补骨脂炮制前后纳入复方二神丸的提取物HPLC指纹图谱的建立及多种模式识别分析

目的建立补骨脂炮制前后分别纳入复方二神丸的石油醚提取物的HPLC指纹图谱,初步建立炮制前后二神丸提取物的化学模式识别方法,为其内在质量的控制提供参考。方法采用HPLC法,以思普乐C18(250 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,0.01%甲酸水溶液和甲醇-乙腈(1∶1)为流动相进行梯度洗脱,检测波长210 nm,柱温30℃,体积流量1 m L/min,进样量10μL,分别建立炮制前后二神丸的提取物指纹图谱,并且采用指纹图谱相似度评价,结合聚类分析和主成分分析(PCA)进行化学模式识别研究。结果分别建立了炮制前后二神丸提取物的HPLC指纹图谱,各色谱峰分离较好,标定了20批次提取物的28个共有峰,明确了其中6个成分(补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂酚、甲基丁香酚、甲基异丁香酚、去氢二异丁香酚);10批炮制前、后提取物分别与对照图谱比较,相似度均大于0.9;PCA和聚类分析可将20批提取物很好地分为炮制前和炮制后2类,且分类结果一致,同时PCA结果提示了一些可区别炮制前后二神丸的指纹图谱特征性的色谱峰。结论该方法稳定、可靠,为炮制前后二神丸提取物的质量控制提供了方法依据,同时结合化学模式识别研究可有助于炮制前后二神丸提取物整体质量控制及质量评价。     

补骨脂炮制前后化学成分的变化

目的:从炮制前后补骨脂素、异补骨脂素和微量元素含量的变化探讨补骨脂炮制的物质基础。方法:采用HPLC梯度洗脱法、电感藕合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)分别测定了补骨脂炮制前后的补骨脂素、异补骨脂素及六种微量元素的含量。结果:炮制使补骨脂中的微量元素Mn、Ca、Mg、Fe、Zn含量增加,但Cu含量变化不明显;补骨脂素、异补骨脂素含量增加。结论:炮制使补骨脂有效成分含量增加,提高了中药补骨脂整体生物活性。     

HPLC法测定泻痢固肠丸中去氢二异丁香酚的含量

目的:建立泻痢固肠丸中去氢二异丁香酚含量的HPLC方法。方法:采用Agilent 5 TC C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱;以甲醇-水(70∶30)为流动相;检测波长为274 nm;流速为1.0 mL/min;柱温:30℃。结果:样品中的去氢二异丁香酚与相邻色谱峰分离度良好,去氢二异丁香酚在0.3569～6.2454μg/mL浓度范围内有与峰面积呈良好的线性关系。结论:经方法学验证方法简单、快速、灵敏、准确,可用于泻痢固肠丸中去氢二异丁香酚的含量测定。     

二神丸中药物炮制前后对肠道菌群和UCP2基因表达的影响

目的:观察二神丸中补骨脂、肉豆蔻炮制前后对脾肾阳虚泄泻模型大鼠肠道菌群和肾脏线粒体解偶联蛋白2(UCP2)基因表达的影响,探讨二神丸中药物炮制增效的机制。方法:将24只SD雄性大鼠随机等分为正常组、模型组、二神丸生品组(补骨脂生品+肉豆蔻生品)和二神丸炮制品组(盐补骨脂+煨肉豆蔻),运用复合造模方法复制大鼠脾肾阳虚泄泻模型,后二组灌胃给药量3.5 g·kg~(-1),正常组和模型组给予同等体积生理盐水。采用实时荧光定量聚合酶链式反应技术检测各组肠道菌群,研究二神丸对肠道菌群的影响;使用免疫组化染色SP法测定各组大鼠肾脏组织UCP2基因表达。结果:脾肾阳虚泄泻大鼠肠道菌群和UCP2含量与造模前相比发生明显变化,其中长双歧杆菌、乳酸杆菌菌群异常低下,大肠埃希菌、粪肠球菌含量显著增加,肾脏组织UCP2含量明显升高。给予二神丸后,对肠道菌群失调和UCP2异常均有明显的调节和改善作用,尤以炮制组(盐补骨脂+煨肉豆蔻)效果为最佳。结论:由盐炙补骨脂和麸煨肉豆蔻组方的二神丸促进脾肾阳虚泄泻模型有益菌的增殖、抑制有害菌以及下调肾脏组织UCP2效果更加明显,提示其增效可能与调节肠道菌群及机体基础代谢率相关。     

GC-MS分析炮制对二神丸中挥发性成分的影响

目的 GC-MS分析二神丸中补骨脂和肉豆蔻的炮制对其4种组合挥发性成分的影响。方法采用水蒸气蒸馏法提取挥发油,气相色谱条件为毛细管色谱柱(HP-5 m S 5%Phenyl methyl siloxane,30 mm×0.25 mm×0.25μm),进样口温度为250℃,程序升温,载气为氦气;质谱条件为电子轰击电离(能量为70 e V),四级杆温度为150℃,离子源温度为230℃。结果 4种组合分别检测出77、109、89和70种化合物,鉴定出了其中78种化合物的结构,占其挥发油总量的97.20%⁹8.87%。结论组合Ⅳ(盐补骨脂+煨肉豆蔻)中补骨脂酚和黄樟醚的量最低,挥发性成分的总量减少,说明补骨脂和肉豆蔻炮制后入药可降低毒性。     

腰疼丸中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定

研究建立HPLC法测定腰疼丸中补骨脂素和异补骨脂素的含量测定方法 ,回归方程为 :补骨脂素Y =16 5 96 384C -94 80 ,r=0 9999;异补骨脂素 :Y =16 5 7985 3C 114 10 ,r=0 9999;线性范围 :补骨脂素 0 10 14～ 0 70 98μg;异补骨脂素 0 10 38～0 72 6 6 μg。     

RP-HPLC测定麸煨肉豆蔻中去氢二异丁香酚的含量

目的:建立麸煨肉豆蔻饮片中去氢二异丁香酚的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法,以甲醇-水(75∶25)为流动相,柱温为室温,检测波长为274 nm。结果:去氢二异丁香酚的进样量在0.075～0.60μg呈现良好现性关系(r=0.999 9),平均回收率为98.22%(n=6),RSD为1.9%。结论:采用高效液相色谱法测定麸煨肉豆蔻饮片中去氢二异丁香酚的含量,方法简便、灵敏、准确,可用于麸煨肉豆蔻饮片的质量控制。     

RP-HPLC法测定人参鹿茸丸中补骨脂的含量

目的:建立HPLC法测定人参鹿茸丸中补骨脂、异补骨脂素含量的方法。方法:采用大连依利特HypersilODS-C18色谱柱,以甲醇-水(55∶45)为流动相,检测波长:246 nm,流速:1.0 mL/min。结果:补骨脂素在0.026 3～0.316 1μgr,=0.999 9,平均加样回收率98.32%;异补骨脂素在0.02908～0.3489μgr,=0.9999,平均加样回收率97.74%;范围内线性关系良好。结论:本方法操作简便、方法可靠、结果准确、灵敏度高、重现性好、可用于该制剂的质量控制。     

补骨脂、肉豆蔻炮制前后在“二神丸”中对脾肾阳虚泄泻小鼠的止泻研究

目的探讨补骨脂、肉豆蔻生品与炮制品分别配方组成的古方"二神丸"对"脾肾阳虚泄泻"小鼠止泻作用的差异,以阐明炮制对方剂疗效影响。方法设立空白组、阳性药物组、"二神丸"Ⅰ(补骨脂生品+肉豆蔻生品)、"二神丸"Ⅱ(补骨脂生品+肉豆蔻煨制品)、"二神丸"Ⅲ(补骨脂盐炙品+肉豆蔻生品)、"二神丸"Ⅳ(补骨脂盐炙品+肉豆蔻煨制品)共6组,观察对番泻叶所致小鼠急性腹泻以及氢化可的松和大黄造成的"脾肾阳虚泄泻"模型小鼠泄泻的影响。结果 "二神丸"Ⅲ、Ⅳ组的小肠推进率与空白组相比有显著性差异(P<0.05);"二神丸"Ⅳ组的首次泄泻时间、稀便率、稀便级和腹泻指数与空白组比较,均有极显著性差异(P<0.01)。结论 "二神丸"Ⅳ组的止泻作用优于其他组合,即盐炙补骨脂和煨炙肉豆蔻组方的"二神丸"止泻作用增强。     

二神汤中补骨脂素、异补骨脂素的药动学研究

目的研究大鼠灌胃二神汤后补骨脂素、异补骨脂素在体内的药动学特征。方法 SD大鼠一次性灌胃给予二神汤,采用HPLC法测定不同时间间隔血药浓度,应用DAS 2.0软件模拟房室模型并计算药动学参数。结果给药后补骨脂素及异补骨脂素在大鼠体内的药时过程符合二室模型,主要药动学参数分别为t1/2=（9.22±2.44）h,（11.40±6.60）h;Tm ax=（9.33±2.73）h,（9.33±2.73）h;Cm ax=（7.91±1.34）mg/L,（3.89±0.54）mg/L;AUC（0-t）=（130.92±18.72）mg·L^-1·h^-1,（69.49±9.05）mg·L^-1·h^-1;AUC（0-∞）=（147.81±25.59）mg·L^-1·h^-1,（83.50±19.83）mg·L^-1·h^-1;MRT（0-t）=（13.39±1.95）h,（13.75±2.01）h;MRT（0-∞）=（16.97±2.87）h,（19.59±7.49）h。结论二神汤灌胃给药后,补骨脂素、异补骨脂素在大鼠血中的吸收、分布和消除皆较慢。     

复方二神丸中的药物炮制后对T淋巴细胞亚群及cAMP/cGMP的调节作用

目的： 比较二神丸方剂中的两味中药炮制前、后对脾肾阳虚泄泻模型大鼠全血T淋巴细胞亚群和环磷酸腺苷（cAMP）与环磷酸鸟苷（cGMP）比值（cAMP/cGMP）失衡的调节作用,为阐明二神丸中药物炮制增效机制提供实验依据。 方法： 将50只SD雄性大鼠随机分为正常、模型、阳性对照参芩白术丸2 g·kg^-1组,二神丸生品（生补骨脂+生肉豆蔻）3.5 g·kg^-1组、二神丸炮制品（盐补骨脂+煨肉豆蔻）3.5 g·kg^-1组共5组,通过复合因素造脾肾阳虚泄泻模型4周,并按组给药2周,分别从股动脉和眼眶后静脉丛取全血和血清,用流式细胞仪检测全血各组样本T淋巴细胞亚群CD3⁺,CD3⁺CD4⁺,CD3⁺CD8⁺的百分比;用酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清样本中环磷酸腺苷（cAMP）和环磷酸鸟苷（cGMP）的水平。 结果： 3个给药组均能显著提高模型动物血清中cAMP/cGMP和全血CD3⁺,CD3⁺CD4⁺百分比,而CD3⁺CD8⁺百分比则显著降低,且炮制品二神丸组对CD3⁺,CD3⁺CD4⁺,CD3⁺CD8⁺百分比和cAMP/cGMP的调节作用明显强于生品二神丸组。 结论： 复方二神丸中药物经过炮制后能显著恢复脾肾阳虚泄泻模型大鼠全血CD3⁺CD4⁺,CD3⁺CD8⁺（P<0.01）和血清cAMP/cGMP（P<0.01）的水平,提示二神丸中的两味中药炮制后增强疗效可能与其增强脾肾阳虚泄泻模型大鼠对T细胞网络平衡（CD3⁺,CD3⁺CD4⁺,CD3⁺CD8⁺）和cAMP/cGMP平衡的调节作用有关。     

二参汤不同组成配比对雌性去势大鼠的影响

目的:观察二参汤(玄参、太子参)的最佳组方剂量.方法:选取60只SD清洁级雌性大鼠随机分为空白对照组、模型组、二参汤(1∶3)大剂量组、二参汤(1∶3)小剂量组、二参汤(2∶3)大剂量组、二参汤(2∶3)小剂量组.通过手术去卵巢的方法造模,空白对照组与模型组给予生理盐水,二参汤(1∶3)大剂量组、二参汤(1∶3)小剂量组、二参汤(2∶3)大剂量组、二参汤(2∶3)小剂量组根据体质量给药,分别给予不同剂量二参汤,持续给药4周.通过观察体征和高效液相法测脑内单胺类递质去甲肾上腺素,五羟色胺,多巴胺含量变化等指标找出最优组合.结果:给予二参汤4周后,摄食量、饮水量和体温二参汤(1∶3)剂量组优于二参汤(2∶3)剂量组,子宫系数和肾上腺系数给药剂量组均未见明显改善.结论:二参汤能改善模型大鼠肾阴虚症状,且二参汤(1∶3)剂量组效果更好.     

补骨脂药材的质量变化规律和标准探讨

目前,《中华人民共和国药典》 2020年版只选取补骨脂素和异补骨脂素作为含量测定指标成分来控制补骨脂药材质量。但是,补骨脂苷与苷元存在内部转化的问题,《中华人民共和国药典》 2020年版中补骨脂质量评价方法和标准并不能完全反映补骨脂药材的质量。通过对补骨脂的市场调研情况,结合前期试验整合分析,探讨了补骨脂的质量标准现状及质量问题。并基于药材指标性成分动态变化,提出了更加合理的质量控制方法,为补骨脂含量测定标准制订提供研究思路和依据。     

“二神丸”中补骨脂、肉豆蔻炮制前后对脾肾阳虚泄泻大鼠血清代谢组学的影响

运用代谢组学的方法,研究"二神丸"中补骨脂、肉豆蔻炮制前后干预脾肾阳虚泄泻大鼠血清内源性代谢物的变化,筛选出与脾肾阳虚泄泻相关的差异代谢物,探讨与脾肾阳虚泄泻相关的代谢模式及"二神丸"中补骨脂、肉豆蔻炮制增效机制。检测分析各组SOD,MDA,应用GC-MS检测不同时段的大鼠血液代谢图谱,采用主成分分析(PCA)方法和偏最小二乘法判别分析方法(PLS-DA)分析,通过变量重要性投影(VIP)和t检验筛选潜在生物标志物。结果显示,"二神丸"能使SOD活性升高,MDA含量降低。确定了10个与脾肾阳虚泄泻相关的差异代谢物。与模型组比较,"二神丸"干预后代谢物水平不同程度回调,且"二神丸"Ⅳ组(盐炙补骨脂+麸煨肉豆蔻)效果最好,推测"二神丸"中补骨脂、肉豆蔻炮制增效可能从抑制过氧化、改善糖脂、氨基酸及能量代谢等多层面协同发挥作用,具有多靶点性。     

四神丸中3种成分在正常大鼠及抑郁大鼠体内药动学的比较

目的比较四神丸中3种成分在正常大鼠及抑郁大鼠体内的药动学。方法 12只大鼠随机分为正常组和模型组,每组6只,灌胃给予四神丸混悬液(4.63 mL/kg),于5、15、30、45、60、90、120、180、240、360、480、720、960、1 440 min采血,LC-MS/MS法测定补骨脂素、异补骨脂素、五味子醇甲血药浓度,绘制血药浓度-时间曲线,计算主要药动学参数。结果模型组3种成分C_max、AUC_0～t、AUC_0～∞及补骨脂素t_max高于正常组(P<0.05,P<0.01),2组3种成分t_1/2比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论四神丸中补骨脂素、异补骨脂素、五味子醇甲在抑郁大鼠体内的吸收程度高于正常大鼠体内,而消除程度无明显变化。     

生发酊制备工艺研究

目的考察生发酊的制备工艺并验证。方法以补骨脂素、异补骨脂素总量为指标,对生发酊提取工艺中浸渍溶剂用量进行考察,并进行制剂工艺验证。结果结合生产实际生发酊的最佳制备工艺是加6倍量75%乙醇浸渍七日。结论优选的制备工艺可行。