白花蛇舌草提取液诱导多药耐药白血病细胞HL-60/ADR凋亡的研究

目的研究白花蛇舌草乙酸乙酯提取液对多药耐药白血病细胞HL-60／ADR的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色试验观察白花蛇舌草乙酸乙酯提取液对多药耐药细胞HL-60／ADR的抑制作用。采用光镜、电镜技术观察细胞形态结构的改变，利用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果①白花蛇舌草乙酸乙酯提取液能明显抑制HL-60／ADR细胞的生长．药物浓度相当于生药41．67mg／ml时．即具有显著的抑制作用，抑制率呈剂量和时间依赖性，半数抑制浓度（IC50）相当于生药70．41mg／ml。②形态学改变．呈典型的凋亡特征。③白花蛇舌草乙酸乙酯提取液能诱导多药耐药细胞HL-60／ADR凋亡，凋亡率也呈时间和剂量的依赖性。结论白花蛇舌草对多药耐药细胞HL-60／ADR的生长具有极强的抑制作用．诱导其凋亡是其机制之一。     

白花蛇舌草提取液诱导多药耐药白血病细胞HL-60／ADR凋亡的研究

目的研究白花蛇舌草乙酸乙酯提取液对多药耐药白血病细胞HL-60／ADR的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色试验观察白花蛇舌草乙酸乙酯提取液对多药耐药细胞HL-60／ADR的抑制作用。采用光镜、电镜技术观察细胞形态结构的改变，利用流式细胞术检测细胞凋亡率。结果①白花蛇舌草乙酸乙酯提取液能明显抑制HL-60／ADR细胞的生长．药物浓度相当于生药41．67mg／ml时．即具有显著的抑制作用，抑制率呈剂量和时间依赖性，半数抑制浓度（IC50）相当于生药70．41mg／ml。②形态学改变．呈典型的凋亡特征。③白花蛇舌草乙酸乙酯提取液能诱导多药耐药细胞HL-60／ADR凋亡，凋亡率也呈时间和剂量的依赖性。结论白花蛇舌草对多药耐药细胞HL-60／ADR的生长具有极强的抑制作用．诱导其凋亡是其机制之一。     

白花蛇舌草注射液联合化疗治疗晚期恶性肿瘤疗效分析

目的:观察白花蛇舌草注射液联合化疗治疗恶性肿瘤的疗效。方法:选择经细胞学或病理学证实的晚期癌症患者54例,随机分2组,治疗组28例,采用白花蛇舌草注射液联合化疗;对照组26例,应用单纯化疗。结果:治疗组CR2例;PR14例,总有效率为57.1%;对照组CR1例;PR8例,总有效率为34.6%。治疗组消化道反应、骨髓抑制率均低于对照组,而且生存质量高于对照组。结论:白花蛇舌草注射液配合化疗治疗恶性肿瘤疗效显著,安全可靠,值得临床使用。     

藏红花素对HL-60细胞增殖抑制和诱导凋亡作用及其机制

本研究探讨藏红花素(crocin)对人急性白血病细胞HL-60增殖抑制的影响及其促凋亡机制。测定HL-60细胞在不同浓度crocin作用后的生长曲线,用荧光显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布,RT-PCR检测bcl-2、bax基因的表达。结果表明,不同浓度crocin作用后HL-60细胞生长明显受抑制,并呈现出剂量时间依赖关系。在0-5mg/ml范围内HL-60细胞凋亡率逐渐升高。当crocin浓度高于5mg/ml时,HL-60细胞凋亡率并没有升高,反而下降,表现为细胞坏死。流式细胞术检测结果显示,细胞周期被阻滞于G0/G1,且在5mg/ml时阻滞作用最明显。RT-PCR结果显示,bcl-2基因表达明显下调,bax基因表达上调。结论:crocin可诱导HL-60细胞凋亡,并对细胞周期起阻滞作用,其作用机制可能与bcl-2基因表达抑制及bax基因表达激活有关。     

白花蛇舌草胶囊治疗痤疮的疗效观察

目的:探讨白花蛇舌草胶囊治疗痤疮的临床疗效。方法:选取我院2013年1月~2014年1月收治的痤疮患者80例,按照入院先后顺序分为观察组和对照组,对照组采用常规西医治疗,观察组在对照组基础上加用白花蛇舌草胶囊进行治疗,并对两组疗效进行比较。结果:观察组总有效率为90.0%,对照组总有效率为72.5%,两组比较差异显著(P<0.05);两组均未发生明显不良反应,所有患者均可耐受。结论:白花蛇舌草胶囊治疗痤疮疗效显著,值得临床应用。     

白花蛇舌草注射液治疗疱疹性咽峡炎疗效分析

我院应用白花蛇舌草注射液治疗疱疹性咽峡炎,取得满意疗效,现报道如下。1资料与方法 1．1一般资料患者98例,均为门诊夏季就诊患者。根据临床表现,发热、咽痛、流涎,特征是软腭及悬雍垂有疱疹。X线胸片：心肺未见异常,血常规：WBC（4．0～9．0）×10^9／L,淋巴比值增高,均支持病毒感染,明确诊断为疱疹性咽峡炎。     

白花蛇舌草的质量研究

目的建立白花蛇舌草质量控制方法。方法采用生药学方法对白花蛇舌草及其伪品水线草和纤花耳草进行鉴别，并建立了白花蛇舌草中齐墩果酸的薄层扫描含量测定方法。结果白花蛇舌草中的齐墩果酸在0．8～6．4μg间有良好的线性关系，回收率为98．7％，RSD为1．95％(n=5)。结论将生药学研究方法和白花蛇舌草中的齐墩果酸的含量测定方法相结合，可作为质量控制方法。     

bcl-2反义寡聚脱氧核苷酸抑制HL-60细胞生长的研究

在体外培养中研究了基因的反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleo-tide,ASON)对HL-60细胞生长增殖的影响。根据bcl-2基因cDNA的序列分析,以bcl-2mRNA翻译起始区域前15个核苷酸为作用靶序列,人工合成了15聚ASON片段,同时合成15聚无关寡聚核苷酸(ODN)片段,以作序列特异性对照。把上述ASON和无关ODN片段与HL-60细胞共培养,同时设置空白对照组,作用一定时间后分别测定细胞动力学和~3H-TdR掺入率。实验发现:从3.5—30.0μmol/L的ASON对细胞生长有不同程度抑制作用,低于10μmol/L时抑制作用小,大于10.0μmol/L时抑制作用显著,浓度愈大,抑制程度愈大,而无关ODN作用组的细胞生长状态与空白对照组无显著差别,作用48小时后浓度3.5μmol/L抑制率为6％,而20.0μmol/L时上升为40％;作用96小时后3.5μmol/L的ASON抑制率是5.1％,30μmol/L的抑制率高达67％。相同浓度的ASON作用不同时间后,细胞生长率各不相同,当浓度达到14.0μmol/L时,48小时的细胞生长抑制率达22％,72和96小时的抑制率分别为25％和29.3％。HL-60细胞被ASON处理后,培养体系中死细胞数随时间延长而增加,浓度在10—30μmol/L范围内,死细胞率由2％增到50％,但在无关ODN及空白对照组中未观察到这种现象。同时发现由于bcl-2的ASON作用使HL-60细胞的     

c-myc在大黄素抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡中的作用

目的研究中药大黄素(emodin)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞的影响及探讨c—myc基因在其中的作用。方法应用MTT法绘制细胞生长曲线；细胞集落培养观察大黄素对HL-60细胞增殖的影响；DNA倍体分析、线粒体细胞凋亡检测法、末端缺失原位标记(TUNEL)法及DNA凝胶电泳分析细胞凋亡；RT—PCR及Western blot检测大黄素作用前后c—myc基因mRNA及蛋白表达水平的变化。结果大黄素能明显抑制HL-60细胞增殖，半数抑制浓度(IC50)约为20μmol／L；DNA片段化、亚G1峰(凋亡峰)的检出及线粒体细胞凋亡检测等证实大黄素能有效诱导HL-60细胞凋亡，细胞凋亡率与药物作用浓度呈正相关。大黄素与HL-60细胞作用后c—myc基因mRNA及蛋白的表达水平与作用时间呈负相关。结论大黄素能有效抑制HL-60细胞增殖，诱导其凋亡；c—myc基因可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

复方白花蛇舌草治疗肺癌荷瘤小鼠的实验研究

目的:探讨复方白花蛇舌草体内抗肿瘤作用。方法:将肺癌荷瘤C57小鼠分为模型组、环磷酰胺(CTX)组、CTX+复方白花蛇舌草高、中、低剂量组与复方白花蛇舌草高剂量组,复方白花蛇舌草水煎剂灌胃,环磷酰胺腹腔注射。观察各组小鼠体重,瘤体、胸腺、脾脏重量,抑瘤率及血细胞变化。结果:CTX组与模型组比较荷瘤小鼠胸腺系数显著降低(P<0.05),白细胞显著下降(P<0.01);各治疗组对荷瘤鼠肿瘤的生长均有一定程度的抑制作用。结论:复方白花蛇舌草能够抑制荷瘤鼠肿瘤的生长,与CTX联合能够达到协同增效解毒的作用,且复方白花蛇舌草对血液系统未见毒副作用。     

广枣黄酮槲皮素和山萘酚促人白血病HL-60细胞系凋亡及其机制探讨

本研究旨在探讨广枣黄酮主要成份槲皮素及山萘酚的抗白血病作用及其可能的作用机制。采用MTT法测定槲皮素及山萘酚对HL-60细胞的增殖抑制作用;用流式细胞术检测药物对HL-60细胞周期的影响及其诱导凋亡作用;通过Western blot观察药物诱导的HL-60细胞凋亡中survivin蛋白表达情况。结果表明,槲皮素及山萘酚对HL-60细胞的增长有显著的抑制作用,并呈浓度和时间依赖性（槲皮素相关系数r=0．77,山萘酚相关系数r=0．76）。给药后HL-60细胞发生G2／M期阻滞和凋亡。药物诱导HL-60细胞survivin蛋白表达下调。结论：广枣黄酮的主要成份槲皮素及山萘酚有明显的抗白血病作用,且槲皮素诱导凋亡作用强于山萘酚。其作用机制可能是通过抑制细胞增殖、细胞周期阻滞、抑制survivin蛋白而诱导细胞凋亡。     

rhGM—CSF对VP—16诱导的HL—60细胞凋亡的影响

为探讨ｒｈＧＭ－ＣＳＦ对ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞凋亡的影响,我们观察了预先应用ｒｈＧＭ－ＣＳＦ孵育的ＨＬ－６０细胞由ＶＰ－１６诱导的凋亡的过程及凋亡相关基因ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达变化,应用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形 和超微结构变化,凝胶电泳检测ＤＮＡ的碎片,流式细胞术检测细胞凋亡率、ｂｃｌ－２和ｆａｓ的表达,实验结果显示,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可抑制ＶＰ－１６诱导的ＨＬ－６０细胞的凋亡,它加强了ＶＰ－１６对ｂｃｌ－２表达的下调作用,抑制了ＶＰ－１６对ｆａｓ表达的上调作用,由此推测,ｒｈＧＭ－ＣＳＦ可能是通过下调ｆａｓ表达降低ＨＬ－６０细胞对ＶＰ－１６的敏感性。     

bcl-2在HL-60细胞分化和凋亡过程中的表达

细胞凋亡抑制基因bcl-2在髓系造血细胞中的表达与细胞分化程度有关。本研究证实全反式维甲酸(ATRA)可诱导HL-60细胞凋亡。流式细胞仪分析表明,在HL-60细胞分化凋亡过程中bcl-2表达逐渐下降,凋亡细胞bcl-2表达水平较低,而未凋亡细胞bcl-2仍维持在高水平。上述结果提示:经ATRA诱导分化成熟的HL-60细胞与正常粒细胞相似,最终走向凋亡;bcl-2表达降低可能对终末分化细胞凋亡有易化作用;未凋亡细胞bcl-2高表达可能是肿瘤细胞耐药和白血病复发的重要因素。     

和厚朴酚对HL-60细胞增殖抑制作用及其相关机制研究

本研究旨在探讨和厚朴酚（honokiol,HNK）对急性髓系白血病细胞HL-60增殖和凋亡的影响及其作用机制。MTT法检测HNK对HL-60细胞增殖抑制作用。流式细胞术检测细胞周期变化。Annexin V/PI法检测细胞凋亡情况。Western blot检测细胞周期蛋白（cyclins）、细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）、P53、P21、P27、BCL-2、BCLXL、BAX、caspase-3、-9、M APK信号通路蛋白。结果表明：HNK能够抑制HL-60细胞增殖,呈时间剂量依赖性。HNK阻滞HL-60细胞于G0/G1期,S期细胞显著减少（P〈0.05）。HNK作用HL-60细胞24 h后,cyclin D1、cyclin A、cyclin E、CDK2、4、6表达显著下调（P〈0.05）,P53、P21表达显著上调（P〈0.05）。HNK作用24 h后HL-60细胞凋亡增加,活化的caspase-3、-9表达显著增加;BCL-2和BCL-XL表达下调,而BAX表达上调。MAPK亚族P38、JNK表达无明显变化;而M EK1/2-ERK1/2的表达显著下调（P〈0.05）。结论：HNK通过干预M EK1/2-ERK1/2信号通路阻滞HL-60细胞于G0/G1期并诱导HL-60细胞凋亡。     

塞来昔布对人白血病细胞株HL-60细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制

本研究旨在探讨塞来昔布（celecoxib）对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞技术分析细胞凋亡及细胞周期分布的变化,定量RT—PCR的方法检测细胞周期蛋白DJ、EI及COX-2mRNA的表达。结果表明,不同浓度塞来昔布作用于HL-60细胞24h后,细胞增殖明显受抑,且呈-定的浓度依赖性（r=0．955）,24h的IC50值为63．037μmol／L。塞来昔布可诱导HL-60细胞的凋亡,也呈剂量依赖性（r=0．988）。塞来昔布可使HL-60细胞明显阻滞于G0／G1期,可下调cyclinD1、cyclinE1mRNA的表达。塞来昔布可使细胞COX-2mRNA表达水平降低。结论：塞来昔布呈浓度依赖性抑制HL-60细胞增殖,并可能通过下调cyclinD1、cyclinE1的表达引起细胞G0／G1,期阻滞,下调COX-2的表达诱导细胞凋亡。     

正常人骨髓基质细胞对HL-60和HL-60/VCR 细胞凋亡易感性的影响

为了观察正常人骨髓成纤维样基质细胞系HFCL对白血病敏感细胞HL-60和多药耐药细胞HL-60／VCR凋亡易感性的影响，先建立HL-60或HL-60／VCR细胞与HFCL细胞共培养体系；采用瑞氏-吉姆萨染色和吖啶橙／溴化乙啶(AO／EB)染色，分别在光镜和荧光显微镜下进行形态学观察；TUNEL检测晚期凋亡细胞，流式细胞术检测细胞周期、凋亡峰和annexin V阳性的早期凋亡细胞；Western blot检测Bcl-2、活化的胱冬蛋白酶(caspase)-3蛋白和P糖蛋白(Pgp)的表达变化。结果表明，经topotecan(TPT)处理后的HL-60和HL-60／VCR细胞，在光镜和荧光显微镜下均有典型的凋亡细胞形态学改变，这些改变具有时间和剂量依赖性；annexin V染色后能检测到早期凋亡细胞；细胞周期显示：G1期细胞比例增高，S期减低，并有明显凋亡峰；TUNEL能检测到许多阳性细胞；同时出现活化的caspase-3，伴有Bcl-2的表达下调，但与HFCL细胞共培养后，经TPT处理的HL-60和HL-60／VCR细胞中早期和晚期凋亡细胞有所减少，凋亡峰减低，而且活化的Caspase-3表达减弱，Bcl-2蛋白表达上调，且以直接接触组为甚。结论：正常骨髓成纤维样基质细胞HFCL能轻度降低白血病HL-60和HL-60／VCR细胞对TPT的凋亡易感性，并有caspase-3和Bcl-2重要信号传导分子的参与。     

青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡的研究

本研究旨在研究青蒿琥酯体外诱导HL-60细胞凋亡及其过程中Bcl-2与ICAD蛋白表达的变化。采用MTT法测定青蒿琥酯对HL-60细胞的生长抑制作用;用光学显微镜检、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术观察和检测青蒿琥酯诱导HL-60细胞的凋亡;应用蛋白印迹法检测青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡过程中Bcl-2与ICAD的表达变化情况。结果表明：青蒿琥酯对HL-60细胞有明显的生长抑制作用,并呈时间、剂量依赖性。48小时IC50值为18.33μg/ml,其增殖抑制作用与诱导细胞凋亡有关;Bcl-2和ICAD在HL-60细胞中均有表达,且随药物浓度的增高表达量逐渐降低。结论：青蒿琥酯可诱导HL-60细胞凋亡,Bcl-2和ICAD在青蒿琥酯诱导HL-60细胞凋亡的信号传导途径中可能是重要的调控因子。     

细胞色素C对HL-60细胞凋亡作用及其与相关bcl-2、bax基因的关系

为了探讨细胞色素C在体外作用于HL-60细胞时细胞发生的变化及其相关凋亡基因的bcl-2、bax表达变化的机制，用不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞24小时，然后分别用肌检测细胞色素C对HL-60细胞的抑制率；应用光学显微镜、荧光显微镜观察HL-60细胞形态的变化；用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的变化；用DNA凝胶电泳检测HL-60细胞的凋亡；用RT—PCR检测bcl-2、bax基因的表达的变化。结果表明：在细胞色素C浓度为0—150mg／L时，细胞抑制率随着浓度的增加而增加；当细胞色素C浓度在0—37．5mg／L时，细胞凋亡率逐渐增加，可见典型的凋亡细胞和明显DNA梯形条带，同时，在该浓度范围内bcl-2表达逐渐减少，而bax表达逐渐增加；当细胞色素C浓度大于37．5mg／L时，细胞凋亡率增加不明显，但细胞出现坏死。结论：细胞色素C能诱导HL-60细胞发生凋亡，细胞色素C对细胞周期的作用是将细胞阻滞于G1期，并且细胞凋亡率、bcl-2、bax基因的表达的变化与细胞色素C浓度呈一定的量效依赖关系，细胞色素C诱导HL-60凋亡可能与bax的激活和bcl-2的抑制有关。     

VEGF反义核酸对 HL-60细胞作用和机制研究

本研究探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸对HL-60细胞生长的量效和时效关系，并研究其作用机制以揭示VEGF基因新的功能。用含20个脱氧核糖核酸的反义核酸A7(用计算机模拟设计和实验筛选出的最优序列)全硫代修饰，以脂质体介导进入细胞，培养72小时后用MTT法计算细胞生长抑制率；采用台盼蓝拒染法每24小时观察细胞存活情况并计数；用Giemsa染色观测细胞形态学改变；用流式细胞仪检测细胞凋亡百分数；用VEGF ELISA试剂盒测定蛋白的水平。结果显示，反义药物对HL-60细胞生长有明显抑制作用，呈剂量依赖关系，并且下调VEGF蛋白的表达；反义药物对HL-60细胞的凋亡无明显影响。结论：VEGF反义药物抑制HL-60细胞生长的机制是抑制细胞增殖，而不是促进细胞凋亡，内源性VEGF蛋白具有促进HL-60细胞增殖的功能。