茄碱通过调控Stat3信号通路影响胰腺癌细胞Panc-1中MMP-2和MMP-9表达

目的 探讨茄碱对胰腺癌细胞Panc-1中基质金属蛋白酶2（MMP-2）和基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达的影响及Stat3信号通路在此过程中的作用。方法 实验分为对照组和药物组,药物组分别采用浓度为3.5、7.0和10.5 μmol/L的茄碱对Panc-1细胞进行干预,明胶酶谱法观察茄碱对细胞中MMP-2和MMP-9活性的影响;实时荧光定量PCR检测MMP-2和MMP-9基因的表达变化;Western blotting法检测总蛋白中信号转导及转录激活因子3（Stat3）蛋白的磷酸化表达变化。结果 与对照组相比,药物组（7.0、10.5 μmol/L）MMP-2活性明显下降（t值分别为2.4、6.4,P<0.05）;MMP-9活性亦下降（t值分别为3.2、4.8,P<0.05）。实时荧光定量PCR结果显示,药物组（7.0 μmol/L、10.5 μmol/L）MMP-2基因表达下调（t值分别为8.7、13,P<0.05）;MMP-9基因表达下调（t值分别为3.2、16.3,P<0.05）。Western blotting结果显示,随着茄碱浓度的增加,Panc-1细胞中Stat3蛋白磷酸化受到明显抑制（t值分别为10.2、6.4、6.2,P<0.05）,延长药物处理的时间（12 h、18 h、24 h）亦可抑制Stat3蛋白磷酸化（t值分别为11.4、26.1、20.4,P<0.05）。结论 茄碱可抑制胰腺癌细胞Panc-1中MMP-2和MMP-9的表达,发挥其抗肿瘤转移能力。其具体机制可能与调控Sata3信号通路有关。     

胃癌中MMP-2表达与TNM分期和淋巴结转移的相关性研究

目的研究胃癌组织中基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达与胃癌TNM分期和淋巴结转移的关系.方法用免疫组织化学半定量方法检测135例胃癌组织中MMP-2的表达,统计分析其与TNM分期等的相关性.结果MMP-2的表达与WHO、Lauren和Ming病理分型和淋巴结转移有相关性(P＜0.05),而与Borrmann病理分型、TNM分期中的远处转移(M)、癌组织浸润深度以及分化程度无相关性(P>0.05).本组中的早期胃癌28例,有9例表达MMP-2,其中7例伴有淋巴结转移,占早期胃癌伴淋巴结转移者8例中的87.5%.结论胃癌细胞表达MMP-2与肿瘤的浸润性生长方式和淋巴结转移密切相关;检测MMP-2可作为术前预测早期胃癌有无淋巴结转移和判断预后的辅助指标.     

靶向MMP-2的RNAi抑制胰腺癌PANC-1细胞侵袭性的研究

目的 观察RNAi体外沉默胰腺癌PANC-1细胞MMP-2基因对胰腺癌细胞MMP-2表达及细胞侵袭能力的抑制作用.方法 设计靶向MMP-2的siRNA并构建到pGCsi-U6质粒,重组质粒通过脂质体Lipofectamine 2000转染PANC-1细胞,流式细胞仪检测质粒的转染率,RQ-PCR检测细胞MMP-2的mRNA表达水平;ELISA检测细胞MMP-2蛋白的分泌量;Transwell小室侵袭观察各组细胞侵袭能力;MTT比色法检测各组细胞增殖活性.结果 测序鉴定证实,干扰质粒构建成功,重组质粒转染率最高达82.1%.转染干扰质粒PANC-1细胞的MMP-2基因mRNA表达抑制了71.74%(P＜0.05);MMP-2蛋白分泌下降了49.82%(P＜0.05);细胞侵袭能力抑制率达33.0%(P＜0.05);细胞的增殖活性无明显变化(P＞0.05).结论 靶向MMP-2的RNAi能抑制胰腺癌PANC-1细胞的体外侵袭能力,提示MMP-2可以作为胰腺癌基因治疗的靶点,亟待RNAi能为肿瘤治疗开创崭新局面.     

MMP-1和MMP-2在肝纤维化组织中的表达和意义

目的:探讨MMP-1和MMP-2在肝纤维化组织中的作用及其机制。方法:应用免疫组化法并用图像分析技术定量检测28例手术切除的肝纤维化组织标本中MMP-1和MMP-2的表达。结果:正常肝组织与肝纤维化组织MMP-1表达无显著性差异(P>0.05),而MMP-2的表达在肝纤维化组织中明显高于正常肝组织(P<0.01)。结论:MMP-1和MMP-2可能在肝纤维化的发生和发展中有重要作用。     

下肢曲张静脉MMP-2 与TIMP-2 的表达及其意义

目的:探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)与基质金属蛋白酶抑制物2(TIMP-2)在下肢曲张静脉组织中的表达及其与发病机制的关系.方法:选取26例下肢静脉曲张患者大隐静脉为观察组,11例正常大隐静脉为对照组,采用免疫组织化学法检测大隐静脉组织中MMP-2和TIMP-2的表达与差异性.结果:MMP-2在下肢静脉曲张患者大隐静脉中的表达显著高于正常对照组(P＜0.05),而TIMP-2在两组中的表达差别无统计学意义(P＞0.05).结论:下肢曲张静脉中MMP-2的高表达使其与TIMP-2比例失调,在下肢静脉曲张的发生及发展中可能起重要作用.     

MMP-2、MMP-9、TIMP-1在血管成形术后再狭窄中的表达及其意义的实验研究

目的观察PTA后MMP-2、MMP-9和TIMP-1在血管壁各层随时间的演变规律,探讨其在血管再狭窄过程中的表达及意义。方法48只大鼠制作成颈动脉再狭窄动物模型,选取30只内膜增生满意的标本,分别代表动脉损伤后1、3、7、14、28、42天6个观察时间点,对胶原纤维进行Masson染色。MMP-2、TIMP-1、PCNA进行免疫组织化学染色,MMP-9进行免疫组织化学和原位杂交两种染色。分析它们的表达与内膜增生和血管重塑的关系。结果正常血管不表达MMP-9mRNA及蛋白,损伤后第3天中膜、外膜mRNA表达达高峰,第7天内膜表达达高峰。MMP-9蛋白第7天内膜表达达高峰,且阳性细胞率高于中膜和外膜。第14、28天,血管壁各层表达逐渐下降至基线水平,内膜的阳性细胞主要集中在新生内膜靠近管腔的一侧。内膜MMP-2表达高峰出现晚至第14天,且近内弹力板处MMP-2也有明显的表达。正常血管壁不表达TIMP-1,损伤后第3天,中膜和外膜表达达高峰。第7天,新生内膜表达达高峰,中膜和外膜仍有较高水平表达。结论MMP-9、MMP-2、TIMP-1参与再狭窄,内膜MMP-9表达与早期增殖的细胞向内膜迁移形成新生内膜有关。MMP-2表达与晚期内膜形成、内膜重塑有关。TIMP-1的表达对内膜增生和重塑没有直接作用,其表达升高是机体为适应MMPs升高做出的代偿反应,在维持自身平衡中起作用。     

胃癌组织中E-钙黏蛋白、MMP-2蛋白和MMP-9蛋白的表达及意义

目的探索胃癌组织及癌旁组织中E-钙黏蛋白、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）及基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达情况,并分析其表达与胃癌临床病理特征的关系。方法采用ABC免疫组化染色方法检测40例胃癌组织和癌旁组织中E-钙黏蛋白、MMP-2蛋白及MMP-9蛋白的表达情况,比较2种组织中3种蛋白的表达情况;并分析该3种蛋白与胃癌临床病理特征的关系。结果胃癌组织与癌旁组织比较,其E-钙黏蛋白的表达下调（P〈0．05）,而MMP．2蛋白和MMP．9蛋白表达均上调（P〈0．05）。T3＋T4期、N1～N3期及Ⅲ＋Ⅳ期胃癌组织中E-钙黏蛋白的表达阳性率分别低于T1＋T2期、NO期及Ⅰ＋Ⅱ期胃癌组织（P〈0．05）;MI期和Ⅲ＋Ⅳ期胃癌组织中MMP-2蛋白的表达阳性率分别高于M0期和I＋Ⅱ期胃癌组织（P〈0．05）;T3＋T4期、Ⅲ＋Ⅳ期及低-未分化的胃癌组织其MMP．9蛋白的表达阳性率分别高于T1＋T2期、I＋Ⅱ期及高-中分化胃癌组织（P〈O．05）。结论E-钙黏蛋白可能参与胃癌的浸润及淋巴结转移,MMP-2蛋白可能参与胃癌的远处转移,而MMP-9蛋白可能参与胃癌的分化及肿瘤浸润。该3种蛋白可作为判断胃癌分期和预后的指标。     

RECK、MMP-2和MMP-9基因在结肠癌组织中的表达及其意义

目的：研究回复引导半胱氨酸丰富蛋白Kazal基元（RECK）、基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）基因在结肠癌中的表达情况及其意义。方法：采用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法检测40例结肠癌组织及癌旁组织RECK、MMP-2、MMP-9基因的表达并作相对定量分析。结果：与癌旁组织相比,结肠癌组织中RECK基因表达显著降低（0.46±0.16比0.88±0.08,P〈0.01）,而MMP-2、MMP-9基因表达显著增高（0.41±0.13比0.14±0.13,0.28±0.11比0.12±0.06,P〈0.01）,RECK基因的表达与MMP-2、MMP-9呈显著负相关（r=-0.918,P〈0.01;r=-0.855,P〈0.01）;MMP2、MMP9基因表达水平与淋巴结转移、TNM分期相关;RECK则与肿瘤分化程度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期相关。结论：结肠癌组织中存在RECK基因的低表达和MMP-2、MMP-9基因的高表达,其机制可能与RECK抑制MMP-2和MMP-9基因的表达有关。联合检测RECK、MMP2、MMP9基因的表达对结肠癌的诊断以及转移和临床分期的判断具有重要的意义。     

基质金属蛋白酶-2和纤维粘连蛋白在乳腺癌细胞系的定量表达

目的分析乳腺癌细胞系的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和纤维粘连蛋白(FN)mRNA表达及蛋白表达与乳腺癌转移的关系，阐明MMP-2和FN在乳腺癌转移中的作用。方法采用荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT—PCR)检测乳腺癌细胞系的MMP-2和FN mRNA表达量；采用Western blot方法检测细胞系的MMP-2和FN蛋白表达量。结果MMP-2和FN的mRNA表达量在乳腺癌高转移细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-435中表达下调，而在低转移细胞系MDA-453、T47D、SK-BR-3和不转移细胞系MCF-7、ZR-75-30表达上调。MMP-2和FN蛋白表达在高转移细胞系上调，而在低转移细胞系和不转移细胞系中下调。结论MMP-2和FN mRNA表达和蛋白表达与乳腺癌转移相关，MMP-2和FN mRNA水平和蛋白水平的表达存在负反馈调节。     

癌基因Stat3与结直肠癌临床病理特征的关系

目的探讨转录信号传导子与激活子 3(Stat3)在结直肠癌中的表达情况 ,分析Stat3的表达与结直肠癌临床病理特征的关系。方法应用Westernblot检测 4 5例结直肠癌组织及其邻近正常肠粘膜中Stat3蛋白的表达。结果结直肠癌组织中Stat3蛋白表达水平明显高于正常肠粘膜(P <0 0 5 ) ,平均为正常肠粘膜的 2 4 5倍 ;Stat3表达水平与Dukes分期、分化及淋巴结转移有关 (P <0 0 5 ) ;Stat3表达水平与肿瘤大小、远处转移、年龄、性别以及是否浸润浆膜无关 (P >0 0 5 )。结论Stat3的过量表达可能在结直肠癌的发生、发展过程中起重要作用。     

抑制信号转导与转录激活因子-3基因表达对人胰腺癌细胞转移能力的影响

目的 探讨RNA干扰(RNAi)技术抑制信号转导与转录激活因子-3(STAT3)表达对人胰腺癌细胞株SW1990体内转移能力的影响及其机制.方法 构建STAT3短发卡RNA(shRNA)表达载体,稳定转染SW1990细胞.应用RT-PCR方法 观察STAT3 mRNA表达的改变,EMSA方法 检测STAT3-DNA结合活性的改变.应用裸鼠急性血路转移实验检测细胞体内转移能力的变化,并通过RT-PCR方法 检测基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的改变.结果 STAT3 shRNA表达载体稳定转染SW1990细胞可显著抑制STAT3 mRNA表达和STAT3-DNA结合活性(P＜0.05);裸鼠急性血路转移实验显示,RNAi技术抑制STAT3后,SW1990细胞体内转移能力明显下降(P＜0.05);RT-PCR结果 显示,RNAi技术抑制STAT3后,SW1990细胞中MMP-2和VEGF的mRNA表达明显减低(P＜0.05).结论 RNAi技术能有效抑制STAT3基因表达,并可通过下调MMP-2和VEGF表达抑制胰腺癌细胞体内转移能力.     

COX-2和MMP-7的表达与胃癌组织生物学行为的关系

目的：探讨癌组织中环氧合酶（COX）-2和基质金属蛋白酶（MMP）-7的表达与胃癌组织生物学行为的关系。方法：选取55例进展期胃癌手术的切除标本,以免疫组织化学SP法检测病灶中COX-2和MMP-7的表达情况。分析COX-2和MMP-7的表达与临床病理因素的关系。结果：COX-2和MMP-7的阳性表达率分别为63.6%和72.7%。COX-2的阳性表达率与肿瘤大体类型、分化程度、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关（P〈0.05）;MMP-7的阳性表达率与浸润深度、淋巴结转移、TNM分期相关（P〈0.001）,而与肿瘤大体类型和分化程度无关（P〉0.05）。胃癌组织中COX-2和MMP-7的表达呈等级正相关（P〈0.001）。结论：COX-2和MMP-7与胃癌组织的生物学行为密切相关,其高表达是胃癌组织高侵袭能力和预后不良的标志之一。COX-2和MMP-7可作为反映胃癌组织侵袭转移及判断预后的生物学指标。     

基质金属蛋白酶-2和基质金属蛋白酶-9在前列腺癌组织中表达的免疫组织化学研究

目的：探讨基质金属蛋白酶－2（MMP－2）和基质金属蛋白酶－9（MMP－9）在胶列腺癌组织中的表达及其与前列腺癌侵袭的关系。方法：采用免疫组织化学方法检测前列腺癌组织及良性前列腺增生组织中MMP－2和MMP－9的表达。结果：前列腺癌组织中MMP－2和MMP－9的表达显著高于良性前列腺增生组织（P＜0．01），前列腺癌组织中MMP－2，MMP－9的表达与侵袭程度呈正相关，结论：MMP－2和MMP－9是检测前列腺癌较好的分子标志，可用于前列腺癌的辅助诊断和预后判断。     

胃癌组织中MMP-2和E-cadherin的表达及意义

目的检测胃癌组织中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和E-钙黏附素（E-cadherin）的表达，探讨其与胃癌侵袭转移的关系。方法对我科2003年12月至2004年4月30例胃癌手术患者，采用免疫组化染色检测胃癌组织中MMP-2和E-cadherin的表达情况。结果70％（21／30）的胃癌组织中MMP-2表达阳性。MMP-2表达阳性与浸润深度（P=0．022）、淋巴结转移（P=0．030）和肿瘤分化程度（P=0．043）密切相关，但与性别、年龄、肿瘤位置和直径、Lauren分型及淋巴管侵袭无关（P〉0．05）。46．7％（14／30）的胃癌组织中E-cadherin表达阴性。E-cadherin表达阴性与Lauren分型（P=0．026）、肿瘤分化程度（P=0．011）、淋巴结转移（P=0．038）和淋巴管侵袭（P：0．001）密切相关。结论胃癌组织中MMP-2表达上调和E-cadherin表达下移可能参与肿瘤侵袭转移的发生。