金刚丸抗去卵巢大鼠骨质疏松症血清代谢组学研究

目的 利用代谢组学初步探讨金刚丸治疗绝经后骨质疏松症的作用机制。方法 采用去双侧卵巢手术法复制绝经后骨质疏松大鼠模型,将SD雌性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、金刚丸组(3.6 g/kg)和戊酸雌二醇组(9 mg/kg),每组6只,每天灌胃1次。连续给药12周后取大鼠右侧股骨进行苏木精-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining, H&E)及骨密度(bone mineral density, BMD)测定,取腹主动脉血采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISE)检测骨代谢指标碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、骨钙素(osteocalcin, OCN)、血清抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tartrate resistant acid phosphatase 5b, TRAP 5b)以及用生化法检测血脂(total cholesterol, TC)、甘油三酯(total triglycerides, TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotei...     

益肾健骨膏对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的影响

目的 探讨益肾健骨膏对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢的影响及可能机制。方法 50只雌性SD大鼠被随机分为假手术组、模型组、高剂量膏方组、低剂量膏方组、阳性药物组,每组10只。假手术组、模型组给予10 mL /（kg·d）生理盐水灌胃,低、高剂量膏方组分别给予2 g /（kg·d）、13 g/（kg·d）益肾健骨膏灌胃,阳性药物组灌服6.25 mg/（kg·w）阿仑膦酸钠维D3。治疗12周后检测大鼠腰椎骨密度和腰椎最大压缩载荷,通过Elisa检测血清骨代谢指标抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）、骨保护素(OPG)、Ⅰ型前胶原氨基端原肽(PINP)、Ⅰ型胶原交联羧基端肽(CTX-Ⅰ),RT-PCR检测腰椎骨组织OPG、RANKL、RANK、TRAF6的 mRNA表达,RT-PCR及Western blot检测腰椎Notch1、Notch2、Jagged1、Jagged2的基因及蛋白表达。结果 益肾健骨膏治疗12周后,与模型组比较,高剂量膏方组大鼠腰椎骨密度、最大压缩载荷,血清PINP、OPG水平,骨组织Notch1、Notch2、Jagged1、Jagged2的mRNA和蛋白表达,OPG的mRNA表达显著升高（P<0.05）,而血清TRACP、CTX-Ⅰ水平,骨组织RANKL、RANK、TRAF6的mRNA表达显著降低（P<0.05）。结论 高剂量益肾健骨膏能改善去卵巢骨质疏松大鼠骨密度、骨强度及骨代谢,其作用机制可能与Notch通路及OPG/RANKL/RANK系统有关。     

健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模型鼠钙调节激素的影响

目的:探讨健骨颗粒对骨质疏松模型鼠三种主要钙调节激素水平的影响.方法:切除雌性大鼠卵巢建立绝经后骨质疏松症病理模型,分别喂服健骨颗粒、骨松宝和生理盐水,用放射免疫测定法检测血清甲状旁腺激素(PTH)、1,25-二羟维生素D3[1,25-(OH)2D3]、降钙素(CT)和雌二醇(E2)水平.结果:卵巢切除后随着血清E2水平的下降,1,25-(OH)2D3、CT含量明显下降(P＜0.01或P＜0.05),而PTH却显著上升(P＜0.01).用药后健骨颗粒组血清1,25-(OH)2D3、CT水平显著回升(P＜0.01或P＜0.05),而PTH浓度出现下降(P＜0.01).E2与CT、1,25-(OH)2D3呈正相关,而与PTH呈负相关;PTH与1,25-(OH)2D3、CT呈负相关,1,25-(OH)2D3与CT呈正相关.结论:健骨颗粒能通过协调骨质疏松模型鼠血清PTH、1,25-(OH)2D3、CT三种钙调节激素浓度,改善因E2下降对骨代谢产生的副作用,这可能是健骨颗粒有效防治骨质疏松症的主要作用机制之一.     

温肾固疏方调控去卵巢大鼠氧化应激及骨代谢指标的机制研究

目的观察温肾固疏方对去卵巢骨质疏松模型大鼠氧化应激及骨代谢指标的影响。方法通过切除大鼠双侧卵巢建立绝经后骨质疏松症模型。造模后,将40只模型大鼠随机分为温肾固疏方高、中、低剂量组、雌二醇组、模型组;假手术组仅切除卵巢旁脂肪组织。干预2月后,检测骨组织形态学改变,测定骨密度,采用ELISA法测定血清PINP、BGP、TRACP5b、RANKL、OPG的含量。比色法检测血清中MDA、CAT、SOD水平。结果与假手术组比较,模型组股骨近端和股骨总BMD均明显降低,模型组血清MDA活力明显升高(P0.05),而CAT活力下降明显(P0.01),血清TRACP5b、BGP、PINP含量明显升高(P0.01),而OPG、OPG/sRANKL比值下降(P0.05),骨形态改变与骨质疏松症一致;与模型组相比:各治疗组骨组织形态改善。雌激素组、温肾固疏方高、中剂量组BMD均明显增高(P0.05)。雌激素组、温肾固疏高、中剂量组血清PINP、BGP含量下降(P0.05)。雌激素组、温肾固疏中剂量组TRACP5b含量下降(P0.05)。温肾固疏中、低剂量组血清OPG含量升高(P0.05)。温肾固疏高、中剂量组OPG/sRANKL比值升高(P0.05),低剂量组比值明显升高(P0.01);雌激素组、温肾固疏中剂量组血清MDA活力降低(P0.05),温肾固疏中、高剂量组血清CAT活力升高(P0.05)。结论温肾固疏方可降低骨代谢高转换水平,增加骨形成,减少骨吸收而发挥抗骨质疏松作用,抗氧化应激机制可能在其中发挥了作用。     

密骨颗粒对去卵巢大鼠TGF-β1表达的影响

目的 观察密骨颗粒对去卵巢大鼠TGF-β1表达的影响，探讨其对绝经后骨质疏松症的预防机制。方法 运用切除大鼠双侧卵巢方法建立骨质疏松症模型，应用中药密骨颗粒防治12周，采用双能X线骨密度测定法、Elisa、免疫组化SABC法、反转录聚合酶链方法，分别观察其对实验鼠离体骨密度、血清TGF-β1活性及其在骨组织中的蛋白和mRNA表达的影响。结果 中药密骨颗粒可以显著升高骨密度，提高血清TGF-β1活性，上调其在骨组织中的mRNA和蛋白表达水平，其蛋白广泛表达于胫骨干骺端。结论 中药密骨颗粒可通过调节TGF-βI活性及其mRNA表达水平而对去卵巢大鼠骨质疏松有预防或延缓发生的作用。     

Vaspin对去卵巢大鼠骨质疏松的保护作用及机制研究

目的 观察内脏脂肪组织特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂（visceral adipose tissue derived serine protease inhibitor,Vaspin）对去卵巢大鼠骨质疏松的保护作用,并探讨潜在的机制。方法 30只雌性SD大鼠随机分为假手术组（Sham）、去卵巢组（OVX）以及OVX+Vaspin治疗组,每组10只,OVX组及OVX+Vaspin治疗组均给予去卵巢手术构建绝经后骨质疏松模型,OVX+Vaspin组大鼠每天给予Vaspin 1 μg/kg腹腔注射治疗,Sham及OVX组给予等量生理盐水腹腔注射,干预12周后,检测血清1型胶原前N末端前肽(P1NP)、骨钙素(OCN)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、1型胶原C末端肽(CTX)、白细胞介素-1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)的水平;再分别进行骨病理组织学检查、生物力学分析、microCT检查,评价骨微观结构和骨强度,并通过qRT-PCR和Western blot检测Vaspin对骨组织中OPG及RANKL的mRNA和蛋白表达的影响。结果 Vaspin干预治疗12周后,与OVX组相比,OVX+Vaspin组大鼠的血清P1NP和OCN明显升高,血清TRAP、CTX及IL-1β、TNF-α明显降低(P<0.05),骨强度和显微结构特征改善, 大鼠骨组织中OPG的mRNA和蛋白表达水平均上调,RANKL的mRNA和蛋白表达水平均下调。结论 Vaspin可能通过上调OPG的表达、下调RANKL的表达介导对OVX大鼠骨代谢的调节作用,改善骨微观结构和提高骨强度,从而发挥抗骨质疏松的作用。     

抗疏健骨颗粒对去卵巢骨质疏松大鼠血清骨代谢及骨组织自噬水平的影响

目的研究抗疏健骨颗粒对去卵巢骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠骨稳态及自噬相关因子的影响,探讨抗疏健骨颗粒干预OP的作用机制。方法将60只SD大鼠随机分为5组:假手术组、模型组、抗疏健骨颗粒低、中、高剂量组。除假手术组外,其余4组建立去卵巢大鼠OP模型。正常喂养12周检测模型建成后,给予抗疏健骨颗粒干预12周,采用ELLSA法测定血清ALP、BGP和TRACP水平和股骨GPR48、ATF4含量;蛋白印迹法(Western blotting)检测股骨中AMPK、LC3、Beclin1和P62蛋白表达。结果抗疏健骨颗粒可显著降低OP大鼠血清ALP、BGP和TRACP水平,升高股骨GPR48、ATF4含量,上调AMPK磷酸化水平及LC3、Beclin1蛋白表达,降低P62水平,差异有统计学意义(P0.05)。抗疏健骨颗粒各剂量组中,中剂量组效果显著,与其他两组相比,差异有统计学意义(P0.05)。结论抗疏健骨颗粒可调节血清、骨组织中骨代谢指标,减轻去卵巢大鼠OP的发生,其机制可能与通过骨组织中AMPK调节自噬通路有关,通过恢复自噬水平,促进骨生成,进而维持骨平衡。     

芪藿肾宝与己烯雌酚对去卵巢大鼠骨代谢的影响

用３月龄去卵巢ＳＤ大鼠为模型，４．５ｍｇ．Ｌ－１己烯雌酚（ＤＥＳ）按５ｍｌ·ｋｇ－１ｉｇ，３３０ｇ·Ｌ－１的芪藿肾宝（含淫羊蕾，黄芪，白术）按５ｍｌ·ｋｇ－１ｉｇ，每周６次，持续１２周，胫骨近端不脱钙骨片测量。结果：己烯雌酚仅部分抑制去卵巢后的骨高转换，未能完全预防小梁骨的丢失（（％Ｔｂ．Ａｒ－２８％）；芪藿肾宝能完全预防去卵巢大鼠的骨质疏松，其作用机理同样是抑制去卵巢后的骨高转换，但以抑制骨吸收为主，从而防止了骨质疏松的发生。     

左归丸防治去卵巢大鼠骨质疏松症的实验研究

目的探讨左归丸对去卵巢所致骨质疏松大鼠的防治作用。方法 手术切除大鼠双侧卵巢建立绝经后骨质疏松大鼠模型,用左归丸(高、中、低剂量)进行灌胃,120 d后,取大鼠左后肢股骨远端1/3做病理切片,光镜下观察骨组织形态学变化,测定骨小梁面积百分比(%Tb.Ar)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁分离度(Tb.Sp);采用双能X线骨密度仪测定右后肢离体股骨近端1/3骨密度(BMD);采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠血清骨钙素(BGP),用比色法测定血清抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)。结果切除大鼠双侧卵巢后,骨小梁明显紊乱,变细且较稀疏,缺少连接,断端增多,%Tb.Ar、Tb.Th显著降低,Tb.Sp明显升高,BMD下降,血清BGP及TRAP水平显著升高,统计学显示有显著性差异(P0.01);去卵巢大鼠灌服左归丸后,与模型空白组比较,左归丸各剂量组均能不同程度地改善骨小梁变化,增加BMD,降低血清BGP及TRAP,统计学显示有显著性差异(P0.01),各用药组之间比较无显著性差异(P0.05)。结论 左归丸对去卵巢所致绝经后骨质疏松大鼠有一定的防治作用。     

健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模鼠血清TNF-α、TGF-β1的影响

目的 探讨补肾健脾中药健骨颗粒对去卵巢骨质疏松模鼠血清TNF-α与TGF-β1含量的变化。方法 切除卵巢建立大鼠骨质疏松模型。随机分成三组，分别喂服健骨颗粒，骨松宝，生理盐水，用药12周后检测各组血清TNF-α，TGF-β1及E2含量。结果 大鼠去卵巢后12周，随着E2水平下降，血清TNF-β含量明显升高，而TGF-β1浓度却明显降低，当喂服健骨颗粒12周后，血清E2水平和TGF-β1浓度回升明显，而TGF-α含量却出现下降，与同期生理盐水组相比有明显统计学意义，血清TGF-β1，E2含量与TNF-α呈负相关，而TGF-β1含量与E2水平高度正相关，结论 E2对TNF-α有一定的抑制作用，而TGF-β1的分泌可能需要雌激素等刺激，健骨颗粒通过综合调整作用以提高模鼠E2水平，既制约了TNF-α的合成，分泌及其活性，又解除了对TGF-β1的抑制作用，使破骨细胞的骨吸收活动减弱，成骨细胞的骨形成作用增强，改善骨代谢的负平衡。     

健骨颗粒含药血清调控miR-141对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的观察健骨颗粒含药血清对去卵巢模型小鼠BMSCs成骨分化的影响,并研究其调控miR-141影响BMSCs分化的可能机制。方法流式细胞计数法鉴定BMSCs;含药血清和空白血清分别干预体外培养的BMSCs;显微镜下观察细胞形态结构,碱性磷酸酶染色、定量检测,茜素红染色;RT-PCR检测miR-141及DLx5、Msx2、Runx2的基因表达情况;Western blot检测DLx5、Msx2及Runx2的蛋白表达情况。结果流式细胞计数法鉴定提取细胞符合实验要求;镜下观察发现两组细胞有差异,含药血清组细胞群落间结晶更为密集;ALP染色及定量、茜素红染色结果含药血清组均优于空白血清组;RT-PCR检测Dlx5、Msx2、Runx2及miR-141的基因表达结果:含药血清组miR-141和Msx2基因表达较空白血清组显著降低(P<0.01),而Dlx5、Runx2的基因表达显著升高(P<0.01);Western blot检测DLx5、Msx2、Runx2的蛋白表达结果:含药血清组较空白血清组相比,Msx2的蛋白表达略微下降(P<0.05),而Dlx5、Runx2的蛋白表达相对升高(P<0.01)。结论健骨颗粒可以调低miR-141的表达,进而调高Dlx5的表达,削弱Dlx5的同源异形基因Msx2对Runx2抑制作用,通过miR-141调控Dlx5/Msx2/Runx2信号通路促进BMSCs成骨分化达到预防和治疗绝经后骨质疏松的目的。     

辛伐他汀联合雌二醇对去卵巢大鼠骨质疏松的影响

目的探讨辛伐他汀联合雌二醇对大鼠骨质疏松的影响。方法 75只雌性SD大鼠随机分为5组:假手术组、去势组、辛伐他汀组、雌二醇组、联合药物组,15只/组,构建去卵巢大鼠骨质疏松模型,给予不同药物干预。检测骨代谢相关生化指标及骨生物力学指标,测定骨组织骨密度(bone mineral density,BMD)和骨矿物含量(bone mineral content,BMC),HE染色观察骨组织形态结构。结果去势组血清骨代谢相关生化指标(ALP、BGP、PICP、TRAP)水平较假手术组均显著增高(P0.05),辛伐他汀组、雌二醇组、联合药物组较去势组均降低,尤以联合用药组降低最显著(P0.05)。去势组骨组织BMD和BMC、骨生物力学指标(最大载荷、最大应力、最大位移和刚度)较假手术组显著降低(P0.05),辛伐他汀组、雌二醇组、联合药物组较去势组均增高,尤以联合药物组增高最显著(P0.05)。去势组骨组织骨小梁减少稀疏,排列紊乱,网状结构破坏,大量纤维组织,髓腔内大量空泡状脂肪细胞。联合药物组骨组织结构较完整,骨小梁数目增多,致密均匀粗壮,连接成网状结构,脂肪细胞明显减少。结论辛伐他汀联合雌二醇可调节大鼠骨代谢,增加骨密度和骨矿物质,改善骨生物力学和骨组织形态学,起到抗骨质疏松疗效和骨保护作用。     

健骨颗粒对骨质疏松模型大鼠垂体-肾上腺轴的影响

目的：从垂体—肾上腺轴角度探讨健骨颗粒治疗I型原发性骨质疏松症的作用机制。方法：通过切除SD大鼠双侧卵巢建立I型原发性骨质疏松模型,随机分成3组,分别喂服健骨颗粒、骨松宝和生理盐水。用药12周后处死取材,检测血清皮质醇(COR)浓度,取脑垂体行ACTH细胞免疫化学染色(S—P法)并形态计量,肾上腺行HE染色。结果：切除卵巢12周后大鼠出现骨质疏松,血清COR浓度以及垂体ACTH阳性细胞数和染色面积均明显高于假手术组(行腹部切口,但不切除卵巢)。用药12周后健骨颗粒组血清COR水平、垂体ACTH阳性细胞数和染色面积均较生理盐水组降低或减少。结论：补。肾健脾中药健骨颗粒可有效调节去卵巢骨质疏松模型大鼠垂体肾上腺轴的病理变化和功能状态,抑制雌激素水平降低后的异常骨吸收。     

芦丁对去卵巢骨质疏松症大鼠的防治作用

目的探讨芦丁在去卵巢骨质疏松大鼠中发挥的抗骨质疏松作用,找到治疗绝经后骨质疏松症的新思路。方法取40只大鼠,10只行剖腹手术未摘除卵巢为假手术组,30只行去卵巢手术。去卵巢手术大鼠随机分成3组:OVX组(用生理盐水灌胃)、R5低剂量组[喂食芦丁剂量5 mg (kg·d)]、R10高剂量组[喂食芦丁剂量10 mg (kg·d)],每日灌胃一次,观察3个月。观察芦丁干预前后大鼠体重和子宫指数的变化,利用双能X线骨密度仪测定大鼠右侧股骨的骨密度(bone mineral density, BMD)。经HE染色分析左侧胫骨组织形态学。用ELISA方法检测IL-6,IFN-γ、TNF-α的含量,观察芦丁对炎性指标的影响。同时监测干预后的去卵巢大鼠体内E2、1,25(OH)2D3_、OCN水平变化。结果芦丁对去卵巢大鼠体重无显著影响,但干预组子宫指数显著升高,且提高了去卵巢大鼠的BMD,降低了OVX大鼠的炎症因子IL-6、TNF-α、INF-γ水平。芦丁干预后E2和1,25(OH)2D3水平显著升高,并且通过剂量依赖性逆转了大鼠的血清OCN水平,使骨小梁变厚。此外,芦丁显著改善了去卵巢大鼠骨小梁的平均厚度及平均骨体积分数。结论芦丁具有明显抗骨质疏松的活性,是一种理想的治疗骨质疏松症的备选药物。     

褪黑素对去卵巢大鼠细胞因子水平和RANKL/OPG比值及骨密度的影响

目的 观察褪黑素对去卵巢大鼠细胞因子水平和RANKL/OPG比值及骨密度的影响。方法 将32只3月龄的雌性大鼠随机分为4组,每组8只。A：假手术组(Sham组),B：去卵巢组(OVX组),C：去卵巢+β-雌二醇治疗组[487.5 μg/(kg·d),OVX+E2组],D：去卵巢+褪黑素治疗组[50 mg/(kg·d),OVX+MEL组],药物治疗8周。治疗结束后,处死动物,取胫骨进行骨密度(bone mineral density, BMD)测定,对股骨进行细胞因子和基因表达分析。结果 治疗8周时,OVX组胫骨骨密度较Sham组显著降低(P<0.05),而OVX+MEL组的胫骨骨密度较OVX组显著增高(P<0.05);OVX组RANKL/OPG比值较Sham组显著增高(P<0.05);OVX组股骨IL-17A及IL-1β和TNF-α较Sham组显著增加 (P<0.05),而IL-23较Sham组显著降低 (P<0.05)。OVX+MEL组的股骨IL-17A及IL-1β和TNF-α较OVX组显著降低,而IL-23较OVX组显著增加(P<0.05)。结论 褪黑素可以通过降低RANKL/OPG比值,改善IL-23、IL-17A、IL-1β和TNF-α细胞因子的表达来增加骨密度。     

曲古抑菌素A促进去卵巢大鼠钛植入物骨整合

目的 探讨TSA对去卵巢大鼠TI骨整合的影响。方法 将30只健康3月龄雌性SD大鼠随机分为Sham组（n=5）和OVX组（n=25）。正常饲养3个月后,两组各选取5只大鼠处死,取股骨远端样本行Micro-CT和HE染色以鉴定是否成功建立骨质疏松模型。随后在OVX组剩余大鼠双侧股骨干骺端植入直径1.5 mm TI,并将其分为2组：Control组（n=10）和TSA组（n=10）。连续给药4周。给药结束后处死全部大鼠并取股骨样本行Micro-CT扫描、HE染色以及Masson染色,ELISA法检测,拔钉实验。结果 与Sham组对比,Micro-CT显示OVX组BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N降低（P<0.05）,而Tb.Sp、SMI升高（P<0.05）,HE染色显示OVX组骨小梁数量明显降低。与Control组对比,Micro-CT显示TSA组BMD、BV/TV、Tb.Th、Tb.N 、Conn.D均升高（P<0.05）,而Tb.Sp、SMI降低（P<0.05）,HE染色、Masson染色显示TSA组骨小梁数量、新生骨数量均升高,ELISA法检测结果显示TSA组OCN、BMP2均升高,拔钉实验显示TSA组TI轴向拔出力增大。结论 TSA通过上调OCN、BMP2等成骨相关蛋白,促进骨小梁形成和新骨形成,进而改善去卵巢大鼠TI骨整合。     

代谢组学和蛋白组学在骨质疏松研究中的应用

骨质疏松症(osteoporosis, OP)是以全身骨密度降低和骨组织微结构退化为特征的慢性骨骼疾病。骨质疏松症已成为一个严重的社会问题而备受广泛关注。近年来,国内外学者通过蛋白组学及代谢组学探究骨质疏松症的发病机制、诊断及防治,虽已取得初步进展,但研究不够系统、完善。笔者查阅相关文献,将对代谢组学和蛋白组学在骨质疏松症中的应用进行对比分析,并对骨质疏松症研究进展进行综述,以期为骨质疏松症的发病机制、诊断及防治提供理论参考。     

基于16S rRNA高通量测序技术分析I型骨质疏松大鼠肠道菌群结构变化

目的 探讨I型骨质疏松大鼠肠道菌群的结构变化。方法 采用去势法建立I型骨质疏松大鼠模型（n=24）：雌性SD大鼠随机分为4组（n=6）,实验动物自由进食水,12 h光照周期。分别在去势前和去势后4、8、12周共4个时间点,采用直接收集法采集大鼠粪便。利用16S rRNA高通量肠菌基因测序技术,在phylum（门）,class（纲）,order（目）,family（科）,genus（属）,species（种）级别分析肠道菌群的变化规律。结果 厚壁菌门与拟杆菌门是肠道菌群的主要构成肠菌,无论在去势前或去势后,二者含量之和均超过肠道菌群总量的90%。厚壁菌门含量在去势后下降并且持续到术后8周,其含量在术后12周显著增加（P<0.05）;拟杆菌门的含量变化趋势与此相反。另外,在纲、目级别的物种差异变化趋势较为一致。普雷沃氏菌属、Odoribacter 含量在术后12周明显降低（P<0.05）,而螺杆菌属与Alistipes在术后12周含量显著增多（P<0.05）。在种级别的分类中,白色瘤胃球菌在术后12周显著增多（P<0.05）,而单形拟杆菌含量显著降低（P<0.05）。结论 I型骨质疏松大鼠的肠道菌群在不同分类级别的结构组成上发生了显著性改变,为研究肠道菌群和骨质疏松症的关系提供理论依据。