超声介导微泡破坏对菲立磁进入主动脉壁作用的活体实验观察

目的 探索血池内造影剂Sonovue和Feridex进入血管壁的可能性.方法 普通级雄性日本大耳白兔17只,11只高脂饲养动脉粥样硬化(AS)模型,6只普食正常对照.数字随机取AS组10只和正常组6只,用和不用超声介导微泡破坏(+/-UMMD)各半.全麻、MR平扫并静推Feridex 100μmol Fe/kg后,立即超声聚焦主动脉弓上缘前壁,缓慢静推Sonovue+生理盐水10 ml,MI1.2,3.5 MPa进行UMMD.3T磁共振仪,膝部线圈,主动脉弓上下120 mm范围,2 mm层厚.3D快速小角度激发GRE序列平扫及增强1、24、48、72 h及处死后扫描,标本送光、电镜检.重复测量资料方差分析检验各组数据.结果 UMMD对SPIO粒子进入血管壁差异有统计学意义(P=0.0004).超顺磁氧化铁(SPIO)粒子进入血管壁,以分散形式分布,间质居多,UMMD对内中外膜分布的影响具有明显作用(P=0.01),以外膜分布居多.光、电镜下可见微泡气体进入血管内中膜,油红O染证实.细胞内与细胞外铁粒子染色后表现不同.结论 UMMD使较大粒径SPIO粒子和气体进入血管壁.可能为大分子复合探针和携基因药物跨血管内膜提供新途径.     

超声及超声微泡介导基因转染的安全性研究

目的:探讨超声及超声微泡介导基因转染的安全性。方法:将人脐静脉内皮细胞分别按超声辐照时长及所加入的微泡剂量分组,超声辐照后分别培养24h及48h,应用台盼蓝拒染法进行细胞计数,与对照组进行比较。超声辐照含有不同微泡剂量的细胞后,行扫描电镜观察细胞膜形态。结果:不同辐照时长组经超声辐照后培养24h,10min、15min、30min组细胞计数比对照组降低,差异有统计学差异(P<0.05);继续培养48h,各组与对照组比较无统计学差异。不同微泡剂量组经超声辐照5min后培养24h,200μl、500μl组细胞计数比对照组降低,差异有统计学差异(P<0.05);继续培养48h,500μl组细胞计数比对照组降低,差异有统计学差异(P<0.05)。扫描电镜可见超声辐照后细胞膜完整性变差,继续培养24h后有一定程度改善。结论:超声辐照+微泡对细胞增殖有一定的抑制作用,对细胞膜有一定程度的损害,但这些作用在超声辐照时长不超过5min及微泡剂量不超过100μl时是轻微、可逆的。超声及超声微泡介导基因转染是相对安全的。     

超声辐照超声微泡介导siRNA 转染膀胱癌T24细胞的实验研究

 目的探讨超声辐照超声微泡介导siRNA 转染人膀胱癌T24 细胞的有效性。方法使用超声辐照超声微泡的方法介导FITC-siRNA转染人膀胱癌T24 细胞,通过荧光显微镜及流式细胞学方法观察siRNA的转染效率,使用MTT方法观察细胞活力。结果与各阴性对照组相比,超声辐照超声微泡的方法可以明显增加siRNA向T24 细胞中的转染效率。随着超声辐照强度的增加,siRNA的转染效率在一定范围内有所提高,同时也增加了对T24细胞毒性。与脂质体介导的siRNA体外转染相比,超声辐照超声微泡介导的siRNA 转染效率仍然较低。结论超声辐照超声微泡能够有效提高siRNA 转染膀胱癌细胞的效率,有可能为膀胱癌的基因靶向治疗提供新的转染手段。     

超声破坏微泡介导骨髓间充质干细胞移植的实验研究

目的 初步探讨超声破坏微泡介导骨髓间充质干细胞(MSCs)移植的可行性.方法 21只Wister大鼠分为3组:干细胞静脉移植组(MSCs-iv)、超声+干细胞组(US+MSCs-iv)、超声+微泡+干细胞组(US+MB+MSCs-iv).各组分别取1只大鼠的骨骼肌行HE染色观察显微结构.移植后7 d取各组剩余大鼠下肢股薄肌、半膜肌行免疫组化检测,观察MSCs移植数量;另外US+MB+MSCs-iv组同时取重要脏器行免疫组化检测,评估靶向性.结果 US+MB+MSCs-iv组大鼠股薄肌、半膜肌染色可见红细胞外溢到组织间隙,同时免疫组化结果显示股薄肌、半膜肌及脾脏可见较多移植的MSCs.而其他组骨骼肌未观察到阳性细胞.结论 超声靶向破坏微泡有可能成为提高干细胞移植效率的新方法.     

超声微泡介导双报告基因在椎间盘髓核中表达的研究

目的:探索超声微泡能否介导外源性基因在椎间盘髓核中表达.方法:40只SD大鼠被随机分为4组.第1组仅于髓核内注入含舣报告基因的质粒;第2组为在第1组基础上加超声照射;第3组同时注入含双报告基因的质粒和微泡的混悬液;第4组为在第3组基础上加超声照射.每只大鼠末接受手术和照射的第4、5椎间盘作为对照.一周后处死大鼠取出全部椎间盘做荧光素酶检测.结果:第4组(96.7×103±72.3×103)荧光素酶强度最高,与第1组(8.7×103 ±7.2×103)、第2组(3.1 × 103±2.4×103)、第3组(47.5×103± 443.3×103)比较,差异有统计学意义(P<0.01).结论:超声微泡介导的基因转染系统能促进外源基因髓核中的高表达,为今后椎间盘病变的基因治疗提供了方法和依据.     

超声联合微泡技术在开放血脑屏障中的研究进展

血脑屏障(BBB)是脑屏障最重要的组成部分,对于维持脑的内环境稳定,调节脑内代谢具有重要作用,但BBB的存在是当前治疗中枢神经系统疾病的药物及其他措施难以跨越的障碍。安全有效地开放BBB是治疗中枢神经系统的前提,为了攻克服这一难关,人们进行了很多尝试。新近研究发现,超声联合微泡技术具有可逆、无创地开放特定部位脑组织BBB的特性,临床应用前景广阔。目前已在基础和临床前期研究中评价超声联合微泡技术开放BBB的可行性和安全性。     

超声联合微泡介导基因转染对内皮细胞骨架的影响

目的 探讨白蛋白微泡在治疗性超声条件下对介导基因转染以及对细胞骨架的影响,同时探讨超声联合微泡介导基因转染的最佳声学参数.方法 六孔板培养大鼠微血管内皮细胞,一组每孔加入eGFP质粒10μg,加或不加微泡,超声条件为连续波,频率2 MHz,机械指数是0.50～1.80.照射时间是30～180 S,24～48 h后观察细胞转染情况.一组超声照射后免疫荧光染色细胞骨架,荧光显微镜观察并测定荧光强度.结果 机械指数为0.50～1.00范围内,基因转染率与机械指数呈正相关(P<0.001),再增加机械指数基因转染率差别无统计学意义.超声照射时间30～90 S范围内,基因转染率以及微管荧光强度改变与超声照射时间呈正相关(P<0.001).再延长照射时间基因转染率差别无统计学意义.同种条件下,微丝蛋白荧光强度改变无统计学意义(P>0.05).结论 超声联合微泡能够显著增加报告基因的转染率并且对细胞骨架无明显的损伤.微泡可以作为临床冠心病基因治疗的安全有效的载体.     

超声介导靶向微泡治疗脑梗死白兔动物实验研究

目的 探究采用超声介导靶向微泡[自制,含造影剂(全氟显)、血管内皮生长因子₁₆₅c脱氧核糖核酸(VEGF₁₆₅c DNA)、抗细胞间粘附因子(ICAM-1)单克隆抗体]治疗脑梗死白兔的动物实验效果,同时观察VEGF₁₆₅c DNA基因转染对改善受损血管内膜的作用。 方法 选取60只新西兰大白兔,通过高脂饮食制作脑梗死模型,随机分为3组,分别采用超声介导靶向微泡(A组)、爱通立(B组)、生理盐水(对照组)进行治疗,观察各组白兔治疗后血管再通情况、梗死部位坏死区中性粒细胞浸润情况、梗死区质量比重。 结果 治疗后A组及B组血管再通情况优于对照组(P<0.05),但A组与B组血管再通情况比较差异无统计学意义(P>0.05);治疗后A组梗死部位坏死区中性粒细胞平均计数明显少于B组及对照组(P<0.05),但B组与对照组梗死部位坏死区中性粒细胞平均计数对比差异无统计学意义(P>0.05);治疗后A组梗死区质量占比低于B组及对照组(P<0.05),且B组梗死区质量占比低于对照组(P<0.05)。 结论 超声联合靶向微泡介导脑梗死治疗的动物实验VEGF₁₆₅c DNA基因转染治疗效果较好,能改善血管再通情况,减轻梗死区域的炎性反应,减少梗死区质量占比,有利于治疗脑梗死。      

超声靶向微泡破坏技术介导基因转染的研究进展

随着肿瘤分子机制研究的不断深入,利用肿瘤与正常组织基因及调控区域的结构差异,从分子水平特异性杀伤肿瘤细胞的基因治疗成为肿瘤治疗中极具应用潜力的新策略。超声靶向微泡破坏技术介导的靶向基因治疗方法既可增强裸质粒DNA在癌细胞内的转染和表达,又能提高基因治疗的靶向性,减少全身不良反应,是一种很有前途的临床肿瘤治疗技术。作者就有关超声结合纳/微泡介导的输送系统的作用机制及其在基因转染的应用进展和影响因素作一综述。     

超声联合微泡剂用于肿瘤治疗的研究进展

近年来，超声联合微泡剂在肿瘤治疗中的作用成为新的研究热点.目前的研究表明，超声联合微泡剂在肿瘤治疗中显示出了巨大潜力，可作为一种无创的有效治疗手段。利用低功率超声辐射微泡栓塞新生血管治疗肿瘤应用前景广阔，而具有靶向性的药物施放、基因治疗及提高高强度聚焦超声（HIFU）疗效等的基础研究，亦有望取得突破性进展。     

ADSCs对辐射诱发C57小鼠胸腺瘤免疫功能的影响及其机制

目的:观察脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)对辐射诱发小鼠胸腺瘤免疫功能的影响及其可能的机制,方法:清洁级C57BL/6小鼠32只,随机分为4组:对照组、照射组、照射+ADSCs组、假照射+ADSCs组,各8只,末次照射后第7天后分别处死4组小鼠,计算小鼠胸腺指数.刀豆素A(ConA)诱导的胸腺淋巴细胞转化率采用MTY法测定,运用流式细胞仪检测胸腺淋巴细胞的细胞周期以及T淋巴细胞亚群的变化.结果:照射+ ADSCs组相对于照射组小鼠的胸腺淋巴细胞转化率和胸腺指数显著增高(P＜0.05),并且CD4+T淋巴细胞的含量显著增加(P＜0.05),CD8+T淋巴细胞明显下降(P＜0.05),CD4+/CD8+T淋巴细胞比值显著升高(P＜0.05).结论:ADSCs可能通过调节小鼠胸腺内细胞水平的变化,保护小鼠胸腺细胞的免疫功能.     

蒿甲醚对紫外线照射后HaCaT细胞表达Fas和Bcl-2的影响

目的为探讨一定剂量不同波长紫外线照射HaCaT细胞后,不同浓度蒿甲醚对HaCaT细胞表达凋亡相关蛋白Fas和Bcl-2的影响.方法采用45.00 mJ/cm2剂量的UVB及4.00 J/cm2剂量的UVA照射培养的HaCaT细胞(永生化角质形成细胞),以羟氯喹及不同浓度的蒿甲醚进行干预处理,应用流式细胞仪检测紫外线辐照及羟氯喹和蒿甲醚处理后HaCaT细胞Fas和Bcl-2蛋白水平的变化.结果(1)与未照射组相比UVA、UVB照射均可使HaCaT细胞表达Fas增加;(2)与UV组相比UVA加羟氯喹,UVB、UVA加25μg/mL蒿甲醚组使HaCaT细胞表达Fas减少;(3)与未照射组相比UVA、UVB照射可使HaCaT细胞表达Bcl-2减少;(4)与UV组相比UVA加25μg/mL蒿甲醚组和UVB加100μg/mL蒿甲醚组可以使HaCaT细胞表达Bcl-2增加.结论小剂量(25μg/mL、50μg/mL)蒿甲醚与凋亡相关的Fas和Bcl-2的表达有关.     

Blood Pressure Associated with Arsenic Methylation and Arsenic Metabolism Caused by Chronic Exposure to Arsenic in Tube Well Water

Objective The effects of arsenic exposure from drinking water, arsenic metabolism, and arsenic methylation on blood pressure (BP) were observed in this study.Methods The BP and arsenic species of 560 participants were determined. Logistic regression analysis was applied to estimate the odds ratios of BP associated with arsenic metabolites and arsenic methylation capability.Results BP was positively associated with cumulative arsenic exposure (CAE). Subjects with abnormal diastolic blood pressure (DBP), systolic blood pressure (SBP), and pulse pressure (PP) usually had higher urinary iAs (inorganic arsenic), MMA (monomethylated arsenic), DMA (dimethylated arsenic), and TAs (total arsenic) than subjects with normal DBP, SBP, and PP. The iAs%, MMA%, and DMA% differed slightly between subjects with abnormal BP and those with normal BP. The PMI and SMI were slightly higher in subjects with abnormal PP than in those with normal PP.Conclusion Our findings suggest that higher CAE may elevate BP. Males may have a higher risk of abnormal DBP, whereas females have a higher risk of abnormal SBP and PP. Higher urinary iAs may increase the risk of abnormal BP. Lower PMI may elevate the BP. However, higher SMI may increase the DBP and SBP, and lower SMI may elevate the PP.     

衰老对于实验性小鼠结肠炎的影响及机制

目的 研究衰老对于实验性小鼠结肠炎的影响及其可能机制。方法 雄性C57BL/6小鼠青年(6~8周)和老年(56周)各10只,各分为对照组和实验组(共4组,每组5只),实验组予葡聚糖硫酸钠(DSS)饮用水,对照组予自由饮用水7 d,第8天处死。采用实时荧光定量PCR检测小鼠结肠组织肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)mRNA相对表达量,电镜观察肠上皮细胞的结构,蛋白电泳和免疫组织化学染色法检测小鼠结肠组织E-cadherin和occludin蛋白表达量。结果 与青年组比较,老年DSS小鼠体质量下降更明显(t=3.679,P=0.006),疾病活动指数更高(t=2.496,P=0.037),病理表现更严重(U=0.000,P=0.008)及IL-6表达增加(U=4.000,P=0.191)。电镜观察老年对照组肠上皮细胞间的紧密连接结构不连续,老年和青年DSS小鼠肠上皮细胞间紧密连接结构模糊,破坏明显。老年实验组小鼠结肠组织E-cadherin(t=0.184,P=0.863)和occludin表达(t=0.399,P=0.710)低于青年实验组。结论 衰老会加重DSS诱发的小鼠结肠炎,其机制可能与衰老相关的肠上皮细胞紧密连接、黏附连接损伤,使肠黏膜屏障功能减退有关。     

卡介菌多糖核酸对尖锐湿疣患者外周血T细胞亚群及其细胞因子表达的影响

目的 研究卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）对尖锐湿疣（CA）患者外周血T淋巴细胞亚群及胞内细胞因子表达的影响，探讨BCG-PSN对尖锐湿疣可能的免疫调节机制。方法 采用三色和双色荧光抗体染色技术经流式细胞仪检测18例CA患者在BCG-PSN治疗前后外周血T淋巴细胞亚群及CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞内IL-2、IL-4、IL-12、IFN-γ染色阳性细胞百分率。结果 在BCG-PSN治疗前，CA患者CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值明显低于对照组（均P〈O．01），CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞内IL-2、IL-12、IFN-γ阳性细胞百分率较对照组明显下降（均P〈0．01），IL-4阳性细胞百分率与对照组比较差异无显著性意义（P〉0．05）；而治疗后CA患者CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞、CD4^＋／CD8^＋比值明显高于治疗前（均P〈O．01）；CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞内IL-2、IL-12、IFN-γ阳性细胞百分率较治疗前升高（均P〈0．01）。结论 BCG-PSN可通过调节尖锐湿疣患者T细胞亚群，纠正患者Th1／Th2模式及Tc1／Tc2模式失衡现象，起到治疗尖锐湿疣的作用。     

透明质酸对白细胞介素-1β诱导软骨细胞iNOS活性和表达的影响

目的:研究透明质酸对重组大鼠白细胞介素-1β(rrIL-β)诱导体外骨关节炎软骨细胞iNOS活性和表达的影响,并探讨其作用机制.方法:体外分离、培养大鼠软骨细胞成功后,加入不同浓度的透明质酸(10,20,40 mg/L)1 h后,以10 μ g/L IL-1β刺激,培养24 h后,通过RT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA的表达;以Griess反应测定上清液中一氧化氮(NO)浓度,并通过iNOS催化L-精氨酸和分子氧反应生成NO推算iNOS的活力.结果:透明质酸可有效抑制IL-1β诱导骨关节炎软骨细胞iNOS的活性和NO的产量;RT-PCR检测显示透明质酸能抑制iNOS的mRNA表达,且呈现剂量依赖的趋势.结论:透明质酸能通过降低iNOS的活性和其蛋白表达,来抑制骨关节炎软骨细胞上清液中NO的含量.     

川芎嗪调控肝癌HepG2细胞凋亡及对相关蛋白表达的影响

目的 通过研究川芎嗪（Tetramethypyrazine,TMP）对肝癌HepG2细胞凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨TMP抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法 通过实时细胞分析技术（Real-time cell analyzer,RTCA DP）检测TMP对HepG2细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测TMP对HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响;通过全自动Western blot实验检测TMP对p53蛋白及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。结果 TMP对肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,并呈现时间剂量依赖关系;TMP可显著诱导肝癌HepG2细胞凋亡,显著增加G0/G1期细胞,且呈一定的时间相关性;TMP能够显著促进p53蛋白的表达（P<0.01）和降低Bcl-2/Bax表达比值（P<0.01）。结论 TMP具有抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用,其机制可能与影响肝癌HepG2细胞周期,导致细胞周期阻滞有关;同时TMP可促进p53蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达从而降低Bcl-2/Bax表达比值,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肝癌细胞的增殖。      

瘦素蛋白在小鼠日本血吸虫病肝纤维化组织中的表达及意义

目的 观察小鼠感染日本血吸虫后不同时期肝脏瘦素蛋白的表达,探讨瘦素在日本血吸虫病肝纤维化发生、发展中的意义.方法 日本血吸虫尾蚴皮肤敷贴法感染小鼠构建日本血吸虫病肝纤维化模型,于感染后不同时间取肝组织标本.HE和VG染色对肝组织进行病理学检查,半定量分析肝纤维化程度;采用免疫组织化学SP法动态观察瘦素及肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)标记物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达情况.结果 模型组肝胶原含量随病程发展呈进行性增多,肝纤维化程度随病程发展呈进行性加重;α-SMA阳性细胞于炎症早期在汇管区已有表达,随病程进展进行性增加,α-SMA阳性表达主要位于胶原纤维所在部位;瘦素阳性表达出现的时间、部位和进程类似于α-SMA阳性表达情况.相关分析表明,α-SMA蛋白表达与胶原含量呈正相关(r=0.956,P＜0.01),而与肝纤维化程度也呈正相关(r=0.804,P＜0.01) ;与瘦素蛋白呈正相关(r=0.836,P＜0.01);瘦素蛋白与胶原含量呈正相关(r=0.758,P＜0.01),而与肝纤维化程度也呈正相关(r=0.823,P＜0.01).结论 HSC是日本血吸虫病肝纤维化发生发展过程中的关键细胞,而瘦素在该过程中发挥重要的促肝纤维化作用,可望成为新的治疗靶点.     

单克隆抗体MGd_1、MG_7对胃癌和相关病变中相应抗原的表达

以 ABC 法研究胃癌和相关病变中,胃癌单克隆抗体相应抗原的特征和分布。MGd_1抗原在胃癌阳性率最高,早期胃癌阳性率为80%,进展期胃癌为90%;而胃癌相关病变阳性率较低,癌旁胃粘膜阳性率为45%,胃溃疡边缘异型增生为20%。MG_7抗原在非癌组织中阳性率最低,对胃癌特异性高。MGd_1和 MG_7联合使用,进展期胃癌阳性率达95%,正常粘膜均为阴性。提示单克隆抗体检查对胃癌的诊断和“高危”癌前状态的确定有所帮助。     

PKC-γ和ERK在慢性染铅小鼠脑皮质区的异常表达

目的观察和探讨铅对小鼠脑皮质区蛋白激酶C-γ(PKC-γ)及细胞外信号调节激酶(ERK)蛋白表达的影响。方法小鼠出生1d起,染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2.4,4.8,9.6mmol/L。幼鼠出生后,先通过哺乳接触铅,断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。分别在14,21,28,35d处死小鼠,用蛋白免疫印迹法观察各组小鼠脑皮质区PKC-γ蛋白表达状况;分别在7,14,21,28d处死小鼠,用蛋白免疫印迹法观察各组小鼠脑皮质区ERK蛋白表达状况。结果慢性铅暴露对小鼠脑皮质区PKC-γ蛋白表达总体上呈现下降趋势,各染铅组中,PKC-γ蛋白表达与相应期对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05)。低浓度铅2.4mmol/L使ERK表达升高,此后随铅浓度升高ERK表达量逐渐降低,铅浓度升高至9.6mmol/L时,随着铅浓度升高,ERK表达量不再降低,相反有所回升。结论铅扰乱小鼠脑皮质区PKC-γ及ERK蛋白正常表达。