缺氧对膀胱平滑肌细胞缝隙连接蛋白40和缝隙连接蛋白43的影响

目的:探讨缺氧环境下缝隙连接蛋白(Cx40、Cx43)在mRNA水平上的变化,研究细胞缺氧和Cx40、Cx43表达变化在不稳定膀胱发病机理上的相关关系。方法:体外培养大鼠膀胱平滑肌细胞,建立细胞缺氧模型;在细胞缺氧1 h后收集细胞,运用逆转录-聚合酶链反应技术分析Cx40、Cx43。结果:缺氧1 h,Cx40、Cx43在mRNA水平上表达较正常氧对照组有明显升高(P<0.01)。结论:细胞缺氧会引起Cx40、Cx43在mRNA水平上表达的变化,这可能与不稳定膀胱的发生有密切联系。     

不稳定逼尿肌Cx43基因表达及其与逼尿肌细胞间缝隙连接通讯功能的关系研究

目的研究连接蛋白Cx43基因在体外培养不稳定逼尿肌细胞中的表达及不稳定逼尿肌细胞间缝隙连接通讯(gap junction intercelluar communication,GJIC)功能的变化,初步探讨二者与逼尿肌不稳定(destrusor instability,DI)的关系.方法健康雌性Wistar大鼠40只,分为DI组和正常组.RT-PCR及Western blot法检测各组逼尿肌细胞中Cx43 mRNA及蛋白表达变化,划痕标记荧光染料示踪技术(SLDT)检测各组逼尿肌细胞间GJIC功能变化.结果RT-PCR及Western blot检测结果显示DI组逼尿肌细胞中Cx43 mRNA及蛋白含量明显高于正常组(P＜0.01),SLDT结果表明DI组逼尿肌细胞间GJIC明显强于正常组(P＜0.01).结论体外培养不稳定逼尿肌细胞中Cx43基因表达增加,细胞间GJIC增强,二者可能与DI的发生有密切关系.     

缝隙连接蛋白Cx43磷酸化的研究进展

相邻细胞间最主要最快速的通讯方式是缝隙连接通道（GJ）,而缝隙连接蛋白（Cx）形成的连接子是其主要组成部分.Cx大多属于磷蛋白,其磷酸化状态不同程度地影响其自身的合成装配以及GJ的功能.Cx43是哺乳动物身上分布最广泛的Cx,尤其是在心血管系统和神经系统,它的磷酸化状态受到多重激酶途径调节,发生磷酸化的位点也不尽相同,且Cx43的磷酸化参与了多种疾病的发生、发展.     

维甲酸对睾丸癌细胞缝隙连接蛋白Cx43表达及其功能的影响

目的 探讨维甲酸对睾丸癌细胞缝隙连接蛋白（Cx43）表达及其功能的影响。方法 体外培养的睾丸癌I-10细胞分别予2.5、5.0、10.0 μmol/L维甲酸处理24 h,Western blot法检测I-10细胞Cx43蛋白表达,细胞免疫荧光法观察细胞膜表面Cx43蛋白分布的改变,细胞接种荧光示踪法检测细胞荧光传递功能的变化。结果 Western blot结果显示,与对照组比较,维甲酸2.5、5.0、10.0 μmol/L可增加I-10细胞中Cx43蛋白表达(P<0.05),其增强率分别为43.14%±2.1%、58.09%±1.8%、143.13%±1.6%;细胞免疫荧光法结果显示,维甲酸2.5、5.0、10.0 μmol/L可显著增加I-10细胞膜表面Cx43蛋白的表达;细胞接种荧光示踪法结果显示,与对照组比较,维甲酸2.5、5.0、10.0 μmol/L可增强I-10细胞间荧光传递功能(P<0.01),增强率分别为26.1%±2.3%、63.3%±1.6%、140.5%±3.4%。结论 维甲酸可通过增加I-10细胞Cx43蛋白的表达来增强细胞间的缝隙连接功能。     

缝隙连接蛋白43 (Cx43)与神经炎症的研究进展

 缝隙连接蛋白43(connexin43, Cx43)是中枢神经系统(central nervous system, CNS)中含量最丰富的连接蛋白,主要分布于星形胶质细胞,以缝隙连接(gap junction, GJ)和半通道(hemichannel, HC)的形式存在,分别介导细胞间和细胞与外环境间的信息交流。随着人口的老龄化,阿尔茨海默病(Alzheimer's disease, AD)、脑卒中及术后认知功能障碍等疾病的发生率越来越高,神经炎症是这些CNS疾病的一个共同特征,涉及到白细胞聚集、胶质细胞激活、炎性因子释放等,该过程需要高效的信息交流,研究表明Cx43在该过程中发挥着不可忽视的作用,主要表现为GJ抑制和HC活性增加并影响神经功能。本文重点综述Cx43与神经炎症的关系,为多种CNS疾病的治疗提供新的靶点。     

不同作用机制的镇痛药对细胞缝隙连接通道蛋白Cx43的作用

 【目的】 探讨不同作用机制的镇痛药对细胞缝隙连接通道功能的作用&#65377;【方法】 天然表达Cx43的小鼠睾丸支持细胞TM4实验前用细胞诱导培养液培养使其表达形成有效的细胞缝隙连接(GJ),细胞接种荧光示踪法测定镇痛药对表达Cx43的TM4细胞GJ功能的影响, 同时Western blot检测细胞缝隙连接通道蛋白之一Cx43的表达&#65377;【结果】 吗啡不影响TM4细胞中Cx43的GJ功能,曲马多和凯纷均抑制TM4细胞中Cx43的的GJ功能,但均不影响Cx43的表达&#65377; 【结论】 曲马多和凯纷均抑制由Cx43组成的细胞缝隙连接功能,提示了一个新的镇痛机制:即曲马多和凯纷可能通过抑制中枢神经元的GJ产生镇痛作用&#65377;     

缝隙连接蛋白43与脑水肿的研究进展

缝隙连接蛋白（connlexin，cx）是构成缝隙连接（Gapjunction，GJ）通道的基本结构和功能蛋白。目前在哺乳动物组织中发现的连接蛋白至少20种。而Cx43（Connexin43，Cx43）是缝隙连接蛋白中最为丰富的连接蛋白，主要存在于星形胶质细胞中，在GJ介导的缝隙连接通讯中发挥着重要作用，目前关于Cx43的主要研究主要集中在与肿瘤、心血管、癫痫、脑水肿等方面，本文就Cx43与脑水肿之间关系的研究进展做一综述。     

急性切口痛对大鼠脊髓背角缝隙连接蛋白Cx43表达的影响

目的观察急性切口痛对大鼠脊髓背角缝隙连接蛋白Connexin43（Cx43）表达的影响。方法雄性SD大鼠80只,随机分为
对照组和急性切口痛模型组,切口痛模型组所有大鼠于左后爪作一纵形切口制备切口痛模型,于术前和术后1、2、4、6、24 h时采
用von frey 细丝法测定大鼠左后足机械回缩阈值的改变。于术前和术后2 h、4 h取大鼠左侧脊髓背角组织,分别采用Western
blot 法和免疫荧光标记法检测脊髓背角Cx43蛋白表达的变化。结果急性切口痛组大鼠50%机械性回缩阈值在术后24 h内显
著降低,并于2 h, 4 h 最为显著,与对照组比较差异均有统计学意义（P<0.01）;Western blot 结果显示,急性切口痛组脊髓背角
Cx43的表达于术后2 h和4 h明显升高,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）;免疫荧光结果显示,急性切口痛组脊髓背角
Cx43的免疫荧光强度于术后2、4、24 h明显升高,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论急性切口痛能够引起脊髓
背角缝隙连接蛋白Cx43的表达明显升高,缝隙连接蛋白Cx43可能参与急性切口痛的产生。
     

缝隙连接蛋白43与心律失常相关性研究进展

缝隙连接蛋白43（connexin43,Cx43）是心肌细胞间隙连接的主要蛋白成分,在维持心肌细胞的连接通讯功能,电信号传导和正常的节律性的收缩中起重要作用。Cx43的空间分布、数量、结构的异常均能影响缝隙连接电荷耦联和代谢耦联的功能导致心律失常的发生,而Cx43在各种心脏疾病中受多因素的调控,如肾上腺素、血管紧张素等,能阐明Cx43病理变化发生的机理将对心律失常的治疗有着重要的意义。     

缝隙连接蛋白43与肿瘤关系的研究进展

细胞缝隙连接通讯是细胞之间信息交流的一种方式,其发挥功能依靠细胞缝隙连接。缝隙连接蛋白(Cx)家族由Cx组成,而Cx43是Cx家族成员之一,其表达及功能异常涉及多种肿瘤的发生、发展。在胃癌、结肠癌、尤文肉瘤、卵巢癌组织中,Cx43表达呈现下调趋势;但在膀胱癌、乳腺癌、神经胶质瘤、肺癌组织中Cx43呈过表达,且在肺癌、乳腺癌神经胶质瘤中Cx43的过表达表现出抑癌和促进肿瘤转移的双向性。因此,寻求以Cx43为靶点治疗肿瘤,并深入探究Cx43与抗肿瘤药物之间的关系成为当前亟待解决的问题。     

环磷酰胺及长春新碱对睾丸支持细胞间隙连接蛋白表达的影响

目的：探讨环磷酰胺、长春新碱对睾丸支持细胞间隙连接蛋白（Cx）43表达的影响。方法：培养小鼠睾丸支持细胞,分别加入环磷酰胺（0、1、2、4、8μg/mL）和长春新碱（0.00、0.01、0.02、0.04、0.08μg/mL）行细胞毒染24 h,MTT法检查细胞毒性。选择4μg/mL环磷酰胺、0.04μg/mL长春新碱作用支持细胞6、12、24及48 h,结果行RT-PCR分析;选择同样浓度药物作用支持细胞24 h,并用免疫荧光染色检测培养的细胞中Cx43的表达情况。结果：环磷酰胺、长春新碱染毒细胞后,Cx43 mRNA水平开始随时间增加而逐渐下降（P〈0.05）,且随剂量增加Cx43表达强度逐渐减弱（P〈0.05）。结论：环磷酰胺及长春新碱对睾丸支持细胞有毒性,并随着药物浓度增大毒性增强,且环磷酰胺比长春新碱更明显。     

Gap junctional protein connexin 43 in rat detrusor muscle with unstable bladder

Background Unstable bladder is one of the common clinical dysfunctions of the lower urinary tract. Gap junctions （GJs） are the plaques of aqueous channels that facilitate electrical and metabolic communication between the intracellular compartments of adjacent cells, exchange of nutrients and ions between connected cells and transfer of electrical signals In the present study we investigated the quantitative alterations of the GJ in the rat detrusor muscle and its functional changes related to the developing of unstable bladder （USB）. Methods Thirteen female Wistar rats （study group） with obstructive unstable bladder as determined by urodynamic study and 10 sham-operated rats （control group） were sacrificed at 6 weeks after surgery. Cystometric investigation, and the content and distribution of the GJ protein connexin 43 （Cx43） in the detrusors which were taken from the bladder of the rats were studied by Western blot and laser confocal microscopy with a double label immunohistochemistry technique. Results The expression of Cx43 was found adjacent to the detrusor with the laser confocal microscopy. The Cx43 expression increased markedly in the study group （pixel density 29.5±13.9, staining size （17.9±8.8） μm2） compared with the control group （pixel density 14.2±2.2, staining size （5.7±3.1） pm2, P 〈0.05）. Western blot analysis demonstrated that Cx43 in the study group （the average gray level was 31.066） was significantly higher than in the control group （the average gray level was 11.701, P 〈0.01 ）. Conclusion The increase of GJ leading to a intercellular excitatory communication is one of the important mechanisms related to developing unstable bladder.     

间隙连接蛋白Cx43在卵巢癌中的表达及意义

目的：探讨间隙连接蛋白Cx43（connexin43,Cx43）在上皮性卵巢癌中的表达及意义。方法：对10例正常卵巢上皮，38例不同分化程度的卵巢浆液性囊腺癌的石蜡包埋切片，用免疫组织化学SP法和计算机图像分析系统检测Cx43蛋白的表达，结果：正常卵巢上皮及卵巢癌组织中Cx43蛋白定位于细胞膜和细胞质中；不同分化程度卵巢癌组织中Cx43阳性表达的相对面积和平均吸光度值均显著低于正常卵巢表面上皮细胞（P＜0．01），而且随着卵巢癌细胞分化程度的下降而显著降低（P＜0．01）。结论：Cx43蛋白表达下降与上皮性卵巢癌的发生发展密切相关。     

慢性缺氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞形态的影响

目的 探讨慢性缺氧引起缺氧性肺血管收缩反应降低的机制。方法 采用计算机成像及图像分析系统，观察慢性缺氧培养的大鼠肺内动脉平滑肌细胞形态学变化的情况。结果 慢性缺氧后肺动脉平滑肌细胞中缺氧敏感型细胞的比例明显减小，中间混合型细胞比例明显增高，而缺氧不敏感型细胞的比例不变(P＜0．05)。结论 慢性缺氧可直接使肺动脉平滑肌细胞表型转化，由缺氧敏感细胞向中间混合型细胞转化。这可能是慢性缺氧时缺氧性肺血管收缩反应降低的机制之一。     

扩张型心肌病患者心肌Cx43基因的表达

目的探讨晚期扩张型心肌病(DCM)患者心肌连接蛋白43(Cx43)基因表达水平及其意义。方法 DCM病例及标本是2002～2003年华中科技大学同济医学院附属同济医院对4例晚期DCM患者进行心脏移植手术切除心脏的心肌;其中男2例、女2例,年龄分别为14、44、45和55岁。对照组4例为同期颅脑损伤和毒品中毒致死者,均为男性,年龄分别为24、29、30和37岁;死因为颅脑损伤3例、毒品中毒1例。每例心脏进行常规病理学检查并取材后,应用逆转录PCR技术定量检测左心室心肌Cx43基因表达水平,并进行比较分析。结果 DCM患者心肌Cx43基因定量检测结果为(0.188±0.167),对照组为(0.440±0.096),两组比较差异有统计学意义(P=0.025)。结论晚期DCM患者心肌Cx43基因表达水平下降,这种心肌Cx43基因表达水平下降可能与DCM患者发生心衰、心律失常和猝死有关。     

犬陈旧性心肌梗死时连接蛋白43的分布

目的：探讨陈旧性心肌梗死时心肌缝隙连接蛋白43（connexin 43,Cx43)的分布特征。方法：结扎犬冠状动脉造成心肌梗死,术后恢复40－50d,用改良的免疫细胞化学法显示心肌梗死区,边缘带及非缺血区Cx43的分布,半定量分析不同部位Cx43的分布密度。结果：与正常心肌相比,梗死病灶及其邻近区域Cx43的分布出现明显紊乱：梗死中心区Cx43完全消失;边缘带Cx43呈现不均匀消失,少量Cx43分布于岛状或半岛状尚存活的心肌;心肌细胞端－端相接处的Cx43严重消失,而细胞侧－侧相接处的Cx43仍有部分存在。非缺血区Cx43的密度和分布与正常心肌相比无明显改变。结论：陈旧性心肌梗死时Cx43的数量和分布呈现高度不均一性,尤其在边缘带Cx43的分布特点是形成局部传导阻滞和折返性心律失常的结构基础。     

Changes in Phosphorylation of Connexin43 in Rats during Acute Myocardial Hypoxia and Effects of Antiarrhythmic Peptide on the Phosphorylation

In order to confirm the hypothesis that during acute hypoxia, the antiarrhythmic peptide (AAP10) could improve conductance by changing the phosphorylation state of connexin43 (Cx43), isolated perfused rat hearts were randomly divided into three groups: control, hypoxia and AAP10 (n=9 in each group). The change in Cx43 phosphorylation was tested by Western-blot; the distribu- tion of Cx43 was observed by confocal immunofluorescence microscopy. Western-blot analysis re- vealed that the expression of total Cx43 protein was significantly decreased during acute hypoxia, while nonphosphorylated Cx43 (NP-Cx43) was unchanged. AAP10 could increase the expression of total Cx43 protein, but had no effects on the NP-Cx43 protein. Immunofluorescence study showed that during acute hypoxia, both total Cx43 and NP-Cx43 proteins were greatly decreased, while AAP10 only increased the expression of total Cx43 protein, but had no effect of the NP-Cx43 protein expression. These findings suggested that the decrease of intercellular communication may be associ- ated with the reduction of phosphorylated Cx43 (p-Cx43) and translocation of NP-Cx43 from the surface of gap junction into intracellular pools during acute hypoxia. AAP10 can improve intercelluar communication by enhancing phosphorylation of Cx43.     

间隙连接蛋白43突变与皮肤疾病相关性研究

间隙连接蛋白(Cx)在保证细胞间物质信息传递及维持皮肤屏障稳态方面发挥着重要作用,其基因突变,甚至表达水平异常均会引起多种疾病,严重影响患者生活质量。在编码人类Cx家族的21个基因中,与Cx基因突变相关的临床伴随疾病至少有14种。其中,Cx43分布最广,不仅在大多数器官组织中均有报道,也是伤口愈合、皮肤角质化,以及皮肤肿瘤发展等重要生理病理过程中的关键调控节点。本文总结了近年来Cx43基因(GJA1)在皮肤屏障中的作用、GJA1基因突变相关皮肤疾病及其潜在致病机制这几个快速发展领域中的研究成果,以期为Cx43临床伴发疾病防治及相关研究提供参考。     

鼠连接蛋白43基因真核表达重组质粒的构建和鉴定

目的 构建含鼠连接蛋白43基因的真核表达重组质粒。方法 从胎鼠中提取总RNA，经RT-PCR方法获得并扩增含全部编码序列的连接蛋白43cDNA片段，将其克隆到pBudCE4．1真核表达载体上，并进行酶切鉴定和测序分析。结果 RT-PCR技术扩增出约1．1kb的连接蛋白43基因全部编码序列的片段。测序分析证实所插入连接蛋白43基因片段的序列完全正确。结论 鼠连接蛋白43基因真核表达重组质粒成功构建。