酪蛋白组分分离技术及消化性测定

本研究以牦牛乳干酪素为原料，分离得到纯度为74．2％的α-酪蛋白组分和纯度为75．0％的B．酪蛋白组分，其得率分别为69．5％和26．5％。通过酸凝性实验观察到在37℃，pH4．0条件下，α-酪蛋白组分形成了颗粒较大的凝块，而β-酪蛋白组分形成的是松软的絮凝物。体外消化实验结果亦显示β-酪蛋白组分的消化性要明显好于α-酪蛋白组分和牛乳酸沉酪蛋白。因而分离得到的β-酪蛋白组分可作为生产利于婴儿消化的新式配方乳粉的基料。     

牛乳β-酪蛋白检测的间接ELISA方法

将从干酪素中提取的牛β-酪蛋白对新西兰白兔进行多次皮下免疫注射.采集血清并用硫酸铵沉淀法进行抗体纯化,以制备兔抗牛β-酪蛋白的多克隆抗体.最后将纯化的抗体用于间接ELISA法检测牛乳β-酪蛋白的含量.     

液相色谱-高分辨串联质谱法测定奶粉中A2β-酪蛋白及β-酪蛋白与乳清蛋白含量关系的研究

目的:建立奶粉中A2β-酪蛋白分离定量的液相色谱-高分辨串联质谱法,并利用婴儿配方奶粉中酪蛋白、乳清蛋白和总蛋白含量的关系,间接得到乳清蛋白含量。方法:样品经前处理后,采用ACQUITY UPLC HSS T_(3)柱(100 mm×2.1 mm×1.8μm),0.1%甲酸-水和乙腈为流动相,梯度洗脱分离。多反应离子监测模式定量测定其中的A2β-酪蛋白特征肽。结果:在0.02~2.0μmol/L范围内线性关系良好(r=0.9938)。在低、中、高三水平加标试验中,回收率在94.9%~98.7%,相对标准偏差在1.7%~3.7%,检出限为0.80 mg/100 g,可满足对奶粉中A2β-酪蛋白定量要求。采用该法对市售11批声称A2奶粉和18批未声称A2奶粉(以下简称A2奶粉和普通奶粉)中A2β-酪蛋白进行测定。结论:A2奶粉中A2β-酪蛋白占总β-酪蛋白含量的86.2%~98.7%,而普通奶粉则低至20.0%~50.0%。另外,乳清蛋白含量的间接测定值和理论计算值经统计分析,无明显差异(P>0.05),为分析婴儿配方奶粉中乳清蛋白含量是否符合国标要求提供参考。     

酪蛋白磷酸肽的分离纯化及分子结构鉴定

将离子交换色谱、凝胶过滤色谱、高压液相色谱及毛细管色谱等分离纯化技术结合使用,从酪蛋白磷酸肽（ＣＰＰ）制品中分离出３ 个纯组分,并对各组分的氨基酸组成和Ｎ 末端２～３ 个氨基酸序列进行了分析测定,从而确定了３ 个组分的结构,它们分别是αｓ１（６１～７９）、αｓ１（４３～７９）和β（７～２４）．与用胰蛋白酶水解酪蛋白得到的ＣＰＰ比较,用胰酶水解得到的ＣＰＰ肽链较短．     

酪蛋白的主要组成及其分离技术

一、酪蛋白的组成在对各种乳蛋白质的研究中,酪蛋白是研究最深入的一种。无论从组成还是从结构上看,酪蛋白都是非常不均一的混合体(见表1)。其蛋白质的组成主要有四部分:α_(S1)—酪蛋白、α_(S2)—酪蛋白、β—酪蛋白和k—酪蛋白。每一组成的第一结构,近年来已经比较清楚。其中α_(S1)—酪蛋白的第一结构于1974年测试完毕,共有199个氨基酸构成;α_(S2)—酪蛋白的第一结构于1979年测试完毕,共有207个氨基酸构成;k—酪蛋白的第一结构于1980年测试完     

两种分离β-乳球蛋白方法的比较

以乳清粉为原料,比较研究了硫酸铵沉淀加凝胶层析法和高盐低pH加透析法两种技术路线分离纯化β-乳球蛋白的得率与纯度。实验结果表明,高盐低pH加透析法所得β-乳球蛋白浓度为11mg/mL、SDS-PAGE检测纯度达90%以上;硫酸铵沉淀加凝胶层析法所得β-乳球蛋白浓度为1mg/mL、纯度>90%。      

牛乳中αs、β-酪蛋白组分的分离

以新鲜脱脂牛乳为原料,在碱性条件下添加钙盐进行选择性沉淀分离αs-、β- 酪蛋白组分,并用十二烷基磺酸钠- 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法测定分离效果。从CaCl2 溶液终浓度、冷却温度和反复溶解﹑沉淀次数三个方面对αs-、β- 酪蛋白的分离效果进行研究。结果表明：CaCl2 溶液终浓度0.065mol/L,冷却温度2℃,经3 次反复溶解﹑沉淀,分离得到的αs- 酪蛋白组分纯度较高,可达83.33%,β- 酪蛋白组分纯度为109.53%。     

乳状液中αs1-酪蛋白和β-酪蛋白的结构特点及吸附行为

乳状液界面处主要的酪蛋白成分是αs1-酪蛋白和β-酪蛋白.本文主要综述了这两种酪蛋白分子的结构特点并比较其差异,进一步阐述了pH、离子强度、分子聚合、未吸附粒子等因素对其吸附行为的影响.     

牛乳主要过敏原酪蛋白的特性和分离纯化研究进展

牛乳是理想的蛋白补充剂,其中80%蛋白质为酪蛋白。酪蛋白作为牛乳中主要过敏原,严重影响牛乳过敏患者的营养补充选择。酪蛋白的结构特征与其致敏性强弱有关,所以选择合适的分离纯化方法,获得高纯度的酪蛋白是深入探究结构特征与致敏性关联的前提。本文从酪蛋白胶束的初步分离和酪蛋白亚型的提纯两个角度,总结了国内外牛乳酪蛋白分离纯化的研究进展。同时,文章也阐述了牛乳酪蛋白的基本特性以及其结构与致敏性的关系,以期为进一步降低酪蛋白致敏性的研究提供参考。     

香菇素与β-酪蛋白的相互作用研究

目的 研究β-酪蛋白与风味物质香菇素相互作用的具体机制, 阐明相互作用对β-酪蛋白结构及微环境产生的影响。方法 构建香菇素-β-酪蛋白互作模型体系, 经荧光光谱法、紫外-可见分光光度法、圆二色光谱、等温滴定及气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱法对香菇素与β-酪蛋白的相互作用进行检测分析。结果 气相色谱-质谱法检测结果表明, β-酪蛋白对香菇素起到显著缓释的作用, 光谱法检测结果及等温滴定结果表明, β-酪蛋白和香菇素的结合主要由疏水相互作用驱动, 热量变化焓值(ΔH)为7.25 kJ/mol, 熵值(ΔS)为113.20 J/(mol·K)。结论 香菇素与β-酪蛋白发生了疏水相互作用。在相互作用过程中, β-酪蛋白发生了静态荧光淬灭, 紫外光谱蓝移以及β-酪蛋白甲基化位点的改变证明了相互作用影响了β-酪蛋白的结构以及微环境极性。     

β-胡萝卜素/酪蛋白纳米复合物的形成及β-CE的生物利用率

β-胡萝卜素（β-CE）具有多种生物活性,但是不稳定,容易降解,利用酪蛋白（CN）对β-胡萝卜素进行自组装能够对其起到保护作用,从而提高β-胡萝卜素在食品工业中的利用价值。本文以β-CE/CN形成纳米复合物为背景,研究了其形成的影响因素、粒径分布以及β-CE的生物利用率。结果表明,β-CE/CN纳米复合物的形成受温度与β-CE/CN质量比的影响较大,β-胡萝卜素经酪蛋白自组装后,其水溶解性提高。经体外消化实验,β-CE/CN纳米复合物经胰蛋白酶和胃蛋白酶酶解后,酶解产物经SDS-PAGE分析,酪蛋白随着酶解时间的延长其水解程度增加,因此β-CE从纳米复合物中更易释放出来,其生物利用率提高。      

双齿围沙蚕β-1,3-葡萄糖苷酶分离纯化及其酶学性质

从双齿围沙蚕中提取、分离纯化β-1,3-葡萄糖苷酶,并研究其酶学性质。通过80%饱和度（NH4）2SO4沉淀从双齿围沙蚕中得到粗β-1,3-葡萄糖苷酶,粗酶依次经DEAE-52离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析进行分离纯化。酶纯化倍数为35.74,回收率为39.49%。SDS-PAGE检测表明其分子量为28.7 k Da。该酶最适温度为50℃,最适p H为7,Km为8.2×10-4mol/L,Vmax为3.2×10-4μmol/h。金属离子K+、Mg²⁺、Fe²⁺、Ba²⁺、Ca²⁺对β-1,3-葡萄糖苷酶酶活力影响较小,Al³⁺、Cu²⁺、Zn²⁺、Ag⁺对β-1,3-葡萄糖苷酶酶活力抑制较大,其中Zn²⁺抑制作用最强。双齿围沙蚕可作为β-1,3-葡萄糖苷酶的潜在来源。      

多酚氧化酶交联β-酪蛋白的抗原性变化初步研究

利用多酚氧化酶催化牛乳β-酪蛋白交联,并通过ELISA方法检测交联前后β-酪蛋白抗原性的变化。SDS-PAGE结果显示,多酚氧化酶可以有效地催化β-酪蛋白交联。同时,间接竞争ELISA检测的β-酪蛋白交联后的半抑制浓度(IC50值)由2.63μg/mL变为4.07μg/mL,表明交联后β-酪蛋白抗原性明显降低。本研究工作为通过多酚氧化酶交联制备低致敏性乳制品提供了部分理论依据。     

多酚氧化酶交联β-酪蛋白的抗原性变化初步研究

利用多酚氧化酶催化牛乳β-酪蛋白交联,并通过ELISA方法检测交联前后β-酪蛋白抗原性的变化。SDS-PAGE结果显示,多酚氧化酶可以有效地催化β-酪蛋白交联。同时,间接竞争ELISA检测的β-酪蛋白交联后的半抑制浓度（IC50值）由2.63μg/mL变为4.07μg/mL,表明交联后β-酪蛋白抗原性明显降低。本研究工作为通过多酚氧化酶交联制备低致敏性乳制品提供了部分理论依据。      

酪蛋白水解物的类蛋白反应修饰产物的分离纯化及其抗氧化活性研究

本文采用木瓜蛋白酶在pH 6.5的条件下对酪蛋白进行水解2 h,水解产物测得DPPH 35.89%±0.13%,超氧阴离子清除能力为21.39%±0.33%,还原能力为53.00%±2.00%。分别导入Tyr、Phe和Try对水解产物进行修饰,结果表明类蛋白反应时间为6 h时,三种产物的抗氧化性最高,其中Try修饰产物抗氧化性最好,测得DPPH、超氧阴离子清除能力、还原能力分别46.84%±1.16%、34.10%±0.32%、70.00%±2%(p0.05)。随后,将Try修饰下的产物进行分离纯化,使用装有G-15葡聚糖凝胶的色谱柱,水为洗脱液,上样浓度为20 mg/mL,流速为0.5 mL/min,洗脱效果最佳,得到三个峰,分别测定其抗氧化性,结果表明峰二的抗氧化性最好,测得DPPH、超氧阴离子清除能力、还原能力分别为58.46%±0.57%、38.42%±0.47%和80.00%±0.02%(p0.05)。将峰二产物通过液相色谱进一步分离鉴定,得到单一峰,证明蛋白纯化下的产物纯度较高。最后,得到了高纯度的抗氧化肽。     

匍枝根霉β-葡糖苷酶的分离纯化及其受产物抑制分析

对匍枝根霉β-葡糖苷酶进行了纯化并研究了葡萄糖、甘露糖、山梨醇和甘露醇对该酶的抑制作用,结果发现,66.7 mmol/L的葡萄糖和88.9 mmol/L的甘露糖可完全抑制一定酶活力单位的β-葡糖苷酶活力(0.76IU),而山梨醇和甘露醇对β-葡糖苷酶的催化活力没有影响。分析结构发现,葡萄糖和山梨糖、甘露糖和甘露醇结构差异仅在醛基位置,通过Molegro Virtual Docker(MVD)软件模拟并分析葡萄糖、山梨醇和纤维二糖与β-葡糖苷酶的对接模型,发现含有醛基的葡萄糖与纤维二糖在酶的结合区存在两处竞争性结合位点(Asp244和Asn242),且两者在该酶活性中心内的全部结合位点上均处于竞争性关系,其中葡萄糖的醛基在与多个活性位点结合过程中起主导作用;而不含醛基的山梨醇与纤维二糖在该酶的催化中心及外围均不存在竞争性关系,由此推测可能是葡萄糖分子中的醛基在β-葡糖苷酶受产物抑制的过程中起到了关键性的作用。     

壳聚糖法分离纯化酪蛋白糖巨肽

探索壳聚糖法分离乳清粉中酪蛋白糖巨肽的工艺条件,通过单因素试验考察混合液pH值、壳聚糖添加量、吸附时间、氯化钠浓度和pH值对酪蛋白糖巨肽分离效果的影响。结果表明最佳分离工艺条件为:在混合液pH4.6时,采用质量浓度2g/L的壳聚糖吸附60min,再用2mol/L、pH9的氯化钠溶液进行洗脱。洗脱液经过超滤除盐、浓缩和冷冻干燥后可获得酪蛋白糖巨肽干粉。采用上述工艺进行放大实验,酪蛋白糖巨肽和唾液酸的回收率分别为83.3%和70.64%,每克酪蛋白糖巨肽含有10mg唾液酸。电泳检测结果显示制备的酪蛋白糖巨肽主要是分子质量约22ku和30ku的酪蛋白糖巨肽多聚体。     

A2β-酪蛋白的功能性及其在乳制品中应用的研究进展

牛奶中富含多种营养成分,包括蛋白质、脂质、碳水化合物等,每100 g牛奶中就含有3 g蛋白质,其中主要包括乳清蛋白和酪蛋白。β-酪蛋白占牛奶蛋白总量的24%～28%,其主要包括两种基因型：A1型与A2型。A1β酪蛋白经消化后产生的β-酪啡肽-7会导致人体消化功能紊乱、心血管疾病等不良反应。A2β-酪蛋白则产生较少甚至并不产生β-酪啡肽-7,在胃肠道消化、提高抗氧化功能、降低胆固醇浓度等方面具有益生作用。本文综述了β-酪蛋白基因型在人体内消化后所产生的影响,并阐述了A2β-酪蛋白的益生功能,讨论其对人体健康的作用。并从β-酪蛋白基因型在乳制品中的应用入手,阐述A2β-酪蛋白乳制品的研究进展,为今后乳制品中A2β-酪蛋白的功能研究提供指导意义。     

小麦麸皮中β-葡聚糖的分离纯化及组成研究

以小麦麸皮为原料,碱法提取β-葡聚糖。采用硫酸铵沉淀法、DEAE Sepharose CL-6B阴离子交换柱层析法、Sepharose CL-4B凝胶过滤层析法对β-葡聚糖的粗提物进行逐步纯化,得到组分A1和A2。并经紫外分光光度法、高效凝胶渗透色谱法鉴定其纯度,最终获得相对分子质量为4.87×105（纯度为98.57%）的β-葡聚糖A1组分、6.13×104左右（纯度为97.03%）的A2组分。可见,经过一系列的纯化实验,可以获得纯度较高的β-葡聚糖单一组分。采用特异性β-葡聚糖酶对经阴离子交换柱层析获得的β-葡聚糖组分A进行水解,经高效液相色谱法分析其寡糖的组成。结果表明,特异性酶解后的β-葡聚糖组分A主要由麦芽三糖和麦芽四糖组成,除了含有少量葡萄糖外,还含有麦芽糖、麦芽五糖。      

酶解酪蛋白制备CPPs的研究进展

CPPs是补钙营养品中的重要多肽，其酶解制备工艺是近年来国内外研究的热点。本文对制备过程中的几个关键问题－－酶种的选择、水解方式、分离纯化方法、检测方法进行全面综述，以期高效制备目标产物。