维生素D及其受体基因多态性与类风湿关节炎关系的研究

目的 探讨淮海经济区汉族人群维生素D水平及其受体(VDR)基因多态性与类风湿关节炎(RA)的关系.方法 收集该地区无血缘关系的120例RA患者(RA组)和120名健康人(对照组)的全血标本,采用聚合酶链反应和限制性内切酶法(PCR-RFLP)研究VDR的Bsm Ⅰ 、ApaⅠ等位基因多态性与类风湿关节炎发病之间的关系,采用电化学发光法检测血清中维生素D含量,研究其与RA发病的关系.使用x2检验和t检验进行统计学分析.结果 RA组与对照组之间ApaⅠ酶切位点AA、Aa、aa基因频率的差异有统计学意义(x2=23.85,4.34,43.2,P值均＜0.05),Bsm Ⅰ酶切位点BB、Bb、bb基因频率的差异无统计学意义(P值均＞0.05).进一步分析VDR基因型与RA患者的性别及有无骨侵蚀的关系,发现VDR各基因型频率差异无统计学意义(P值均＞0.05).RA组维生素D水平显著低于对照组[(2.8±0.3)与(4.0±0.4) ng/ml],RA患者中骨侵蚀组维生素D水平显著低于无骨侵蚀组[(1.8±0.3)与(3.1±0.4)ng/ml],差异均有统计学意义(F=193.26,41.96,P值均＜0.05).但RA患者中男性患者组与女性患者组之间维生素D水平相当[(2.6±0.3)与(2.7±0.4) ng/ml],差异无统计学意义(P＞0.05).结论 VDR基因多态性ApaⅠ与淮海经济区汉族人群RA发病是显著相关联的,基因型AA、Aa的出现可能增加RA的易患性,基因型aa可能为RA的保护型基因,同时VDR各基因型与RA患者性别及是否存在骨侵蚀无相关性;血清维生素D水平下降与RA的发病及骨侵蚀的发生是显著相关的,与RA患者的性别无相关性.     

类风湿关节炎患者血清25羟基维生素D水平变化及其临床意义

目的 观察类风湿关节炎(RA)患者血清中25羟基维生素D[25(OH)D]水平变化,并探讨其临床意义.方法 收集130例RA患者及80名健康对照者的血清,酶联免疫法测定其25(OH)D浓度,比较RA患者25(OH)D水平的变化;同时运用双能X线吸收仪(DXA)测定RA患者骨密度,双手X线Sharp评分(SHS)评定患者骨侵蚀及狭窄程度并详细记录RA患者临床、实验室及影像学资料,计算疾病活动性.采用t检验或单因素方差分析,组间比较采用x2检验,相关性采用Pearson相关分析,危险因素分析采用多元线性回归分析和Logistic回归分析进行统计学分析.结果 ①RA患者血清25(OH)D水平较健康对照组明显降低[(17±6) ng/ml与(23±6) ng/ml,t=-6.624,P＜0.01],且RA患者25(OH)D不足者明显多于健康对照组(98.5％与87.5％,x2=26.291,P＜0.01);②25(OH)D水平分别与RA患者晨僵时间、关节压痛数(TJC)、关节肿胀数(SJC)、红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、生活质量(HAQ)评分等呈负相关(r=-0.370,-0.307,-0.243,-0.369,-0.175,-0.381,P均＜0.05);③根据DAS28评分,稳定或轻度活动组明显高于中度活动组和重度活动组的RA患者血清25(OH)D水平(P均＜0.05);线性回归分析进一步提示RA患者血清25(OH)D水平减低是疾病活动性的危险因素(b=-0.46,P=0.029);④25(OH)D水平与RA患者骨侵蚀度无相关性(P＞0.05);⑤根据骨密度分为RA骨量正常组、骨量减少组及骨质疏松组,3组间的25(OH)D水平呈依次下降趋势且相互间比较差异均有统计学意义(P＜0.05),经Logistic回归分析,RA患者血清25(OH)D是其骨质疏松的保护因素(OR=0.898,95％CI 0.830～0.972,P=0.008).结论 RA患者血清25(OH)D水平显著低下,与RA疾病活动性、骨质疏松相关;25(OH)D水平减低是RA疾病活动以及高发骨质疏松症的危险因素.     

结构型热休克蛋白70在类风湿关节炎患者滑膜组织和血液中表达的研究

目的 在蛋白和mRNA水平上研究结构型热休克蛋白70(Hsc70)在类风湿关节炎(RA)患者滑膜和血液中的表达水平,探讨该蛋白对RA的病理作用.方法 用免疫组织化学法、实时荧光定量聚合酶链反应、蛋白印迹法分析Hsc70在RA滑膜中的表达水平;以健康人为对照,用酶联免疫吸附法分析Hsc70在RA患者血液中的表达水平.采用单因素方差分析、LSD检验、Spearman相关分析进行统计学处理.结果 与骨关节炎和强直性脊柱炎比较,Hsc70在RA滑膜高表达,表达率为100％.Hsc70在RA血液中表达量(吸光度值0.32±0.09)也高于健康组(吸光度值0.16±0.03)的表达量(P＜0.01).结论 Hsc70在RA滑膜组织中高表达,提示Hsc70在RA发病过程中可能起重要作用.     

维生素D结合蛋白研究进展

维生素D结合蛋白(DBP)最初被称为簇特异性成分(group-specific component),简称Gc蛋白,是一种多功能的糖蛋白,具有高度多态性,DBP基因多态性会影响其水平及其与维生素D及其代谢产物的亲和力,从而可能影响功能性25 (OH)D3水平.它不仅与骨质疏松相关,同时也与多种骨外疾病相关.     

FcRL3基因与安徽籍汉族类风湿关节炎的相关性研究

目的 探讨Fc受体样基因3(FeRL3)部分单核苷酸多态性(SNP)在安徽籍汉族类风湿关节炎(RA)发病中的作用.方法 选取RA患者140例,健康对照组187名.用Mass-ArrayTM SNP检测仪对FcRL3基因上的SNP位点:FeRL3-1(rs0158440)、FcRL3-2(rs2225828)、FcRL3-3(rs7528684)、FcRL3-4(rs11284799)、FeRL3-5(rs945635)、FcRL3-6(rs3761959)、FcRL3-7(rs2210913)、FcRL3-8(rs2282284)、FcRL3-9(rs2282283)SNP进行检测.单倍型构建采用PHASE v 2.1软件完成.结果 在RA组中FcRL3-3(rs7528684)-169C等位基因的频率为43.80%,显著高于对照组33.33%.差异有统计学意义(X~2=7.348,P=0.007,OR=1.558,CI:1.130～2.150).单倍型FcRL3-1～9 CCCGGGGAA、CTCGCAAAC、CCTACAAAA、CCTGCGGAA、CTCGCGAAC差异有统计学意义,其中RA组中FcRL3-1～9 CCCGCAGGAA、CTCGCAAAC单倍型频率明显高于对照组,FcRL3-1～9 CCTACAAAA、CCTGCGGAA、CTCGCGAAC单倍型频率明显低于对照组.结论 FcRL3基因可能与安徽籍汉族RA的易感性相关.     

雌激素受体基因多态性与女性类风湿关节炎的关系

目的 探讨雌激素受体(ER)基因rs2234693 (C/T)、rs9340799 (A/G)位点多态性与女性类风湿关节炎(RA)的关系.方法 选择女性RA患者160例(观察组)及正常健康体检女性150例(对照组),采用PCR技术测定两组ER基因rs2234693(C/T)、rs9340799 (A/G)位点基因型、等位基因,并分析其与RA的关系.结果 观察组CC/GG基因型阳性率显著高于对照组(P＜0.05),而TT/AA基因型的阳性率显著低于对照组(P＜0.01).观察组ER基因多态性与RA的严重程度无关.结论 ER基因rs2234693和rs9340799位点多态性可能参与女性RA的发病.     

厦门地区汉族人PTPN22C1858T基因多态性与类风湿关节炎的关系研究

目的 建立TaqMan-MGB探针实时荧光聚合酶链反应(PCR)方法,研究福建厦门地区汉族人类风湿关节炎(RA)与PTPN22基因C 1858T多态性的相关性.方法 应用病例对照法,收集100例RA患者和100名健康人血液标本,利用TaqMan-MGB探针实时荧光PCR方法检测PTPN22C1858T基因多态性.结果 ①成功建立TaqMan-MGB探针实时荧光PCR技术检测PTPN22C1858T基因多态性.②PTPN22基因1858位点在福建厦门地区汉族人中仅存在C等位基因,未检测到T等位基因.结论 厦门地区汉族人不存在PTPN22 1858T等位基因,PTPN22 C1858T多态性与RA可能不存在关联.

Abstract：

Objective To assess the correlation between FFPN22 C1858T polymorphism and rheumatoid arthritis(RA)in Han people in Xiamen area by TaqMan-MGB real-time PCR．Methods A casecontrol study was carried out in Xiamen Han population．Their blood samples(100 RAs and 100 controls respectively)were collected and the PTPN22 C1858T polymnrphism was tested by TaqMan-MGB real-time PCR．Results ①A technique of TaqMan-MGB teal-time PCR was established to investigate PTPN22 C1858T polymorphism;② Onlv 1858 C allele was presented in all the RAs and controls,and no T allele was detected．Conclusion There is no PTPN22 1858T allele in Han people in Xiamen area．It is suggested that there's no association between PTPN22 C1858T polymorphism and RA．     

中国汉族人群B细胞表面调节蛋白基因1单核苷酸多态性与类风湿关节炎的相关性研究

目的 探究B细胞表面的调节蛋白基因(BANK1)单核苷酸多态性(SNPs)与类风湿关节炎(RA)的关系.方法 221例确诊RA组和310名健康对照组的外周全血提取DNA,采用非标记探针-高分辨率熔解曲线法分别检测rs10516487,rs17266594和rs3733197 SNPs位点,采用X2检验分析3个位点与RA的相关性.结果 RA患者rs17266594 TT基因型频率较健康对照显著升高(X2=6.241,P=0.044);rs10516487、rs17266594和rs3733197的等位基因频率(分别是G、T和G等位基因)较健康对照呈升高的趋势,但差异无统计学意义;rs10516487和rs17266594呈强连锁不平衡(D'=0.993,r2=0.985);3个SNPs的TGG单倍体型在RA患者频率较健康对照显著升高[P=0.037,OR=1.345,95％CI(1.018～1.776)].结论 BANK1 rs17266594与RA相关,3个SNPs TGG单倍体型可能是RA的易感因素.     

硫氧还蛋白5在类风湿关节炎患者滑膜组织滑液及血液中表达的研究

目的 在蛋白和mRNA水平上进一步研究硫氧还蛋白5(TXNDC5)在类风湿关节炎(RA)患者滑膜和血液中的表达水平与临床指标的关系,探讨该基因对RA的病理作用.方法 用免疫组织化学法、免疫荧光定量分析、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、蛋白免疫印迹定量分析TXNDC5在RA滑膜中的表达水平;以骨关节炎(OA)、系统性红斑狼疮(SEE)、强直性脊柱炎(AS)及健康人为对照,用夹心酶联免疫吸附法(Sandwich-ELISA)分析TXNDC5在RA患者血液和滑液中的表达水平.采用单因素方差分析,LSD检验、Spearman相关分析进行统计学处理.结果 免疫组织化学法和免疫荧光定量分析显示TXNDC5在RA滑膜组织中高表达(100%,40±9),在OA滑膜中无表达,在AS滑膜中表达量(200%.4±4)也较低.实时定量PCR和Western blotting均证实TXNDC5在RA滑膜中高表达(P均<0.01).SandwichELISA显示,TXNDC5在RA患者血液及滑液中高表达(A值=1.31±0.37),但在OA、SEE、AS以及健康人低表达或无表达(P均<0.05).RA血液中TXNDC5的水平(A值=0.8185±0.299)与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平存在正相关(r=0.350,P=0.027).结论 TXNDC5在RA滑膜和血液中表达量明显升高,可能通过刺激RA滑膜血管翳形成参与RA病理进程.     

上海汉族人群维生素D结合蛋白基因多态性与2型糖尿病的相关分析

采用PCR-RFLP技术研究维生素D结合蛋白（DBP）基因Asp416Glu和Thr420Lys多态性与2型糖尿病的关系。经传递不平衡检验和同胞传递不平衡检验，结果不支持连锁。但此基因多态性对胰岛β细胞功能有一定作用。     

类风湿关节炎患者血清肽酰基精氨酸脱亚氨酶4水平及其意义

目的 通过检测肽酰基精氨酸脱亚氨酶(PADI)4在类风湿关节炎(RA)患者血清中的水平,探讨其在RA发病机制中的意义.方法 采用ELISA检测100例RA患者、23例其他风湿病患者、24例健康体检者血清中PADI4及抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体水平.结果 (1)RA患者PADI4水平为(620.10±259.82)μg/L,较其他风湿病患者[(404.41±195.38)μg/L]、健康体检者[(522.19±142.40)μg/L]明显升高,差异有统计学意义(F=8.75,P＜0.001).(2)RA患者PADI4-94(rs 2240340)基因型T/T、C/C、T/C PADI4水平分别为(597.43±255.76)μg/L、(674.63±320.67)/μgL、(628.78±274.13)μg/L;PADI4-104(RS 1748033)基因型T/T、Cμg/C、T/C PADI4水平分别为(571.56±138.34)μg/L、(653.41±300.35)μg/L、(640.07±302.82)μg/L.各基因型间PADI4水平差异无统计学意义(P＞0.05).(3)相关性分析:RA组PADI4水平与RA疾病活动评分(DAS28)、ESR呈正相关(r=0.24,P=0.03;r=0.23,P=0.03),而与抗CCP抗体、抗PADI4抗体、C反应蛋白无相关性(r=0.02,P=0.83;r=-0.17,P=0.10;r=0.14,P=0.18).结论 PADI4可能是RA的一个致病性抗原,参与了RA发病,其水平高低反映病情活动程度.

Abstract：

Objective To detect the levels of serum peptidylarginine deiminase (PADI)4 and explore its significance in rheumatoid arthritis ( RA ). Methods The presence of PADI4, anti-PADI4antibodies and anti-cyclic citrullinated peptide (CCP) antibodies levels were examined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Serum samples were obtained from 100 patients with RA, 23 patients with other rheumatic diseases, and 24 healthy controls. The associations between PADI4 and the disease activity score using 28 joint counts ( DAS28 ) score, anti-CCP antibodies, erythrocyte sedimentation rate ( ESR ),C-reactive protein ( CRP), PADI4-94 ( rs 2240340 ) and PADI-104 ( rs 1748033 ) gene polymorphisms and other indexes were analyzed in RA. Results The levels of PADI4 in RA patients were significantly higher than in other rheumatic diseases and healthy controls ( F = 8. 75, P ＜ 0. 001 ). There was no significantly difference in levels of PADI4 among ADI4-94 ( rs 2240340)/PADI-104 ( rs 1748033 ) genotypes. Conclusions PADI4 is associated with disease activity involved in the RA pathogenesis and may be a RA pathogenic antigen.     

肽酰基精氨酸脱亚氨酶-4基因多态性与类风湿关节炎的相关性

目的 肽酰基精氨酸脱亚氨酶基因4-94位点(PADI4-94)和4-104位点(PADI4-104)基因的单核苷酸多态性(SNPs)与类风湿关节炎(RA)易感性的关系.方法 采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)方法 鉴定116例RA患者和100名健康体检者基因及基因型,计算其频率,用X2检验统计分析.用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测RA外周血抗PADl4抗体及PADI4蛋白水平.结果①PADI4-94及PADI4-104位点存在A和G 2种等位基因,A/A,G/G和A/G 3种基因型,RA组/健康组PADI4-94等位基因A、G及其A/A、G/G和A/G基因型频率分别是0.460/0.392、0.540/0.608,0.204/0.186、0.283/0.402和0.513/0.412,2组差异无统计学意义(X2=1.996,P=0.157;X2=3.407,P=0.182);RA组/健康组PADI4-104等位基因A、G及其A/A、G/G和A/G基因型频率分别是0.412/0.345、0.588/0.655,0.150/0.144、0.32710.454和0.522/0.402,2组差异无统计学意义(X2=1.937,P=0.164;X2=3.780,P=0.151).③RA组PADI4-94/PADI4-104各基因型间红细胞沉降率(ESR),RA疾病活动关节评分28(DAS28)评分,C反应蛋白(CRP),抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,PADI4蛋白量及抗PADI4抗体水平差异无统计学意义(P值分别为0.46/0.67,0.62/0.57,0.12/0.23,0.81/0.43,0.78/0.75,0.38/0.31).结论 我国人群PADI4-94和PADI4-104两位点存在多态性,但其与RA的易感性无关.     

4型肽酰基精氨酸脱亚胺酶单核苷酸多态性与河北汉族人群类风湿关节炎的相关性

目的 探讨4型肽酰基精氨酸脱亚胺酶( PADI4)单核苷酸多态性(SNP)与中国河北汉族人群类风湿关节炎(RA)易感性的关系.方法 采用病例-对照研究方法,用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性( PCR-RFLP)法检测该地区105例RA患者和96名健康者的PADI4 92基因型并与先前报道的PADI4其他位点进行连锁不平衡分析,构建单倍型,进行相关性分析.采用Pearson x2检验及Woolf方法计算并相对危险度及95％可信区间(95％CI).结果 3个位点的碱基均存在二态性,通过对padi4_92、padi4_ 94、padi4_104 3个位点的连锁不平衡分析,构建成5种主要功能单倍体,功能单倍体CCC和GTT所占频率达到了80％,并且均与RA的发病存在相关性.功能单倍体GCC虽然所占频率不到10％,但是却与RA的发病有着强烈的关联,分布明显趋向病例组.结论 PADI4基因SNP单核苷酸多态性以及基因功能单倍体表达多样性均与河北汉族人群RA易感性相关.     

四型肽精氨酸转亚胺基酶功能基因多态性及其表达与类风湿关节炎相关性研究

目的 探讨四型肽精氨酸转亚胺基酶(PADI4)功能基因多态性及其表达与类风湿关节炎(RA)的相关性.方法 采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测70例RA患者、81名健康对照者外周血单个核细胞(PBMC)中PAD14基因的表达水平,采用DNA测序和TA载体克隆方法 分析PAD14基凶外显子内第89、90、92、104位点单核苷酸多态性(SNPs).结果 4个SNPs中除了PAD14_92位点外,携带PAD14少见等位基因者发生RA的易感性显著高于携带常见等位基因者;在所研究对象中分别由4个位点上的常见等位基因(ACCC)和少见等位基因(GTGT)组成的功能基因型为主要基因型.与ACCC型比较,携带GTGT型者发生RA危险件显著增高(P<0.01).RA组PAD14基因表达水平显著高于正常对照组(P<0.05),并且在RA组和对照组中携带PAD14少见等位基因者PAD14的表达水平显著高于携带常见等位基因者.结论 PAD14功能基因多态性及其基因表达与中国人RA易感性相关,PAD14功能基因多态性影响基因表达.     

肿瘤坏死因子受体相关因子1基因多态性与上海市汉族人群类风湿关节炎患者疾病易感相关性的研究

目的 对肿瘤坏死因子受体相关因子1(TRAF1)基因的单核苷酸多态性(SNPs)进行检测,分析其与上海市汉族人群类风湿关节炎(RA)的易感相关性.方法 采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱方法 对汉族RA患者(RA组,100例)和健康人(健康对照组,100名)TRAF1基因的6个SNPs位点进行了基因分型,并使用Haploview软件进行分析.数据分析采用χ2检验和Fisher确切概率法.结果 在中国汉族RA患者中位于TRAF1基因的6个位点中,RA组rs4836834位点A/A、A/T、T/T基因频率分别为:22.22%、49.49%、28.28%,健康对照组rs4836834位点A/A、A/T、T/T基因频率分别为:28.57%、30.61%、40.82%,2组差异有统计学意义(P<0.05);其他5个位点,包括已有报道与白种人RA易感相关的rs10818488位点,RA组与健康对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05).而连锁不平衡及单倍体型频率分析结果 发现,rs7021049与rs7021880,rs7021049与rs4836834,rs7021880与rs4836834之间存在较强的连锁不平衡,3组连锁不平衡关系单倍体频率RA组与对照组差异均无统计学意义.结论 TRAF1可能是汉族人RA的易感基因,但其SNPs与白种人的表现有所不同.

Abstract：

Objective To detect TRAF1 gene single nucleotide polymorphism in Han population ,and analyze its association with increased risk of rheumatoid arthritis (RA) in Han people. Methods The study group was comprised with 100 healthy Han subjects and 100 Han RA patients. Six SNPs was detected by matrix-assisted laser desorption ionization time of flight mass spectrometry (MALDI-TOFMS), and the result was analyzed by Haploview software. Fisher's exact test and χ2 test were used for statistical analysis.Results The rs4836834 A/A, A/T, T/T allele frequencies of RA group were 22.22%, 49.49%, 28.28% respectively. The rs4836834 A/A, A/T, T/T allele frequencies of healthy control group were 28.57%, 30.61%,40.82% respectively. There was significant difference (P<0.05) of rs4836834 between Hah patients with RA and healthy controls. For other five sites, including rs10818488, which had been reported to be associated with increased risk of Caucasians RA patients, there was no significant difference (P>0.05) between RA group and the control group. The linkage disequilibrium and haplotype frequency analysis results showed that there was strong linkage disequilibrium between rs7021049 and rs7021880, rs7021049 and rs4836834, rs7021880 and rs4836834, but there was no significant difference between RA group and the control group in the haplo-type frequencies of the three classes of linkage disequilibrium. Conclusion TRAF1 gene may be a susceptible gene associated with Han RA people, but its single nucleotide polymorphisms and performance may be different between Caucasians and Han people.     

尿激酶型纤溶酶原激活物受体在类风湿关节炎滑膜组织细胞的表达

目的观察尿激酶型纤溶酶原激活物受体（uPAR）在类风湿关节炎（an）滑膜组织细胞膜（muPAR）和细胞质（cuPAR）的表达及分布。方法分别采用间接免疫荧光和免疫组化等方法检测18份RA、10份骨关节炎（OA）和4份正常滑膜组织中uPAR的表达及分布。结果RA滑膜组织细胞中muPAR阳性表达率为（66．0±9．4）％,主要分布于滑膜组织中血管翳周围,如血管内皮细胞和间质细胞等;而cuPAR阳性表达率为（61．0±5．8）％,主要分布于滑膜衬里层和滑膜下层细胞,如滑膜下层巨噬细胞样细胞、滑膜衬里层细胞及单个核白细胞等。OA滑膜组织中uPAR也呈不同程度的阳性表达,但与RA相比阳性表达程度较弱,阳性细胞数量较少。相关性分析：muPAR、cuPAR与RA滑膜炎积分呈正相关（r分别为0．672、0．649,P〈0．01）。结论muPAR表达阳性的细胞可能主要参与RA血管翳的形成及滑膜组织的侵袭等病理过程;而cuPAR表达阳性的细胞则可能与炎性介质的释放和致炎作用有关;提示uPAR在RA的病理过程中起重要作用。