青占鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽制备工艺优化

目的 本研究以青占鱼为原料,对黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XOD)抑制肽的制备条件进行优化。方法 选用五种蛋白酶对其水解制备黄嘌呤氧化酶抑制肽,测定XOD抑制率和水解度并用以评价效果,通过单因素和响应面分析相结合的实验方法优化酶解条件,最后对其分子量分布情况进行了检测分析。结果 结果表明复配酶制剂为最适酶,最佳酶解工艺为：加酶量4000U/g,酶解时间4h,酶解温度55℃,pH 7.0,料液比1:2;同时测得最优工艺下XOD抑制率和水解度的实际值分别为65.21%和18.5%,与理论值基本无差别。采用该法制备的青占鱼XOD抑制肽分子量分布情况为：5500~3000Da的肽段占比56.44%,3000~1500Da的肽段占比31.07%,＜1500Da的肽段占比12.49%。结论 本研究可为青占鱼制备XOD抑制肽的生产工艺与机理研究提供一定的技术参考与理论支持。     

马鲛鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽的制备 工艺优化及抗氧化活性研究

目的 探究马鲛鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽制备的最佳条件及其抗氧化活性。方法 以马鲛鱼为原料,黄嘌呤氧化酶抑制肽采用超声辅助酶法制备,并筛选最佳反应用酶;以单因素实验为基础,通过Box-Behnken响应面分析法,以黄嘌呤氧化酶抑制活性为响应值,优化得到酶解最优条件。通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl, DPPH)自由基清除等方法测定膜分离物的抗氧化活性;肌肽和鹅肌肽的含量测定采用了高效液相色谱法。结果 最佳反应用酶为复配的中性蛋白酶与复合蛋白酶,总加酶量0.3%（中性蛋白酶∶复合蛋白酶=1:1, m:m）。优化所得的最佳酶解条件为：酶解温度50℃,加酶量为0.2%,pH为7.0。在此条件下黄嘌呤氧化酶抑制率37.49%,与回归理论模型基本符合。3个组分的膜分离物中,相对分子量小于1 kDa的酶解产物的抗氧化性能力最强。马鲛鱼中鹅肌肽的含量为1.558 mg/g,而肌肽含量则为0.10 mg/g。结论 马鲛鱼制备及工艺优化所得的黄嘌呤氧化酶抑制肽对黄嘌呤氧化酶有较好的抑制作用,为工业化制备马鲛鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽提供了数据基础和理论依据,肌肽和鹅肌肽的含量测定为分离纯化马鲛鱼黄嘌呤氧化酶抑制肽试验奠定了基础。。     

超声辅助酶解制备大米蛋白黄嘌呤氧化酶活性抑制肽的工艺条件优化

摘 要: 本文以大米蛋白为原料,研究了碱性蛋白酶酶解法制备黄嘌呤氧化酶（Xanthine Oxidase,XOD）活性抑制肽,并对其体外功能活性进行评价。研究了蛋白酶种类、底物浓度、酶解温度、加酶量、酶解pH、酶解时间对大米蛋白水解度（degree of hydrolysis,DH）及酶解产物对黄嘌呤氧化酶活性抑制率的影响,探讨了不同超声处理方式对酶解过程的影响,通过响应面法对实验条件进行了优化结果如下：采用碱性蛋白酶,底物浓度5 %,酶解温度为56 ℃,加酶量为8000 U/g,酶解pH为10,超声功率70 W,超声酶解60 min,对所制备的大米蛋白黄嘌呤氧化酶活性抑制肽的功能活性进行了评价。在最优条件下其黄嘌呤氧化酶抑制活性的IC50为1.55 mg/mL, ABTS自由基清除作用、羟基自由基清除作用、DPPH自由基清除作用的IC50值分别为0.49、12.48、3.88 mg/mL。     

仿刺参酶解液抑制黄嘌呤氧化酶活性的研究

目的:为了充分利用仿刺参这一海洋资源,开发其活性成分,研究了仿刺参的最优酶解条件并探讨仿刺参通过抑制黄嘌呤氧化酶活性对大鼠高尿酸血症的预防效果。方法:以水解度为指标,通过单因素试验对酶解温度、酶解时间、加酶量等酶解工艺参数进行研究,采用响应面法优化酶解工艺。以酵母膏淀粉混合液配合氧嗪酸钾构建大鼠高尿酸血症模型。分别灌胃造模后的SD大鼠,30 d后,测定大鼠的脏器系数及血清中XOD活力,UA和BUN含量。利用基因芯片技术比较不同组别间基因的表达水平。同时利用RT-qPCR技术验证基因芯片结果。结果:选用复合蛋白酶,酶解温度55℃,酶解时间136 min,加酶量1.97%,水解度最高。仿刺参酶解液能显著改善大鼠的脏器系数,降低大鼠血清中的UA和BUN含量,降低XOD活性,抑制黄嘌呤氧化酶的活性,降低尿酸的合成产生。与模型组的差异表达比较,试验组基因表达水平有显著改变,其中表达上调的基因36个,表达下调的143个。结论:仿刺参营养丰富,可以抑制黄嘌呤氧化酶的活性,具有抗高尿酸血症的作用,是一种预防痛风的食品。     

黄嘌呤氧化酶肽类抑制剂的研究进展

痛风是由于嘌呤类物质代谢增加或尿酸排泄异常引起的一种反复发作的炎症性疾病。在嘌呤类物质代谢成尿酸的过程中,黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase,XO）是调控尿酸生成的关键酶,其作用是将次黄嘌呤转化成黄嘌呤,将黄嘌呤转化成尿酸。通过抑制XO的活力可以抑制尿酸的生成,缓解高尿酸血症。近年来,蛋白来源的小分子降尿酸肽具有制备成本低、安全性高、易吸收、高活性、高稳定性和特异性等特点,已引起研究者的关注。本文首先对XO进行介绍,然后概括了XO分离鉴定的通用步骤,归纳总结了研究发现的混合肽类抑制剂及单一肽类抑制剂,并找到这些抑制剂的结构共性。为研究者发现新的XO肽类抑制剂提供思路和方向。     

奶油黄嘌呤氧化酶的酶学性质研究

利用反向高效液相色谱（RP-HPLC）测定该酶产物尿酸的生成量,研究黄嘌呤氧化酶的酶学特性。结果表明,在50mmol／L Tris—HCI缓冲液和O．24mmol／L黄嘌呤的体系中,该酶检测反应的最适温度为37℃,最适pH8．4。XOD在pH7．O～9．0,40℃以下稳定,对黄嘌呤的Km值为0．043mmol／L。XOD酶激活剂包括水杨酸钠、半胱氨酸、组胺、硫酸铵、乙二胺四乙酸等。金属离子对其活性有抑制作用。低浓度表面活性剂Tween80、SDS和TritonX．100对该酶活力影响不明显。关键词：黄嘌呤氧化酶;酶学特性;稳定性     

超声辅助提取苦丁茶多糖的工艺优化及其对黄嘌呤氧化酶抑制活性

目的：优化苦丁茶多糖的提取工艺,分析其对黄嘌呤氧化酶的抑制活性。方法：以得率为指标,采用响应面优化超声辅助法研究料液比、超声时间、超声温度、超声功率对苦丁茶多糖的得率的影响;通过体外实验测定苦丁茶多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制率及其动力学常数K_i。结果：响应面试验优化条件为：料液比1:25 g/mL,超声时间60 min,超声温度40℃,超声功率260 W,得到得率为5.85%。苦丁茶多糖对黄嘌呤氧化酶的抑制率随物质量浓度增大而增加,IC₅₀为1.28 mg/mL,其对黄嘌呤氧化酶抑制作用类型属于竞争性可逆抑制,抑制动力学常数K_i为0.62 mg/mL,结论：苦丁茶多糖能够抑制黄嘌呤氧化酶的活性,其可作为潜在的预防高尿酸血症的食品或保健品进行深入研究,以期对苦丁茶的综合利用提供理论数据。     

青钱柳粗多糖CP50制备工艺优化及对黄嘌呤氧化酶抑制作用研究

青钱柳是珍贵的药食同源型植物,青钱柳多糖CP50是具有较强生物活性的果胶类酸性多糖。黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase, XO)是一种嘌呤分解代谢酶,与高尿酸血症和痛风形成有关。该研究采用正交法优化了从青钱柳干叶中制备青钱柳多糖CP50的最佳工艺为提取温度100℃、料液比1∶40(g∶mL)、提取时间2 h,此条件下多糖得率为1.67%。以黄嘌呤氧化酶作为靶点,并结合分子模拟手段探究了青钱柳多糖CP50对XO的抑制机理。试验结果显示,青钱柳多糖CP50(0～1 mg/mL)对XO有一定抑制作用,且对XO的抑制活性呈浓度依赖性,IC₅₀为0.825 mg/mL。分子对接结果进一步表明,青钱柳多糖作用于XO时,CP50分子插入XO的疏水腔,占据催化中心,导致XO活性受到抑制而达到降低尿酸的效果。该研究旨在为青钱柳CP50作为一种有效的膳食多糖应用于高尿酸血症患者的日常饮食提供方法借鉴和数据支持。     

阿魏酸对黄嘌呤氧化酶的抑制机理

为系统地探讨阿魏酸抑制黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)活性的分子机制,采用酶学和光谱学方法测定了阿魏酸对XO抑制可逆性、抑制动力学、结合性质及结构的影响,采用分子模拟技术预测了阿魏酸与XO的结合构象。结果表明:在混合竞争的方式下,阿魏酸能可逆地抑制XO活性,抑制常数为4.5μmol/L,与咖啡酸、对香豆酸、绿原酸和没食子酸相比,阿魏酸对XO的抑制能力最强,其半抑制浓度为116.2μmol/L。荧光滴定实验结果表明:阿魏酸通过动态静态混合猝灭方式使XO荧光减少,其中静态猝灭占主导,且与XO存在一个结合位点,结合常数为3.38×10⁴L/mol(298K);ΔG<0、ΔH<0和ΔS>0,表明该结合过程主要是以氢键和疏水作用力驱动且自发进行。分子对接结果揭示了阿魏酸进入了XO中黄素腺嘌呤二核苷酸活性区域,影响XO正常催化过程。同步荧光光谱和圆二色光谱实验表明:阿魏酸能改变XO的二级和三级结构,使XO中酪氨酸和色氨酸残基周围极性增加及疏水性降低,并且α-螺旋含量升高,β-折叠含量降低,使XO二级结构趋于紧密,这是影响XO活性的另一原因。研究以期为阿魏酸作为XO抑制剂改善高尿酸血症提供一定的理论依据。     

苦丁茶总黄酮纯化工艺及其黄嘌呤氧化酶抑制活性研究

以D101大孔树脂对苦丁茶粗提物中的总黄酮进行分离纯化,确定最佳纯化工艺条件,测定纯化前后的样品总黄酮的纯度,并检测纯化前后样品对黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase,XOD）的体外抑制活性。通过单因素试验得到最佳优化工艺条件为上样液pH值为3、洗脱液乙醇浓度70%、上样液浓度3.0 mg/mL、上样液流速2.0 mL/min、洗脱液流速2.0 mL/min、上样量55 mL、洗脱液体积40 mL。纯化后样品纯度由75.53%提高至94.40%,对XOD的IC50分别为（228.22±1.07）μg/mL 和（135.74±1.02）μg/mL。     

基于电子鼻技术快速检测带鱼新鲜度的研究

气味是判断水产品品质的重要指标之一。利用电子鼻技术检测不同贮藏条件下的带鱼气味成分,并与pH和挥发性盐基氮(TVBN)等指标进行对比分析,建立了一种基于电子鼻技术的带鱼新鲜度快速检测方法。结果表明,4℃和0℃两个温度下,随着贮藏时间的延长,带鱼气味成分发生显著变化,氮氧化合物、硫化物、有机硫化物及芳香成分等是带鱼品质恶化的主要来源;采用主成分分析(PCA)、线性判别分析(LDA)均可以区分不同新鲜度的带鱼;利用电子鼻技术得到带鱼的贮藏品质区分结果与TVBN分析结果基本一致,电子鼻技术可用于带鱼新鲜度的快速有效判定。     

Changes of water state and gel characteristics of Hairtail (Trichiurus lepturus) surimi during thermal processing

This study examined the changes of water state and gel characteristics of Hairtail surimi during thermal processing including two steps. The results showed that there were four content of water in Hairtail surimi gels. Water‐holding capacity (WHC) and T₂₃ relaxation time of water and gel strength increased from 47.01 to 78.97% and from 64.23 to 51.52 ms, respectively, and whiteness decreased from 63.87 to 55.22 during the entire thermal processing. Meanwhile, the texture properties including hardness, gumminess, and chewiness declined from 402.42 to 130.41 g, from 294.39 to103.70 g, and from 233.68 to 43.60 g, respectively, during the first step, and then increased markedly during the second step from 130.41 to 2,301.87 g, from 103.70 to 1,250.99 g, and from 43.60 to 978.51 g, respectively. Furthermore, the WHC and textural profile had positive correlation, and changes in protein secondary structure were interesting, with the α‐helices decreasing significantly from 26.40 to 14.12%, while the β‐sheet and the random coil structure increasing significantly from 36.28 to 44.03%, and from 10.89 to 14.31%, respectively, and β‐turn structure increasing form 26.44 to 27.98% during the first step and then declining markedly during the second step, moreover β‐sheet had a fine positive correlation with WHC hardness and chewiness. Overall, dense, porous and compact three‐dimensional network gel structure gradually formed. In a word, during thermal processing. WHC of Hairtail surimi increased, and protein secondary structure of protein became orderly, and a fine, dense gel formed during thermal processing. Water is considered as the highest and most important chemical constituent in surimi products. During surimi gelation, water molecules exist as bulk water and motionally restricted water on the protein surface. In order to gain more insights into the surimi heating‐induced gelation processing, and improve the surimi gel properties, and give same advice to manufacturing enterprise, this work was conducted to study the structural changes of protein and water state during surimi gelation processing and performed along with the monitoring of the texture, WHC and other physical characteristics of surimi gel, as well as the microstructure of surimi gel.     

多酚化合物对黄嘌呤氧化酶抑制作用的研究进展

文章主要对近5年来多酚化合物抑制黄嘌呤氧化酶活性、抑制类型及相互作用研究进行了综述,并对其构效关系、结构修饰及金属配合物的开发与应用进行了展望,以期为多酚化合物作为降尿酸食品功能因子和药物的研发提供参考.     

新鲜奶油中黄嘌呤氧化酶的纯化及其酶学性质

采用正丁醇处理、硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等分离技术,从新鲜的稀奶油中纯化得到SDS-PAGE电泳纯的黄嘌呤氧化酶,其最终回收率为19.9%,纯化倍数为82.42,酶比活为8.65U/mg。该黄嘌呤氧化酶的相对分子质量约为280kDa,最适作用温度为40℃,在35℃以下比较稳定;最适pH值是8.5,在pH6.5～8.5时较稳定;Zn2+、Fe2+和K+对黄嘌呤氧化酶活性有促进作用,Ag+、Mn2+、Ca2+和SDS对黄嘌呤氧化酶活性有抑制作用。     

金雀异黄酮通过抑制黄嘌呤氧化酶延缓结肠肿瘤发展

流行病学研究表明摄入大豆制品可以降低罹患结直肠癌的风险,可能是大豆中含有丰富的异黄酮类物质,金雀异黄酮(genistein)是其中的主要成分.最近的研究表明,在核酸分解代谢中,催化嘌呤产生尿酸和活性氧的黄嘌呤氧化酶(xanthine oxidase,XO)可促进肿瘤的发展.同时,黄酮类物质显示出对XO抑制的巨大潜力,为...     

In vitro antioxidant and in vivo xanthine oxidase inhibitory activities of Pandanus amaryllifolius in potassium oxonate‐induced hyperuricemic rats

Xanthine oxidase (XO) plays an important role in the regulation of uric acid and prevents it from being overproduced as in hyperuricemia disease. The combined effects of antioxidant and xanthine oxidase inhibitor would become a promising approach for hyperuricemia treatment. In this research, the antioxidant and xanthine oxidase inhibitory activities of Pandanus amaryllifolius leaf were evaluated. The leaf water extract (PA‐W) showed highest total phenols, and petroleum ether extract (PA‐PE) showed highest total flavonoids contents. The antioxidant activity of DPPH, metal chelating and hydrogen peroxide was highest in PA‐W extract. The treatment of PA‐W extract at 1000 mg kg^?1 body weight in potassium oxonate‐induced hyperuricemic rats showed significant (P < 0.001) decrease in serum uric acid level by 85% and XO activity by 64%, respectively, as compared to the hyperuricemic rats. In conclusion, the P. amaryllifolius possess the dual effect of antioxidant and XO inhibition as potential therapeutic agents in the hyperuricemia treatment.     

梅花总黄酮对黄嘌呤氧化酶的抑制作用及其抗氧化活性评价

评价了梅花总黄酮对黄嘌呤氧化酶（XOD）的抑制作用及其抗氧化活性。通过体外评价实验测定梅花总黄酮对XOD的抑制作用,并分别采用DPPH自由基法、铁离子还原法（FRAP）和血液总抗氧化能力测定法评价其抗氧化活性。结果显示,梅花总黄酮对XOD的抑制呈现浓度依赖关系,半抑制浓度（IC50值）为85.45μg/mL;梅花总黄酮清除DPPH自由基的能力强于竹叶黄酮,但弱于维生素C和芦丁;梅花总黄酮还原铁离子的FRAP值为3.38mmol/mg,是芦丁的1.44倍和竹叶黄酮的1.29倍;血液总抗氧化能力的测定结果从强到弱依次为：维生素C〉梅花总黄酮〉竹叶黄酮〉芦丁。研究表明,源自青梅花的生物总黄酮具有优良的生物抗氧化能力和显著的XOD抑制活性,可作为潜在的抗氧化应激和预防高尿酸血症的膳食功能因子进行深入研究和开发。