抗黄曲霉毒素B1单克隆抗体的制备及特性

用杂交瘤技术制备了5株产生抗黄曲霉毒紊B₁单克隆抗体的杂交瘤细胞株。对其中之一AFB1－2H8进行了较系统的研究。AFB1一2H8属IgC3。纯化腹水抗体效价约5×10⁶。ELISA检测标准毒素的线性范围为0．5～50ng／ml。最低检出量为0．01ng／ml。该单抗与参试的其它黄曲霉代谢物的交叉反应系数为0～0．21,该抗体有较大的应用价值。     

抗吡虫啉单克隆抗体的制备及鉴定

为制备灵敏度高,特异性强的抗吡虫啉单克隆抗体,建立经济、快速、准确的吡虫啉残留免疫学分析方法,采用分子模拟技术分析吡虫啉及其类似农药的电荷分布后,选择1-[6-(2-羧乙硫基-3-吡啶)甲基]-N-硝基-2-咪唑啉亚胺 (H1) 作为免疫半抗原,1-(6-氯-3-吡啶甲基)-3-羧丙基-N-硝基-2-咪唑啉亚胺 (H2) 作为包被半抗原,利用NHS酯法将H1和H2分别与牛血清蛋白 (BSA) 和卵清蛋白 (OVA) 偶联合成免疫原与包被原。免疫BALB/c小鼠后,采用常规杂交瘤技术共获得2株稳定分泌抗吡虫     

微生物来源的尿酸氧化酶的研究进展及应用前景

尿酸氧化酶是一种重要的医药用酶,它催化嘌呤代谢途径中的尿酸氧化生成尿囊素和过氧化氢,因而被广泛用于治疗痛风,检测血液尿酸浓度,预防和治疗由于肿瘤化学治疗引起的高尿酸血症。综述了尿酸氧化酶的来源、酶学性质、基因克隆与表达及其用途,并对其在应用中存在的问题和前景作了展望。     

抗汉坦病毒等三种单克隆抗体细胞株的建立及分析应用

以纯化的病毒抗原加完全福氏佐剂,免疫BALB/c小鼠,再利用杂交瘤技术建立针对汉坦病毒、狂犬病毒及乙型脑炎病毒的单克隆抗体(McAb)细胞株,制备并提纯标记McAb,应用于各种实验和检测工作。结果获得了6株分泌抗汉坦病毒McAb杂交瘤细胞株、6株分泌抗狂犬病毒McAb杂交瘤细胞株、2株分泌抗乙型脑炎病毒McAb杂交瘤细胞株,共14株,并对它们的特性进行了分析。各McAb效价不尽相同,有的高达10-7,有的则不足10-3。各McAb亚型以IgG型为主,少数为IgM型;轻链以κ型为主,个别为λ型或阴性。McAb与纯化的病毒抗原有明显的特异性吸附(P<0.01)。有的McAb有相同的作用位点,有的McAb则没有,但与其它McAb有交叉反应。通过对McAb进行提纯和标记,建立了双抗体夹心ELISA法,用于病毒抗原的检测。实验表明获得的McAb有较好的生物学特性,可与相应的病毒抗原特异性结合,用于免疫学检测及其它多种用途。     

蛇毒类凝血酶鼠单克隆抗体的制备

采用杂交瘤技术,获得了４株稳定分泌抗蛇毒类凝血酶的单克隆抗体杂交瘤细胞株,均属ＩｇＧ１ｋ链,４株杂交瘤细胞培养上清液效价为 ４ × １０－１～４ × １０－２,腹水效价为 ４ × １０－１～３．２ ×１０－５。     

TT病毒重组蛋白单克隆抗体的制备

采用杂交瘤技术,获得了4株稳定分泌抗TTV重组蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株,1株属IgG2bλ链、1株属IgG1κ链、2株属IgG2aκ链。4株杂交瘤细胞培养上清液效价为1：80-1：1280,腹水效价为1：32万-1：160万。     

抗HBsAg─抗HRP双特异单克隆抗体的鉴定及初步应用

应用本实验组建立的分泌抗ＨＢｓＡｇ─抗ＨＲＰ双特异单克隆抗体的杂交─杂交瘤细胞株注射Ｂａｌｂ／Ｃ小鼠腹腔,诱生腹水。经用双亲和柱层析,获得较纯双特异单克隆抗体,检测结果表明该抗体具有特异性好、亲和力高等特性。用以建立单克隆抗体与双特异抗体夹心法ＥＬＩＳＡ,初步用于临床血清标本中ＨＢｓＡｇ检测,取得满意效果。并与上海实业科华生化制品有限公司乙肝ＨＢｓＡｇ诊断试剂（卫生部推荐使用试剂）比较,符合率为１００％。此双特异抗体诊断试剂有望广泛用于临床血清标本ＨＢｓＡｇ的检测,为乙型肝炎的诊断提供价廉、快速、特异而敏感的诊断试剂。     

金霉素单克隆抗体的制备及检测方法的建立

采用羰基二咪唑法,将半抗原金霉素(AM)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联制备金霉素免疫抗原AM-BSA和检测抗原AM-OVA,通过紫外光谱扫描检测偶联产物。采用细胞杂交瘤技术,制备抗金霉素单克隆抗体杂交瘤细胞株,建立了金霉素竞争ELISA检测方法,其灵敏度达到50ng/ml,且呈现良好的线性关系(r=0.9812),并且与其他抗生素无交叉反应。     

微囊化不可繁殖型尿酸氧化酶工程菌的制备

目的：制备微囊化不可繁殖型尿酸氧化酶工程菌,以期研制一种降低血尿酸的口服药物,用于治疗高尿酸血症及痛风。方法：用甲醛灭活尿酸氧化酶工程菌,使其不可繁殖并保持酶活性;以壳聚糖和海藻酸钠为囊材,采用气流喷雾法制备微囊;用试剂盒体外评价微囊降解尿酸的效果。结果：经甲醛灭活后,工程菌繁殖活性丧失,其降解尿酸的能力降低85%;制备的微囊粒径呈正态分布于20～220μm,包封率达到99%以上;体外试验表明其具有降尿酸活性。结论：获得了具有降解尿酸活性的微囊化不可繁殖型工程菌。     

抗iLRP单克隆抗体的制备和鉴定

为了研究抗iLRP (Immature laminin receptor protein)单克隆抗体在免疫治疗中的应用,本研究采用重组iLRP对6~8周龄BALB/c雌性小鼠进行免疫,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0进行细胞融合,在HAT (Hypoxanthine aminopterin thymidine)半固体培养基上挑选分离明显的细胞克隆于96孔板培养后,取上清液通过ELISA法进行克隆筛选,初次筛选得到23株阳性克隆,复筛后得到13株稳定分泌抗体的细胞株。抗体类别鉴定显示,其中9株为IgM,3株为Ig G1,1株为IgG2a,轻链类型都为κ型。其中1株IgG1和IgG2a用于制备小鼠腹水,经Protein-G柱纯化,SDS-PAGE检测抗体纯度,Western blotting验证抗体特异性。结果表明,抗体纯度均大于90%,并与i LRP有明显的特异性结合。此结果为后续的深入研究提供了一套完整有效的抗iLRP单克隆抗体生产和鉴定的程序,对以iLRP为治疗靶点的单克隆药物研究以及最近兴起的CAR-T (Chimeric antigen receptor modified T cell)免疫治疗具有积极的意义。     

结核分枝杆菌ESAT-6抗原鼠单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备重组结核分枝杆菌ESAT-6抗原鼠单克隆抗体.方法:采用杂交瘤技术,获得了12株针对结核分枝杆菌ESAT-6抗原的鼠单克隆抗体杂交瘤细胞株,对其中的5株进行了小鼠腹水的制备及相关鉴定.结果:5株单克隆抗体的腹水效价达到1:512 000～1:1 024 000,纯化后纯度高于90%,抗体亚类(型)均为IgGl...     

人乳头瘤病毒（HPV）58型中和单克隆抗体的制备及初步应用

人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）58型是宫颈癌的主要诱因之一. HPV58在亚洲地区宫颈癌组织中的检出率仅次于HPV16/18. HPV58中和单克隆抗体可用于 HPV病毒样颗粒（virus-like particle,VLP）疫苗的研究,并为病毒感染入侵机制的 研究提供实验材料. 本研究采用HPV58 L1 VLP免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞进行杂交瘤 细胞的制备,通过VLP-ELISA和假病毒中和实验筛选杂交瘤细胞株;经rProtein A纯化 阳性杂交瘤细胞培养上清获得单抗;采用ELISA测定型别特异性中和单抗的亲和力,采用相加实验及变性VLP-ELISA分析单抗识别表位的性质;选取高亲和力单抗建立定量分 析HPV58 L1 VLP的ELISA方法. 获得了2株HPV58特异性中和单抗XM-22和XM-23,亲和常数分别为2.7×107 mol-1·L和1.9×106 mol-1·L,二者识别表位可能不同. 同时获得2株具有交叉中和活性的单抗XM-21和XM-24,除可较高水平中和HPV58外,还可分别交叉 中和亲缘关系较远的HPV18和HPV6. 以XM-22建立的ELISA方法定量分析HPV58 L1 VLP的检测范围为0.05 μg/mL~0.40 μg/mL. 本研究建立的ELISA方法可用于HPV58 L1 VLP疫苗生产的质量控制研究,获得的4株具有不同特点的中和单抗可用于HPV58感染入侵机制 的研究.     

抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体的制备及性质研究

人类巨细胞病毒（Human cytomegalovirus,HCMV）是一种机会性感染疱疹病毒,在人群中感染比较常见,但在免疫缺陷个体与新生儿中可引起严重的疾病。HCMV Pp65是HCMV活动感染的主要标志,也是临床检验检测HCMV感染的重要靶标。为研发抗HCMV Pp65蛋白单克隆抗体作为临床免疫检测HCMV感染的关键原料,本研究采用重组表达的HCMV Pp65蛋白免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠淋巴结细胞与sp2/0细胞融合,采用间接ELISA法筛选阳性克隆与效价测定,再用Western blotting进行抗体特异性鉴定,最后用免疫捕获PCR和免疫荧光法评价其应用前景。最终获得了1株能稳定分泌高效价的抗HCMV Pp65单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为8D6。Western blotting及间接ELISA检测其效价分别达1∶4 000和1∶105;细胞免疫荧光与免疫捕获PCR实验结果说明,该杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体具有良好的亲和力和特异性,具有作为外周血细胞免疫荧光细胞化学和免疫捕获PCR检测HCMV临床感染的关键原料,也可作为双抗体夹心法检测HCMV临床感染的关键原料,为建立HCMV感染快速灵敏的临床诊断试剂打下了重要的基础。     

抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的制备及双抗体夹心酶联免疫吸附试验检测法的建立

目的：制备针对嗜肺军团茵血清8型的单克隆抗体,并建立双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）检测方法。方法：用甲醛灭活的嗜肺军团菌血清8型菌免疫BALB／c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,建立双抗夹心ELISA检测方法。结果：研制出8株能特异性分泌抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体的杂交瘤细胞株,Ig类型分别为IgM（2株）、IgG,（1株）和IgG,（5株）;利用IgG1型单抗6G10与6C7配对,建立了双抗夹心ELISA检测方法,该方法的最低检出浓度为2．6×10^5cfu／mL,除与金黄色葡萄球菌有微弱的交叉反应外,与14株其他血清型嗜肺军团菌、17株非嗜肺军团菌及11株非军团菌均无交叉反应,具有较高的特异性。结论：制备了具有高特异性和亲和力的抗嗜肺军团菌血清8型单克隆抗体,并建立了双抗夹心EUSA检测方法。     

尿激酶型纤溶酶原激活剂单克隆抗体的生产及其在抗原纯化中的应用

从ＣＨＯ工程细胞培养上清初步纯化的ｕＰＡ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠,通过杂交瘤技术制备单克隆抗体细胞株,取其中一株３８－１－７株作高密度大量培养,细胞密度达１３．２×１０６／ｍＬ时,抗体滴度为１∶６１．４４×１０４。用自制的ｕＰＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱纯化抗体。抗体滴度提高２４３倍。纯化后的抗体与活化的Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ珠交联,制成ＩｇＧ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ亲和层析抗体柱,亲和力常数：１．２８×１０９（ｍｏｌ／Ｌ）－１,交联率：８３．５％。直接从培养上清纯化ｕＰＡ,纯度为９６．３％,回收率：８１．６％±１９,纯化倍数：５０倍左右,比活１．１１±０．２９×１０５。试验结果表明该法效果好,方法简单、操作方便、值得进一步研究和应用。     

抗人B7-H1单克隆抗体的制备和鉴定

目的:采用杂交瘤技术制备抗人B7-H1单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法:经抗原免疫的小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞以常规方法融合;用间接ELISA法筛选分泌抗体的杂交瘤细胞株;阳性克隆用有限稀释法获得稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株;扩增杂交瘤细胞注射进小鼠腹腔后制备腹水;纯化腹水中的单克隆抗体并对其亚型进行鉴定;用间接ELISA法测抗体效价;将肺癌组织制成石蜡切片,用抗人B7-H1抗体进行免疫组化染色。结果:获得1株稳定分泌抗人B7-H1单克隆抗体的杂交瘤细胞株,所分泌的单抗类型为IgG1;抗体效价为1×108,纯化后的抗体含量为6.76g/L;免疫组化实验中,单抗可与肺癌组织表面的B7-H1蛋白特异地结合。结论:制备了人B7-H1单克隆抗体,为B7-H1检测试剂盒的研制奠定了基础。     

促甲状腺激素单克隆抗体的制备

获得了抗促甲状腺激素(TSH)单克隆抗体杂交瘤细胞20株,其中T₇₄A₁₀小鼠腹水滴度为1:50 000,亲和常数为7.15×10⁹L/mol,T₇₁B₁₁小鼠腹水滴度为1:150000,亲和常数为8.75×10⁹L/mol.两个抗体与人绒毛膜促性腺激素(HCG)、促卵泡激素(FSH)和促黄体生成激素(LH)的交叉反应分别小于1.1×10^-6%、0.01%和0.016%.将T₇₄A₁₀和T₇₁B₁₁应用于TSH免疫放射分析中,得到了满意的结果.     

人突触小体相关蛋白25单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的:制备抗人突触小体相关蛋白25(SNAP25)的鼠源单克隆抗体。方法:利用大肠杆菌表达SNAP25蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备杂交瘤细胞,筛选针对SNAP25的阳性杂交瘤细胞株,鉴定抗体亚型;用杂交瘤细胞株制备腹水单抗,纯化后利用SDS-PAGE检测抗体纯度。结果:表达并纯化得到纯度大于90%的SNAP25蛋白,免疫小鼠后经2轮筛选得到12株阳性杂交瘤细胞株,其中抗体重链包括IgG1、IgG2型,轻链大部分为κ链;选择具有相对较高抗原结合活性的14号杂交瘤细胞株制备腹水,纯化后得到纯度大于90%的抗体。结论:获得1株高纯度的针对SNAP25的鼠源单克隆抗体,为肉毒毒素的检测奠定了基础。     

抗人IL-6单克隆抗体的制备及鉴定

用基因重组人IL-6免疫Balb/c小鼠,采用小鼠杂交瘤技术,筛选克隆到分泌抗人重组IL-6单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其中2H₂、 1D₂ 和4B₄瘤细胞株进行了鉴定.其抗体类别均为IgG,亚类分别为IgG1和IgG2a.用多种细胞因子和无关蛋白的鉴别试验结果证实它们均特异地识别rhIL-6.免疫转染结果显示,该单抗识别分子质量为21 ku的IL-6单一条带.IL-6单克隆抗体的亲和常数K_aff= 1.62×10⁹ (mol/L)^-1.     

重组马g-干扰素抗病毒活性测定及单克隆抗体抑制活性鉴定

为了测定大肠杆菌和杆状病毒表达的重组马g-干扰素是否具有抗病毒活性, 利用这两种干扰素处理马胎肾细胞(EFK-78), 然后接种表达绿色荧光蛋白(GFP)的重组水泡性口炎病毒(VSV*GFP), 观察干扰素对病毒表达GFP的抑制, 测出其抗病毒活性单位分别为1×103 AU/mL、1×105 AU/mL。评价了制备的九株抗重组马g-干扰素单克隆抗体是否可抑制重组马g-干扰素抗病毒活性, 证实其中一株可中和重组马g-干扰素的抗病毒活性。结果表明: 杆状病毒表达的马g-干扰素具有较高的抗病毒活性, 其活性可被一株制备的抗重组马g-干扰素单克隆抗体抑制; 首次获得原核表达的具有抗病毒活性的马g-干扰素。