内吗啡肽在小鼠树突状细胞的诱导表达

目的研究内吗啡肽-1和内吗啡肽-2在小鼠树突状细胞的表达。方法从7～8周龄的C57BL/6J小鼠骨髓提取骨髓前体细胞培养,经CD11c(树突状细胞的特异性标记)免疫磁珠分选,获得纯化的树突状细胞。流式细胞仪分析表明,CD11c阳性细胞纯度达95%以上。免疫荧光染色研究内吗啡肽-1和内吗啡肽-2在树突状细胞的表达;酶免疫测定(enzyme immunoassay,EIA)的方法,检测培养树突状细胞上清液中的内吗啡肽-1和内吗啡肽-2的含量。结果免疫荧光染色表明,活化的树突状细胞内可分泌内吗啡肽-1和内吗啡肽-2;酶免疫测定检测结果表明,不同的Toll样受体(toll like receptor,TLR)配体活化树突状细胞促使分泌不同浓度的内吗啡肽-1和内吗啡肽-2。结论活化的树突状细胞可诱导内吗啡肽的表达。     

内吗啡肽-1对人树突状细胞TLR2和TLR4表达的影响

目的观察内吗啡肽-1(EM-1)对人外周血来源树突状细胞TLR2和TLR4表达的影响。方法从人外周血中提取和分离单核细胞,在含重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子和重组人白细胞介素-4的完全培养基中培养,6 d后未成熟树突状细胞(im DC)分4组,空白对照组(BLA组)、EM-1组、LPS组、LPS+EM-1组。继续培养2 d后,流式细胞术检测各组DC表面TLR2、TLR4蛋白的表达;RT-PCR法检测各组DC中TLR2 mRNA、TLR4 mRNA的表达。结果流式结果显示,TLR2、TLR 4在im DC表达较高,随着DC成熟表达下降。与BLA组相比,EM-1组DC表面TLR2、TLR4的表达下调(P<0.05);与LPS组相比,LPS+EM-1组DC表面TLR2、TLR4受体均明显下调(P<0.01)。RT-PCR的结果显示,与BLA组相比,EM-1干预后引起DC表面TLR2 mRNA表达明显降低(P<0.01),TLR4 mRNA的变化无差异(P>0.05);与LPS组相比,LPS+EM-1组DC表面TLR2 mRNA、TLR4mRNA均有所下调(P<0.05)。结论 EM-1使DC表面TLR2、TLR4的表达下调,EM-1对DC免疫功能的影响可能与DC表面TLR2、TLR4表达有关。     

内吗啡肽-1对麻醉大鼠左心室功能的影响

目的：观察内吗啡肽-1（endomorphin-1,EM-1）静脉注射和侧脑室注射对麻醉大鼠左心室功能的影响,并初步探讨其可能的作用机理。方法：Wistar大鼠麻醉后,静脉注射或侧脑室注射EM-1,经右颈总动脉左心室插管测定左心室功能,并测定血清和心肌组织NO和T-NoS含量。结果：静脉注射、侧脑室注射EM-1均剂量依赖性地降低麻醉大鼠左心室功能,预先给予阿片受体阻断剂纳洛酮或特异性肚受体阻断剂cyprodime可阻断EM-1引起的心功能降低反应;预先给予胆碱能M受体阻断剂阿托品可减弱EM-1引起的心功能降低反应。静脉注射EM-1血清中NO和T-NOS比对照组有所增加,而心肌组织的NO和T-NOS无明显变化;侧脑室注射EM-1的血清和心肌组织的NO和T-NOS均无明显变化。结论：静脉注射、侧脑室注射EM-1可引起麻醉大鼠在体左心室功能下降,此效应由阿片受体介导,可能有胆碱能M受体参加。     

侧脑室注射内吗啡肽-1对麻醉大鼠血压的影响

目的　观察侧脑室注射内吗啡肽-1(EM-1)对麻醉大鼠血压的影响,并初步探讨其作用机理。方法　侧脑室埋植导管给药,颈动脉插管测血压。结果　icv EM-1剂量依赖、纳洛酮敏感地降低麻醉大鼠的血压。icv或iv酚妥拉明、普萘洛尔和iv L-NNA对EM-1引起的血压降低反应无影响;给予阿托品(icv 25 μg·kg^-1 ;或iv 50 μg·kg^-1)和切断双侧迷走神经减弱EM-1引起的血压降低反应。结论　icv EM-1可引起麻醉大鼠血压降低;此效应由阿片受体介导,有中枢M受体的参与,通过兴奋迷走神经所致     

内源性阿片样肽——内吗啡肽的研究进展

阿片肽的研究已有30年的历史。1997年，又发现了μ阿片受体的高选择性、高亲和性的内源性配体——内吗啡肽(EM)，它通过与G蛋白偶联的μ阿片受体结合从而发挥许多生物学效应。本文就近年来EM的研究进展，特别是关于它在中枢神经系统内分布、受体结合特性、镇痛作用的特点及其机制，以及对心血管、呼吸、消化功能的调节等方面作一综述。     

内吗啡肽研究进展

1997年发现的内吗啡肽 (Endomorphins、EMs) ,结构上属于四肽 ,被认为是 μ阿片受体 (MOR)的内源性配基 ,它通过与G蛋白偶联的MOR受体结合介导许多生理活动 ,本文结合本实验室对内吗啡肽的研究 ,对其神经系统分布、受体结合特性、生理作用、构象及构效关系等方面进行介绍     

吗啡对小鼠免疫功能的影响

近年来的大量研究表明,阿片类药物吗啡和海洛因等对机体的免疫功能有明显的损害［１,２］,因此机体很容易受到细菌和病毒等的感染。为了研究如何改善阿片类药物依赖者的免疫功能,我们观察了皮下注射不同剂量的吗啡对小鼠免疫功能的影响,试图建立吗啡依赖小鼠的动物模...     

内吗啡肽—1的镇痛作用

目的：研究内吗啡肽－1（EM－1）的镇痛作用。方法：采用电刺激鼠尾－嘶叫法、扭体法、佐剂性关节炎以及神经源性疼痛等多种疼痛模型,观察腹腔注射EM－1的镇痛作用,并和脊髓蛛网膜下腔注射和侧脑室注射EM－1的镇痛作用进行比较。结果：1）EM－1能剂量依赖地提高大鼠电刺激鼠尾－嘶叫法的痛阈;能抑制醋酸引起的小鼠扭体反应;在佐剂性关节炎所致的炎症性痛觉过敏及坐骨神经部分结扎所引起的神经源性痛觉过敏中,EM－1与有镇痛作用。2）中枢给EM－1的镇痛作用比外击给药出现得较快,而且较强。3）阿片受体拮抗选择性拮抗剂cyprodime也能翻转EM－1的镇痛作用;反复给予EM－1具有确切的镇冯作用,其镇痛作用由中枢μ阿片受体介导。     

右美托咪定对小鼠树突状细胞免疫功能的影响

目的研究右美托咪定对小鼠树突状细胞功能的影响及作用机制。方法分离获取小鼠骨髓原性树突状细胞鉴定成功后,体外分组培养,以正常培养基作为空白组,实验组为含有10μmol·L-1右美托咪定的正常培养基,对照1组和对照2组分别为含有10μmol·L-1酚苄明及同时含有10μmol·L-1右美托咪定和酚苄明的正常培养基,分别于96孔板培养24 h、Transwell 24孔板培养4 h和6孔板培养24 h。测定实验药物对小鼠树突状细胞活力、细胞迁移数量及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-1β(IL-1β)的影响情况。结果空白组、实验组、对照1组和对照2组的树突状细胞活力分别为(99.96±0.19)%,(62.61±0.08)%,(98.74±0.45)%和(79.25±0.23)%,树突状细胞迁移细胞数量分别为(3684.68±38.36),(1836.37±21.38),(3659.90±27.92)和(2670.06±27.61)个,树突状细胞培养上清液的TNF-α浓度分别为(67.26±1.51),(353.81±6.29),(67.92±1.45)和(169.63±2.89)pg·mL-1,IL-6浓度分别为(29.64±1.20),(511.29±12.97),(29.38±1.88)和(230.17±2.19)pg·mL-1,IL-1β浓度分别为(46.51±2.43),(436.97±5.86),(46.19±1.29)和(147.30±3.57)pg·mL-1,实验组与其他组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论右美托咪定能够影响小鼠树突状细胞的活力、迁移能力以及促炎性细胞因子的分泌,其作用机制跟α肾上腺素受体的激活有关。     

痛稳素和痛稳素(10～17)对孤啡肽对抗内吗啡肽-1及内吗啡肽-2镇痛作用的影响

目的研究痛稳素及其碳末端八肽在小鼠脑内对孤啡肽对抗内吗啡肽-1及内吗啡肽-2镇痛作用的影响。方法以固相多肽合成法合成了痛稳素及其碳末端八肽,侧脑室注射孤啡肽、痛稳素及其碳末端八肽,用辐射热甩尾法测定痛阈。结果孤啡肽可对抗内吗啡肽-1及内吗啡肽-2的镇痛作用;痛稳素及其碳末端八肽不影响小鼠的基础痛阈,但可逆转孤啡肽对抗内吗啡肽-1及内吗啡肽-2的镇痛作用。结论痛稳素及其碳末端八肽在脊髓以上水平可逆转孤啡肽对抗内吗啡肽-1及内吗啡肽-2的镇痛作用。     

人参三醇组甙对小鼠骨髓细胞体外诱导树突状细胞的影响

目的 研究人参三醇组甙对小鼠骨髓细胞体外诱导扩增树突状细胞的影响，为临床肿瘤治疗提供实验依据。方法 应用IL-4和GM-CSF培养小鼠骨髓细胞5-7d，光镜下观察细胞形态学变化；培养至第5-6d，加入黑色素瘤（B16）冻融抗原继续培养1．2d，流式细胞仪检测细胞表面分子CD83、CD86。结果 用IL-4和GM-CsF培养3d可见细胞形态发生改变，细胞形状不规则，培养5．6天时，有刺状突起、拉长，为典型树突状细胞形态学特征；抗原装载后流式细胞仪检测CD83、CD86表达，IL＋GM-CSF＋TNF-α组（68．32％。60．25％）及IL-4＋GM-CSF＋冻融抗原组（83．51％，75．89％）明显高于对照组（3．25％，4．37％）及单纯IL-4＋GM-CSF培养组（22．74％，27．49％）（P〈0．001），IL-4＋GM-CSF＋冻融抗原组及IL-4＋GM-CSF＋冻融抗原＋人参三醇组甙组（85．54％，78．96％）CD83表达高于IL-4＋GM-CSF＋TNF吨组，差异显著（P〈0．05）。结论 人参三醇组甙可以体外协同抗原负载诱导小鼠骨髓细胞的树突状细胞成熟。     

Shikonin inhibits maturation of bone marrow-derived dendritic cells and suppresses allergic airway inflammation in a murine model of asthma

BACKGROUND AND PURPOSE

Shikonin exhibits a wide range of anti-inflammatory actions. Here, we assessed its effects on maturation of murine bone marrow-derived dendritic cells (BM-DCs) and on allergic reactions in a murine model of asthma.

EXPERIMENTAL APPROACH

Cultured murine BM-DCs were used to investigate the effects of shikonin on expression of cell surface markers and their stimulation of T-cell proliferation and cytokine production. The therapeutic potential of shikonin was evaluated in a model of allergic airway disease.

KEY RESULTS

Shikonin dose-dependently inhibited expression of major histocompatibility complex class II, CD80, CD86, CCR7 and OX40L on BM-DCs, induced by a mixture of ovalbumin (OVA; 100 µg·mL⁻¹) and thymic stromal lymphopoietin (TSLP; 20 ng·mL⁻¹). Shikonin-treated BM-DCs were poor stimulators of CD4⁺ T lymphocyte and induced lower levels of interleukin (IL)-4, IL-5, IL-13 and tumour necrosis factor (TNF)-α release by responding T-cells. After intratracheal instillation of shikonin in OVA-immunized mice, OVA challenge induced lower IL-4, IL-5, IL-13, TNF-α and eotaxin release in bronchial alveolar lavage fluid, lower IL-4 and IL-5 production in lung cells and mediastinal lymph node cells and attenuated OVA-induced lung eosinophilia and airway hyperresponsiveness.

CONCLUSION AND IMPLICATIONS

Shikonin effectively suppressed OVA + TSLP-induced BM-DC maturation in vitro and inhibited allergic inflammation and airway hyperresponsiveness in a murine model of asthma, showing good potential as a treatment for allergic asthma. Also, our model provides a novel platform for screening drugs for allergic diseases.     

CCK-8对LPS诱导小鼠骨髓来源树突状细胞分泌IL-12的影响

目的探讨八肽胆囊收缩素(cholecystokinin-octopep-tide,CCK-8)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导小鼠骨髓来源的树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cell,BM-DC)分泌IL-12的影响。方法应用免疫荧光技术观察BM-DC表面CCK受体表达情况,酶联免疫吸附(ELISA)方法检测CCK-8对LPS诱导BM-DC分泌IL-12的影响,Western blot技术检测CCK-8对LPS诱导BM-DC细胞p38MAPK磷酸化的影响。结果BM-DC表面存在CCK-1R和CCK-2R;CCK-8促进LPS对BM-DC表达IL-12的诱导作用呈剂量依赖性(10-10、10-8、10-6mol·L-1);并能增加其p38磷酸化水平;CCK的1、2受体拮抗剂CR1409或CR2945均可减弱CCK-8的此种效应。结论CCK-8剂量依赖性促进了LPS诱导BM-DC分泌的IL-12,该作用由CCK-1R和CCK-2R介导,可能是通过促进p38MAPK的磷酸化作用而实现的。     

柴胡乳剂对小鼠免疫功能的影响

目的研究中药柴胡乳剂对小鼠免疫功能的影响。方法分别用碳粒廓清法、溶血素测定法和2,4二硝基氯苯诱导DTH反应法测定柴胡乳剂对正常小鼠非特异性免疫及环磷酰胺免疫功能低下小鼠体液免疫、细胞免疫的影响。结果与正常对照组比,柴胡乳剂组小鼠的碳粒廓清指数明显提高;柴胡乳剂能明显提高环磷酰胺免疫功能低下小鼠血清溶血素含量,增加DTH反应小鼠的耳肿胀度。结论柴胡乳剂可以增强正常小鼠及Cy所致免疫功能低下小鼠的免疫功能。     

Biomedical nanoparticles modulate specific CD4+ T cell stimulation by inhibition of antigen processing in dendritic cells

Abstract

Understanding how nanoparticles may affect immune responses is an essential prerequisite to developing novel clinical applications. To investigate nanoparticle-dependent outcomes on immune responses, dendritic cells (DCs) were treated with model biomedical poly(vinylalcohol)-coated super-paramagnetic iron oxide nanoparticles (PVA-SPIONs). PVA-SPIONs uptake by human monocyte-derived DCs (MDDCs) was analyzed by flow cytometry (FACS) and advanced imaging techniques. Viability, activation, function, and stimulatory capacity of MDDCs were assessed by FACS and an in vitro CD4⁺ T cell assay. PVA-SPION uptake was dose-dependent, decreased by lipopolysaccharide (LPS)-induced MDDC maturation at higher particle concentrations, and was inhibited by cytochalasin D pre-treatment. PVA-SPIONs did not alter surface marker expression (CD80, CD83, CD86, myeloid/plasmacytoid DC markers) or antigen-uptake, but decreased the capacity of MDDCs to process antigen, stimulate CD4⁺ T cells, and induce cytokines. The decreased antigen processing and CD4⁺ T cell stimulation capability of MDDCs following PVA-SPION treatment suggests that MDDCs may revert to a more functionally immature state following particle exposure.     

丹柴合剂对树突状细胞的诱导分化作用

目的 研究中药复方制剂丹柴合剂对树突状细胞（DCs）的诱导分化作用,并探讨其机制。方法 制备丹柴合剂的大鼠含药血清。分离人外周血单个核细胞,经磁珠筛选出CD14+单核细胞,培养5-7 d获得未成熟树突状细胞（imDCs）,分为空白血清对照组与含药血清组,空白血清组分别加入含或不含脂多糖（LPS）的大鼠空白血清,含药血清组分别加入含或不含LPS的大鼠含药血清,用流式细胞术检测DCs表面分子CD86、CD11b和HLA-DR的表达,用酶联免疫反应（ELISA）法检测DCs分泌IL-10的情况,用流式细胞术检测DCs对T细胞增殖能力的影响,用实时定量PCR检测吲哚胺2,3双加氧酶（IDO）基因的表达。结果 经丹柴合剂作用后,DCs高表达CD11b,低表达CD86与HLA-DR,IL-10分泌增加。且该制剂通过促进DCs表达IDO进而抑制DCs介导的T细胞增殖能力。结论 丹柴合剂可将诱导DCs分化为DCregs并发挥免疫调节作用。     

地塞米松对树突状细胞Toll样受体4信号通路的影响

目的：观察地塞米松对树突状细胞（den-dritic cells,DC）表面分子Toll样受体4（toll-like re-ceptor 4,TLR4）及转录因子NF-κB表达的影响,以探讨地塞米松抑制DC分化成熟和抗原提呈功能的作用机制。方法：常规培养小鼠DC,在培养体系中加入地塞米松作用后,通过流式细胞术分析DC TLR4表达情况;凝胶电泳迁移实验（EMSA）分析DC NF-κB活化情况。结果：地塞米松以剂量依赖方式抑制NF-κB表达,但对TLR4表达无抑制作用。结论：地塞米松影响DC分化成熟和抗原提呈功能的机制可能与其对NF-κB活化的抑制作用有关。