3种实蝇基因组DNA提取及ISSR-PCR反应体系的建立

为探讨高品质实蝇基因组DNA提取,研究模板DNA浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶用量、dNTP浓度、退火温度及时间对ISSR-PCR扩增结果的影响,以3种实蝇为材料,建立通用且稳定的实蝇ISSR-PCR反应体系。结果表明:获得了高品质实蝇基因组DNA;确立了通用且稳定的实蝇ISSR-PCR反应体系:10×PCRBuffer2.5μL,模板DNA50ng,引物0.25μmol/L,TaqDNA聚合酶0.50U,dNTP200μmol/L,最后加ddH2O至25μL;明确了ISSR-PCR扩增程序:94℃预变性5min,94℃变性30s,52.4℃退火45s,72℃延伸90s,循环36次,最后72℃延伸7min,4℃保存。体系的建立弥补了实蝇传统形态检测的不足,为快速准确鉴定、种群异质性及遗传多样性分析奠定了基础。     

龙牙百合DNA的提取及ISSR-PCR体系的建立

[目的]研究龙牙百合总DNA的提取方法,建立优化的ISSR-PCR反应体系和程序,为种质资源研究奠定基础。[方法]利用改良的CTAB法提取龙牙百合基因组DNA,并对影响ISSR扩增反应的各因素进行优化。[结果]获得了高质量的龙牙百合基因组DNA;优化的龙牙百合ISSR-PCR反应体系为,25μl体系中含60 ng模板DNA,0.4μmol/L ISSR引物,2.0 mmol/L Mg2+,1.5 UTaq酶,0.2 mmol/LdNTPs;反应程序为,94℃预变性5 min;然后进行40个循环:94℃变性50 s,52℃复性45 s,72℃延伸75 s;循环结束后72℃延伸8 min。[结论]建立了适合于龙牙百合的ISSR-PCR反应体系及程序,为种质资源研究奠定了基础。     

龙荔基因组DNA的提取及ISSR-PCR体系的建立与优化

应用改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA,探讨龙荔ISSR-PCR扩增反应体系的建立和优化。结果表明,经过改良的CTAB法提取龙荔基因组DNA效果良好,所提取的DNA纯度较高,符合ISSR-PCR反应的要求;龙荔ISSR-PCR最佳反应体系（反应总体积20μl）：1×Buffer缓冲液（含适量Mg^2＋）,1 UTaqDNA聚合酶,0.20 mmol/L dNTP,0.25μmol/L引物,DNA模板70-80 ng/μl,退火温度53-54℃。     

魔芋DNA快速提取新方法及ISSR-PCR扩增

[目的]研究魔芋DNA的提取方法。[方法]采用CTAB、SDS及新改良的方法提取魔芋总DNA,通过分光光度计检测、电泳检测及ISSR-PCR检测方法进行比较分析。[结果]采用新改良的方法得到的DNA纯度及产量均较高,适于魔芋DNA的快速提取;以其为模板进行ISSR-PCR扩增,条带清晰,可获得较好的结果。[结论]为大规模提取高质量的魔芋DNA奠定基础,也为进一步研究魔芋的遗传多样性提供了分子依据。     

翻白草总DNA的提取与ISSR-PCR体系的建立与优化

[目的]针对翻白草ISSR的反应特点,建立稳定可靠的ISSR分子指纹标记反应体系,为进一步研究翻白草的居群差异奠定基础。[方法]通过筛选引物并设定影响翻白草ISSR反应的诸因子的不同浓度,检测ISSR不同反应体系的扩增效果;通过分析非特异性条带的产生原因并进行条件优化,建立翻白草ISSR稳定可靠的反应体系。[结果]首次建立了可用于翻白草ISSR-PCR分析的最适宜的反应体系,确定了25lμPCR反应体系中各试剂终浓度:1×Buffer缓冲液,1 UTaq DNA聚合酶,2.5 mmol/LMg2+,0.25 mmol/L dNTP,0.4μmol/L引物,DNA模板约20~30 ng,退火温度在50~56℃;实验表明:Taq酶质量、DNA模板品质、退火温度、Mg2+浓度d、NTP浓度均对ISSR反应结果具有较大影响。[结论]所建立的翻白草ISSR反应体系具有标记位点清晰、反应系统稳定、检测多态性能力较强、重复性好等特点,可以较好地应用于翻白草的居群鉴别及居群分子生态的研究。     

山乌桕叶片DNA提取及ISSR-PCR反应体系优化

为研究南方优良乡土彩叶树种山乌桕的遗传多样性,并为山乌桕种质培育研究提供技术参考.以山乌桕叶片为试验材料,对山乌桕ISSR-PCR反应体系进行优化,比较试剂盒法、改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法和十二烷基硫酸钠(SDS)法对山乌桕叶片DNA的提取效果,并利用单因素试验和L25(53)正交试验对DNA模板用量、引物...     

贵州石笔木DNA提取与ISSR-PCR反应体系的建立

[目的]利用ISSR技术对贵州石笔木的遗传多样性进行分析。[方法]以贵州石笔木种子、新鲜叶片和干燥叶片为试材,采用改良的CTAB法和SDS法提取贵州石笔木基因组DNA,并对提取DNA的浓度和纯度进行测定。通过单因子梯度试验,筛选出优化、稳定的ISSR-PCR反应体系。[结果]利用CTAB法和SDS法从石笔木叶片中提取DNA时,鲜叶和干燥叶片提取的DNA质量和浓度略有差别,CTAB法提取的浓度稍大而蛋白残留稍多,SDS法提取的DNA量稍少但质量最高。而从种子中提取的DNA无论质量还是浓度均较差,但尚可满足ISSR分子标记试验。贵州石笔木的适宜ISSR-PCR反应体系为2μl的10×Buffer,模板DNA 40 ng,dNTP 0.25 mmol/L,Taq酶1 U,引物0.2μmol/L,总体积为20μl。[结论]该ISSR技术体系适用于贵州石笔木遗传多样性分析。     

西番莲基因组DNA的提取及ISSR-PCR的优化

对5种DNA提取方法进行比较,得到一种效率较高的、且适用于西番莲ISSR-PCR的DNA提取方法.同时,对影响西番莲ISSR-PCR的因子进行优化.结果表明:改良的SDS法2提取的DNA最适宜进行西番莲的ISSR-PCR扩增.ISSR-PCR产物在2%琼脂糖凝胶上检测,发现PCR扩增的平均条带数为4.1 2条.西番莲的ISSR-PCR的最优体系为20μL PCR反应液体系中含有1×buffer(Mg2+),0.2 mmol/L dNTPs,0.5μmol/L引物,0.2 UTaqDNA聚合酶,5 ng DNA模板.     

孑遗植物水松基因组DNA提取及ISSR反应体系建立

以不同种源水松叶片为材料,应用改良CTAB法提取水松基因组DNA,并对ISSR-PCR反应体系进行优化.结果表明:利用改良CTAB法提取的水松基因组DNA产量高、质量好,符合ISSR分析要求.通过正交试验设计,探讨不同浓度DNA模板、引物、dNPT、Taq DNA聚合酶对水松ISSR-PCR反应体系的影响.     

魔芋DNA快速提取新方法及ISSR-PCR扩增（摘要）

[目的]研究魔芋DNA的提取方法。[方法]采用CTAB、SDS及新改良的方法提取魔芋总DNA,通过分光光度计检测、电泳检测及ISSR-PCR检测方法进行比较分析。[结果]采用新改良的方法得到的DNA纯度及产量均较高,适于魔芋DNA的快速提取;以其为模板进行ISSR-PCR扩增,条带清晰,可获得较好的结果。新改良的方法与常规的SDS及CTAB方法相比,有以下优点：①效率高。运用冷冻研磨仪进行研磨,克服了研磨困难问题,节约液氮,且研磨效率大大提高,研磨时间短,褐变较少,1个人即可同时大批量进行提取;②提取质量高。在提取液中加入高浓度的PVP、β-巯基乙醇及KAc,有效去除了多酚和多糖等次生物质,检测结果DNA条带清晰,且无拖尾,更有利于大规模样本DNA提取;③用材少。需要的魔芋组织量少,适宜对较为珍贵的材料进行DNA提取,从而进行分子标记辅助育种、群体遗传多样性分析和种芋纯度鉴定的研究。[结论]为大规模提取高质量的魔芋DNA奠定基础,也为进一步研究魔芋的遗传多样性提供了分子依据。     

贯叶连翘ISSR-PCR反应体系的建立与条件优化

[目的]建立贯叶连翘的ISSR-PCR反应体系,并对其条件进行优化.[方法]以贯叶连翘基因组DNA为模板,用L16(45)正交试验设计系统分析引物浓度、Taq DNA聚合酶浓度、Mg2浓度、dNTP浓度和模板DNA浓度5种因素对贯叶连翘ISSR-PCR反应扩增结果的影响.[结果]正交试验设计的方法可以用于贯叶连翘1SSR-PCR反应体系的建立,经过优化得到贯叶连翘ISSR-PCR反应体系的最佳条件为:20μISSR-PCR反应体系中含10×PCR buffer,Mg2+浓度1.2 mmol/L,Taq DNA聚合酶浓度50 U/ml,DNA浓度20 ng/μl,dNTP浓度250 μmol/L,引物浓度0.75 μmol/L.[结论]试验建立的贯叶连翘的ISSR-PCR反应体系重复性好、分辨率高,结果稳定可靠.     

海巴戟DNA提取方法及SRAP分子标记聚类分析

应用SRAP分子标记技术开展海巴戟(Morinda citrifolia Linn,又名Noni)种质资源遗传多样性研究。结果表明,采用改良DNA提取方法能获得质量好,纯度高的海巴戟DNA。应用12对引物对78份海巴戟种质的SRAP分子标记扩增,共获得11 154条带,其中多态性条带有3 792条,多态性为33.99%,种质间具有很好的多态性。聚类分析结果表明,遗传距离为0.66时,78份海巴戟种质可归为2类,即海南本地种和西沙群岛种聚为一类,其余种质则聚为另一类;以0.86为阈值,78份海巴戟种质材料可聚为6类,从上至下依次是:万维2号种、新加坡种、大溪地种、万维1号种、海南本地种、西沙群岛种。其中,大溪地种和万维1号种的相似度较高,可以推断这2个种质亲缘关系较近,新加坡种与万维2号种的亲缘关系次之。     

诺丽营养器官内的总黄酮含量及消长规律

利用紫外分光光度法对诺丽(Noni)营养器官及枝叶不同生长阶段中总黄酮含量的消长规律进行研究,以探索诺丽营养器官内总黄酮的动态积累,为生产中确定适宜的采收期及其采收部位提供依据。结果表明:(1)该方法测定诺丽中总黄酮含量重复性好,稳定性强,加标回收率达99.66%,测试结果稳定可靠;(2)诺丽各器官总黄酮的含量顺序为:90 d叶270 d叶30 d叶毛状根210 d叶150 d叶侧根330 d叶主根嫩枝老枝2年生枝多年生枝1年生枝。结果表明,对诺丽中总黄酮的开发利用应重点选择叶片,采摘生长270 d的叶入药,有利于植株生长,并可提高诺丽资源的综合利用率。     

海巴戟中7种矿物质元素的测定

利用空气-乙炔火焰原子吸收光谱法对海巴戟果肉、叶、果实冻干粉及发酵果汁中的钾、钙、钠、镁、铁、锌、锰等7种重要矿物质元素进行测定。结果表明:实验回收率为94%~107.2%;海巴戟中钾、钙、锌、铁、锰元素含量丰富;海巴戟果肉中钾元素含量高,为24 215.81μg·g-1,钠元素含量相对较低,仅为789.40μg·g-1,是一种典型的低钠高钾保健食品,具有良好的保健养生价值。除钾元素外,叶中其他元素含量均高于果肉中的,尤其是微量元素铁、锌、锰的含量。海巴戟产品冻干粉中的7种元素含量与诺丽果肉中的接近。海巴戟发酵果汁与同一品种海巴戟果肉中的矿物质元素含量成一定比例,7种矿物质元素均能够满足人体需求。     

大花萱草ISSR-PCR最佳反应体系的建立

ISSR标记能揭示出种间、种内遗传变异情况,更好地揭示亲缘关系和遗传多样性。以大花萱草的5个品种为试材,研究了影响大花萱草ISSR-PCR扩增效果的各项因素,建立了适合大花萱草ISSR-PCR的最佳反应体系:20μL反应体系中,10×buffer 2μL,dNTP 0.2 mmol/L,Mg2+浓度1.5 mmol/L,引物浓度0.5 mmol/L,Taq酶10.002 nkat,DNA模板20 ng。大花萱草的最佳ISSR扩增反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性40 s,50℃退火45 s,72℃延伸1.5 min,共40个循环;最后72℃延伸10 min。通过该反应程序进行的大花萱草ISSR扩增可获得清晰、稳定的条带。     

3种实蝇基因组DNA提取及ISSR-PCR反应体系的建立

为探讨高品质实蝇基因组DNA提取,研究模板DNA浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量、dNTP浓度、退火温度及时间对ISSR-PCR扩增结果的影响,以3种实蝇为材料,建立通用且稳定的实蝇ISSR-PCR反应体系。结果表明：获得了高品质实蝇基因组DNA;确立了通用且稳定的实蝇ISSR-PCR反应体系：10×PCR Buffer 2.5 μL,模板DNA 50 ng,引物0.25 μmol/L,Taq DNA聚合酶0.50 U,dNTP 200 μmol/L,最后加ddH2O至25 μL;明确了ISSR-PCR扩增程序：94℃预变性5 min,94℃变性30 s,52.4℃退火45 s,72℃延伸90 s,循环36次,最后72℃延伸7 min,4℃保存。体系的建立弥补了实蝇传统形态检测的不足,为快速准确鉴定、种群异质性及遗传多样性分析奠定了基础。     

诺丽种子的生活力测定与发芽试验

[目的]研究影响诺丽种子萌发的因素。[方法]以诺丽种子为材料,用四唑染色法测定种子的生活力,采用8种不同的处理方法进行种子发芽试验。[结果]诺丽种子的平均生活力为17%,8种处理中,aBE（不消毒、浸种、剪口）和ABD（消毒、浸种、毒口）对诺丽种子发芽影响显著,其平均发芽率分别为13.3%、12%;平均发芽势分别为5.7%、7.7%。单独采用消毒、浸种、剪口处理对诺丽种子发芽影响不大。[结论]诺丽种子萌发困难受到多个因素的影响,而非单一因素作用的结果,温水浸种并剪口处理促进诺丽种子的萌发,能提高它的发芽整齐度。