小剂量3-硝基丙酸预处理对脑缺血沙土鼠海马CA1区及纹状体神经元的影响

目的 :探讨小剂量 3 硝基丙酸 (3 nitropropionicacid ,3 NPA)预处理诱导沙土鼠脑缺血耐受的可行性。方法 :将 5组沙土鼠腹腔分别注射双蒸水 5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、2 0mg/kg 3 NPA ,于注射 3 NPA后 3d ,透射电镜观察纹状体神经元细胞核和细胞器超微结构形态的变化 ;每组均分别于注射后 1d ,2d ,3d ,4d阻断沙土鼠双侧颈总动脉造成前脑缺血模型 ,恢复血流期满时处死动物 ,通过CresylViolet染色观察海马锥体细胞层存活神经元数目结果 :应用不同剂量 3 NPA后 3d ,纹状体神经元细胞核均无明显变化 ,腹腔注射 15mg/kg及 2 0mg/kg 3 NPA组线粒体和粗面内质网轻度肿胀。应用不同剂量 3 NPA 1～ 3d后 ,前脑缺血沙土鼠海马CA1区锥体细胞层存活神经元数目均高于双蒸水对照组 (P <0 .0 1或 0 .0 5 ) ,第 4d则下降 ,与双蒸水对照组比较差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :应用小剂量 3 NPA诱导脑缺血耐受较安全 ,具有时间依赖性 ,无剂量依赖性     

小剂量3-硝基丙酸预处理后鼠脑海马脑源性促红细胞生成素的表达

目的：探讨小剂量3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid，3-NPA)预处理后鼠脑海马脑源性促红细胞生成素(Epo)的表达变化，揭示3-NPA预处理的机制。方法：雄性沙土鼠48只，随机分为正常对照组(n=12)和3-NPA预处理组(n=36)。3-NPA预处理组腹腔一次性注射3-NPA 5mg／kg后1d、3d、5d，应用免疫组织化学和免疫印迹法观察海马脑源性Epo的表达变化。结果：腹腔注射3-NPA后ld、3d，海马区可检测到脑源性Epo的表达，腹腔注射3-NPA后5d，海马区Epo的表达极低，正常对照组无Epo表达。结论：脑源性Epo的表达变化和3-NPA预处理诱导脑缺血耐受的时间相一致，提示Epo的表达与小剂量3-NPA预处理相关。     

3-硝基丙酸预处理对肢体缺血再灌注损伤的保护作用

目的:探讨3-硝基丙酸(3-nitropropionicacid,3-NPA)预处理对肢体缺血再灌注损伤的影响。方法:采用大鼠右后肢缺血再灌注模型,将30只实验大鼠随机分为假手术组、对照组、3-NPA组。测定各组血清磷酸激酶(CPK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)变化,观察腓肠肌组织学及超微结构变化。结果:对照组和3-NPA组血清CPK、LDH、MDA与假手术组相比明显升高(p<0.05);3-NPA组各指标与对照组相比显著降低(p<0.05)。结论:3-硝基丙酸预处理对肢体骨骼肌缺血再灌注损伤具有保护作用。     

3-硝基丙酸预处理对多巴胺神经元生存预后影响的研究

目的观察不同3-硝基丙酸（3-Nitroproplonle acid，3NP）预处理方式对黑质多巴胺神经元（Dopaminergic neurons，DA）存活能力的影响，寻求3NP预处理保护黑质DA神经元的最佳预处理方式。方法以6-OHDA为损毁剂建立大鼠在体及离体PD模型。在体3NP预处理组于造模前2h、1d、3d、5d、7d分别腹腔注射不同荆量3NP（10mg／kg、20mg／kg、40mg／kg），观察6-OHDA损毁2周后大鼠的行为学；黑质脑片体系在含0．01mM6-OHDA的人工脑脊液Ⅱ（ACSFⅡ）中加入不同浓度3NP（0．1mM、0．3mM、0．6mM）共孵育脑片至不同时间点（0、5h、1h、2h、3h）。采用免疫组织化学方法检测黑质酪氨酸羟化酶（Tyrosine hydroxylase，TH）蛋白表达。结果20mg／kg3NP预处理的各个时间点均可以显著改善APO诱发PD大鼠的旋转行为；同时3NP可以抑制6-OHDA诱导的黑质TH样免疫反应阳性细胞数减少。其中在离体脑片体系中，0．3mM3NP预处理1h、2h时间差异具有显著性（P〈0．05或P〈0．01）；在体试验中20mg／kg3NP预处理的各个时间点差异均有显著性（P〈0．05），其中以3NP预处理3d显著性差异更加明显（P〈0．01）。结论适宜剂量3NP预处理对PD大鼠黑质DA神经元具有保护效应，3NP预处理可能成为延缓DA神经元变性的新策略。     

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注细胞凋亡的影响

目的 研究3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响。方法 采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,将20只大鼠随机分成4组,假手术组、缺血组、3-硝基丙酸预处理组、3-硝基丙酸预处理+5-羟癸酸盐组。观察各组凋亡细胞数和凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的变化。结果 与缺血组比较,3-硝基丙酸预处理组使凋亡细胞数明显减少（85.96±11.51） vs( 123.96±13.45）, Bcl-2表达增高(0.18±0.02 )vs (0.13±0.01),Bax表达下降(0.14±0.02) vs( 0.20±0.03),差异有显著性（P<0.01）。3-硝基丙酸预处理+5-羟癸酸盐组与缺血组比较差异无显著性（P>0.05）。结论 3-硝基丙酸预处理可通过开放线粒体ATP敏感性钾通道,上调缺血半暗带区Bcl-2蛋白表达,下调Bax蛋白表达,减少神经元凋亡,对脑缺血损伤起保护作用。     

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性脑缺血Caspase-3表达和活性的影响

目的探讨小剂量线粒体毒素3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NPA)预处理对大鼠局灶性脑缺血半暗带半胱天冬酶-3(Caspase-3)表达和活性的影响。方法大鼠腹腔注射3-NPA20mg/kg或生理盐水3d后制作局灶性脑缺血再灌注模型,采用免疫印迹技术和荧光测定法观察3-NPA预处理对缺血2h再灌注24hCaspase-3的表达和活性的影响。结果缺血2h再灌注24h3-NPA预处理组Caspase-3表达减弱(P<0.05),活性降低(P<0.05),与对照组比较差异有显著性。结论3-NPA预处理诱导脑缺血耐受与降低Caspase-3活性,进而抑制神经细胞凋亡有关。     

3-硝基丙酸预处理对大鼠局灶性缺血-再灌注脑损伤的影响

目的探讨线粒体毒素3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid,3-NPA)预处理对大鼠缺血-再灌注脑损伤的保护作用.方法大鼠腹腔注射3-NPA(20 mg·kg-1)3 d后制作大脑中动脉缺血-再灌注模型,采用红四氮唑(TTC)染色、荧光法和干湿重法观察3-NPA预处理对缺血2 h再灌注24h和48 h脑梗死体积、血脑屏障通透性和脑组织含水量的影响.结果缺血2 h再灌注24 h和48 h,3-NPA预处理组脑梗死体积变小,血脑屏障通透性降低,脑组织含水量减少,与对照组比较有显著性差异(均P＜0.05).结论3-NPA预处理可以诱导脑缺血耐受,降低血脑屏障通透性、减轻脑水肿可能是其机制之一.     

7-硝基吲唑对大鼠局部脑缺血急性期保护作用的研究

目的 研究7-硝基吲唑在鼠脑局灶缺血中的保护作用。方法 线拴法建立大鼠大脑中动脉闭寒模型。观察应用7-硝基吲唑前后鼠多项指标变化规律。结果 7-硝基吲唑的适宜剂量为50mg/kg,可显著抑制nNOS活性,减少脑含水量及梗死体积,但对神经功能缺损改善无显效。结论 7-硝基吲唑对鼠脑有保护作用。     

地昔帕明对3-硝基丙酸所致小鼠运动功能障碍的治疗作用

目的探讨抗抑郁药地昔帕明对神经毒剂3-硝基丙酸所致小鼠运动功能损伤的治疗作用。方法选用8周龄雄性昆明小鼠36只,随机分为生理盐水对照组、地昔帕明对照组、3-硝基丙酸模型组、3-硝基丙酸模型+地昔帕明治疗组。小鼠神经损伤模型腹腔注射总剂量为320 mg/kg的3-硝基丙酸复制;地昔帕明治疗采用10 mg/(kg.d),连续12 d。采用Rotarod test和Pole test检验小鼠的运动功能。结果 3-硝基丙酸能够导致昆明小鼠运动功能障碍,模型小鼠Rotarod时间与生理盐水对照组相比明显缩短,Pole test转头时间和总时间明显延长。10 mg/(kg.d)地昔帕明能够明显延长3-硝基丙酸毒性损伤小鼠Rotarod时间,降低Pole test转头时间和总时间。结论地昔帕明对3-硝基丙酸所致的小鼠运动功能损伤具有一定的治疗作用,为研究抗抑郁药治疗与纹状体神经元损害有关的神经精神疾病提供了动物实验依据。     

地昔帕明对3-硝基丙酸所致小鼠运动功能障碍的治疗作用

目的探讨抗抑郁药地昔帕明对神经毒剂3-硝基丙酸所致小鼠运动功能损伤的治疗作用。方法选用8周龄雄性昆明小鼠36只,随机分为4组:生理盐水对照组、地昔帕明对照组、3-硝基丙酸模型组、3-硝基丙酸模型+地昔帕明治疗组。小鼠神经损伤模型腹腔注射总剂量为320 mg/kg的3-硝基丙酸复制;地昔帕明治疗采用10 mg/kg,连续12 d。采用转棒实验和爬杆实验检验小鼠的运动功能。结果 3-硝基丙酸能够导致昆明小鼠运动功能障碍,模型小鼠在转棒上停留的时间与生理盐水对照组相比明显缩短,爬杆实验转头时间和总时间明显延长。地昔帕明能够明显延长3-硝基丙酸毒性损伤小鼠在转棒上停留的时间,降低爬杆实验的转头时间和总时间。结论地昔帕明对3-硝基丙酸所致的小鼠运动功能损伤具有一定的治疗作用,为研究抗抑郁药治疗与纹状体神经元损害有关的神经精神疾病提供了动物实验依据。     

硫氧还蛋白对缺氧/复氧大鼠海马神经元caspase-3活性的影响

目的：探讨硫氧还蛋白（Trx)和caspase-3在鼠海马神经元缺氧／复氧损伤中的作用。方法：原代培养10d的新生鼠海马神经元缺氧3h复氧12h,24h和48h，分为正常对照组、缺氧／复氧组和Trx组，用MTT比色法测定各时点的神经元存活率；底物裂解法检测caspase-3活性。结果：缺氧／复氧组海马神经元复氧12－48h，海马神经元caspase-3样蛋白酶活性明显增高，以复氧24h为最高，而存活率进行性下降；Trx组caspase-3样蛋白酶活性曲线与缺氧／复氧组相似，但明显下降，细胞存活率较缺氧／复氧组明显提高。结论：海马神经元缺氧／复氧后，caspase-3样蛋白酶被激活，参与神经元损伤过程；Trx对神经元有保护作用。     

A Study of Epileptiform Hippocampal Unit Activity Induced by Intracerebroventricular Injection of Kainic Acid in Rats

Hippocampal EEG and unit activities were recorded after seizures were initiated withintracerebroventricular injection of kainic acid (KA) in rats. Three kinds of hippocampal unit re-sponses to KA were found:1. Positive units: These units were characterized by high frequency burst firing temporally coincidentwith each hippocampal EEG spike.2. Negative units: These units showed a cessation of firing during each EEG paroxysm.3. Indifferent units: These units showed no evident chanses coincident with EEG paroxysms.Most positive units were hippocampal complex spike cells which correspond histologically tohippocampal pyramidal cells, and most complex spike cells fired in positive bursts after KA treat-ment. In the early period after KA injection, the positive units were concentrated in CA3 area. It was suggested that the activities of positive units may be considered as the typical epileptiformhippocampal unit activity induced by KA, and the firing features of negative units ma be the resultof the influence of hippocampal inhibitory interneurons or the result of excessive cellulardepolarization, and that hippocampal pyramidal cells were more sensitive to the epileptogenic ef-fect of KA than hippocampal intemeurons, and some pyramidal cells in CA3, in particular,may serve as "epileptic pacemaker neurons " in KA-induced epileptogenesis.     

β-淀粉样蛋白所致模拟老年性痴呆动物模型的建立

目的 建立β-淀粉样蛋白(Aβ)诱导的模拟老年性痴呆(Alzheimer’s disease，AD)的动物模型。方法 将凝聚态Aβ1-40注射入大鼠左侧海马，Morris水迷宫试验检测大鼠的学习记忆能力，病理检测采用尼氏染色方法。结果 海马内注射凝聚态Aβ1-40后，大鼠在定位航行试验中，平均逃避潜伏期明显延长；在空间探索试验中，跨越原平台位置的次数明显减少；在注射点附近可见弥漫性胶质细胞浸润和局部神经元的大量丢失。结论 海马内注射凝聚态Aβ1-40可以模拟AD的学习记忆障碍、炎症反应和神经元损伤等行为学和病理学方面的特征。     

脂多糖联合海人藻酸诱导的热性惊厥导致幼鼠海马神经元凋亡

目的观察热性惊厥(FS)幼鼠海马神经细胞凋亡数变化,为探讨幼鼠FS脑损伤机制及寻求有效的防治措施提供理论依据。方法按析因设计,64只14日龄SD幼鼠随机均分为4组(n=16),即对照组:生理盐水(NS)组;试验组:脂多糖(LPS)+海人藻酸(KA)组;KA组;LPS组。采用LPS联合低剂量KA腹腔注射的方法诱导幼鼠FS。H-E染色观察幼鼠海马神经元显微结构的改变,TUNEL法检测海马神经细胞凋亡数的变化。结果 LPS+KA组16只幼鼠均出现FS,发作时肛温为(39.3±0.4)℃;其他组幼鼠均未出现FS。LPS+KA组、LPS组、KA组及NS组幼鼠末次腹腔注射后24h,海马CA1区神经细胞凋亡数分别为(20.63±3.78),(11.63±3.58),(4.06±2.86)及(3.06±2.01),48h分别为(20.63±1.69),(12.25±3.62),(5.50±3.06)及(3.19±1.98)。FS持续时间与海马细胞凋亡程度呈正相关(r=0.866,P<0.01)。结论 LPS联合低剂量KA腹腔注射诱导FS可导致幼鼠海马神经细胞损伤。     

腺苷A2A受体激活抑制低氧性肺动脉平滑肌细胞增殖的机制

目的 研究腺苷A2A受体(adenosine A2A receptor,A2AR)激活对低氧肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)增殖的影响及其作用机制.方法 体外培养SD大鼠PASMCs,经免疫组化鉴定,离体培养分7组:①正常对照组(control group);②低氧组(chronic hypoxia,CH);③CH+线粒体敏感性钾通道(MitoKArP)开放剂diazoxide组;④CH+MitoKATP阻断剂5-HD组;⑤CH+A2AAR特异性激动剂CGS21680组;⑥CH+CGS21680+diazoxide组;⑦CH+CGS21680 +5-HD组.CCK-8染色法检测CGS21680对离体大鼠PASMCs增殖的影响,实时荧光定量法检测CGS-21680对大鼠PASMCs腺苷A2A受体基因表达的影响.结果 低氧使CCk-8吸光度(absorbance,A)值升高(P＜0.01),CGS-21680干预使低氧下A值明显下降,且CGS-21680和5-HD协同作用下效果更明显.Real-time RT PCR显示低氧和CGS-21680干预组A2A AR表达显著升高(P＜0.01),且以CGS-21680联合5-HD组升高最明显.结论 A2AAR激活剂CGS-21680抑制低氧PASMCs增殖,可能与阻断MitoKATP通道开放有关.     

施普善对慢性低氧高二氧化碳大鼠学习记忆及海马caspase-3表达的影响

目的：观察脑活素（施普善）对慢性低氧高二氧化碳大鼠学习记忆功能的影响及大鼠海马中caspase-3表达的变化,并探讨可能的作用机制。方法：筛选八臂迷宫训练后清洁级的雄性SD大鼠32只,随机均分为对照组、模型组、施普善1 mL/kg组和施普善2.5 mL/kg组。采用八臂迷宫观察干预前后大鼠空间学习记忆能力的变化,Western-blot法检测大鼠海马caspase-3蛋白的表达。结果：与对照组比较,模型组大鼠空间学习记忆能力下降,海马中caspase-3明显增高。与模型组大鼠比较,2种剂量施普善干预组大鼠的学习记忆能力明显改善,且海马中caspase-3的表达减少。结论：施普善具有改善慢性低氧高二氧化碳大鼠空间学习记忆作用,可能与抑制海马中caspase-3表达有关。     

熊果酸诱导肺腺癌SPC-A-1细胞凋亡及其机制

目的 研究熊果酸(UA)对人肺腺癌SPC-A-1细胞凋亡的影响及其作用机制.方法 应用MTT法检测UA对SPC-A-1细胞增殖的作用.透射电镜观察细胞形态学变化.流式细胞仪(FCM)分析细胞周期和细胞凋亡率.RT-PCR探讨UA对SPC-A-1细胞GDF15和p21基因表达的影响.结果 UA抑制SPC-A-1细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性.透射电镜观察UA作用的SPC-A-1细胞,出现胞质大量空泡变性、细胞核凝集等细胞凋亡形态学改变.流式细胞术检测到凋亡峰.30、40、50μmol/L的UA作用SPC-A-1细胞48h后,其凋亡率分别为1.83%、18.6%、22.6%,细胞周期阻滞于S期,且呈浓度依赖性.RT-PCR证实UA能使SPC-A-1细胞GDF15、p21基因表达上调.结论 UA对SPC-A-1细胞具有抑制增殖和诱导凋亡作用,其机制可能与上调GDF15和p21基因表达相关.     

Cerebral Ischemic Tolerance Induced by 3-nitropropionic Acid Is Associated with Increased Expression of Erythropoietin in Rats

Preconditioning of brain tissues with sub-lethal stresses or stimuli can result in resistance to subsequent lethal ischemic events in a response called ischemic tolerance[1] [2—4] . Recently, it was reported that such a neuronal tolerance could be induced by irreversible inactivation of succinate dehydrogenase (SDH), which is a mitochondrial complex Ⅱ (Krebs cycle) enzyme. SDH is the main respiratory electron transfer pathway into the plastoquinone (PQ) pool and could limit the damage inf…     

HL—60细胞在诱导分化中DNA含量及细胞动力学观察

以显微分光光度法和流式细胞计观察经维甲酸(RA)或二甲亚砜(DMSO)处理 HL-60细胞的 DNA含量和细胞增殖的动态变化.结果显示 HL-60细胞的 DNA 含量由原来高出一倍以上降至接近正常.其中 RA处理细胞 DNA 在处理后第3天和第5天有二次剧降,而 DMSO 处理细胞 DNA 量呈平缓逐日下降.两种处理细胞在诱导第2天 G_1/G_0期细胞明显增多,并在第3天达到高峰。对两种诱导剂作用机理进行了讨论.     

用单细胞凝胶电泳法研究慢性染砷对子代大鼠海马DNA的影响

目的：以单细胞凝胶电泳法（SCGE）研究慢性染砷对子代大鼠海马神经DNA的影响.方法：从妊娠期前2周开始,用不同剂量的含砷水和自来水分别饲种鼠及其子代大鼠.子鼠染砷7个月后（从娩出后计算）取子鼠的海马组织制备单细胞悬液,进行SCGE实验.结果：长期慢性染砷对子代大鼠海马组织DNA具有显著的损伤作用,长期高剂量染砷损伤主要以中等程度损伤为主,低剂量染砷损伤以低度损伤为主,统计分析结果提示,高染砷组相对于对照组差异显著（P〈0.01）.结论：通过SCGE实验,观察到慢性染砷可引起海马组织的细胞DNA损伤或损伤易感性增加.