嗅球神经元的体外培养研究

目的 :建立稳定的、产出率高的嗅球神经元离散细胞培养系统。方法 :取出生后5～6d大鼠的嗅球于体外培养。48h后随机分为对照组和阿糖胞苷(Ara -C)组连续培养14d。动态观察细胞生长情况 ,进行免疫细胞化学染色。结果 :嗅球神经元可以在体外培养成功 ,且对神经元有特异性的标志蛋白抗神经丝蛋白 (NFP)呈阳性反应。加入抗有丝分裂剂Ara-C后2组标本计数第1d差别无统计学意义 (P>0.05) ;第5,7,14dAra-C组较对照组明显增高(P<0.01)。其神经突生长指数随着时间的延长而增长 ,于7d后逐渐下降。结论 :在有血清的培养条件下 ,离散后的嗅球神经元仍可在体外存活 ,并有神经突生长、标记蛋白的表达。为生理学、分子生物学及药理学研究提供了一个有用的实验模型。     

新生大鼠海马神经干细胞的分离培养及鉴定

目的：从新生大鼠海马分离培养并鉴定神经干细胞。方法：应用含有碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)和表皮生长因子（EGF）的无血清条件培养基，采用无底物的悬浮培养法培养神经干细胞，并用免疫细胞化学技术鉴定传代后形成的细胞团。结果：EGF bFGF可能明显地促进神经干细胞分裂增殖，免疫细胞化学检测发现传代后形成的细胞团中的细胞均表达神经上皮干细胞蛋白（Nestin)。结论：我们成功地建立了新生大鼠海马神经干细胞培养模型。     

Triton损伤成年大鼠嗅上皮对嗅球钙结合蛋白D和小白蛋白表达的影响

目的　探讨嗅觉障碍的可能机制。方法　成年SD大鼠,TritonX 10 0灌流单侧鼻孔,30 ,4 5和6 0d后用免疫组化方法检测嗅球的钙结合蛋白 D(CB)和小白蛋白(PV)表达。结果　损伤后30d ,与对照侧相比,损伤侧嗅球的CB和PV阳性细胞密度减少6 8.9%和6 6 .7% ,4 5d后减少4 6 .4 %和5 0 .0 % ,4 5d的CB和PV阳性细胞密度比30d时增加,6 0d时接近对照侧。结论　大鼠嗅球中CB和PV的表达受Triton诱导的传入神经阻滞的可逆调控。     

成年小鼠心脏干细胞的分离、培养鉴定和离子通道特征

目的：建立分离、培养和鉴定成年小鼠心脏干细胞的方法并初探其离子通道特性。方法和结果：（1）分离Langendorff法灌流小鼠心脏，用胶原酶酶解法制备单个心肌细胞，差速离心法将较大的细胞（如心室肌细胞）和较小的细胞分离卉。取用较小细胞，用c-kit抗体孵育后，然后用免疫磁珠分离法分离心脏干细胞。     

SD大鼠神经干细胞评价药物神经毒性模型研究

目的：应用SD大鼠神经干细胞评价药物的神经毒性,为新药早期筛选和临床前安全性评价提供体外替代方法。方法：体外培养SD大鼠神经干细胞,传代后得到稳定的第二代神经球。以已知具有神经毒性的长春新碱、顺铂、瑞芬太尼、丙泊酚注射液、丙戊酸钠、苯妥英钠、丙烯酰胺、乙醇、氧化铁纳米粒子作为神经毒性阳性物质,以培养基作为神经毒性空白对照品;以没有神经毒性且具有促进神经细胞生长的神经生长因子作为检测模型的敏感性;以验证SD大鼠神经干细胞模型对神经毒性药物的检出能力。结果：长春新碱、顺铂、丙泊酚注射液、苯妥英钠、丙烯酰胺、氧化铁纳米粒子可引起全部或部分神经球解离破碎,神经干细胞坏死。顺铂、丙戊酸钠和苯妥英钠可见显著性的抑制神经球聚集。长春新碱、顺铂、瑞芬太尼、氧化铁纳米粒子、丙泊酚注射液、丙戊酸钠、苯妥英钠、丙烯酰胺、乙醇均表现剂量相关性的神经干细胞增殖毒性作用。神经生长因子可见促进神经球聚集及神经干细胞增殖。结论：本文以SD大鼠神经干细胞模型,以神经干细胞体外生长发育指标,验证了已知神经毒性抗肿瘤药物、麻醉剂、抗癫痫药物等的神经毒性特征。评价结果与这些药物已知的神经毒性作用特点一致,该评价方法可作为药物神经毒性临床前安全性评价研究的体外替代试验。     

大鼠神经干细胞的分离培养和分化鉴定

目的建立神经干细胞分离、培养和分化鉴定技术。观察神经干细胞生长、增殖特点。方法利用无血清培养,从胚胎大鼠海马、纹状体等区分离神经干细胞,进行体外扩增培养、传代观察。采用荧光免疫细胞化学检测技术,观察鉴定神经干细胞及其分化结果。结果从胚胎大鼠海马、纹状体等区分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞克隆中有巢蛋白(nestin)表达阳性细胞,显微镜下观察见典型的干细胞特征。分化为3种神经细胞类型:神经元、胶质细胞、少突胶质细胞。结论用上述方法分离培养的神经干细胞具有自我更新和增殖能力,通过鉴定确为神经干细胞,并经过分化鉴定确认。     

神经营养素对培养的新生大鼠神经干细胞分化的影响

为了了解不同神经营养因子对体外培养不同时间的大鼠脑神经干细胞(NSCs，Neural stem cells)分化的影响，采用BDNF、GDNF、CNTF、NGF和PDGF，以及腺苷酸环化酶激动剂forskolin等对新生大鼠脑神经干细胞进行诱导。研究发现，BNDF、GDNF、CNTF对体外培养3个月内的NSCs分化为神经元均有不同程度的作用，其     

嗅球提取液脑室内注射对大鼠阿尔茨海默病的影响

目的探讨嗅球提取液(DFOB)脑室内注射对大鼠阿尔茨海默病(AD)的影响。方法SD大鼠双侧海马注射Aβ1~40,建立AD大鼠模型。实验动物分为4组:健康对照组、AD模型组、人工脑脊液(MCSF)注射组、DFOB注射组,每组8只。运用行为学测试、NADPH-d组织化学、刚果红组织学染色结合积分吸光度测定等技术,观察、比较各组AD模型大鼠注射4周后学习记忆能力、一氧化氮合酶(NOS)阳性神经元数以及老年斑的变化。结果DFOB注射组大鼠达到学会标准所需训练次数、错误反应次数、潜伏期和全天总反应时间均小于AD模型组、MCSF注射组(P<0.05)。DFOB注射组NOS阳性神经元数较AD模型组、MCSF注射组明显增多(P<0.05)。DFOB注射组刚果红染色及其吸光度测定与AD模型组、MCSF注射组比较差异有统计学意义。MCSF注射组与AD模型组差异均无统计学意义。结论DFOB脑室内注射对大鼠AD具有明显的治疗作用。     

嗅球结构及其对生物节律的调控

嗅球是人体控制嗅觉的关键部位。近年来研究发现,嗅球还参与了生物节律的调控,其相对独立于视交叉上核表达节律调控基因。基于嗅球与脑内的神经联系以及其对生物节律调控的作用,深入研究一些神经系统疾病和睡眠等人体自身节律可能会成为基础和临床医学研究的新热点。本文将介绍嗅球的结构,并对其参与调控生物节律的功能进行分析总结。     

胎鼠脑神经干细胞的分离、培养和鉴定

目的 研究胎鼠脑皮质神经干细胞(NSCs)的分离、培养及鉴定方法。方法 从孕15d胎鼠的大脑皮层和海马区脑组织中获取NSCs,在含有B27、表皮生长因子(EGF)和碱性成纤维生长因子(bFGF)的DMEM/F12无血清培养液中培养;传代后用5%胎牛血清培养液诱导NSCs分化。结果 体外分离培养的NSCs在无血清培养液中形成大量的神经球。经3-5代传代的细胞生长稳定。经巢蛋白染色鉴定,大部分为阳性细胞,神经细胞球经胎牛血清培养液贴壁培养后可分化为神经元特异烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白和半乳糖脑苷脂表达阳性的细胞。结论 从孕15d胎鼠大脑皮质和海马组织分离出的NSCs具有自我更新能力和多向分化潜能,其在5%胎牛血清培养液中具有向神经元和神经胶质细胞分化的潜能。     

神经干细胞移植治疗小脑性共济失调的疗效评定

目的探讨神经干细胞（Neural stem cells,NSCs）移植对小脑性共济失调的治疗作用。方法对216例小脑性共济失调患者进行NSCs腰椎脊髓蛛网膜下腔注射,分别于治疗前及治疗后180d对患者日常生活自理能力进行评分。结果采用NSCs移植治疗前和治疗后180d的生活自理能力评分分别为（52.25±9.12）、（73.50±11.35）,有显著差异（P〈0.05）。结论 NSCs移植治疗能改善小脑性共济失调患者的日常生活自理能力,提高生存质量。     

大鼠骨髓源性肝干细胞脾内移植后的分化

目的探索大鼠骨髓源性肝干细胞（BDHSC）脾内移植后的分化情况。方法利用肝细胞生长因子（HGF）体外诱导大鼠BDHSC,并植入60只成年SD大鼠脾内,两组（n=30）分别于术后7天和14天处死动物后取脾,RT—PCR及免疫组化检测移植细胞的AFP及白蛋白的表达。结果移植后7天,AFP mRNA、白蛋白mRNA和AFP的阳性表达率分别为73．3％、46．7％、56．7％;移植后14天,AFP mRNA阳性表达率（23．3％）显著下降（P〈0．01）,白蛋白mRNA阳性表达率（20%）显著下降（P〈0．05）,AFP阳性表达率（26．7％）亦显著下降（P〈0．05九,结论体外诱导大鼠BDHSC脾内移植后,其原有的肝干细胞特性逐渐丧失     

胶质瘤细胞诱导神经干细胞迁移作用的实验研究

目的观察胶质瘤细胞在体外培养条件下对神经干细胞是否有诱导迁移的作用。方法①从新生1～2dSD大鼠脑皮层分离培养神经干细胞,进行神经干细胞及其增殖能力鉴定。②胶质瘤细胞与神经干细胞限定区域联合培养,观察神经干细胞的生长及其形态学变化。结果①所获得神经细胞球Nestin染色阳性,传代神经细胞球抗BrdU染色阳性。②可观察到神经干细胞球周围长出细胞突起,在靠近胶质瘤细胞的一侧,细胞突起的密度及长度均大于其他方向上的突起并且可见部分干细胞向胶质瘤细胞方向的移动。结论胶质瘤细胞在体外对神经干细胞有诱导迁移作用。     

Comparison of Ectopic Gene Expression Methods in Rat Neural Stem Cells

Neural stem cells (NSCs) have the ability to proliferate and differentiate into various types of cells that compose the nervous system. To study functions of genes in stem cell biology, genes or siRNAs need to be transfected. However, it is difficult to transfect ectopic genes into NSCs. Thus to identify the suitable method to achieve high transfection efficiency, we compared lipid transfection, electroporation, nucleofection and retroviral transduction. Among the methods that we tested, we found that nucleofection and retroviral transduction showed significantly increased transfection efficiency. In addition, with retroviral transduction of Ngn2 that is known to induce neurogenesis in various types of cells, we observed facilitated final cell division in rat NSCs. These data suggest that nucleofection and retroviral transduction provide high efficiency of gene delivery system to study functions of genes in rat NSCs.     

人胰岛素样生长因子-1重组腺病毒转染C17.2神经干细胞增殖及分化的影响

目的观察人胰岛素样生长因子-1重组腺病毒(Ad-IGF-1)转染对C17.2神经干细胞体外增殖和分化的影响。方法体外培养及鉴定C17.2神经干细胞,Ad-IGF-转染C17.2神经干细胞;Western-blotting法检测IGF-1蛋白的表达,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测IGF-1蛋白的表达曲线;MTT检测C17.2神经干细胞增殖,NSE及MBP免疫组化观察C17.2神经干细胞体外分化。结果转染AdIGF-1的C17.2神经干细胞成功表达IGF-1蛋白;IGF-1蛋白在病毒转染5～7d达高峰,13d仍高于转染前,Ad-IGF-1转染后各时间C17.2神经干细胞的增殖与对照组相比有显著差异,Ad-IGF-1转染对c17.2神经干细胞向神经元细胞及神经胶质细胞的分化与对照组相比有显著差异。结论Ad-IGF-1转染c17.2神经干细胞可稳定表达IGF-1,Ad-IGF-1转染促进C17.2神经干细胞的增殖及向神经元细胞和少突胶质细胞的分化。     

An Aminopropyl Carbazole Derivative Induces Neurogenesis by Increasing Final Cell Division in Neural Stem Cells

P7C3 and its derivatives, 1-(3,6-dibromo-9H-carbazol-9-yl)-3-(p-tolylamino)propan-2-ol (1) and N-(3-(3,6-dibromo-9H-carbazol-9-yl)-2-hydroxypropyl)-N-(3-methoxyphenyl)-4-methylbenzenesulfonamide (2), were previously reported to increase neurogenesis in rat neural stem cells (NSCs). Although P7C3 is known to increase neurogenesis by protecting newborn neurons, it is not known whether its derivatives also have protective effects to increase neurogenesis. In the current study, we examined how 1 induces neurogenesis. The treatment of 1 in NSCs increased numbers of cells in the absence of epidermal growth factor (EGF) and fibroblast growth factor 2 (FGF2), while not affecting those in the presence of growth factors. Compound 1 did not induce astrocytogenesis during NSC differentiation. 5-Bromo-2′-deoxyuridine (BrdU) pulsing experiments showed that 1 significantly enhanced BrdU-positive neurons. Taken together, our data suggest that 1 promotes neurogenesis by the induction of final cell division during NSC differentiation.     

人胎儿肝干细胞的分离及鉴定

目的:探索人胎儿肝干细胞的分离及鉴定方法。方法:改进Seglen胶原酶(IV型)原位灌注结合Percoll密度梯度离心分离纯化4～6个月水囊引产男性胎儿的肝干细胞,CO2培养箱培养,光镜、电镜下观察细胞特点,进行肝干细胞细胞标志SABC免疫组化染色。结果:平均细胞产量(2.10±0.50)×107,细胞活性率为(92.30±1.23)%。光镜下呈游离状态、大小不等的单个细胞,约为正常肝细胞1/5～1/3大小;电镜下细胞表面可见少量短而小的微绒毛状突起,卵圆形细胞核,核/浆比例较大等特点;甲胎蛋白、细胞角蛋白8、19及α-1-抗胰蛋白酶免疫组化染色呈阳性,白蛋白及白细胞共同抗原染色呈阴性表现,培养3周可形成克隆样结构。结论:改进的Seglen胶原酶原位灌注结合Percoll密度梯度离心法可成功分离、纯化人胎儿肝干细胞。     

干细胞技术的专利分析

通过分析干细胞技术相关专利,研究干细胞技术的发展现状,并推测未来技术的发展方向,指出未来干细胞技术的发展更应侧重于加快基础研究到应用的转化,促进产业的发展;另外还分析了干细胞技术主要专利申请人的专利布局策略,并对比我国和其他国家或地区在干细胞技术专利申请方面的差异,以期对我国创新主体未来的技术研发方向及专利布局有所启示。     

腺苷促进体外培养神经干细胞增殖作用研究

目的研究腺苷促进体外培养神经干细胞（NSCs）增殖作用。方法取新生小鼠大脑进行神经干细胞原代培养,观察神经球生成情况,特异性蛋白质免疫细胞化学染色和BrdU标记鉴定并判断其增殖能力;将腺苷按0.4,2.0,10.0 μmol&#8226;L 13个浓度加入神经干细胞培养基,同时设立溶媒对照组和阳性对照组,通过观察神经球形态、神经球生成数目及 MTT法定量比较,分析不同浓度腺苷对神经干细胞分裂增殖的影响。结果培养物中有大量神经球生成,神经干细胞特异性蛋白质免疫细胞化学染色呈阳性,BrdU标记亦呈阳性反应,所培养的细胞为神经干细胞,具有增殖能力;腺苷中、高浓度组神经球数目、MTT比色结果明显高于溶媒对照组。结论腺苷具有促进NSCs增殖作用。