对体外培养鸡听壶支持细胞增殖的观察

选用出生后７－１４ｄ罗曼鸡１５只，解剖出完整耳蜗进行体培养，３ｄ后在培养液中加入氚标胸腺嘧啶核苷，分别在培养第６ｄ，第９ｄ终止培养，切片曝光观察。结果显示；加＾３Ｈ－ＴｄＲ后培养３ｄ，５ｄ的叶壶上皮均有少量支持细胞增殖，被标记的支持细胞多位于基底层及中层，少数移至表面。     

结缔组织生长因子及抗体对体外培养鸡滑膜细胞增殖活性的影响

目的：研究不同浓度结缔组织生长因子（CTGF）及其抗体对鸡肌腱滑膜细胞增殖活性的影响.方法：以来亨鸡屈趾肌腱腱周滑膜组织为材料,经体外分离、培养和鉴定后,加入不同浓度的CTGF（浓度为0,5,10,20,50,100,200,500 ng/ml）及CTGF抗体（浓度为0,1,2,4,8,16,32,64 μg/ml）分组培养滑膜细胞,并以CCK-8染色法检测滑膜细胞的增殖情况.结果：滑膜细胞增殖在CTGF浓度为5 ng/ml至200 ng/ml时,呈逐步递增趋势,各组之间差异有统计学意义（P＜0.05）;而在200 ng/ml及500 ng/ml浓度组间差异无统计学意义（P＞0.05）,加入浓度为4,8,16,32 μg/mlCTGF抗体时,滑膜细胞增殖呈逐步递减趋势,各组之间差异有统计学意义（P＜0.05）;而CTGF抗体浓度为0,1,2 μg/ml和浓度为32,64μtg/ml时,各组间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论：CTGF可促进体外培养的鸡肌腱滑膜细胞增殖,最佳浓度为200 ng/ml;CTGF抗体对滑膜细胞增殖活性可产生一定程度的抑制作用.     

硒化壳聚糖对体外培养表皮细胞增殖的影响

目的 研究硒化壳聚糖对体外培养的表皮细胞增殖的影响. 方法 用不同剂量(25,50,100,200,400 mg/L)硒化壳聚糖作用于表皮细胞,镜下观察药物对细胞形态的影响;MTT法、3H-TdR掺入法、细胞生长动力学研究用于检测药物对细胞增殖影响,并以等体积的细胞培养液处理为对照组. 结果 各药物浓度组处理细胞后,细胞形态未见明显改变,均可使细胞吸光度值增加(除25 mg/L组外,均P<0.05),细胞倍增时间缩短(除25 mg/L组外,均P<0.05),促进表皮细胞对3H-TdR的掺入(P<0.05,P<0.01). 结论 硒化壳聚糖对体外培养表皮细胞增殖具有促进作用.     

牛磺酸对体外培养的兔角膜基质细胞增殖的影响

目的观察牛磺酸对兔角膜基质细胞增殖的影响。方法将体外培养的原代兔角膜基质细胞传至2～3代用于实验,分别加入25、50、100、200、400mmol／L的牛磺酸,用药后2、4、6、8天倒置显微镜下加台盼蓝染色活细胞计数,计算细胞抑制率,并于2、4、6天进行MTT方法检测。结果细胞计数和MTT法均显示牛磺酸浓度≥100mmol／L时,作用2天、4天和6天对兔角膜基质细胞增殖均有明显的抑制作用,其抑制作用呈剂量依赖性。结论牛磺酸具有抑制兔角膜基质细胞增殖的作用,该研究结果为防治PRK和LASEK术后角膜上皮下混浊（haze）形成提供了客观依据。     

胎鼠听囊细胞体外培养研究

目的:了解哺乳动物听觉细胞的来源,探索听觉细胞前体细胞体外增殖和分化. 方法:取孕鼠胚胎听囊细胞进行体外培养,用免疫细胞化学方法,分别对培养的细胞进行细胞角蛋白、F-肌动蛋白和calretinin染色观察细胞特征;BrdU染色观察细胞增殖. 结果:培养的细胞在体外进行分化和增殖,细胞形态主要有上皮细胞形态、成纤维细胞形态和神经细胞形态3种. 对细胞角蛋白和F-肌动蛋白这两种上皮细胞的标志染色呈阳性. 在原代培养就出现calretinin染色明显阳性的细胞. 传代后结果仍为阳性着染,但强度减弱. BrdU染色显示培养细胞具有明显的增殖活性. 本研究共传8代,历时4 mo,细胞形态维持稳定. 结论:胎鼠听囊细胞在体外自然培养条件下可以分化或者增殖为未成熟毛细胞. 本研究为探索刺激听觉毛细胞再生的治疗方法提供研究思路和方法.     

FTY720对体外混合培养淋巴细胞增殖和凋亡的影响

目的观察FTY720对体外混合培养小鼠脾脏淋巴细胞的增殖、分化和凋亡的影响。方法将C57BL/6J小鼠与BALB/c小鼠的脾脏淋巴细胞体外混合培养5 d,培养液中加入不同浓度的FTY720。分别运用MTT法和流式细胞仪检测在不同浓度FTY720作用下,混合培养淋巴细胞的增殖状况、细胞表型和凋亡率。结果当FTY720为400 ng/mL时,体外混合培养淋巴细胞的增殖即受到明显抑制,抑制率为47.6%(P<0.05);当FTY720为3 200 ng/mL时,其抑制率达到为51.6%,呈剂量依赖性。FTY720为1 600 ng/mL时,混合培养淋巴细胞中的CD4 CD25 T细胞比例显著增加(P<0.05)。FTY720在200 ng/mL时,混合培养淋巴细胞的细胞凋亡率即显著增加(P<0.05)。结论在小鼠混合淋巴细胞培养体系中加入高浓度的FTY720,能显著抑制淋巴细胞增殖能力,增加调节性细胞的比例并促进细胞凋亡。     

酸性肽对体外培养大鼠星形胶质细胞增殖的影响

目的:观察酸性肽对体外培养的大鼠星形胶质细胞增殖的影响.方法:SD大鼠来源的星形胶质细胞经传代纯化后分为5组培养:无血清组、体积分数20%的胎牛血清对照组和低、中及高剂量酸性肽组(分别给予37.5、75.0及150.0 mg/L酸性肽),作用24、48及72 h后,收集星形胶质细胞及上清液,计算细胞存活率,并采用日立7170全自动生化分析仪测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量.另取细胞,同上分组后培养72 h.采用MTT法观察细胞增殖情况,计算细胞增殖率.结果:培养24、48和72 h后,5组细胞存活率及上清液中LDH含量差异均有统计学意义(细胞存活率F＝149.381、58.817和119.135,LDH含量F＝1 247.644、2 381.877和1 102.340,P均<0.001);5组不同时间点间细胞存活率及上清液中LDH含量差异均有统计学意义(细胞存活率F＝62.777、50.993、10.555、38.874和21.742,LDH含量F＝775.762、222.799、184.471、59.806和135.954,P均<0.001).培养72 h后,5组细胞增殖率相比,差异有统计学意义(F＝137.416,P<0.001).与相同时间点的无血清组和胎牛血清对照组相比,酸性肽各组细胞存活率和增殖率均升高,上清液中LDH含量均降低(P均<0.05).结论:酸性肽对体外培养的大鼠星形胶质细胞的增殖具有一定的营养和保护作用.     

五子衍宗丸对幼年大鼠睾丸支持细胞增殖的影响及机制

目的探讨五子衍宗丸对幼年大鼠睾丸支持细胞的增殖作用及其机制。方法分离并培养20 d龄SD雄性大鼠的睾丸支持细胞,将支持细胞随机分为正常组和五子衍宗丸低、中、高剂量(5、10、15 g/L)组。采用MTT比色法检测各组支持细胞OD值的变化,采用免疫组化的方法检测各组支持细胞中Ki67阳性颗粒的表达,采用Western Blot方法检测各组支持细胞中Akt和p-Akt的表达。结果与正常组相比,经五子衍宗丸处理后的睾丸支持细胞增殖能力明显增加(P0.05或P0.01);Ki67阳性颗粒的表达明显增多(P0.05或P0.01);p-Akt的相对表达量明显增加(P0.05或P0.01)。结论五子衍宗丸可能通过激活Akt信号通路,上调p-Akt的表达,促进幼年睾丸支持细胞的增殖。     

口腔粘膜上皮细胞体外培养的研究

目的 :探索口腔粘膜上皮细胞体外培养的技术和方法 ,为进一步采用组织工程技术构建口腔粘膜组织奠定基础 ,同时可为口腔粘膜的生理、药理、毒理学及微生态研究提供实验模型。方法 :取刚离乳的雄性新西兰幼兔口腔粘膜组织小块 ,酶消化成单细胞悬液 ,接种后静置培养 ,定期换液、传代。以相差显微镜每日动态观察细胞形态变化及生长增殖情况 ,细胞进行常规组化染色、免疫组化染色及流式细胞仪检查 ,并以电镜观察其超微结构。结果 :整个上皮细胞生长期内无成纤维细胞混杂生长 ,均为单一的上皮细胞 ,并证实为二倍体细胞。细胞可传11 13代 ,成活 5 0～ 60天。结论 :新西兰幼兔口腔粘膜上皮细胞可在体外进行培养 ,在一定时间内保持增殖能力。这不仅为组织工程化口腔粘膜构建奠定了基础 ,而且为口腔粘膜的体外研究提供了实验模型     

兔视网膜色素上皮细胞培养和鉴定

目的：进行兔视网膜色素上皮细胞(RPE)细胞的体外培养，探讨RPE培养与鉴定方法，为研究其生理功能、生化特征和病理过程提供细胞模型。方法：用改良的眼杯固定法，将其固定在眼球托上，用胰酶直接消化视网膜色素上皮面，收取RPE细胞。作细胞形态学、免疫组织化学、免疫荧光鉴定。结果：RPE细胞培养早期生长活跃、胞核透明、胞浆含丰富黑色素颗粒，多巴氧化酶呈阳性反应．免疫组织化学染色和免疫荧光染色提示角蛋白表达强阳性。结论：培养的大量细胞可用于RPE的体外实验研究，多巴染色是鉴定RPE细胞一种较好的方法。     

血小板源性生长因子对人视网膜色素上皮细胞的作用

目的　观察血小板源性生长因子 (PDGF)对人视网膜色素上皮细胞 (hRPE)增殖和移行能力的影响 .方法　将体外培养的第 46代人视网膜色素上皮细胞分为DMEM组(改良型Eagle培养液 )和含有 2 0mL·L-1小牛血清的DMEM组(2 0 g·L-1DMEM ) ,每组分别加入不同浓度 (0 .1,1,5 ,10 ,5 0和 10 0 μg·L-1)的PDGF ,然后采用MTT比色法观察分析其对hRPE的增殖作用 ;应用hRPE损伤模型 ,计数进入缺损区的细胞 ,定量观察PDGF对hRPE移行的影响 .结果　①增殖作用 :0 .110 0 μg·L-1的PDGF均能促进hRPE的增殖 ,DMEM组 10 μg·L-1时促增殖作用最明显 ,增殖率达15 3% ;2 0 g·L-1DMEM组 5 0 10 0 μg·L-1的增殖率为 174% ,作用最强 .②移行作用 :PDGF能够显著促进hRPE的移行 ,并呈剂量依赖性 ,5 0 10 0 μg·L-1时促移行能力最强 ,DMEM组移行率为 5 10 % ,2 0mL·L-1FBS +DMEM组达 6 40 % .结论　PDGF能够促进hRPE的增殖和移行 ,有血清时可以加强这种作用 ,提示它在PVR的发病过程中可能发挥了重要作用     

苏拉明对体外培养视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的　研究苏拉明 (suramin)对培养人视网膜色素上皮细胞 (retinal pigm ent epithelium,RPE)增殖的影响 .方法　将不同质量浓度的苏拉明 (1.5 ,15和 15 0 mg· L- 1 )加入RPE细胞培养液 ,采用四甲基偶氮唑盐 (tetrazolium,MTT)比色法 ,细胞分裂指数计数和核仁组成区嗜银染色(Ag NORs)检测苏拉明对 RPE增殖活力的影响 .结果　含有10 0 m L· L- 1小牛血清的培养液可以显著刺激 RPE的增殖(P<0 .0 1) ,无血清组 A值为 0 .19± 0 .0 1、含血清组 A值为0 .30± 0 .0 1;苏拉明抑制了 10 0 m L· L- 1血清条件下 RPE的增殖 ,呈剂量依赖性 ,最大抑制率达 5 1% ,3种浓度组 A值分别为 0 .2 9± 0 .0 1,0 .2 4± 0 .0 1和 0 .14± 0 .0 1,对细胞的形态无明显影响 .结论　苏拉明对血清刺激 RPE增殖有显著非毒性抑制作用     

Transwell小室共培养条件下缺氧时视网膜色素上皮细胞对内皮细胞增殖的影响

目的 研究在Transwell小室共培养系统中,缺氧时视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)对血管内皮细胞增殖的影响.方法 培养并鉴定RPE细胞和人脐静脉血管内皮细胞,利用200 μmol/LCoC12造成细胞缺氧、Transwell小室建立细胞共培养模型.实验分为4组:对照...     

不同方法体外培养兔结膜上皮细胞的比较研究

目的比较不同方法体外培养兔结膜上皮细胞的效率,确定体外培养兔结膜上皮细胞的最佳方法,建立兔结膜上皮细胞系,为进一步研究结膜上皮干细胞的鉴别、定位及其增殖分化提供基础。方法分别采用DispaseⅡ消化法、组织块培养法、胰酶／EDTA混合消化法获得兔结膜上皮细胞后进行体外培养,在不同时间观察细胞的形态,并应用免疫组化的方法进行细胞鉴定。结果组织块培养法细胞生长较慢,胰酶／EDTA混合消化法容易有成纤维细胞等污染,DispaseⅡ化法能够获得大量的较纯净的结膜上皮细胞,细胞生长增殖快,免疫荧光pan-cytoeratin染色阳性．部分细胞MUC5AC染色阳性。结论DispaseⅡ消化法是进行体外结膜上皮细胞培养的最佳方法。     

壳聚糖体外促进兔膀胱黏膜上皮细胞的增殖

目的:观察壳聚糖对体外培养膀胱黏膜上皮细胞增殖的影响,探讨其治疗间质性膀胱炎的可行性.方法:获取新西兰兔膀胱黏膜,Dispase酶消化法收集上皮细胞,分不同浓度(0.3、0.6、1.2、2.4、4.8 g/L)壳聚糖实验组与对照组进行细胞原代培养,免疫组织化学鉴定培养细胞.培养72 h后,光镜下观察细胞生长增殖情况,NAG酶反应比色法和细胞计数法测定壳聚糖对膀胱上皮细胞增殖的影响.结果:免疫组化鉴定培养细胞为膀胱黏膜上皮细胞.与对照组相比,壳聚糖在浓度》0.3 g/L时能促进兔膀胱黏膜上皮细胞的增殖, 促进作用在浓度为1.2 g/L时最明显(P＜0.01),2.4、4.8 g/L时渐降低,但仍高于对照组(P＜0.01).结论:壳聚糖体外可以促进兔膀胱黏膜上皮细胞增殖,值得进一步研究以用于治疗间质性膀胱炎.     

尾加压素Ⅱ对体外高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响及其意义

目的：探讨尾加压素Ⅱ（UⅡ）对体外高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞（MC）增殖影响的机制及意义。方法：体外高糖培养大鼠肾MC，分为5组：对照组及不同浓度UⅡ（10^-7、10^-8、10^-9和10^-10 mol•L^-1）组，37℃孵育24 h，用流式细胞术分析处于细胞周期中S期的MC比例，MTT比色法检测细胞增殖率，BrdU-ELISA法测定细胞培养上清中BrdU含量。结果：MTT实验，UⅡ10^-9及10^-8 mol•L^-1组细胞增殖率明显高于对照组（P<0.05），UⅡ10^-10及10^-7 mol•L^-1组细胞增殖率与对照组比较差异无显著性（P>0.05）；流式细胞术实验，UⅡ10^-9及10^-8 mol•L^-1组MC细胞周期中S期比例较对照组明显增加（P<0.05），UⅡ10^-10及10^-7 mol•L^-1组MC细胞周期中S期的比例与对照组比较差异无显著性（P>0.05）；BrdU-ELISA实验，UⅡ10^-9及10^-8 mol•L^-1组MC培养上清中BrdU含量明显低于对照组（P<0.05），UⅡ10^-10及10^-7 mol•L^-1组MC培养上清中BrdU含量与对照组比较差异无显著性（P>0.05）。结论：10^-9及10^-8 mol•L^-1浓度的UⅡ对体外高糖培养的大鼠肾小球MC具有明显促增殖作用。     

人参皂苷Rg3对培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的 研究人参皂苷Rg3(Ginsenoside-Rg3)对体外培养视网膜色素上皮(RPE)细胞增生的直接抑制作用及可能机制。方法 通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度(10、20、50、80、100、150mg/L)Rg3和Rg3 80mg/L在不同作用时间(6-120h)对RPE细胞增生及代谢的影响。结果 Rg3组细胞增殖受到抑制并出现细胞脱落，Rg3 100mg/L具有最强的抑制效应，其明显抑制效应在6h即出现，96h达高峰。Rg3组A值明显低于对照组，RPE细胞生存率下降。结论 Rg3可能通过抑制钙内流促进钾外流改变细胞膜电位、干扰RPE细胞代谢，对RPE细胞增殖具有剂量依赖和时间依赖方式的抑制作用。     

人参皂甙Rb2对培养人视网膜色素上皮细胞增生的抑制作用

目的：研究人参皂甙Rb2(Ginsenoside-Rb2)对体外培养视网膜色素上皮细胞增生的直接抑制作用及可能机制。方法：通过活细胞计数法与MTT比色法分别检测不同浓度（250、200、120、100、50、10μg/ml）Rb2t Rb2 150μg/ml在不同作用时间（6－120h)对RPE细胞增生及代谢的影响。结果：Rb2组细胞增殖受到抑制并出现细胞脱落，Rb2 200μg/ml具有最强的抑制效应，其明显抑制效应在6h即出现，96h达高峰。Rb2组A值明显低于对照组，RPE细胞生存率下降。结论：Rb2可能通过阻滞钙通道降低细胞内钙浓度、干扰RPE细胞代谢对RPE细胞增殖具有剂量依赖和时间依赖方式的抑制作用。