一种新的种子细胞——滑膜间充质干细胞

滑膜间充质干细胞作为一种新的间充质干细胞在组织工程中有着广阔的应用前景。滑膜间充质干细胞能够分化为软骨、骨、脂肪、骨骼肌，具有取材方便，供区并发症少等优点。因此，滑膜间充质干细胞是软骨、骨、脂肪及骨骼肌的种子细胞的理想来源。介绍了滑膜间充质干细胞的分离、获取以及其生物学特性，并对其在组织工程中应用的研究进展做一回顾。     

胎儿骨髓间充质干细胞的分离培养及表面标志的检测

目的 建立胎儿骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC)的分离培养方法，并对其表面标志进行检测。方法 采用体外细胞培养技术，分离培养胎儿骨髓MSC，用流式细胞术对其进行鉴定，并研究其增殖及生长特征。结果 流式细胞术证明，MSC具有间质细胞的特征。原代及传代培养显示，胎儿骨髓MSC具有活跃增殖的能力。结论 胎儿骨髓MSC作为组织工程重建的种子细胞具有较强的可行性。     

人骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定

目的:探讨密度梯度离心结合贴壁筛选法分离培养人骨髓间充质干细胞(MSCs)的条件,为组织工程选择合适的种子细胞奠定基础.方法:采用密度梯度离心法将人MSCs自少量骨髓中分离并培养,观察其增殖和生长特性,绘制生长曲线,测定贴壁率,免疫组化与流式细胞仪细胞表型鉴定.结果:人MSCs生物性状稳定.不同代次生长曲线相似,第5～6d细胞数日最多;传代后10 h贴壁率高达90%.MSCs表达CD44、CD90,但不表达CD34、CD45.结论:密度梯度离心法是分离人MSCs的理想方法.MSCs能为组织工程提供足量种子细胞.     

血管体外应力培养系统:一种新的血管生物力学实验模型

本文设计并建立一种新型的血管体外应力培养系统,分别施加定常流与脉动流,检测其运行稳定性后,将猪颈总动脉进行体外培养7d,采用组织形态学方法结合计算机图像分析与透射电镜技术,评价培养动脉的状态。结果表明,颈外动脉进行体外培养7d仍然存活,血管几何形态结构与细胞超微结构基本正常。本系统能够提供多种较为稳定的应力培养条件,为血管生物力学和血管组织工程研究提供了一种有效的实验模型。     

牵张应力对体外骨髓间充质干细胞形态、排列及迁移的影响

目的观察牵张应力对体外骨髓间充质干细胞(BMSC)的细胞形态、排列及迁移生物学行为的影响。方法利用应力装置对体外培养的BMSC施以周期性牵张应力刺激,在相差显微镜下观察细胞形态、排列及迁移的变化,借助计算机图像处理和分析系统(ImageJ软件)进行定量分析。结果 BMSC受力后,形态明显变长,轮廓鲜明。强度为12%应力干预BMSC12h后,细胞长度增长1.56倍;干预24h后,细胞长度增长1.66倍。BMSC受力刺激后,细胞排列规则,沿受力环切线方向分布。受力12h及24h后,BMSC与切线夹角统计值分别为9.48°±2.83°、8.30°±6.03°,与切线夹角<10°的细胞比例分别为88.52%±6.43%,92.33%±4.98%,明显较对照组规律,并且细胞的迁移速度明显快于对照组。结论 BMSC加载应力刺激后,其形态学及细胞迁移速度均发生明显变化。     

骨髓基质细胞成骨的研究进展

骨髓基质细胞作为骨组织工程的种子细胞具有广阔前景。许多实验证实骨髓基质细胞具有间充质干细胞特性 ,表现为较强的增殖能力和向多种间充质细胞分化的潜能。目前已建立了体外培养骨髓基质干细胞的方法 ,而且正在摸索进一步纯化的方法和诱导分化的条件。本文就骨髓基质细胞的研究现状与前景作一综述。     

间充质干细胞在组织工程气管中的研究进展

组织工程学通过细胞或组织重建,修复缺损组织并保留其生物功能,成为气管替代治疗的新途径.种子细胞、生长因子及气管支架材料是组织工程气管的三大要素,学者们一直在寻求理想的种子细胞.间充质干细胞(MSCs)是一种具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞,广泛分布于骨髓、脐带、脂肪组织、心肌组织、大脑、肌肉和皮肤等,可向骨、软骨、脂肪、神经等多种细胞定向分化.MSCs具有增殖能力强、分化范围广、免疫调节等功能特点,能够修复损伤的组织,有望成为应用于组织工程气管的理想种子细胞.旨在对MSCs在组织工程气管中的应用作一综述.     

小鼠骨髓间充质干细胞的分离与培养

探索在体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞 (Bone m arrow m esenchym al stem cells,BMSCs)的最适条件。以密度梯度离心技术及贴壁筛选法相结合 ,在体外分离 BAL B/C小鼠的 BMSCs,通过 MTT法测定了不同离心力、不同换液时间、不同血清浓度、不同种植密度等因素对 BMSCs分离和培养的影响。在 5 0 0 g× 30 min的离心力下分离细胞 ,加入 10 %的胎牛血清 ,原代按 (12～ 2 0 )× 10 5/m l的细胞密度接种 ,接种 2 4 h后换液 ,继代种植密度为 6 .4～ 2 5 .6× 10 4 /ml时最适宜细胞生长 ;在此条件下 ,细胞快速增殖 ,传代后 8h贴壁达 90 %以上 ,2 4 h便进入对数生长期 ,直至第 5 d,细胞约增殖 3倍。本研究建立了在体外分离培养骨髓间充质干细胞的细胞生物学方法和技术参数。     

组织工程种子细胞的研究进展

组织工程学近年来研究进展很快 ,目前采用组织工程技术建造的部分组织或器官已经开始进入或即将进入临床应用 ,如组织工程化皮肤已经实现商品化 ,软骨组织工程产品也已经进入临床前期实验阶段 ,在近年内即可进入临床应用[1～ 3 ,12 ] 。组织工程研究成功与否主要取决于以下三个关键性制约因素 :种子细胞、支架材料以及有助于细胞生长、分化的外在环境。其中获得足够数量、不引起免疫排斥反应且具有再生活力的种子细胞是开展组织工程研究的前提和基础。尽管目前种子细胞的研究仍面临众多挑战 ,但令人欣喜的是 ,随着干细胞体外分离、培养和扩…     

自体骨髓间充质干细胞和同种异体软骨细胞共培养优化软骨组织工程种子的细胞源

背景：至今尚无一种细胞能完全满足组织工程对种子细胞的要求。 目的：探讨自体骨髓间充质干细胞和同种异体软骨细胞共培养的可行性。 方法：酶消化分离法获得兔软骨细胞,使用密度梯度离心和贴壁筛选的方法获得骨髓间充质干细胞。取细胞浓度为3×108 L-1的第2代骨髓间充质干细胞和软骨细胞,随机分为3组,共培养组：将骨髓间充质干细胞和软骨细胞按2∶1比例混匀;实验组：取同代同浓度的软骨细胞(浓度与共培养细胞的终浓度相同);对照组：取低浓度软骨细胞1×108 L-1(与共培养组中软骨细胞终浓度相同)。 结果与结论：共培养组、实验组及对照组细胞平均群体倍增时间分别为3,7,8 d;共培养组共培养细胞增殖比其他2组明显增快(P < 0.05);糖胺多糖水平明显多于其他2组(P < 0.05);自体骨髓间充质干细胞与同种异体软骨细胞共培养未见明显排异反应,提示自体骨髓间充质干细胞与同种异体软骨细胞为种子细胞共培养,骨髓间充质干细胞能促进软骨细胞的增殖和细胞外基质合成,缩短软骨细胞培养时间和减少传代次数,同时软骨细胞可促进骨髓间充质干细胞向软骨细胞的定向转化,节省大量软骨细胞。关键词：软骨细胞;共培养;骨髓间充质干细胞;组织工程;种子细胞 缩略语注释：BMSCs：bone marrow-derived mesenchymal stem cells,骨髓间充质干细胞 doi:10.3969/j.issn.1673-8225.2012.14.008     

组织工程引导骨再生膜的体外构建

采用多孔的 PCL/ PL A共聚膜 ,对材料进行亲水性和细胞亲和性表面加工后 ,用作组织工程载体材料。通过将 5× 10 6 / ml成骨诱导 10 d的 MSCs与 PCL/ PL A共同培养 7d,扫描电镜观察细胞在材料中的生长状态。发现材料作为细胞生长的支持结构与细胞的相容性良好 ,细胞可以黏附在材料的表面和孔隙中。实验证明该材料具有良好的生物相容性 ,可以在体外与骨髓间质干细胞共同构建组织工程化的细胞 -材料复合物用于引导性骨再生。     

流动剪切和不同流型对血管内皮细胞增殖的影响

动脉粥样硬化的非随机分布与局部的血流动力环境有关，而内皮细胞增殖引起的内皮层失稳与动脉粥样硬化早期发生过程有关。本文比较了不同大小的切应力对内皮细胞增殖的影响，发现切应力抑制细胞增殖并与切应力大小相关。同时构建了平行板式突然扩张流槽，探讨流型改变对细胞增殖的影响，发现扩张效应和流线偏转效应使得这种剪切抑制作用被减弱。     

流体剪应力对血管内皮细胞的作用研究与应用

血管内皮层具有重要的生理功能。血流剪应力作用影响内皮细胞的形态结构、功能、增殖和迁移过程。其作用是通过应力转导途径实现的。对应力转导的深入研究,不仅揭示了人体血管内的许多生理过程,解释动脉粥样硬化等心血管疾病的病理机理,而且可将其机理应用于改进临床治疗手段。     

流体剪切力对骨组织细胞作用的研究进展

骨组织细胞包括成骨细胞、破骨细胞、骨细胞和骨衬细胞。在体内生理条件下,流体剪切力可能是这些细胞受到的最主要的力学刺激。近年来对流体剪切力影响骨组织细胞的研究取得了较大的进展,相关研究主要集中在流体剪切力引起骨组织细胞的细胞内信号分子、细胞内钙信号、细胞间隙连接和细胞骨架系统改变这几个方面,同时,流体剪切力会引起骨组织细胞间的相互作用的改变。本文就这些方面的重要研究内容做简要综述。     

流体剪切应力对骨细胞分子活动的影响

机械应力在骨的生长、重建过程中起着十分重要的作用。应力刺激作用于骨组织后对应力感受细胞（骨细胞、成骨细胞）产生牵张应力及流体剪切应力(FSS)刺激，进而影响细胞内相关基因的表达，在此过程中流体剪切应力占主导作用。目前FSS引起骨细胞分子活动的具体机制还不明确，细胞膜上的应力敏感离子通道、整合素－细胞骨架复合体以及缝隙连接／CX43半通道结构可能在力学信号转导过程中起重要作用，它们可能通过促分裂原活化蛋白激酶(Mitogenactivated protein kinase, MAPK)通路、蛋白激酶A/蛋白激酶C(PKA/PKC)通路、核因子κB(NFκB)通路、RhoA/Rho-激酶(RohA-dependent kinase, ROCK)通路以及Ca(上标 2+)通路起作用，最终影响细胞生长因子、转录因子以及成骨相关基质蛋白的表达。FSS影响骨细胞分子活动的应力传导以及信号转导的确切机制仍需要进一步阐明。     

骨髓间充质干细胞在骨组织工程中的应用

间充质干细胞可以分化为成骨细胞、成纤维细胞、神经细胞等多种组织细胞。研究者从骨髓中分离提取骨髓间充质干细胞 ,并通过诱导和体外培养使之分化为成骨细胞 ,作为骨组织工程的种子细胞。     

流体切应力对内皮细胞粘附分子表达的影响

在动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)的发生发展中各种白细胞,包括单核细胞对内皮细胞的粘附可能起着较为重要的作用。在体内,血流切应力对内皮细胞的形态和功能有重要影响。为了阐明流体切应力对内皮细胞表面粘附分子表达的影响,本文研究了流体切应力(2.23～6.08dyne/cm     

剪切力对血管内皮细胞表达IL-8的影响

本文利用改进的流室装置, 通过精密蠕动泵提供剪切力, 选择5dyne/cm2、10dyne/cm2、15dyne/cm2三种剪切力, 施加于体外培养的血管内皮细胞, 作用不同时间, 用RIA的方法检测流体动力学对血管内皮细胞表达IL-8的影响.结果表示, 不同剪切力作用内皮细胞后, IL-8的表达量与剪切力大小及作用时间有关, 为时间依赖性增长, 在5dyne/cm2组和10dyne/cm2组中, IL-8表达量明显高于空白对照组, 而15dyne/cm2组与对照组相比有下降趋势, 提示高剪切力有可能抑制IL-8的分泌.通过观察不同大小剪切力对血管内皮细胞表达IL-8的影响, 为探讨剪切力对动脉粥样硬化的影响提供一些数据.     

骨髓间质干细胞体外分化为成骨细胞的实验研究

建立猪骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcells ,MSCs)体外分离培养方法。对猪MSCs体外分化为成骨细胞的能力进行研究。抽取猪骨髓 ,体外培养MSCs。取第二代MSCs ,以含有不同浓度的抗坏血酸、β -磷酸甘油、地塞米松及碱性成纤维细胞生长因子等条件培养基进行成骨细胞诱导分化。通过细胞形态变化 ,碱性磷酸酶染色及钙盐沉积对成骨细胞进行鉴定。结果表明MSC细胞形态由长梭形向多边形转变 ,ALP染色阳性 ,VonKossa染色阳性 ,经体外诱导分化后呈典型的成骨细胞样改变。猪骨髓MSCs可在体外长期、稳定培养 ,具有向成骨细胞分化的潜能 ,可以为骨组织工程研究提供较理想的细胞来源和动物模型。     

流体剪应力在骨髓基质干细胞成骨向分化中作用机制的研究进展

细胞在体内受到流体剪应力、机械应变、流体静压力等机械应力的作用,其中流体剪应力(fluid shear stress,FSS)被认为是维持骨稳态及骨改建过程中最重要的应力。目前研究多集中在FSS对骨细胞及成骨细胞的作用上,骨髓基质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)的研究相对较少。BMSCs对骨改建及治疗具有重要的意义,BMSCs对FSS的应答越来越受到关注。BMSCs对FSS的反应涉及细胞骨架、基质刚度及弹性、成骨信号等方面。总结FSS在BMSCs内的力转导机制、对其分化及功能的改变等方面的研究进展,为今后构建组织工程化骨、骨病变的治疗等研究提供思路。