Nucleostemin siRNA对结肠癌细胞株HT-29细胞凋亡的影响

利用RNA干扰技术沉默结肠癌细胞株HT-29细胞中Nucleostemin(NS)基因的表达,并分析其对HT-29细胞凋亡的影响,进一步利用半定量RT-PCR和Western blotting技术检测细胞凋亡相关基因caspase-3/9 mRNAs和蛋白的表达.结果表明,NS基因的沉默能明显提高caspase-3/9的活性(P0.05),并诱导细胞发生凋亡,此外,HT-29细胞中NS基因沉默后,caspase-3/9mRNAs和蛋白的表达均明显升高,提示NS基因沉默介导的细胞凋亡与caspase-3/9基因表达的升高密切相关.     

硒诱导人结肠癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨硒对体外培养的人结肠癌细胞凋亡影响作用.方法将不同浓度的亚硒酸钠(Na2SeO3)分别加入到接种有体外培养的人结肠癌细胞悬液的培养瓶中,于不同时间应用流式细胞仪检测细胞凋亡率结果显示Na2SeO3可诱导结肠癌细胞凋亡,且该作用与Na2SeO3浓度和作用时间有关.结论硒可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而达到抗肿瘤的作用.     

陡脉冲诱导在体瘤细胞凋亡的实验及分析

检测陡脉冲电场作用下Wistar大鼠在体瘤细胞的Bcl-2和Bax基因编码蛋白表达,探讨陡脉冲诱导在体瘤细胞凋亡的机理.用免疫组织化学法和原位缺口末端标记(TUNEL)法分别检测18例荷有Walker-256瘤株的Wistar大鼠瘤细胞中Bcl-2和Bax蛋白表达阳性率和凋亡细胞百分率.结果表明:1)陡脉冲电场对在体瘤细胞有显著的治疗作用,治疗组可见大量肿瘤坏死组织,对照组瘤细胞呈弥漫性密集分布,浸润性生长;2)TUNEL检测结果:治疗组的细胞凋亡率明显高于对照组;3)Bcl-2、Bax蛋白表达:陡脉冲电场作用后,Bcl-2蛋白表达减弱,Bax蛋白表达增强.陡脉冲电场能诱导瘤细胞凋亡,其分子机制是下调Bcl-2蛋白表达,增强Bax蛋白表达.     

JR6对人结肠癌细胞HT-29氧化还原系统影响

探讨新型抗肿瘤药物JR6诱导人结肠癌细胞HT-29凋亡机制.使用噻唑兰比色法(MTT)检测JR6对人结肠癌细胞HT-29的生长抑制作用,并测定HT-29细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)浓度.JR6对HT-29细胞生长有明显抑制作用,可以降低HT-29细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性,升高MDA浓度.JR6对HT-29细胞有明显的细胞毒作用,其IC50为39.8μg/ml,可能通过影响HT-29细胞中SOD、GSH-Px、CAT活性和MDA浓度,达到诱导HT-29细胞凋亡的目的.     

菟丝子提取物对小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

利用免疫组织化学超敏SP法检测SD大鼠摘除卵巢前后及菟丝子提取物治疗后小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化,探讨菟丝子提取物对大鼠小脑皮质和深层核团中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响.结果,摘除双侧卵巢,小脑皮层及小脑深层核团中Bax阳性细胞数及其表达强度不同程度上升,而Bcl-2阳性细胞数及其表达强度不同程度降低;菟丝子提取物治疗后,Bax和Bcl-2的表达不同程度地恢复.结论:中药菟丝子提取物能够不同程度地下调小脑皮层及小脑深层核团中Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达,从而对小脑神经元具有保护作用.     

雌激素和菟丝子提取物对大鼠小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

利用免疫组织化学超敏SP法检测SD大鼠摘除卵巢再用17β-雌二醇和中药菟丝子提取物治疗后小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的变化.结果,摘除双侧卵巢,小脑皮质及深层核团中Bcl-2表达不同程度降低,而Bax的表达出现不同程度的上升;给予外源性雌激素及菟丝子提取物治疗后,两种蛋白的比例基本恢复正常,而且两者之间差异不显著.结果表明,雌激素和中药菟丝子提取物都能够不同程度地下调小脑皮质及小脑深层核团中Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白的表达,从而对小脑神经元具有保护作用,中药菟丝子提取物可以部分代替雌激素抑制和延缓神经元凋亡.     

西达本胺通过线粒体凋亡途径诱导结肠癌HCT-15细胞凋亡

研究西达本胺(Chidamide)对结肠癌细胞系HCT-15的增殖抑制作用及机制. 以不同浓度西达本胺处理HCT-15细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况及细胞的药物敏感性;平板克隆形成实验检测细胞体外克隆形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡;EdU实验检测细胞增殖周期;Western blot检测乙酰化组蛋白、线粒体凋亡途径相关蛋白、细胞周期相关蛋白表达水平的变化. 结果表明:西达本胺抑制HCT-15细胞增殖呈浓度和时间依赖性,细胞体外克隆形成能力减弱,凋亡增多,细胞分裂相明显减少、总周期变慢,乙酰化组蛋白H3和H4、线粒体介导的相关凋亡蛋白表达上调、p21、p27表达上调、CDK2、CyclinA2蛋白表达下调. 西达本胺可抑制HCT-15细胞增殖,通过线粒体途径诱导细胞凋亡并阻滞细胞周期.     

黄荆子中一个木脂素成分的分离与NMR解析

木脂素类是黄荆子中重要的抗风湿、抗癌成分.结合文献调研,确定了从黄荆子分离木脂素的可行提取工艺方案.利用高效液相色谱仪(HPLC)对样品进行粗分析,再综合运用色谱技术将经过高效液相分析的样品进行化学成分的分离,最终从黄荆子中分离出1个木脂素化合物vitcannasides B,并进行了¹H NMR、¹³C NMR、DEPT、HMBC、HSQC、¹H-¹H COSY、NOESY等核磁共振数据测定,对其进行详细NMR解析,特别是化合物上葡萄糖基团的准确解析未见报道.     

白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌HT-29细胞增殖及Hedgehog信号传导通路表达的影响

目的:观察白花蛇舌草乙醇提取物对人结肠癌HT-29细胞增殖及Hedgehog信号传导通路表达的影响.方法:采用人结肠癌细胞HT-29常规体外培养,随机设定空白组和不同浓度(1、3、5mg/mL)白花蛇舌草乙醇提取物组,干预24h,倒置显微镜观察细胞形态变化；MTT法测定不同浓度药物对HT-29细胞增殖的影响；RT-PCR检测药物作用后HT-29细胞Shh、Ptch、Smo和Gli-1mRNA的表达.结果:白花蛇舌草乙醇提取物干预后,能抑制HT-29细胞增殖,并呈现出量效作用；Shh、Ptch、Smo和Gli-1 mRNA 表达随药物浓度的增加而减少.结论:白花蛇舌草乙醇提取物能抑制HT-29细胞与其可抑制Shh、Ptch、Smo和Gli-1的表达有关.     

藏药材纤毛婆婆纳乙酸乙酯提取物的抗癌活性及其机制研究

采用MTT法检测纤毛婆婆纳(Veronica ciliata Fisch.)乙酸乙酯提取物(ethyl acetate extract,VEAE)对五种不同癌细胞(A549,Hela,U20S,MCF-7和SMMC-7721)的增殖抑制作用,筛选出对VEAE最敏感的细胞,并进一步运用DAPI染色、Annexin V/PI双染及荧光定量PCR(qRT-PCR)来探究其作用机制.MTT结果显示,VEAE对五种癌细胞的增殖均有抑制作用,并呈现时间和剂量的依赖效应,其中对MCF-7细胞的抑制作用最为显著,处理48h后其IC50达到最低,为63.42±0.19μg/mL;DAPI染色和Annexin V/PI双染结果发现,VEAE处理MCF-7细胞后,细胞皱缩变圆,凋亡细胞的数量增加,从对照组的5.00%上升到47.45%;qRT-PCR结果表明;VEAE处理MCF-7细胞后,凋亡基因Caspase-3,Caspase-9和Bax的表达上调,抗凋亡基因Bcl-2的表达下调.由此表明VEAE能抑制癌细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡,其机制可能是通过调控与细胞凋亡相关基因的表达来实现.     

一个新的靶点的反义bcl—2寡核苷酸诱导HL—60细胞凋亡的研究

目的：探讨针对bcl-2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸对HL-60细胞bcl-2蛋白表达和凋亡的作用。方法：应用台盼蓝拒染法和流式细胞仪检测HL-60细胞的活性和bcl-2蛋白表达和细胞凋亡的情况。结果：10μmol/L和20μmol/L的反义寡核苷酸能抑制HL-60细胞bcl-2蛋白表达和诱导细胞调亡,并且针对bcl-2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸比针对bcl-2mRNA翻译起始区的反义寡核苷酸作用更强。结论：针对bcl-2mRNA蛋白编码区的反义寡核苷酸能抑制HL-60细胞bcl-2蛋白表达和诱导细胞调亡。     

云芝多糖影响人宫颈癌HeLa细胞的增殖和凋亡的研究

研究云芝多糖(CVP)对宫颈癌HeLa细胞系的增殖、凋亡及产生途径。采用MTT法测定了CVP对HeLa细胞增殖的体外抑制作用,流式细胞仪检测凋亡细胞的比例,qRT-PCR检测P53、Bcl-2和Fas基因在细胞处理前后表达量的变化。结果显示：CVP以时间和剂量依赖的方式抑制HeLa细胞的生长。作用时间在24 h,48 h和72 h时对细胞抑制的抑制率分别为92%、95%和98%;当CVP浓度达到1.25 mg/L时,作用24 h、48 h和72 h时的IC50值分别为0.2507±0.01 mg/L、0.2720±0.04 mg/L和0.2736±0.03 mg/L;当CVP浓度为0.5 mg/L时,作用24 h和48 h后细胞凋亡率分别为26.36% 和63.81%;CVP处理HeLa细胞24 h后,Bcl-2基因的表达被显著下调。研究表明：CVP促进HeLa细胞凋亡,其作用机制与Bcl-2基因的表达下调有关,推测是通过Bcl-2介导的途径促进细胞凋亡。图4表1参30     

胡椒碱对脂多糖和金黄色葡萄球菌抑制人结肠腺癌细胞系表达防御素的拮抗作用

目的:研究胡椒碱(piperine,PIP)对脂多糖(LPS)和灭活金黄色葡萄球菌(SAC)菌体抑制人结肠腺癌HT-29和Caco-2细胞表达防御素(Defensin)的影响.方法:WST-1法检测PIP对HT-29和Caco-2细胞增殖的作用;定量PCR(qRT-PCR)检测人α防御素DEFA5(HD5)和DEFA6(HD6),人β防御素HBD-1以及胰岛再生源蛋白(Reg)Reg IIIγ等mRNA的表达水平.结果:PIP处理可剂量依赖性地抑制HT-29和Caco-2细胞的增殖,半数抑制浓度IC50分别为328.5μmol/L和155.1μmol/L,表明PIP对细胞的毒性较小;定量PCR检测显示,PIP处理对LPS或SAC下调HT-29和Caco-2细胞DEFA5和DEFA6 mRNA表达水平具有显著的拮抗作用,对DEFB1和Reg IIIγmRNA的表达没有明显影响.结论:胡椒碱可能通过拮抗病原体诱导细胞表达防御素的抑制作用,进而发挥其抗肠炎作用.