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IBDV野毒株主要结构蛋白基因RT—PCR方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
借助计算机软件,在分析比较了9个传染性法氏囊病病毒(IBDV)A片段结构蛋白基因的基础上,设计并合成了2对VP2和VP3基因PCR引物,经RT-PCR反应条件优化选择,成功地建立了RT-PCR方法,用于扩增IBDV VP2和VP2基因,经琼脂糖凝胶电泳和分子杂交鉴定,获得4个IBDV野毒株VP2和VP3基因,为IBDV分子生物学研究奠定了基础。 相似文献
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对利用IBDV地方野毒株所制备的囊毒和胚毒二价灭活油乳苗免疫效果进行了比较研究。结果表明,所制备的囊毒灭活苗免疫效果显著优于胚毒灭活苗和活疫苗,在接种后各个时期所产生的抗体效价均显著高于其它两种疫苗(P<0.01),最高AGP效价可达4.8log2;胚苗的免疫效果虽然差于囊苗,但明显优于活疫苗,当活苗免疫组鸡血清中已无可测性抗体时,胚苗组仍具有1.0log2的AGP效价。在攻毒试验中,囊苗组鸡对IBDV标准毒、两株野毒株的攻击均100%地获得了保护;胚苗组也均可获得80%的保护,这两种由地方毒株所制备的疫苗均未呈现出对不同毒株抵抗性的不同,而活苗组对不同毒株的攻击则分别只有53.3%、40%和46.7%的保护率,呈现出一定的差异性。 相似文献
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通过对鸡肾变型传染性支气管炎6个地方毒株的分离,动物回归试验和免疫原性试验,发现其中ZJ93-1株免疫原性最强。经电镜鉴定及理化特性研究。确诊ZJ93-1株属T血清型,为鸡传染性支气管炎肾变型病毒株。 相似文献
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IBDV强毒株与弱毒株对SPF鸡侵染过程的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
用DIG标记PS19探针和异硫氰酸荧光素标记的鸡抗IBDV IgG,对人工接种IBDV强毒株Hrb和弱毒细胞适应株Ts后不同时间段的法氏囊、盲肠扁桃体、脾、肾、肝、胸腺、大腿及胸部肌肉的石蜡切片分别进行原位杂交和荧光抗体检测。同时将各时间段每种组织的石蜡切片进行HE染色以观察组织破坏情况。结果发现,用原位杂交和荧光抗体两种方法首先分别于接种Hrb后8h和16h在法氏囊中检测到IBDV的阳性信号,然后依次是盲肠扁桃体、脾、肾、肝、胸腺。侵害程度以法氏囊最重。实验结果表明:Hrb毒株在组织中复制速度快,并迅速在SPF鸡体内传播。Ts毒株侵染较轻,对器官组织无损伤。 相似文献
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牛病毒性腹泻病毒野毒株的分离鉴定 总被引:6,自引:0,他引:6
牛病毒性腹泻病毒 (BVDV)属于黄病毒科瘟疫病毒属 (Pestivirus) [2 ] ,是一种重要的动物病毒。它不仅是牛病毒性腹泻的重要病原 ,也是青海、内蒙古和新疆地区羔羊腹泻的重要病原之一。自 80年代初在国内发现该病并分离到病原以来 ,已有 15个省、市、自治区陆续查出该病的抗体和分离到病原。王治才等[3] 对新疆 7个地区的羔羊腹泻作了BVDV感染调查 ,平均阳性率为 73.6%。笔者在从事BVDV单克隆抗体研制过程中 ,先后分离到 2株BVDV野毒株 ,现将结果报道如下。1 材料和方法1.1 MDBK细胞 中国科学院上海细胞所… 相似文献
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根据Gen Bank中猪流行性腹泻病毒(PEDV)的基因序列分别设计两对引物,在完成最佳条件筛选、特异性、敏感性试验的基础上,建立一种快速区分PEDV疫苗毒株与野毒株的巢式PCR检测方法。建立的PCR快速检测方法能分别对PEDV疫苗毒株和野毒株扩增出特异性片段,片段大小分别为774 bp、150bp。该方法对传染性胃肠炎病毒(TGEV)、轮状病毒(Po RV)、猪瘟病毒(HCV)、伪狂犬病病毒(PRV)则不能扩增出特异性片段。该方法具有快速、灵敏、特异、通用等特点,可用于实验室的快速诊断、分子流行病学的调查和野毒株的分离鉴定。 相似文献
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GPV野毒株的分离及PCR检测方法的应用 总被引:6,自引:2,他引:6
在本实验中,用根据CPVHI标准毒核苷酸VP1-VP3和VP3两个区段基因序列设计的2特异性引物CRP1/CRP2和CF1/CF2,用该2对引物对从鹅细小病毒野毒感染的病鹅分离的GPV野毒株进行PCR检波,结果2对引物CRP1/CRP2和CF1/CF2,均能特异性地扩增出与预期片段大小相符的0.6bp和1.6bp两个片段,回归试验的结果表明,该CFV野毒株的感染潜伏期为8d,病程为1~3d,致死率达100%。 相似文献
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猪瘟病毒野毒株RT-LAMP可视化检测方法的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
本研究旨在建立一种可视化检测猪瘟病毒(CSFV)野毒株的反转录.环介导等温扩增方法(RT-LAMP).根据CSFV的NS5B基因序列设计一套RT-LAMP引物,以样品的cDNA为模板,利用Bsf DNA聚合酶,在62℃恒温条件下进行扩增,扩增产物中加入sYBR Green I染料直接或在紫外光下观察判定扩增结果.该方法可检测出不同基因型的CSFV厂野毒株,其检出极限为2.5 TCID_(50)的CSFV,与实时荧光定量RT.PCR方法的敏感性相当;特异性试验表明,该方法对猪瘟免化弱毒疫苗株(HCLV)、牛病毒性腹泻病毒以及其它常见猪源病毒均无扩增反应;通过对126份不同样品进行检测比较,该方法与实时荧光定量RT-LAMP检测方法的符合率达100%.与引物.探针能量转移PCR方法的符合率为98.4%.该方法无需特殊仪器,是一种适用于基层的快速、简便的CSFV野毒鉴别检测方法. 相似文献
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新城疫病毒弱毒株分子生物学特性的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
于1996年从长春地区一养鸡场分离到一株新城疫病毒(NDV长春株),经过病毒生物学特性的研究表明该NDV毒株为弱毒株。将NDV长春株纯化培养后,提取病毒RNA,经RT-PCR扩增F基因,并测定出F基因的全部核苷酸序列为1758bp,编码有553个氨基酸残基。与国内外发表的部分NDV病毒的强毒株和弱毒株的相同序列进行比较,其核苷酸同源性在88.2% ̄96.7%之间,氨基酸同源性在90.1% ̄98.1%之间,并与所有弱毒株F蛋白裂解位点区(112 ̄117)氨基酸序列Gly-Arg/Lys-Gln-Gly/Ser-Arg-Leu相同,从基因和分子水平上进一步证明NDV长春株为NDV弱毒株。 相似文献