板蓝根基因组DNA提取方法的比较

目的:建立并优化板蓝根基因组DNA的提取方法。方法:以板蓝根为实验材料,分别采用CTAB法、改进的CTAB法和试剂盒法(硅胶膜技术)对其基因组DNA进行提取和纯化,然后对其提取产物做光密度、琼脂糖凝胶电泳检测。结果:紫外光谱检测表明,常规的CTAB法的A 260/A 280比较低,不在理想值之间,而改进的CTAB法和试剂盒法均在理想值之间。琼脂糖电泳检测证实,常规的CTAB法提取的DNA条带最弱,其它两种方法的DNA条带很清晰,DNA没有降解,无拖尾现象。     

市售鹿茸片基因组DNA提取方法的比较

目的建立一种稳定高效获得鹿茸片DNA基因组的提取方法,为相似形态中药总DNA提取奠定基础,便于应用分子生物学进行药材鉴定。方法将乌鲁木齐市售鹿茸饮片选取3份为材料,通过两种试剂盒和CTAB三种不同方法提取,提取的DNA再进行琼脂糖凝胶电泳法、紫外分光光度法进行浓度和纯度检测。结果 3种方法均可以从市售鹿茸饮片中提取到基因组DNA,但天根组织提取试剂盒得到的基因组DNA的纯度和浓度最高,提取效果最佳;CTAB法提取效果相对最差。结论天根组织提取试剂盒基因组DNA提取方法操作简便、稳定、高效,提取的DNA效果较好,纯度和浓度检查均合格。     

中麻黄基因组DNA不同提取方法的比较

目的:比较不同DNA提取方法,选择最适于中麻黄基因组的方法.方法:采用改良CTAB,SDS法、试剂盒法提取中麻黄基因组DNA;用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度法检测所得总DNA的得率和纯度,并进行ISSR-PCR扩增检测.结果:3种方法均可从新鲜中麻黄中提取出产量较高的基因组DNA,但其中改良CTAB法提取的总DNA纯度高,质量好,扩增产物的电泳条带也较明显;SDS法和试剂盒法提取的总DNA质量差,不适用于下游分子生物学实验.结论:改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法为中麻黄基因组DNA提取的最佳方法,该方法提取的基因组DNA适用于中麻黄基因组PCR扩增和其他分子生物学研究.     

拉萨蒲公英基因组DNA不同提取方法的比较及PCR检测

目的比较不同研磨方式、不同提取方法提取的拉萨蒲公英叶片基因组DNA的效果。方法分别用液氮和提取缓冲液两种研磨方式对拉萨蒲公英叶片进行研磨处理,用5种方法提取拉萨蒲公英叶片基因组DNA,分别用紫外分光光度计法、琼脂糖凝胶电泳、PCR扩增检测DNA的质量。结果用提取液研磨可以充分除去色素、酚类、蛋白质等物质,提取的DNA纯度高,降解少,用液氮研磨提取的DNA杂质多,降解严重;高盐低p H法提取的DNA的A260/A280接近1.8,A260/A230为1.93,Ezup柱式试剂盒法提取的DNA的A260/A280为2.01,A260/A230大于2.0,说明这两种方法提取的DNA的纯度比较高,其余3种方法提取的DNA的纯度都比较低。结论用提取缓冲液研磨提取的DNA的质量高于液氮研磨,并且缓冲液研磨能降低DNA提取成本,操作安全,因此是一种经济适用的方法;Ezup柱式试剂盒法操纵简单,但是价格昂贵,且DNA的得率低,高盐低p H法成本低,但是提取时间比试剂盒长,两种方法提取的DNA的PCR效果相差不大,高盐低p H法适用于需要大批量提取拉萨蒲公英叶片DNA的研究。     

哈蟆油药材基因组DNA提取方法的比较

目的:建立一种适合于哈蟆油药材基因组DNA的提取方法,为该药材的后续分子鉴定奠定基础。方法:采用十二烷基硫酸钠(SDS)法,改良SDS法,Chelex-100法,异硫酸氰胍(Gu SCN)法,试剂盒法及改良试剂盒法提取哈蟆油基因组DNA,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法及细胞色素C氧化酶Ⅰ(COⅠ)序列的引物聚合酶链式反应(PCR)扩增对DNA产量及质量进行检测。结果:Chelex-100法,改良SDS法,Gu SCN法及改良试剂盒法均能从哈蟆油药材中提取得到基因组DNA,SDS法和试剂盒法提取不到。其中改良SDS法得到的DNA质量良好,得率高,但操作繁琐;改良试剂盒方法得到的DNA质量较好,但得率低,成本高;Chelex-100法操作简单快速、得率高,但得到的DNA质量较差;Gu SCN法提取的DNA含有较多杂质,会抑制PCR反应。结论:Chelex-100法、改良SDS法及改良试剂盒法均可得到满足PCR扩增要求的DNA,实践中可根据条件选择适宜方法来提取哈蟆油基因组DNA。     

毛冬青基因组DNA提取方法及ISSR-PCR

目的:优化毛冬青基因组DNA提取方法,建立稳定性高、重现性好、适合其遗传差异分析的ISSRPCR反应体系。方法:对比CTAB法、mCTAB法、SDS法、蛋白酶K法及植物基因组提取试剂盒的提取效果后,选择mCTAB法结合蛋白酶K法提取毛冬青基因组DNA,并优化了蛋白酶K用量。利用正交试验设计,对毛冬青ISSR-PCR反应的5个因素(Mg²⁺、dNTPs、Primer、DNA、Taq酶)进行优化,PCR结果使用SPSS16.0软件进行分析,基于优化后体系对哥伦比亚大学公布的100条ISSR引物进行筛选,确定退火温度。结果:采用蛋白酶K-mCTAB法实现了4 h内提取高纯度毛冬青基因组DNA,蛋白酶K用量为20 ng·mL^-1时DNA平均提取量较传统CTAB法提升9.5倍;毛冬青ISSR-PCR最终反应体系为Mg²⁺2.5 mmol·L^-1,dNTPs 0.15 mmol·L^-1,Primer 0.4μmol·L^-1,DNA 70 ng,Taq酶0.5 U。实验从100条引物中筛选出16条引物并确定退火温度,绘制出毛冬青ISSR指纹图谱。结论:蛋白酶K-mCTAB法适合毛冬青基因组DNA的提取,筛选出的反应体系、引物及退火温度能够满足毛冬青ISSR-PCR实验的要求。     

破布木果基因组DNA不同提取方法比较研究

目的采用不同方法对维药破布木果基因组DNA进行提取,为破布木果基因组DNA的研究提供参考。方法采用改良CTAB(十六烷基三乙基溴化铵)法和改良SDS(十二烷基磺酸钠)法提取破布木果基因组DNA,并采用分光光度法和琼脂糖凝胶电泳技术检测提取DNA的纯度和浓度。结果分光光度法检测结果表明,用改良CTAB法提取的基因组DNA纯度优于改良SDS法,无蛋白质和RNA污染。琼脂糖凝胶电泳结果表明,2种方法提取得到的基因组DNA电泳图谱均有明显的主带出现,但改良SDS法提取的基因组DNA降解较多。结论改良CTAB法可以提取相对较高质量的破布木果基因组DNA。     

南药高良姜基因组DNA提取方法的研究

目的 提取高质量的高良姜基因组DNA,用于药材分子鉴定、分子系统分类和分子进化等下游分子生物学研究.方法 在CTAB改良法基础上,采用4个方案提取DNA.结果 用改良CTAB法方案4提取的基因组DNA的OD260/OD280比值在1.8～2.0之间,产率为0.54～1.049 μg/mg干燥叶片.基因组DNA能被限制性内切酶EeoR Ⅰ和Mse Ⅰ完全酶切,经AFLP分析,得到了条带清晰的DNA指纹图谱.结论 用改良CTAB法方案4提取的基因组DNA纯度高,符合分子生物学研究要求.     

半夏基因组DNA的提取及鉴定

目的探讨不同DNA提取方法对半夏DNA质量及RAPD-PCR标记结果的影响。方法对用不同方法提取的DNA进行电泳、紫外吸收A260/A280和RAPD-PCR分析。结果不同方法提取的DNA质量和产率差异不显著,对RAPD结果无影响。结论半夏在DNA提取前加入氯仿对材料预处理,可获得较高质量的DNA进行PCR扩增。     

忍冬干叶基因组DNA提取方法的研究

目的从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取高质量的基因组DNA.方法分别采用常规CTAB法与改良CTAB法提取干叶的DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、酶切检测其质量,并与鲜叶的提取效果比较.结果改良CTAB法所得DNA优于常规CTAB法,电泳条带清晰,完整性好,纯度高,能被EcoR I完全酶切.从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取的DNA质量与鲜叶无明显差异,且产率更高.结论改良CTAB法适合忍冬干叶基因组DNA的提取.     

忍冬干叶基因组DNA提取方法的研究

目的：从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取高质量的基因组DNA。方法：分别采用常规CTAB法与改良CTAB法提取干叶的DNA，通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、酶切检测其质量，并与鲜叶的提取效果比较。结果：改良CTAB法所得DNA优于常规CTAB法，电泳条带清晰，完整性好，纯度高，能被EcoRⅠ完全酶切。从变色硅胶干燥的忍冬叶片中提取的DNA质量与鲜叶无明显差异，且产率更高。结论：改良CTAB法适合忍冬干叶基因组DNA的提取。     

中药肉桂基因组DNA的提取

目的:为获得能用于中药肉桂RAPD分析及其它分子生物学研究的高质量DNA,研究和改进几种DNA提取法.方法:先将样品与PVP和VitC共研碎,然后用Tris-HCl缓冲液洗涤样品,沉淀用改进的CTAB法、高盐低pH法和尿素法来提取DNA.通过电泳、紫外吸收A260/A280和PCR扩增检测所得DNA的产量和质量.结果:改进的CTAB法和高盐低pH法都能获得高质量的DNA进行PCR扩增,其中以改进的CTAB法效果最好.     

中草药干品和鲜品基因组总DNA提取及质量比较研究

目的 探讨中草药干品和鲜品总DNA的提取方法,并比较干、鲜品总DNA质量之间的差别,为后续研究奠定基础.方法 分别采用SDS法和改良的CTAB法提取6种中草药干品和鲜品总DNA,并对其进行核酸含量测定、电泳检测和酶切反应检测. 结果改良CTAB法提取的DNA质量要高于SDS法,在干品和鲜品样品间,干品提取的DNA质量要高于鲜品.利用CTAB法提取鲜品和干品的各6种DNA样品,进行酶切反应得到了清晰的酶切条带.结论 改良的CTAB法能够获得高质量的中草药总DNA,且该方法得到的干品DNA比鲜品DNA质量更高,酶切验证二者都可以用于进一步的实验分析.     

开口箭DNA提取方法比较

目的:筛选从开口箭不同类型材料中提取DNA的最佳方法。方法:采用十二烷基磺酸钠(SDS)法,改良SDS法,十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和改良CTAB法4种方法分别对开口箭的新鲜茎、硅胶干燥茎、烘干茎、新鲜叶片和硅胶干燥叶片这5类材料进行DNA提取。从DNA的完整性、纯度、得率等方面对DNA进行比较,确定开口箭不同材料DNA提取的最适方法。结果:采用改良CTAB法提取的硅胶干燥茎和叶片的A_{260 nm}/A_{280 nm}均在1.8~1.9,纯度最高,且完整性较高,提取效果较其他方法更佳;其余材料则均有不同程度的污染, 新鲜叶片的A_{260 nm}/A_{280 nm}普遍很低。结论:从硅胶干燥叶片和茎的开口箭材料中更容易提取出纯度高、完整度好的DNA。改良CTAB法是适合开口箭DNA提取的有效方法,通过改良CTAB法从硅胶干燥叶片和茎的开口箭中更容易提取纯度高、完整度好的基因组DNA。     

枸杞基因组DNA提取及指纹图谱分析

目的建立一种适于RAPD分析的快速提取枸杞叶片基因组DNA的方法,并利用RAPD技术研究枸杞属植物基因组DNA指纹图谱。方法采用改进的CTAB法提取枸杞冷藏幼叶的基因组DNA,利用RAPD技术对其进行指纹图谱分析。结果改进的CTAB法提取的10份枸杞材料基因组DNA均适于RAPD分析;可提供清晰的RAPD指纹图谱,利用筛选出的2个随机引物对供试材料DNA进行随机扩增,共得到56条带,其中多态性条带44条,多态性百分率为78.6%。结论表明改进的CTAB法提取的枸杞基因组DNA不需经氯化铯梯度离心或柱层析纯化,可以直接用于RAPD分析;RAPD对枸杞属植物进行指纹图谱分析是可行的。     

毛冬青基因组DNA提取方法及ISSR-PCR反应体系的优化

目的:优化毛冬青基因组DNA提取方法,建立稳定性高、重现性好、适合其遗传差异分析的ISSRPCR反应体系。方法:对比CTAB法、mCTAB法、SDS法、蛋白酶K法及植物基因组提取试剂盒的提取效果后,选择mCTAB法结合蛋白酶K法提取毛冬青基因组DNA,并优化了蛋白酶K用量。利用正交试验设计,对毛冬青ISSR-PCR反应的5个因素(Mg~(2+)、dNTPs、Primer、DNA、Taq酶)进行优化,PCR结果使用SPSS16.0软件进行分析,基于优化后体系对哥伦比亚大学公布的100条ISSR引物进行筛选,确定退火温度。结果:采用蛋白酶K-mCTAB法实现了4 h内提取高纯度毛冬青基因组DNA,蛋白酶K用量为20 ng·mL~(-1)时DNA平均提取量较传统CTAB法提升9.5倍;毛冬青ISSR-PCR最终反应体系为Mg~(2+)2.5 mmol·L~(-1),dNTPs 0.15 mmol·L~(-1),Primer 0.4μmol·L~(-1),DNA 70 ng,Taq酶0.5 U。实验从100条引物中筛选出16条引物并确定退火温度,绘制出毛冬青ISSR指纹图谱。结论:蛋白酶K-mCTAB法适合毛冬青基因组DNA的提取,筛选出的反应体系、引物及退火温度能够满足毛冬青ISSR-PCR实验的要求。     

五味子总DNA提取方法的比较

目的:建立一套适合从五味子种子中提取高质量DNA的方法,为进一步开展五味子分子鉴定奠定基础。方法:比较SDS法、高盐低pH值法以及改进的CTAB法,运用紫外光谱和电泳分析方法测定所得DNA样品的纯度与浓度。结果:3种方法中CTAB改良法所得DNA纯度最高,完整性好,且该方法稳定可靠。结论:CTAB改良法是适合从五味子中提取高质量DNA的方法。     

浙贝母基因组DNA的提取与分析

对浙贝母叶片、鲜鳞片和干鳞片的基因组ＤＮＡ，采用两种方法进行了提取。并对浙贝母的基因组ＤＮＡ进行了琼脂糖电泳分析。结果表明不同的ＤＮＡ提取方法得到的ＤＮＡ量不同；电泳结果还发现除基因组ＤＮＡ外，还有两条值得进一步研究的谱带。     

中药何首乌总基因组DNA的提取

目的为获得高质量的何首乌总基因组DNA。方法采用CTAB法提取,对其提取方法进行改进。结果用改进的方法提取的样品DNA的OD260/OD280值在1.630~1.955之间,琼脂糖凝胶上主带清晰、降解较少,能完全被限制性内切酶EcoRⅠ和M seⅠ完全酶切,得到合适的AFLP指纹样式。结论改良的CTAB法提示提取何首乌DNA的理想方法,适合AFLP-PCR反应和其他分子生物学应用。     

枸杞基因组DNA的提取与分析

目的 :掌握枸杞基因组 DNA的提取和分析方法。方法 :用 CTAB法提取枸杞基因组 DNA,经 RAPD法扩增后进行琼脂糖电泳分析。结果 :CTAB法提取枸杞基因组 DNA省时、经济、易操作。结论 :电泳结果表明对枸杞有 DNA分子标记意义。可为枸杞道地品种鉴种提供依据