神经酰胺对人膀胱癌细胞凋亡诱导作用及其机制

目的 探讨神经酰胺（cer）对人膀胱癌细胞的凋亡诱导作用及其机制。方法 不同浓度C2-神经酰胺（C2-cer）作用于膀胱癌T24细胞，噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞存活率，吖啶橙（AO）荧光染色、流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡，并对半胱天冬酶（Caspase）-3活性、bcl-2蛋白含量和细胞色素C在细胞内的分布变化进行检测。结果 T24细胞存活率与C2-cer浓度呈负相关（r=-0．973，P＜0．01）。对照组和5、10、20、40μmol／L的C2-cer处理组凋亡率分别为2．95％、9．18％、14．23％、29．12％、48．46％，C2-cer处理组凋亡率显著高于对照组（P＜0．01）。Caspase-3活性随C2-cer浓度增加而增加，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0．05）。在C2-cer作用下，T24细胞内bcl-2蛋白含量下降，细胞色素C向细胞质释放。结论 降低bcl-2蛋白表达水平，从而促进线粒体细胞色素C释放和Caspase-3激活可能是C2-cer诱导膀胱癌细胞凋亡的重要机制。     

丝裂霉素C膀胱内灌注预防浅表性膀胱癌术后复发

对50例病人长期用丝裂霉素C膀胱内灌注预防浅表性膀胱癌术后复发,随访16～94个月,总有效率为76%。丝裂霉素C无骨髓抑制的全身副作用,持续应用证明安全有效。     

丝裂霉素C治疗浅表性膀胱肿瘤的基础研究

ＭＭＣ为浅表性膀胱癌治疗和预防复发的常用药物之一，临床报道疗效相差较大，其中一个重要原因是没有统一的治疗方案及规范的病例选择标准。本文简述ＭＭＣ作用于膀胱肿瘤的基础研究有助于规化治疗方案及病例选择。     

丝裂霉素C联合抗Fas单抗、C2神经酰胺对人膀胱癌T24细胞的抑制作用

化学治疗是膀胱癌术后治疗的重要方法，但药物的毒副作用和肿瘤的耐药现象常使治疗归于失败。合理的联合用药可以获得协同作用，减少用药剂量，降低毒副反应，延缓耐药性产生。本研究于2004年9月至11月于2004年9月至11月应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测丝裂霉素C（MMC）、抗Fas单抗和C2神经酰胺（C2-Cer）对人膀胱癌T24细胞株生长的抑制作用，并应用Chou—Talalay联合指数法判定药物之间联合应用的效果。     

丝裂霉素C诱导成纤维细胞凋亡的作用及其机制

目的 观察丝裂霉素C(MMC)对成纤维细胞诱导凋亡的作用及机制.方法 体外培养成纤维细胞并传至5～8代,分别用含有0～0.3g/L MMC的MEM培养液处理成纤维细胞12h后CCK-8试剂盒检测不同浓度MMC对成纤维细胞的生长抑制效果;以0～0.2g/L MMC处理细胞爬片后用Hoechest33342细胞核染色,荧光显微镜下观察凋亡细胞核形态并用image pro-plus软件计数凋亡细胞;按不加药培养细胞12 h作对照组、0.2g/L.MMC培养细胞12h、P13K/Akt抑制剂LY294002 100 nmol/L与MEK/ERK抑制剂PD98059 100nmol/L分别处理细胞1h后换新鲜培养基培养11h分为4组,提取胞质蛋白,Western blot法检测Caspase-3、p-ERK1/2、p-Akt表达量.结果 MMC对成纤维细胞的抑制率与药物浓度呈正相关性,0.2g/L MMC对细胞活性抑制率达50.21%;Hoeeheat33342细胞核染色随MMC浓度升高出现凋亡细胞核特征的染色质凝聚,边集,呈亮蓝色核的比率逐渐增高,凋亡细胞计数显示0.05、0.1、0.2g/L MMC处理组凋亡率显著高于其他低浓度组,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot检测0.2 g/L MMC组、PD98059组、LY294002组C8spase-3表达均显著高于对照组,p-ERK1/2、p-Akt表达均较对照组降低.结论 一定浓度的MMC可诱导成纤维细胞发生凋亡,其效应途径部分是通过降低ERK1/2、Akt的磷酸化水平使胞质内凋亡执行蛋白Caspase-3的表达水平增加,诱导成纤维细胞由正常增生状态转而发生凋亡减少胶原纤维生成,从而抑制瘢痕形成.     

α-干扰素加丝裂霉素C膀胱灌注防治浅表性膀胱癌复发的研究

目的：提高膀胱癌的治疗效果,降低膀胱癌术后复发率。方法：42例膀胱癌患者术后分为两组：（1）α－干扰素＋丝裂霉素C组20例,α-干扰素3000万IU＋丝裂霉素C40mg 生理盐水40ml膀胱灌注,（2）丝裂霉素C组22例,丝裂霉素C40mg 生理盐水40ml膀胱灌注。每周1次,连续6次,然后每2周1次,连续6次,以后每月一次连续2年。结果：随访6－30个月（中位数18个月）,α-干扰素＋丝裂霉素C组复发2例,复发率为10％,丝裂霉素C组复发8例,复发率为36％,两组比较差别有显著性意义（卡方检验,P＜0．05）。结论：α-干扰素＋丝裂霉素C膀胱灌注防治浅表性膀胱癌术后复发疗效优于单用丝裂霉素C灌注。     

2μm激光联合丝裂霉素治疗表浅性膀胱癌的疗效分析

目的 探讨2μm激光联合丝裂霉素治疗表浅性膀胱癌的安全性和有效性.方法 自2009年6月至2012年6月共116例表浅性膀胱癌患者入选研究,平均年龄58.3岁.其中,高级别泌尿上皮乳头状癌18例,低级别泌尿上皮乳头状癌93例,低度恶性倾向泌尿上皮乳头状瘤5例.影像学检查包括盆腔CT和排泄性尿路造影均显示没有膀胱外侵犯,淋巴结转移以及上尿路肿瘤性病变.所有患者在连续硬膜外麻醉下行2μm激光肿瘤切除,术后24h内即刻灌注撕裂霉素一次,然后1周后开始连续8周每周膀胱灌注丝裂霉素一次,然后改为每月一次维持治疗12个月.结果 116例患者总共201个肿瘤应用2μm激光成功切除,每例患者平均手术时间28min.没有出现闭孔神经反射或膀胱穿孔等严重并发症.所有患者均进行了12个月的膀胱灌注化疗.平均随访时间21.3个月,复发率为9.5％.结论 2μm激光联合丝裂霉素治疗表浅性膀胱癌是安全有效的.     

卡介苗和丝裂霉素C交替灌注防治膀胱癌术后复发

对52例膀胱移行上皮癌患者施行膀胱部分切除或经尿道电切,术后应用BCG和丝裂霉素C交替膀胱灌注防止复发。全部患者随访12～94个月,仅3例复发,复发率5.8％。认为:BCG和丝裂霉素C交替灌注可增强防止膀胱癌术后复发的作用。     

卡介苗与丝裂霉素C膀胱灌注预防浅表性膀胱癌复发疗效及毒性比较的Meta分析

目的比较卡介苗（BCG）与丝裂霉素C（MMC）膀胱灌注治疗对浅表性膀胱癌复发的预防作用及治疗毒性等方面的特点。方法收集国内外关于BCG与MMC膀胱灌注治疗浅表性膀胱癌的比较性研究文献，对结果进行统计学综合分析（Meta分析）。采用优势比（OR）及其95％可信区间（95％CI）作为评价比较疗效及毒性差异的指标。统计学分析采用RevMan4．2软件。结果共收集国内外17个临床研究，包括1600例进行BCG、1503例进行MMC膀胱灌注治疗的患者被纳入分析。最大随访期内，BCG治疗组与MMC治疗组分别有599例（37．4％）、684例（45．5％）复发。Meta分析显示，BCG与MMC膀胱灌注治疗预防肿瘤复发的疗效差异有统计学意义，BCG显著优于MMC（OR0．58，95％CI 0．42～0．80，P=0．0009）。8个较详细报道治疗副作用的比较研究中，Meta分析显示膀胱炎发生率BCG组显著高于MMC组（OR1．97，95％CI 1．31～2．98，P=0．001）。结论BCG膀胱灌注预防浅表性膀胱癌复发作用优于MMC，可以显著减少肿瘤复发，但膀胱炎发生率明显高于MMC。     

抗人IgG抗体与丝裂霉素联合应用治疗膀胱癌的实验研究

目的 探讨抗人IgG抗体和丝裂霉素(MMC)联合应用对人膀胱癌细胞株的抑制作用及机制.方法 抗人IgG抗体和MMC单独或联合作用于人膀胱癌T24细胞,噻唑盐(MTT)法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪检测T24细胞的凋亡率,蛋白质印迹法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)和PARP的表达.采用T24细胞裸鼠移植瘤模型进行抗人IgG抗体和MMC的体内抗瘤实验.结果 单独应用抗人IgG抗体和MMC对T24细胞生长抑制率分别为(25.02±6.71)%和(32.31±6.46)%,而二者联用的抑制率达(73.66±5.81)%.PBS、25mg/L羊IgG、25mg/L羊抗人IgG抗体、2mg/L MMC、2mg/L MMCIk 25mg/L羊IgG和2mg/L MMC加25mg/L羊抗人IgG抗体处理T24细胞72 h后细胞凋亡率分别为1.7%、2.3%、20.7%、22.4%、28.3%和53.8%.羊抗人IgG抗体、MMC、MMC加羊IgG和MMC加羊抗人IgG抗体处理T24细胞72 h后出现17 000的Caspase-3和85 000的PARP剪切片断.体内实验显示羊IgG组、羊抗人IgG抗体组、MMC组、MMC加羊抗人IgG抗体组抑瘤率分别为2.31%、12.73%,36.81%和50.51%.HE切片观察见生理盐水组和羊IgG组移植瘤细胞基本无凋亡和坏死,羊抗人IgG抗体组肿瘤细胞凋亡和坏死增多,MMC组和MMC加羊抗人IgG抗体组则见大量肿瘤细胞凋亡和坏死.结论 抗人IgG抗体和MMC联合应用对膀胱癌具有体内外双重抗瘤作用,其抗瘤机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

转染XIAP基因对丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的影响

目的：探讨XIAP基因对低剂量丝裂霉素C(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响。方法：脂质体介导XIAP基因转染膀胱癌T24细胞3天后．用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测XIAP基因的表达．用低剂量MMC诱导细胞凋亡启动,用MTT比色法分析检测癌细胞生长活性．用3末端脱氧核苷酰转移酶介导生物素标记法检测细胞凋亡率。结果：各组癌细胞在低剂量MMC的诱导下发生凋亡、与单用MMC组比较．转染XIAP基因的癌细胞组的凋亡率显著降低。结论：XIAP基因在癌细胞中的过度表达可以明显降低化疗药物诱导的膀胱癌细胞凋亡,其可能在膀胱癌多药耐药中起一定作用。     

低剂量丝裂霉素短时加药诱导膀胱癌细胞凋亡的研究

目的探讨低剂量丝裂霉素（MMC）短时处理,诱导膀胱癌细胞凋亡的可能性。方法应用细胞和分子生物学技术检测各MMC处理条件对靶细胞生长和凋亡的影响。结果低剂量MMC处理EJ细胞1小时或2小时,均出现典型凋亡特征．其中,100mg／L,和20mg／L,MMC对凋亡的诱导作用最佳且处理时间的长短,对抑癌结果无明显影响。结论以一半的临床MMC用药剂量和时间即可有效诱导膀胱癌EJ细胞凋亡,为拟定更合理的膀胱癌腔内化疗方案提供可靠的实验佐证。     

Smac基因促丝裂霉素诱导膀胱癌细胞凋亡的研究

目的 探讨Smac基因的表达对于丝裂霉素(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响。方法 脂质体介导Smac基因转染膀胱癌T24细胞3d后，用低剂量丝裂霉素诱导凋亡启动，噻唑蓝(MTT)比色分析检测癌细胞生长活性，吖啶橙-溴化乙锭荧光染色法及流式细胞术法检测细胞凋亡；免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应检测Smac基因的表达。结果 T24细胞在低剂量丝裂霉素的诱导下发生凋亡，两种方法检测细胞凋亡率，用0．05g／L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为20，50％和18．84％，而经过转染Smac后用0，05g／L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为36，40％和33．52％，差异有统计学意义(P＜0．05)。结论 促凋亡基因Smac在膀胱癌细胞中的活化表达可以明显增强细胞在刺激信号下的凋亡。     

体外膀胱灌注噻替哌和丝裂霉素C的药效学研究

目的　探讨体外膀胱灌注噻替哌和丝裂霉素Ｃ 药物浓度和作用时间对膀胱癌细胞杀伤作用的影响。　方法　用不同浓度的抗肿瘤药物与人膀胱移行细胞癌细胞系ＢＩＵ８７ 共同培养至一定时间，采用ＭＴＴ 比色法测定细胞存活率。　结果　细胞存活率与二药的药物浓度和作用时间均呈明显的线性相关（ Ｐ＜ ０ ．０１） ，而且主要与浓度有关；当超过一定作用时间后，存活率仅与药物浓度呈负相关（ Ｐ＜ ０ ．０１） 。　结论　只有保证有效的作用时间，尽量增加药物剂量和有效浓度，才能显著提高膀胱腔内化疗效果，减少复发。     

纤维连接蛋白在膀胱癌丝裂霉素化疗药物耐受中的作用

目的 :探讨纤维连接蛋白 (FN)在膀胱癌化疗药物耐受中的作用。方法 :将T2 4膀胱肿瘤细胞分别接种于包被FN、牛血清蛋白 (BSA)的培养板上孵育 2 4h ,加入不同浓度的丝裂霉素C(MMC)作用 2h ,用MTT比色法检测作用后不同时间肿瘤细胞的存活率 ,用ANNEXINⅤ流式细胞分析仪检测不同时间肿瘤细胞的凋亡率。结果 :FN黏附的膀胱肿瘤细胞在不同浓度MMC作用 2h、12h和 2 4h后的平均存活率为 6 8.3%、4 5 .7%及 5 9.1% ,与BSA黏附的膀胱肿瘤细胞平均存活率 4 5 .0 %、2 1.3%、2 6 .6 %比较 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。FN黏附的膀胱肿瘤细胞在不同浓度MMC作用 2h和 12h后平均凋亡率分别为 1.4 %和 1.0 % ,而BSA组的细胞平均凋亡率为4 .9%和 8.2 % ,两组比较差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :与FN黏附后的膀胱肿瘤细胞对化疗药物MMC的敏感性下降 ,细胞存活率增高 ;FN能抑制MMC引起的膀胱肿瘤细胞凋亡 ,产生药物耐受。     

膀胱癌细胞凋亡检测方法的比较研究

目的 比较几种检测羟基喜树碱（ＨＰＴ）诱导的膀胱癌细胞凋亡的方法。方法 通过流式细胞分析观察ＨＰＴ诱导Ｔ２４膀胱癌细胞凋亡的量效关系;通过荧光染色对凋亡细胞的形态特征进行分析;直接使用苏木素染色进行细胞凋亡的检测;应用ＤＮＡ分析进行ＤＮＡｌａｄｄｅｒ检测。结果 （０．０１￣１０）μｇ／ｍｌ的ＨＰＴ在体外能够诱导Ｔ２４细胞凋亡,其最佳诱导时间在３小时以后。流式细胞（０．０１￣１０）μｇ／ｍｌ的ＨＰ     

全反式维甲酸诱导人膀胱癌细胞T24凋亡的研究

目的　探讨全反式维甲酸（ＡＴＲＡ） 诱导人膀胱癌细胞Ｔ２４ 凋亡的可能性。方法　应用细胞和分子生物学技术检测不同浓度ＡＴＲＡ 对Ｔ２４ 细胞生长和凋亡的影响。结果　３ ×１０－５ ～３ ×１０－ ７ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ可显著抑制Ｔ２４ 细胞增殖。用３×１０－５ ｍｏｌ／Ｌ和３×１０－ ６ ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ 作用细胞６ 天,可出现典型凋亡特征;３ ×１０－５ 、３×１０－ ６ ｍｏｌ／ＬＡＴＲＡ 组及对照组的细胞凋亡率分别为２０ ．１６ ％ 、１５ ．３１％和１ ．４９ ％ ;ＤＮＡ 琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡特征性的ＤＮＡ 梯形带。结论　ＡＴＲＡ对人膀胱癌细胞Ｔ２４ 有剂量生长抑制作用,且可成功地诱导人膀胱癌细胞Ｔ２４ 发生凋亡。