甲醛对凋亡相关基因bcl-2bax在生精细胞表达的影响

目的研究长期在甲醛含量过高的室内环境中凋亡相关基因bcl-2、bax在睾丸和生精小管细胞中表达。方法利用医用甲醛制备大白鼠的甲醛毒性模型,采用免疫组织化学技术,检测甲醛对bcl-2bax蛋白在睾丸及生精小管中的表达。结果高浓度的甲醛作用于大白鼠2个生精周期,每个生精小管中bcl-2蛋白表达的阳性细胞数目在高剂量组为27±2.47,低剂量组为24±4.61,均显著低于正常组93±2.81,(P<0.05)。每个细胞中bcl-2蛋白表达强度(OD值)在高剂量组为0.132±0.024,低剂量组为0.113±0.021,均明显低于对照组0.183±0.031,P<0.05;bax蛋白表达的阳性细胞数目在高剂量组为89±20.14,低剂量组为61±14.76,均显著高于正常组23±4.71,P<0.05。每个细胞中bcl-2蛋白表达强度(OD值)在高剂量组为0.098±0.021,低剂量组为0.085±0.018,均明显高于对照组0.032±0.026,P<0.05。结论长期处于高浓度甲醛的室内环境中使睾丸和生精细胞中bcl-2的表达降低,bax的表达增强。     

SGR4和GFRa-1基因在小鼠睾丸移植物中的表达

目的检测小鼠睾丸异体异位移植物中SGR4和GFRa-1基因,对采用该动物模型进行睾丸组织移植在生殖医学中应用的可行性进行评估。方法以新生1～2 d小鼠睾丸组织为供体,雄性去势免疫缺陷小鼠为受体进行组织移植;在移植后不同时间段(分为3 d、1～10周共11个组)取出移植物,采用RT-PCR法对移植物中生精阶段特异性基因SGR4和GFRa-1进行检测;分析2种基因在精子发生不同阶段出现的时间及表达情况,并与相应各时期正常小鼠睾丸中的基因表达相比较;同时进行组织形态学观察,对比各种基因出现的时间与小鼠睾丸发育周期的吻合程度。结果在11个时间段取出的移植物中,GFRa-1在出生3 d就开始表达,表达持续恒定;SRG4在出生2周内的小鼠睾丸中呈低表达,直至出生3周,SRG4基因在小鼠睾丸中开始大量表达,以后表达持续恒定在高水平。2种基因表达趋势与正常昆明小鼠睾丸中的表达基本相同,并与小鼠发育周期基本吻合。结论将新生小鼠睾丸组织移植到免疫缺陷小鼠体内后,生精细胞的发育在组织形态和SGR4、GFRa-1基因出现的时间上与正常小鼠相似。     

甲醛对凋亡相关基因Bcl-2 Bax在生精细胞表达的影响

目的 研究长期在甲醛含量过高的室内环境中凋亡相关基因Bcl-2、Bax在睾丸和生精小管细胞中表达.方法 利用医用甲醛制备大白鼠的甲醛毒性模型,采用免疫组织化学技术,检测Bcl-2、Bax蛋白在睾丸及生精小管中的表达.结果 高浓度的甲醛作用于大白鼠2个生精周期,每个生精小管中Bcl-2蛋白表达的阳性细胞数目在高剂量组为27±2.47,低剂量组为35±4.61,均显著低于正常组93±2.81,(P<0.05).每个细胞中Bcl-2蛋白表达强度(OD值)在高剂量组为0.132±0.024,低剂量组为0.113±0.021,均明显低于对照组0.183±0.031,P<0.05;Bax蛋白表达的阳性细胞数目在高剂量组为89±20.14,低剂量组为61±14.76,均显著高于正常组23±4.71,P<0.05.每个细胞中Bcl-2蛋白表达强度(OD值)在高剂量组为0.098±0.021,低剂量组为0.085±0.018,均明显高于对照组0.032±0.026,P<0.05.结论 长期处于高浓度甲醛的室内环境中使睾丸和生精细胞中Bcl-2的表达降低,Bax的表达增强.     

贫铀对小鼠睾丸生精细胞和精子遗传损伤的初步研究

目的　初步探讨小鼠吸入不同剂量的贫铀 (DU)气溶胶对生精细胞和精子的遗传损伤作用。方法　采用小鼠睾丸初级精母细胞染色体畸变试验、小鼠睾丸生殖细胞微核试验和精子染色质结构试验 (SCSA) ,评价DU诱导小鼠生精细胞和精子的遗传损伤程度。结果　吸入DU气溶胶组睾丸生殖细胞微核发生率与对照组相比无显著差异 ,吸入 ( 73 1 5 2± 3 5 99)和 ( 877 83± 43 19)ng gDU组小鼠睾丸初级精母细胞染色体数目畸变率为 17 2 %和 2 7 2 %,与对照组比较显著升高 (P <0 0 1) ;精子染色质结构试验中 ,对照组、吸入 ( 73 1 5 2± 3 5 99)和 ( 877 83± 43 19)ng gDU组的精子SCSA各变量平均值 :αT分别为 2 5 3 5 1± 3 1 76、2 88 2 9± 68 3 0、2 94 5 6± 72 90 ,%COMP分别为 3 73± 5 5 0、9 0 2± 4 43、9 11± 5 3 3 ,%GREEN分别为 0 89± 0 44、1 62± 1 0 6、1 80± 0 61,DU组各变量值与对照组比较均有显著增高 (P <0 0 5 )。结论　小鼠吸入贫铀气溶胶可诱导生精细胞和精子遗传损伤     

肾阳虚大鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因的表达

目的:观察肾阳虚大鼠睾丸生精细胞凋亡相关基因bcl-2和bax表达的变化.方法:选用雄性SD大鼠,每日用腺嘌呤(200mg/kg)灌胃,连续30天,造成肾阳虚生精障碍模型大鼠.采用免疫组织化学方法观察bcl-2和bax的表达情况.结果:与正常大鼠比较,模型大鼠睾丸生精细胞bcl-2的表达显著下降、bax的表达显著增高(P＜0.05).结论:睾丸生精细胞凋亡相关基因bcl-2和bax表达的改变可能是肾阳虚大鼠生精障碍的原因之一.     

雄激素受体敲除小鼠睾丸生精功能变化及p63的表达

目的 研究雄激素受体（AR）敲除小鼠睾丸生精功能及p63在曲细精管中表达的改变.方法 采用雄性Flox-AR小鼠与雌性ACTB-Cre小鼠交配,并敲除胚胎中AR,筛选AR敲除（AR敲除组）和AR未敲除（对照组）雄性小鼠各10只,对比睾丸曲细精管生精功能及p63的表达.结果 两组小鼠曲细精管内径、管周膜厚度、管壁生殖细胞层数、生殖细胞成熟度评分及总Makler评分之间差异均有统计学意义（P＜0.05）,p63的阳性表达主要位于精原细胞及精母细胞,精子细胞及成熟精子中表达呈阴性,且AR敲除组表达阳性率及HSCRE评分均显著低于对照组（P＜0.01）.结论 AR表达与小鼠睾丸曲细精管p63表达关系密切,AR敲除小鼠睾丸曲细精管生精功能受损、p63表达下调,p63调控生殖细胞的早期分化.     

ZNF230基因多态性与无精症相关性研究

目的研究ZNF230基因多态性与无精症的相关性。方法通过变性高效液相色谱(denaturing high performance liquid chromatography,DHPLC)对60例无精症患者ZNF230基因全部外显子进行筛查,并与71名正常人进行对照研究。结果发现ZNF230基因第2外显子C164T碱基转换并首次报告其频率;无精症组与正常对照组之间基因型频率和等位基因频率均存在显著性差异(分别为P=0,019和P=0．033)。结论ZNF230基因可能与无精症相关。     

HSP70基因与睾丸生精细胞凋亡

HSP70基因是参与睾丸生精细胞凋亡的重要基因之一。现就睾丸生精细胞凋亡特点及其生理意义、HSP70基因研究及如何影响睾丸生精细胞凋亡等方面作一综述。     

宝生汤对生精障碍小鼠睾丸及精子的影响

探讨宝生汤对生精障碍模型小鼠睾丸的影响。造模并分组，检测精子密度、活动率，睾丸、附睾重量，小鼠体重，睾丸组织病理切片。结果显示：宝生汤能明显促进损伤睾丸病理修复，提高小鼠精子活动率，增加小鼠睾丸和附睾重量。说明宝生汤有明显的促生精子，修复睾丸病理的作用。     

生精细胞凋亡的基因调控

生精细胞凋亡受大量基因共同调控,深入研究睾丸生精细胞的凋亡及其基因调控是进一步了解生精细胞凋亡机制和其生物学过程的关键所在,对阐明精子发生的生理、病理及探讨男性不育有重要的意义.     

X线辐射对成年小鼠睾丸ghrelin表达的影响

目的:探讨ghrelin在X射线全身照射后小鼠睾丸中表达及其意义。方法:采用辐射剂量1.0GyX线对成年小鼠进行全身照射,于照射后16h、4w取小鼠睾丸组织制备标本,免疫组织化学ABC法检测ghrelin的表达及变化。结果:正常小鼠睾丸ghrelin的阳性表达主要集中在间质细胞,生精细胞呈阴性反应,照射后ghrelin间质细胞为阴性,而生精细胞中出现阳性反应,阳性反应定位于精原细胞、精母细胞和早期变形精子细胞,但照射后4w组中的精子细胞中未见阳性反应。结论:ghrelin在X线辐射后小鼠睾丸中表达的变化,表明ghrelin参与了小鼠睾丸辐射急性损伤及损伤后修复过程。     

小鼠锌指蛋白基因Znf230条件基因打靶载体的构建

目的 构建用于小鼠锌指蛋白基因Znf230条件基因打靶的载体,为产生Znf230基因敲除的小鼠模型准备条件.方法 设计和合成引物,经PCR从小鼠的基因组中扩增出5'同源臂、3'同源臂及锚定序列,长度分别为4,4,1 kb的片段,反向插入pBS载体的neo基因的两侧,从而构建小鼠Znf230条件基因打靶载体Znf230-pBS(5).结果 经过限制性内切酶及DNA测序鉴定,证实该条件基因打靶载体含有的同源序列与Genebank公布的基因序列一致,表明载体构建成功.结论 PCR技术和定向克隆技术是构建条件基因打靶载体简单而可靠的方法.运用该技术可获得小鼠锌指蛋白基因Znf230的条件基因打靶载体.     

REEP6在人睾丸和精子中的表达及定位

目的:通过对人受体相关蛋白(receptor accessory protein 6,REEP6)在睾丸和精子中表达研究来探讨REEP6蛋白在雄性生殖中潜在的功能。方法:Western blot检测REEP6在人睾丸及精子中的表达;免疫组化及组织免疫荧光方法对REEP6在人睾丸组织中的定位进行研究;人精子免疫荧光对REEP6在精子顶体反应前后的定位进行研究。结果:REEP6在人睾丸及精子中均有表达,在睾丸组织中REEP6定位于各级生精细胞的细胞膜,在精子中则定位于核后区附近,并且在顶体反应前后,REEP6在人精子的定位及表达量不发生改变。结论:REEP6在人睾丸和精子中均有表达,其表达定位具有细胞特异性和区域特异性,提示其可能在人睾丸精子发生和(或)精卵融合过程中发挥作用。     

丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶SRPK2在小鼠睾丸组织中的表达及意义

【摘要】 目的 通过研究丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2（serine/arginine-rich protein specific kinase 2，SRPK2） 基因mRNA及其编码蛋白产物在小鼠睾丸组织中的表达特征，探讨该基因在精子发生过程中的作用及意义。 方法 分别采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹杂交（Western blotting）分析该基因mRNA及蛋白产物在小鼠多种组织中的表达；利用实时定量PCR（real-time quantitative PCR）分析SRPK2 mRNA在不同发育阶段小鼠睾丸组织中的差异表达；应用免疫组织化学染色和间接免疫荧光技术观察SRPK2蛋白在小鼠曲精小管中的细胞定位和生精细胞内的亚细胞定位。 结果 半定量RT-PCR和Western blotting分析显示SRPK2 mRNA和蛋白在小鼠睾丸组织中均大量表达；实时定量PCR分析发现SRPK2 mRNA在5周及8周龄雄性小鼠睾丸组织中显著表达，具有明显的阶段特异性表达特征。免疫组织化学染色结果表明SRPK2蛋白阳性着色主要位于曲精小管中的长形精子细胞核；间接免疫荧光分析显示SRPK2蛋白定位于长形精子细胞核表面。 结论 SRPK2基因在小鼠睾丸组织中大量表达，并且具有显著的阶段特异性表达特征和明确的细胞核定位，极有可能在小鼠精子发生的变态成形期参与mRNA前体分子的剪接过程，其作用机制值得进一步深入研究。     

跨膜蛋白CMTM2在人睾丸和精子中的表达及定位

目的：通过研究跨膜蛋白CMTM2在睾丸和精子中的表达来探讨CMTM2蛋白在男性生殖系统中潜在的功能。方法：Western blot方法检测CMTM2在人睾丸及精子中的表达,免疫组织化学及组织免疫荧光方法检测CMTM2在人睾丸组织中的定位,TRITC-CMTM2及FITC-Hoechst免疫荧光双染法检测CMTM2在人精子顶体反应前后的定位。结果：CMTM2在人睾丸及精子中均有表达,在睾丸组织中CMTM2定位于各级生精细胞的细胞膜,睾丸组织冰冻切片免疫荧光检测的结果与免疫组织化学一致,进一步证实CMTM2存在于睾丸各级生精细胞的细胞膜,在精子中则定位于核后区附近。以TRITC-CMTM2及FITC-Hoechst免疫荧光双染法检测CMTM2在人精子顶体反应前后的定位,在顶体反应前后,CMTM2在人精子的定位及表达量未发生改变。结论：CMTM2在人睾丸和精子中均有表达,其表达定位具有细胞特异性和区域特异性,提示其可能在人睾丸精子发生和精卵融合过程中发挥作用,是男性不育研究的靶基因。CMTM2在男性生殖系统中的表达呈现细胞与生精区域的特异性,提示其高度参与生精功能,但目前针对CMTM2在男性生殖系统与精子生成过程中的作用仍未明确,今后可以采用体外受精 胚胎移植等技术进一步研究CMTM2的作用。     

Dbn1在小鼠脑发育过程中表达与定位的研究

目的 探索小鼠发育调节脑蛋白Dbn1在脑发育中的功能,检测在小鼠脑发育不同阶段的表达模式和定位.方法 运用免疫组化和Western blot方法,检测小鼠脑发育不同阶段(E14,P1和P7 d)以及成年(adult),Dbn1蛋白的表达模式和细胞内定位.结果 Western blot方法检测小鼠各发育阶段全脑的Dbn1蛋白表达模式为:在胚胎14 d时即有很高的表达,P1有所降低,P7期又有增加,成年时最低.免疫组化进一步显示:在E14时,Dbn1主要表达在大脑皮层,海马和室管膜区域,阳性信号弥散分布在细胞内;在P1期,Dbn1主要表达在海马,室管膜两侧,阳性信号在细胞内定位趋向于细胞周围及突起;P7期,Dbn1主要表达在大脑皮层,海马和神经元核团,阳性信号在细胞内的定位集中在细胞的突起;在成年2个月期,Dbn1的表达明显减弱,仅少量表达在某些神经核团,细胞内定位不十分明显.结论 在小鼠发育过程中,Dbn1蛋白在脑内的表达为胚胎期最高随后降低,成年后表达甚微;而随着细胞的分化成熟,其在胞内的定位呈现出从细胞质向细胞突起集中的趋势,提示Dbn1在调节神经系统发育中有重要的作用,可能参与神经元的发育和迁移以及神经网络的建立的调节.     

雌激素受体β亚型在大鼠睾丸发育过程中的表达和定位

目的：研究雌激素受体β亚型（ERβ）在大鼠睾丸发育过程中的作用。方法：采用免疫组织化学染色和免疫荧光组织化学染色方法，观察在出生后3，7，16及28d的大鼠睾丸和成年大鼠睾丸中ERβ的表达和分布情况。结果：在出生后3，7d的大鼠睾丸中ERβ主要分布于睾丸间质细胞，在出生后，16，28d分布于睾丸间质细胞胞质，大鼠睾丸中ERβ的表达随出生天数增加而呈逐渐上升的趋势，成年大鼠睾丸间质细胞中ERβ分布较幼年大鼠密度增加。结论：ERβ可能作为一种特异性受体在大鼠睾丸发育过程中影响睾丸间质细胞雄性激素的分泌；进而调节生精过程和精子发育成熟。     

p38 MAPK在小鼠睾丸出生后不同发育阶段的表达

目的：探讨p38 MAPK在小鼠睾丸出生后不同发育阶段的表达．方法：应用免疫组织化学SABC法检测1～7周龄小鼠睾丸p38MAPK的表达和定位．结果：在2周龄小鼠睾丸生精小管上皮中即可观察到p38MAPK免疫阳性反应，免疫反应阳性细胞为精原细胞；3，4和5周龄小鼠睾丸仅有个别生精小管上皮可见p38 MAPK免疫阳性反应；6，7周龄小鼠睾丸中p38 MAPK表达较丰富，免疫反应阳性细胞为精原细胞和初级精母细胞，免疫阳性反应物均主要位于细胞核内．在7周龄小鼠睾丸中还可见到部分间质细胞呈p38 MAPK阳性，免疫阳性反应物主要位于细胞质内．结论：p38 MAPK可能对生精细胞的增殖分化以及雄激素的分泌具有调控作用。     

小鼠睾丸中神经激肽B受体(NK3r)的免疫组织化学

1　材料和方法1.1　材料　雄性成年 BAL B/ c小鼠 6只 ,体质量 2 5～ 2 8g.以颈椎脱臼法处死后立即取材 ,用 9g· L- 1 生理盐水迅速冲洗干净置入 40 g· L- 1 多聚甲醛固定 2 4h,再浸入含 30 0 g·L- 1蔗糖的缓冲液中浸泡 4℃过夜 ,包埋剂包埋后恒冷箱切片 ,分两套收集 ,片厚 4μm,贴于涂明胶载玻片上室温晾干 .1.2　方法　经 30 m L· L- 1 的甲醇双氧水封闭 30 min后 ,第一套切片按照 ABC法进行染色 :1进兔抗神经激肽 B受体 [1 ](1∶ 5 0 )染色 12～ 2 4h;2 Biotin标记的山羊抗兔 Ig G抗体(DAKO 1∶ 40 0 )染色 6～ 8h;3 Avidin…