同轴共纺复合神经生长因子导管修复大鼠坐骨神经缺损的实验研究

目的 观察同轴共纺复合神经生长因子(NGF)导管对大鼠坐骨神经缺损修复的促进作用.方法 以复合NGF的牛血清白蛋白为芯层、乳酸.己内酯共聚物[P(LLA-CL)]为壳层,采用同轴共纺技术制备具有"壳-芯"结构的可降解纳米纤维复合神经导管.取SD大鼠72只,随机分为四组:自体神经移植组(A组),单纯[P(LLA-CL)]导管组(B组),单纯导管内一次性汴射NGF组(C组)和复合NGF导管组(D组),每组18只.制作大鼠坐骨神经10 mm缺损模型,四组大鼠分别采用白体神经移植、单纯[P(LLA-CL)]导管、单纯导管内一次性注射NGF、复合NGF导管桥接修复缺损.于术后第1、2、3个月行大体观察、坐骨神经功能指数、小腿三头肌湿重恢复率测量、电生理检测和组织学检查. 结果术后复合NGF导管逐渐开始吸水膨胀并降解,3个月时,虽然管壁已经出现裂隙,但依然保持良好的外形,没有对再生神经形成卡压.术后1个月,再生神经均已通过缺损,连接两断端,但较细小;随着时间的延长,再生神经逐渐增粗.各组间比较发现,D组再生神经取得了和A组相似的效果,明显优于B组和C组(P<0.05).尽管D组与A组之间比较.差异无统计学意义(P>0.05),甚至D组的有髓神经纤维计数还稍高于A组,但其髓鞘的厚度和直径不如A组,并且坐骨神经功能指数和腓肠肌湿重恢复率也比A纽稍差. 结论同轴共纺复合NGF神经导管具有良好的组织相容性、生物活性和机械强度,能够有效地促进神经再生,效果接近自体神经移植.     

静电纺纳米聚乳酸己内酮共聚物导管修复周围神经缺损的实验研究

目的 探讨应用同轴静电纺丝技术制备的聚乳酸己内酮共聚物[Poly(1-lactide-co-epsilon-caprolactone),P(LLA-CL)]导管,移植修复大鼠周围神经缺损的效果.方法 选取健康SD大鼠54只,随机分成3组,每组18只.先造成坐骨神经1.5cm缺损段,然后分别采用P(LLA-CL)导管桥接(A组)、硅胶管桥接(B组)、自体神经逆行原位移植(C组).分别在术后4、8、12周对大鼠进行大体观察、坐骨神经功能指数检查、神经电生理检查、肌肉湿重、再生有髓神经纤维计数、电镜观察,评价各组神经再生.结果 术后4周时A组再生神经已部分生长到导管的中部;8周时再生神经已通过神经导管,但再生的神经纤细;12周时再生神经粘连较轻,直径较粗.A组的坐骨神经功能指数、神经电生理、肌肉湿重和组织学观察等各项指标均略差于C组,但明显优于B组.结论 纳米聚乳酸己内酮神经导管具有促进神经轴突再生的作用,有望成为自体神经移植的替代材料应用于周围神经缺损的修复.     

外消旋聚乳酸复合神经生长因子缓释导管促周围神经再生的形态学研究

目的 建立外消旋聚乳酸复合神经生长因子（poly-D，L-lactic acid／nerve growth factor，PDLLA／NGF）可吸收性缓释导管桥接修复大鼠坐骨神经缺损的动物模型，观察复合导管对大鼠坐骨神经缺损再生的促进作用。方法利用溶剂挥发法制备PDLLA单纯导管和PDLLA／NGF缓释导管，每根缓释导管含NGF450U。SD大鼠40只随机分成4组，每组10只，切除中段坐骨神经10mm之后分别行自体神经移植（A组）、单纯导管桥接（B组）、单纯导管加一次性给药（C组）、PDLLA／NGF缓释导管桥接（D组）修复坐骨神经，除A组外，均保留10mm缺损。术后3个月观察神经再生情况，比较各组光镜、电镜及图像分析等指标。结果术后3个月导管与周围组织粘连松，并开始降解，但外形仍保持完整。再生神经均顺利通过导管腔，组织学观察A组和D组内神经纤维数目多，大小均匀，成熟良好；B组和C组纤维结缔组织多，神经纤维细小，髓鞘薄。图像分析显示除神经纤维计数D组高于A组外，A组和D组在纤维直径、轴突直径和髓鞘厚度方面差异均无统计学意义（P〉0．05），并明显优于B组和C组（P〈0．05）。结论 PDLLA／NGF缓释导管能够有效促进大鼠坐骨神经缺损再生，组织学观察指标接近自体神经移植。     

自组装多肽与神经生长因子导管修复兔周围神经缺损

[目的]探索自组装多肽凝胶复合神经生长因子(NGF)的神经导管修复周围神经损伤的可行性及效果。[方法]以静电纺丝技术制备单纯聚乳酸-羟基乙酸(PLGA)和PLGA复合NGF的纳米纤维复合神经导管,制备"异亮氨酸-赖氨酸-缬氨酸-丙氨酸-缬氨酸"(IKVAV)顺序的自组装多肽凝胶。选取新西兰大白兔72只,制备兔坐骨神经10 mm缺损模型。按随机数字法分为4组,每组18只,分别给予以下处理:A组自体神经移植,B组单纯PLGA神经导管+NGF桥接,C组单纯PLGA神经导管+IKVAV多肽凝胶+NGF桥接、D组复合NGF的PLGA导管+IKVAV多肽凝胶桥接。术后1、2、3个月行电生理检测、大体观察、小腿三头肌湿重恢复率测量和组织学检查。[结果]术后复合NGF导管逐渐吸水膨胀并降解,周围组织未见明显炎性反应,无神经卡压。术后1个月,再生神经已通过缺损,但直径细小,随着时间延长逐渐增粗。各组间比较发现,D组神经再生效果接近A组,各项指标优于B组(P0.05),部分指标优于C组(P0.05)。D组和A组之间比较,差异无统计学意义(P0.05),但小腿三头肌湿重恢复率较A组稍差。[结论]自组装多肽凝胶联合复合神经生长因子的神经导管具有良好的组织相容性,能够有效促进神经生长,效果接近自体神经移植。     

静脉体基底膜许旺细胞和NGF复合移植桥接神经缺损的实验研究

目的观察静脉体、基底膜、许旺细胞和神经生长因子复合移植桥接神经缺损的作用。方法采用健康白兔40只，分为4组，每组10条坐骨神经。A组为静脉体、基底膜、许旺细胞和神经生长因子复合移植组，B组为自体静脉组， C组为人羊膜基底膜组，D组为自体神经移植组。均修复坐骨神经1.5 cm缺损，术后3 个月观察肢体运动，肌电图动作电位波幅、潜伏期和传导速度，并常规HE染色、免疫组化SP 法染色显示髓磷脂碱性蛋白（MBP）及Cajal吡啶银染色，镜下观察移植体段神经束面积、有髓神经纤维密度、直径、轴突直径等，做统计学处理。结果静脉体、基底膜、许旺细胞和神经生长因子复合移植组的上述指标与自体神经移植组比较，差异无显著性(P＞0.05)，与静脉和人羊膜基底膜组比较，差异有显著性(P＜0.05)。结论（1 ）静脉体、基底膜、许旺细胞和神经生长因子复合移植起到了自体神经移植桥接神经缺损的作用；（2）移植体内有较粗大成熟的有髓神经纤维轴突再生为有效神经再生，再生有髓神经纤维直径和轴突直径与功能恢复密切相关。     

去细胞异种神经复合神经生长因子修复神经缺损的实验研究

目的 应用含有神经生长因子(NGF)的去细胞异种神经基膜管作为神经移植替代物桥接大鼠坐骨神经缺损,观察其对神经再生的作用.方法 选用Wistar大鼠45只,随机分为3组,每组15只,于术制成右后肢坐骨神经长10 mm的神经缺损,取兔胫神经制成去细胞神经基膜管,电镜及HE染色观察神经基膜管超微结构,流式细胞仪检测去细胞前后神经主要组织相容性抗原Ⅱ(MHC Ⅱ)的变化情况.A组以含有NGF的去细胞异种神经基膜管桥接神经缺损,B组单纯采用去细胞异种神经基膜管桥接神经缺损,C组采用自体神经移植修复神经缺损.术后1个月行神经电生理检测即胫后肌群运动诱发电位,用HE染色、免疫组化染色、透射电镜等方法对移植体远端吻个口再生神经纤维进行形态学观察,并对再生有髓神经纤维的数量、密度、直径及雪旺细胞的密度进行量化分析.结果 移植前新鲜神经组MHC-Ⅱ检测值为72.14±19.88,去细胞组MHC-Ⅱ检测值为4.19±3.11,两组比较差异有统计学意义(t=3.817,P＜0.05);透射电镜观察显示为胶原性管道,无细胞成分.术后4周,处死前行运动诱发电位检测,神经传导速度A组为(21.16±2.31)m/s,B组为(13.37±1.89)m/s,C组为(21.43±2.18)m/s,A组与 C组比较差异无统计学意义(P＞0.05),A组与 B组比较差异有统计学意义(P＜0.05).组织学观察见3组移植体远端吻合口横切面再生神经纤维呈微束状,透射电镜观察再生神经纤维具有正常的形态和结构.A、C组再生神纤纤维数量及直径均优于B组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 经化学萃取的去细胞兔胫神经基膜管能够移植于大鼠,成功修复大鼠坐骨神经缺损,而且复合NGF的去细胞基膜管在神经修复质量上优于单纯的去细胞神经基膜管,更加接近自体神经移植的效果.     

亲和素-生物素黏附系统修饰纳米纤维构建组织工程神经的实验研究

目的 观察亲和素-生物素黏附系统(avidin-biotin binding system,ABBS)快速黏附雪旺细胞(SCs)对组织工程神经促进神经再生的影响.方法 以坐骨神经缺损10 mm作为实验模型.取40只Wistar大鼠分成A、B、C、D4组,每组10只.A组:自体神经移植修复组;B组:空白对照组,用聚乳酸己内酮共聚物[ Poly(L-lactic acid-co-epsilon-caprolactone),P(LLA-CL)]支架修复神经缺损;C组:P(LLA-CL)支架上用普通方法黏附雪旺细胞修复神经缺损;D组:P(ILA-CL)支架上用ABBS法黏附雪旺细胞修复神经缺损.术后3个月,检测坐骨神经功能指数、神经传导速度、再生神经轴突及髓鞘厚度,评估ABBS对于促进神经再生的影响.结果 C组与D组的神经修复效果无差别.虽然修复效果不及A组,但是均明显好于没有雪旺细胞的B组.结论 ABBS在动物体内实验中未对组织工程神经促进神经再生造成不利影响,是一种可靠的细胞快速黏附方法.     

乳酸-羟基乙酸-L-赖氨酸多肽接枝聚复合FK506和神经生长因子缓释膜促进大鼠坐骨神经再生的实验研究

目的 观察乳酸.羟基乙酸-L-赖氨酸(RGD)多肽接枝聚复合FK506和神经生长因子(NGF)缓释膜桥接大鼠坐骨神经5 mm缺损促进神经再生的效果.方法 将24只雄性Wistar大鼠随机分成三组,切断左侧坐骨神经形成5 mm缺损,分别以RGD多肽接枝聚复合FK506和NGF缓释膜(A组)、RGD多肽接枝聚复合FK506缓释膜(B组)和RGD多肽接枝聚膜(C组)桥接缺损;A组膜FK506与NGF的含量分别为0.48 mg和2μg,B组膜FK506的含量为0.72 mg,C组为对照组.术后3个月,采用大体观察、神经电生理、小腿三头肌湿重恢复率、组织学观察和图像分析等方法规查神经再生情况. 结果术后3个月,膜外形完整、质脆;各组再生神经均通过了缺损,且A组的再生神经各项检测指标明显优于B组和C组.结论 RGD多肽接枝聚复合FK506和NGF缓释膜能够有效地促进损伤的大鼠坐骨神经再生,且FK506和NGF联合应用,可减少FK506的用量.     

静脉体基底膜许旺细胞和NGF合移植桥接神经缺损的实验研究

目的 观察静脉体、基底膜、许旺细胞和神经生长因子复合移植桥接神经缺损的作用。方法 采用健康白兔40只，分为4组，每组10条坐骨神经。A组为静脉体、基底膜、许旺细胞和神经生长因子复合移植组，B组为自体静脉组，C组为人羊膜基底膜组，D组为自体神经移植组。均修复坐骨神经1.5cm缺损，术后3个月观察肢体运动，肌电图动作电位波幅、潜伏期和传导速度，工常规HE染色、免疫组化SP法梁色显示髓磷脂碱性蛋白（MBP）及Cajal吡啶银染色，镜下观察移植体段神经束面积、有髓神经纤维密度、直径、轴突直径等，做统计学处理。结果 静脉体、基底膜、许旺细胞和这在子复合移植组的上述指标与自体神经移植组比较，差异无显著性（P＞0.05），与静脉和人羊膜基底膜组比较，差异有显著性（P＜0.05）。结论 （1）静脉体、基底膜、许旺细胞和神经生长因子复合移植起到了自体神经移植桥接神经缺损的作用；（2）移植体内有较粗大成熟的有髓神经纤维轴突再生为有效神经再生，再生有髓神经纤维直径和轴突直径与功能恢复密切相关。     

电纺丝壳聚糖/聚乳酸神经导管修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的研究利用电纺丝壳聚糖/聚乳酸(chitosan/polylactic acid,ch/PLA)神经导管修复大鼠坐骨神经缺损的方法和效果。方法采用电纺丝方法制备ch/PLA神经导管,通过扫描电镜、生物力学测定、表面润湿性测定和体外生物相容性检测,并与纯PLA比较,测试ch/PLA神经导管的性能。选取健康SD大鼠54只,随机分成3组,每组18只,制作右侧坐骨神经10 mm缺损模型,分别利用ch/PLA神经导管(A组)、自体神经(B组)移植修复,并与切除旷置(C组)进行对照。术后4、8、12周,通过大体观察、坐骨神经功能指数(sciatic functional index,SFI)、神经电生理、肌肉湿重恢复率、肌细胞横截面积检测和组织学、免疫组织化学染色、透射电镜观察,对大鼠神经再生进行评价。结果随着chitosan的加入,神经导管的均一性、物理性能、亲水性及体外生物相容性均得到了明显改善。术后4周A组再生神经已通过神经缺损。术后A、B组SFI不断改善,两组恢复速度相似,差异无统计学意义(P0.05)。术后8、12周,A、B组可引出神经肌电图表现,且神经传导速度与动作电位波幅均不断恢复(P0.05)。术后12周,A、B组肌肉湿重恢复率与肌细胞截面积优于C组(P0.05),但A、B组间差异无统计学意义(P0.05)。生长相关蛋白43、神经纤维丝蛋白160亚单位、S-100蛋白免疫组织化学染色示,A、B组轴突与髓鞘恢复情况相似。术后12周A、B组再生神经纤维直径相似(P0.05),而A组再生神经髓鞘厚度优于B组,差异有统计学意义(P0.05)。结论电纺丝ch/PLA神经导管具有促进大鼠周围神经再生的作用,有可能成为治疗周围神经缺损的新方法。     

Rat sciatic nerve repair with a poly-lactic-co-glycolic acid scaffold and nerve growth factor releasing microspheres

The effect of microsphere delivered Nerve Growth Factor (NGF) in a poly-lactic-co-glycolic-acid (PLGA) 85/15 nerve conduit bridging a 10mm rat sciatic nerve gap was assessed, comparing nine groups (n = 6): PLGA conduits filled with saline, saline and NGF, saline with blank microspheres; four different NGF microspheres (5, 20, 50, and 100 mg/ml); an autologous graft and sciatic nerve gap. Histomorphometry, retrograde tracing, electrophysiology, and functional outcomes were evaluated up to 16 weeks. The autologous graft showed the largest fascicular area (0.65 mm(2) ) and had a significantly greater number of myelinated fibers (P < 0.0001). Electrophysiology showed Compound Muscle Action Potential (CMAP) recordings for the autologous graft returning at 6 weeks after nerve transection, reaching their highest amplitude of 3.6 mV at endpoint. No significant differences were found in functional evaluation between groups or between conduits with microspheres and the saline filled conduit. A PLGA 85/15 nerve conduit is capable of sustaining nerve regeneration. The microsphere delivery system does not interfere with regeneration.     

促红细胞生成素促进大鼠坐骨神经再生作用的实验研究

目的 探讨促红细胞生成素(Erythoropoietin,EPO)对大鼠坐骨神经损伤修复后神经再生的影响,为周围神经损伤的临床治疗提供实验依据.方法 雄性SD大鼠40只,随机分为两组,即EPO组和神经生长因子(NGF)组,用硅胶管桥接10 mm的坐骨神经缺损,EPO组和NGF组分别注射EPO和NGF.术后4周和8周时每组分别提取10只大鼠,以坐骨神经功能指数(SFI)、运动神经传导速度(MNCV)、形态学观察和蛋白基因产物9.5(PGP 9.5)免疫组织化学染色,评估EPO对大鼠坐骨神经再生的影响.结果 术后4周SFI,EPO组为[(-78.85±3.87),x-±s,下同],NGF组为(-79.98±4.58),差异无统计学意义(P>0.05);术后8周SFI,EPO组为(-60.26±2.91),NGF组为(-64.65±4.11),差异有统计学意义(P<0.05).术后4周和8周时,EPO组MNCV、有髓神经纤维数目以及PGP9.5免疫阳性神经纤维的平均光密度和积分光密度均优于NGF组,差异有统计学意义(P<0.05).结论 EPO 能促进大鼠坐骨神经损伤后的修复与再生.     

几丁糖复合聚乙烯醇神经导管修复大鼠坐骨神经损

目的 径较粗,达到正常神经的直径。肌肉湿重和肌细胞截面积：A组和C组比较,差异无统计学意义(P＞0.05);A、C组明显优于B组,差异有统计学意义(P＜0.05)。组织学观察：A组和C组神经纤维数日多、大小均匀、成熟良好,B组神经纤维数目少、不均匀、髓鞘发育较差。神经示踪观察结果显示：A、B、C三组在L4～L6节段脊髓前角和背根节均可见到真蓝标记的神经元细胞,其中A组脊髓前角真蓝标记的神经元数目和C组相似,差异无统计学意义(P＞0.05),但明显优于B组,差异有统计学意义(P＜0.05)。 结论 几丁糖复合聚乙烯醇神经导管具有促进神经轴突再生的作用,有望成为自体神经的替代材料,应用于周围神经缺损的修复。     

同轴电纺聚左旋乳酸-己内酯共聚物/牛血清白蛋白纳米纤维的体内外生物相容性研究

目的 研究同轴电纺的聚左旋乳酸-己内酯共聚物/牛血清白蛋白[P(LLA-CL)/BSA]"壳-芯"结构纳米纤维在体内外的生物相容性.方法 应用同轴静电纺丝技术制备具有"壳-芯"结构的P(LLA-CL)/BSA纳米纤维膜.将在体外分离培养好的SD乳鼠雪旺细胞分别接种于该纳米纤维膜(材料组)及空白培养板(对照组)上进行复合培养.通过MTT法检测纳米纤维膜上雪旺细胞的活性,并与对照组比较;在扫描电镜下观察不同时间段雪旺细胞在纳米纤维膜上的黏附、生长与增殖情况.将该纳米纤维材料植入大鼠椎旁肌内,不同时间点取材,观察材料周围的炎症反应和纤维包囊形成情况. 结果 复合培养第3天后,材料组的雪旺细胞活性均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);第7天时,材料组和对照组的OD值平均分别为0.67±0.09、0.55±0.07.扫描电镜观察见纳米纤维膜表面雪旺细胞增殖黏附良好,胞体突起显著,呈端对端连接或成束排列.纳米纤维材料植入后第1周,可见大量淋巴细胞聚集在材料表面,呈现出急性炎症反应,无明显的纤维包囊形成.随着时间的推移,炎症反应逐渐消退,材料周围的纤维包囊也由厚变薄,植入后第12周,材料周围已无明显的纤维包囊,仅有少量的多核巨细胞出现. 结论 P(LLA-CL)/BSA纳米纤维材料在体外与雪旺细胞具有良好的相容性,能促进雪旺细胞的黏附与增殖分化;植入大鼠体内后,无急性毒性及免疫反应发生,与周围组织之间有着良好的相容性.     

甲壳质生物套管小间隙桥接大鼠周围神经的实验研究

目的探讨脱乙酰甲壳质生物套管小间隙桥接周围神经损伤的可行性。方法将120只SD大鼠右侧坐骨神经切断,按手术方法随机分为5组。A组:神经外膜原位缝合(n=24);B组:套管小间隙原位桥接(n=24,间隙5mm);C组:两断端相对旋转180°后外膜缝合(n=24);D组:两断端相对旋转180°后套管小间隙桥接(n=24,间隙5mm);E组:套管小间隙原位桥接(n=24,间隙5mm)后间隙内注射神经生长因子(NGF)。术后2、4、6、8周分别进行电生理学检查、组织学检查以及计算单位视野有髓神经纤维数。结果组织学检查术后4周各实验组的神经远端均见到再生的神经纤维;小间隙套管组(B,D组)运动神经传导速度在各个时间检测点上均好于相应的直接外膜缝合组(A组)和旋转后直接外膜缝合组(C组)(P<0·05)。小间隙套管组(B,D组)神经远端的有髓神经纤维计数在4、6、8周3个检测点上高于相应的直接外膜缝合组(A组)和旋转后直接外膜缝合组(C组)(P<0·01);在2周时差异没有统计学意义(P>0·05)。结论生物套管小间隙(5mm)桥接的修复周围神经的效果好于断端外膜直接缝合,具有替代直接神经外膜缝合的临床应用可行性。     

甲壳质套管桥接周围神经长度极限的研究

目的 通过采用不同间隙套接修复大鼠坐骨神经损伤的实验研究,探讨甲壳质套管桥接修复周围神经损伤的长度极限.方法 SPF级健康成年雄性SD大鼠24只,于大鼠右侧坐骨神经分叉处以上5 mm建立坐骨神经离断伤模型,部分切除坐骨神经后使用甲壳质套管桥接修复,使神经断端间留有2、5、8和10 mm间隙.8周后常规锇酸染色,镜下观察套管远端有髓神经纤维数目、轴突平均面积、髓鞘平均厚度及腓肠肌平均湿重,并进行定量组织学分析.结果 术后8周显示2 mm小间隙组神经纤维已有80%再生,再生效果最佳,与其他组相比差异有统计学意义(P＜0.01).随着间隙距离逐渐增加,神经纤维再生效果逐渐变差;5 mm间隙组再生约60%,效果优于8 mm间隙组(P＜0.01);8 mm间隙组再生约20%,优于10 mm间隙组(P＜0.01);10 mm间隙组只有1%有髓神经纤维成功长入远端,肌肉湿重降至正常的42.9%.结论 使用甲壳质套管桥接修复大鼠坐骨神经损伤时,2 mm左右小间隙套接修复效果最佳,5 mm间隙是修复后周围神经功能得到恢复的极限间隙,10 mm是神经单靠趋化性、营养作用再生的最大间隙.     

A comparison of polyglycolic acid versus type 1 collagen bioabsorbable nerve conduits in a rat model: an alternative to autografting

PURPOSE: Severe nerve injury with segmental loss requires nerve graft or conduit repair. We compared 2 synthetic, bioabsorbable nerve conduits with the gold standard of autogenous nerve grafting using histopathologic and neurophysiologic analyses. METHODS: A 10-mm segment of the sciatic nerve of 45 Sprague-Dawley rats was resected, leaving a gap defect. Three experimental groups were used: 15 coaptations using type I collagen nerve conduits, 15 coaptations using polyglycolic acid (PGA) nerve conduits, and 15 coaptations using the excised segments as autogenous nerve grafts. The contralateral legs were used as unoperated controls. After 15 weeks, nerve regeneration was evaluated by measuring isometric muscle contraction force, axonal counting, wet muscle weights, and histology. RESULTS: Statistically significant differences in the isometric muscle contraction force, axonal counts, and wet muscle weights were found between type I collagen conduit and nerve graft compared to the PGA conduit. Axonal sprouting was less organized and less dense with the PGA conduits when compared to nerve reconstruction with the type I collagen conduits and nerve grafts. CONCLUSIONS: Type I collagen conduits and autografts produced comparable results, which were significantly better than PGA conduits. The use of type I collagen conduit is a reliable alternative to nerve grafting for gaps up to 10 mm in length.