定量PCR及western blot结果表明,与对照组相比,实验组在EV71感染RD细胞8 h后,其VP1 mRNA及蛋白质的表达水平均明显下降(P均0.01)。此外,western blot检测结果证实EV71感染RD细胞后,其JNK1/2、c-Fos和c-Jun的蛋白质磷酸化水平均明显升高(P均0.05)。而经抑制剂SP600125处理可明显下调其JNK1/2、c-Fos、c-Jun磷酸化水平(P均0.05)。结论 JNK1/2信号通路可被EV71感染有效激活,并与EV71复制有关。     

Notch1 siRNA对骨髓瘤细胞硼替佐米药物敏感性的影响

目的探讨Notch1 siRNA对体内外人骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞硼替佐米药物敏感性的影响。方法体外采用Notch1 siRNA转染RPMI-8226细胞,CCK-8实验检测细胞增殖及硼替佐米药物的敏感性;Western blot检测各组细胞Notch1蛋白表达变化;将RPMI-8226细胞皮下注射于NOD/SCID小鼠,建立人多发性骨髓瘤(MM)小鼠移植瘤模型,将成瘤小鼠分为三组:NS+bortezomib(Notch1 siRNA转染联合硼替佐米)组;CS+bortezomib(Control siRNA转染联合硼替佐米)组;UN+bortezomib(硼替佐米)组,观察各组肿瘤体积变化,免疫组化染色法观察Notch1变化,TUNEL法检测细胞凋亡。结果 Notch1 siRNA有效下调骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞Notch1蛋白表达;Notch1 siRNA在96 h抑制细胞增殖作用明显增加,与CS及UN组比较对细胞增殖的作用可见明显差异(P<0.01);Notch1 siRNA转染组细胞对硼替佐米IC50值为1.21μmol/L,与Control siRNA转染组及未转染组相比均存在统计学差异(P<0.01);Notch1 siRNA降低移植瘤Notch1蛋白表达,Notch1 siRNA转染组细胞的AI明显高于Control siRNA转染组及未转染组(P<0.01);Notch1 siRNA转染联合硼替佐米组肿瘤体积明显减小,13、17及21 d与Control siRNA转染联合硼替佐米组比较均有统计学差异(P<0.05)。结论体外实验Notch siRNA抑制人骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞增殖增加硼替佐米的敏感性,体内试验证实Notch siRNA联合硼替佐米可以明显减小荷瘤MM小鼠肿瘤体积、增加凋亡,提示Notchl是治疗MM的有效分子靶点。     

Hippo信号通路核心元件MST1在急性白血病患者中的表达及意义

本研究旨在探讨Hippo信号通路核心元件MST1基因在急性白血病患者中的表达情况及其与白血病发生、发展的关系。采用实时定量PCR检测50例初治急性白血病患者、33例正常人、23例完全缓解缓解患者及12例难治/复发患者的MST1基因的表达情况,采用Western blot进一步验证其蛋白的表达水平,结合临床资料对患者的预后因素进行分析。结果表明,与正常人相比,急性白血病初治患者MST1基因的表达水平明显减低(P<0.05),完全缓解前后差异有统计学意义(P<0.05),难治/复发患者与初治患者MST1基因表达水平无明显差异(P>0.05),完全缓解患者与正常人MST1表达水平无明显差异(P>0.05)。结论:MST1基因的低表达与急性白血病的发病及预后相关。     

JAK/STAT信号通路对肠道病毒71型感染的调控作用

目的探讨肠道病毒71型(EV71)与JAK/STAT信号通路的关系。方法 EV71感染人横纹肌肉瘤(RD)细胞和人单核-巨噬细胞系THP-1细胞,用IFN-α2b(1 000 U/m L)刺激1 h,用实时荧光定量PCR(real-time qRT-PCR)法检测EV71感染前后以及感染病毒细胞接受IFN刺激前后4种干扰素刺激基因ISG15、ISG56、OAS1和MXA及STAT1、VP1的mRNA水平变化,观察IFN-α2b(1 000 U/m L)对EV71/VP1的影响,并用western blot分析转录因子STAT1磷酸化水平和EV71/VP1蛋白质表达水平变化。结果 EV71感染RD细胞后,MXA mRNA的相对表达量下调,未见STAT1的磷酸化。而感染THP-1细胞后,MXA、OAS1和ISG56 mRNA的表达水平及STAT1的磷酸化水平均上调。与未感染EV71而经IFN-α2b处理的细胞相比,EV71感染的RD细胞经IFN-α2b处理后ISG15、ISG56、OAS1、MXA的mRNA表达水平及STAT1磷酸化水平下降,并抑制EV71/VP1的mRNA和蛋白质水平的表达。EV71感染的THP-1细胞经IFN-α2b处理后与未感染EV71而经IFN-α2b处理组细胞相比,上述4种干扰素刺激基因的mRNA表达水平及STAT1磷酸化水平明显上调,并抑制EV71/VP1的mRNA和蛋白质水平的表达。结论EV71感染可抑制RD细胞内JAK/STAT信号通路,而对THP-1细胞的影响则相反,提示THP-1细胞在EV71感染的固有免疫应答中发挥作用。