端粒酶活性对HeLa细胞生长及化疗敏感性的影响

目的研究抑制端粒酶活性对HeLa细胞在体内外生长和对顺铂敏感性的影响。方法将野生型端粒酶逆转录酶、端粒酶逆转录酶显性负突变体和对照质粒电转染于HeLa细胞中，绘制细胞生长曲线，四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测细胞对顺铂的敏感性，磷脂酰丝氨酸外翻分析（Annexin V）法检测细胞凋亡情况；接种裸鼠观察其致瘤性及对顺铂敏感性的影响。结果端粒酶逆转录酶显性负突变体转染于HeLa细胞后，端粒酶活性显著下降，细胞生长速度延缓，显著增强顺铂诱导的凋亡，端粒酶活性抑制后对裸鼠致瘤性丧失，而端粒酶活性增强后顺铂对肿瘤的抑制作用下降。结论端粒酶活性下降能抑制HeLa细胞生长，增强顺铂的杀伤作用，反之端粒酶活性升高将导致对顺铂耐药。     

食管鳞癌组织端粒酶活性与PCNA和CK17关系的研究

目的：通过对食管鳞癌及癌旁组织端粒酶活性测定、增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞角蛋白(CKl7)免疫组化染色．了解端粒酶活性与食管鳞癌发生发展及其与PCNA和CK17表达之间的关系；探讨端粒酶活性作为诊断食管鳞癌、判断其生物学行为和预后指标的可能性。方法：食管鳞癌组织30例，癌旁2cm和癌旁5cm组织各25例及正常食管组织3例。标本离体后液氨速冻并深低温保存．以端粒酶PCR—ELISA试剂盒进行端粒酶活性测定，石蜡包理切片HE染色和免疫组化染色观察PCNA和CK17表达。结果：3例正常食管粘膜组织端粒酶活性均阴性。食管鳞癌癌组织86．7％(26／30)，癌旁2cm组织60％(15／25)，癌旁5cm组织8％(2／25)端粒酶活性阳性，三组阳性率有显著性差异(P＜0．01)。癌端粒酶活性与患者年龄，肿瘤大小，浸润深度，淋巴结转移无关；与临床分期(TNM分期)相关(P＜0．05)；PCNA阳性指数在食管鳞癌癌组织、癌旁2cm与癌旁5cm表达三组比较有差异(P＜0．05)；端粒酶与PCNA无相关关系(P＞0．05)；CK17在癌组织表达率为83．3％，三组间CK17表达率有显著性差异(P＜0．01)。癌组织端粒酶活性阳性率与CK17阳性表达率之间存在相关性。结论：正常食管粘膜组织无端粒酶活性表达。癌旁组织中端粒酶活性随与肿瘤间距离的增加逐渐降低，Ⅲ期者端粒酶活性阳性率明显高于临床分期Ⅰ、Ⅱ期者。癌灶端粒酶活性与PCNA阳性指数间无相关关系；与CK17表达有明显相关性，端粒酶活性有可能作临床诊断食管鳞癌和预测其生物学行为及预后的分子生物学指标。     

The effect of GRIM-19 gene on the telomerase activation and cell senescence in the cervical cancer cell line HeLa

目的 重组质粒转染HeLa细胞以探讨Grim-19表达水平的变化对HeLa细胞中端粒酶活性的影响.方法 将重组质粒p3×flag-myc-cmv-24-Grim-19(简写Grim-19)通过脂质体转染至HeLa细胞,48 h后通过Western blot检测Grim-19、htert、P16、P21的表达情况,同时检测HeLa细胞衰老和端粒酶活性.结果 转染后可见flag的表达及htert的表达降低及P16、P21的表达升高,细胞衰老增加,增殖减弱及端粒酶活性的降低.结论 在子宫颈癌细胞株HeLa中Grim-19具有调控端粒酶活性和细胞衰老的作用.     

Grim-19对宫颈癌HeLa细胞端粒酶活性及衰老的影响

目的重组质粒转染HeLa细胞以探讨Grim-19表达水平的变化对HeLa细胞中端粒酶活性的影响。方法将重组质粒p3×flag-myc-cmv-24-Grim-19(简写Grim-19)通过脂质体转染至HeLa细胞,48 h后通过Western blot检测Grim-19、htert、P16、P21的表达情况,同时检测HeLa细胞衰老和端粒酶活性。结果转染后可见flag的表达及htert的表达降低及P16、P21的表达升高,细胞衰老增加,增殖减弱及端粒酶活性的降低。结论在子宫颈癌细胞株HeLa中Grim-19具有调控端粒酶活性和细胞衰老的作用。     

小牛血清浓度对胃癌SGC-7901细胞端粒酶活性及端粒酶活性抑制剂实验结果影响

目的　了解小牛血清 (FBS)浓度胃癌SGC - 790 1细胞端粒酶活性及端粒酶抑制剂实验结论影响。方法　取用不同浓度新生小牛血清培养的SGC - 790 1细胞和收集高浓度 (40×IC50 )顺铂分别作用于含 1 0 %、2 0 %新生小牛血清培养 4h、2 8hSGC - 790 1细胞 ,用TRAP—ELISA法测定收集细胞端粒酶活性。结果　含不同小牛血清浓度培养液培养SGC - 790 1细胞端粒酶活性不同 ,高浓度顺铂能抑制不同浓度小牛血清培养的SGC - 790 1细胞端粒酶活性。结论　小牛血清浓度对端粒酶活性有影响 ,端粒酶活性随小牛血清浓度增加而增加 ,但不影响端粒酶抑制剂实验结论     

顺铂对人舌癌细胞的抑制作用和对端粒酶活性的影响

目的 研究化疗药物顺铂对人舌癌Tca8113细胞的抑制作用和对端粒酶活性的影响及其抗癌机制、并初步探讨端粒酶作为化疗敏感性指标的可行性。方法 应用顺铂处理的人舌癌Tca8113细胞为用药组，相同条件培养但不用药的细胞为对照组。MTT法研究细胞的生长和增殖情况，双层琼脂培养法研究细胞的克隆形成率，透射电镜观察细胞的超微结构，应用流式细胞术检测细胞周期，TRAP-PCR—ELISA法检测人舌癌Tca8113细胞端粒酶活性。结果 顺铂对人舌癌Tca8113细胞有明显的抑制作用，且呈浓度依赖性；能明显改变细胞大体形态和超微结构；抑制端粒酶活性且有一定的时间依赖性；细胞周期改变不明显。结论 顺铂可以明显抑制Tca8113细胞的增殖活性及其转移复发倾向、还可作用于线粒体，抑制端粒酶活性，对细胞周期的改变不明显。     

高三尖杉酯碱诱导白血病细胞凋亡与人端粒酶逆转录酶及端粒酶的关系

目的 研究高三尖杉酯碱(HHT)诱导白血病细胞调亡与细胞端粒酶和端粒酶逆转录酶(hTERT)水平的关系。方法 在体外，以HL60细胞株细胞为对象，采用半定量RT—PCR法检测hTERT mRNA表达量；采用端粒重复序列扩增法(TRAP)—酶联免疫吸附试验(ELISA)检测端粒酶活性；采用TUNEL法检测凋亡细胞。结果 与空白对照相比，HHT能够下调hTERT mRNA的表达。HHT浓度为0．005—0．030μg／m1时，HL60细胞hTERT mRNA表达无明显变化；当浓度增至0．040—0．050μg／m1，hTERT mRNA表达量下降至检测不出。0．020μg／m1 HHT作用18h后，hTERT mRNA表达呈下降趋势，24h后端粒酶活性明显下降，两者的下降趋势基本相似，但hTERT mRNA表达下降幅度较端粒酶活性下降幅度更大。在HHT作用下，HL60细胞凋亡率增加，而端粒酶活性及hTERT mRNA水平下降，且与HHT浓度或作用时间相关。结论 HHT下调端粒酶活性可能与hTERT mRNA转录水平下降有关。通过下降hTERT mRNA转录和端粒酶活性可能是HHT诱导HL60细胞凋亡的原因之一。     

槲皮素联合顺铂对宫颈癌HeLa细胞增殖及凋亡的影响

目的:探讨槲皮素联合顺铂对HeLa细胞增殖及凋亡的影响。方法:不同浓度槲皮素及不同浓度槲皮素联合顺铂处理HeLa细胞24 h后,采用MTT检测细胞的增殖活性、流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞的凋亡情况、激光扫描共聚焦显微镜观察用PI荧光标记的细胞核的形态学变化。结果:槲皮素能抑制HeLa细胞增殖,且呈剂量依赖性;槲皮素联合顺铂与相同浓度顺铂单用处理HeLa细胞相比,前者对HeLa细胞的抑制作用更显著(P<0.01);不同浓度槲皮素与顺铂联合处理HeLa细胞与顺铂单用相比,前者显著提高了HeLa细胞的凋亡率(P<0.01)。结论:槲皮素可显著抑制HeLa细胞增殖并诱导其凋亡,槲皮素与顺铂联合应用具有一定的协同效应。     

丁酸钠联合阿霉素对HeLa细胞端粒酶活性的影响

目的研究阿霉素(ADR)与丁酸钠(NaBu)联用对HeLa细胞增殖和端粒酶活性的影响。方法MTT法检测NaBu、ADR以及两药联用的药效动力学特征;TRAP-银染法检测端粒酶活性;RT-PCR法检测hTERT mRNA表达。结果NaBu、ADR以及两药联用均可抑制HeLa细胞生长,ADR单独作用HeLa细胞48h的IC50为6000nmol/L,与1mmol/L的NaBu联用后降为320nmol/L,两组均呈剂量依赖性。ADR组和NaBu ADR组的端粒酶活性随ADR浓度增加而降低,呈剂量依赖性,在ADR浓度为100nmol/L时差异有统计学意义(P<0.05);hTERT mRNA表达与端粒酶的变化趋势一致,在ADR浓度为10nmol/L、100nmol/L浓度时差异有统计学意义(P<0.05)。结论NaBu和ADR均可抑制HeLa细胞增殖,联合应用具有协同效应,与抑制端粒酶活性、下调hTERT mRNA表达有关。     

顺铂对人卵巢癌CAOV3细胞端粒酶活性和凋亡的影响

目的研究顺铂作用于卵巢癌CAOV3细胞后，端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期变化与细胞耐药性的关系。方法用顺铂处理卵巢癌CAOV3细胞，端粒酶重复序列扩增(TRAP)一银染法测定端粒酶活性，流式细胞仪观察细胞凋亡和细胞周期的改变。结果顺铂(DDP)处理卵巢癌CAOV3细胞后，CAOV3细胞端粒酶活性受到抑制，细胞周期受阻于G2／M期，未见细胞凋亡峰改变。结论CAOV3细胞对顺铂的耐药性通过多因素起作用，DDP对端粒酶活性具有抑制作用，可以改变细胞周期，但对细胞凋亡无明显影响。     

顺铂诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡及对FHIT,Ki67和Bax表达的影响

目的研究顺铂对人宫颈癌HeLa细胞生长的作用以及对FHIT,Bax,Ki67表达的影响,初步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定1μg／ml,5μg／ml,10μg／ml,15μg／ml的顺铂对Helm细胞增殖的影响;流式细胞仪检测1μg／ml,5μg／ml,10μg／ml顺铂作用24h后的细胞凋亡情况;免疫细胞化学法测定用药前后FHIT,Bax,Ki67在宫颈癌HeLa细胞上的表达。结果MTT比色法表明顺铂抑制体外培养的HeLa细胞生长并且呈时效和量效关系（P〈0．05）;流式细胞术测细胞凋亡率显示不同浓度顺铂作用于HeLa细胞24h后,各组细胞亚G1峰与对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）;免疫组化法结果显示顺铂可以使FHIT和Bax的表达上调,而Ki67的表达则下调（P〈0．05）。结论顺铂对宫颈癌HeLa细胞体外生长具有明显抑制作用,能通过促进FHIT和Bax的表达,抑制Ki67的表达来诱导肿瘤细胞凋亡。     

siRNA靶向沉默p53对PCNA泛素化修饰及细胞凋亡的影响

目的siRNA靶向沉默p53蛋白后,观察其对PCNA泛素化修饰及细胞凋亡的影响。方法将p53siRNA及阴性对照siRNA通过脂质体分别转染入HeLa细胞中;转染后48h,顺铂处理不同细胞系,Westernblot法检测p53低表达对细胞PCNA泛素化修饰（ubi-PCNA）及凋亡诱导基因Caspase-3的影响。结果siRNA可显著抑制p53的表达;Westernblot结果提示,与对照组比较,顺铂损伤后p53低表达细胞系其PCNA泛素化修饰蛋白表达增加,同时Caspase-3蛋白表达下降,细胞存活率升高。结论靶向沉默p53的表达,可促进顺铂损伤诱导的PCNA泛素化修饰,降低细胞凋亡率。     

涎腺粘液表皮样癌中血管生成与肿瘤细胞增殖的研究

目的 :探讨涎腺粘液表皮样癌中血管内皮生长因子 (vascularendothelialgrowthfactor ,VEGF)的表达及与血管生成、肿瘤细胞增殖的关系。方法 :应用免疫组织化学SP法检测 2 8例涎腺粘液表皮样癌组织中VEGF、PCNA的表达 ,用CD34标记血管内皮细胞计数肿瘤内微血管密度 (MVD) ,并进行统计分析。结果 :本组病例VEGF阳性表达率为 82 .14 % (2 3/ 2 8) ;MVD为 30 .19± 12 .99(8～ 5 9) ,PCNA为 (2 0 .5 0± 12 .5 8) % (6 .2 3%～5 1.78% )。低分化组MVD、PCNA阳性率均高于高分化组 (P <0 .0 5 )。VEGF表达阳性的肿瘤组织MVD高于阴性者 (P <0 .0 5 ) ,VEGF表达与MVD呈正相关 (rs=0 .80 ,P <0 .0 5 )。VEGF表达、MVD与PCNA表达均无明显相关性 (相关系数分别为rs=0 .0 2 ,rs=0 .15 ,P >0 .0 5 )。结论 :涎腺粘液表皮样癌中 ,肿瘤细胞能产生VEGF促进血管生成 ;低分化粘液表皮样癌微血管密度及肿瘤细胞增殖活性均高于高分化粘液表皮样癌。     

雌激素受体在星形细胞瘤中的表达

目的探讨脑肿瘤中的激素受体(ER)的表达与肿瘤细胞增殖和临床病理的关系。方法应用免疫细胞化学方法,检测ER和细胞增殖核抗原(PCNA)在114例星形细胞瘤标本中的表达。结果星形细胞瘤ER阳性率为40%(45/114),PCNA阳性率为66%(75/114)。高度恶性星形细胞瘤(Ⅲ级)ER阳性率(43%)明显高于良性(Ⅰ级)的阳性率(34%)。星形细胞瘤中ER与PCNA,ER与肿瘤分级及PCNA与肿瘤分级之间有相关性。结论ER在神经胶质瘤中的表达随着肿瘤的恶性程度的增高而增加,PCNA的表达与恶性增殖呈正相关。     

喉癌中survivin mRNA与端粒酶活性的关系

目的 通过测定23例喉癌患者喉癌组织的端粒酶活性和凋亡抑制因子survivin mRNA表达水平，探讨端粒酶活性和survivin mRNA表达水平这两个指标之间的关系。方法 采用Taqman技术建立荧光实时定量FQ—PCR方法检测喉鳞癌组织的survivin mRNA；应用TRAP—ELISA法测定喉癌组织的端粒酶活性。结果 喉癌组织中survivin mRNA的表达水平与端粒酶活性具有相关性，呈正相关（r=0．591，P=0．003）。结论 Survivin可能是使端粒酶活性增高的细胞因子。     

肝细胞癌细胞凋亡、细胞增殖与病理组织学类型的关系

目的研究肝细胞癌细胞凋亡、细胞增殖及其与病理组织学类型的关系。方法经手术病理证实的6种组织学类型肝细胞癌57例,用TUNEL法检测凋亡细胞,用免疫组化检测各标本Bcl-2、Bax,P53,Ki-67和PCNA表达。结果透明细胞型和梁索型Ki-67蛋白表达较假腺样型、实体型和低(未)分化型低(P<0.05)。假腺样型Bcl-2蛋白较低(未)分化型低(P<0.05);Bax蛋白表达梁索型较实体型、低(未)分化型和硬化型高(P<0.05);透明细胞型较低(未)分化型高(P<0.05)。Bcl-2/Bax比值梁索型较假腺样型,硬化型和低(未)分化型低(P<0.05);透明细胞型较低(未)分化型低(P<0.05)。随病理分级的升高Ki-67和PCNA蛋白表达升高(P<0.05)。3级Bax蛋白表达较2级显著降低(P<0.05)。细胞凋亡与Bax蛋白表达显著正相关,与Ki-67蛋白表达和Bcl-2/Bax蛋白表达比值显著负相关(P<0.05)。Ki-67蛋白表达与PCNA和P53蛋白表达显著正相关(P<0.05),与细胞凋亡和Bax蛋白表达显著负相关(P<0.05)。P53蛋白表达与PCNA和Ki-67蛋白表达显著正相关(P<0.05),与Bcl-2/Bax蛋白表达比值显著负相关(P<0.05)。Bcl-2蛋白表达与Bcl-2/Bax蛋白表达比值显著正相关(P<0.05),与PCNA蛋白表达显著负相关(P<0.05)。Bax蛋白表达与细胞凋亡显著正相关(P<0.05),与Ki-67、PCNA蛋白表达和Bcl-2/Bax蛋白     

不同肿瘤细胞株人端粒酶逆转录酶及端粒酶活性的检测及其意义

目的：检测5种肿瘤细胞株人端粒酶逆转录酶（hTERT）表达及端粒酶活性状态，为端粒酶抑制剂在肿瘤治疗学方面的应用研究提供理论基础。方法：分别用免疫细胞化学S-P法和TRAP-ELISA方法检测人宫颈癌细胞株HeLa、人乳腺癌细胞株MCF-7、人肝癌细胞株SMMC7721、人前列腺癌细胞株PC-3m和人骨肉瘤细胞株U2OS hTERT表达及端粒酶活性状态。 结果：HeLa细胞hTERT表达阳性率最高，为 (93.75±3.10) %；而U2OS阳性表达率最低,仅为(2.75±0.96) %，近于不表达；其他3种细胞MCF-7、SMMC7721和PC-3m的hTERT表达阳性率分别为(92.50±2.65)%、(53.75%±2.22)%和(23.50±2.89)%。与hTERT表达阳性率相似，HeLa细胞端粒酶活性最强，为(94.58±3.49)%；而U2OS 端粒酶活性近于阴性，为(3.02±0.43)%；其他3种细胞MCF-7、SMMC7721和PC-3m的端粒酶活性分别为 (73.90±4.50) %、(66.67±3.35) %和(50.62±1.96) %。结论：5种细胞系中hTERT表达及端粒酶活性状态差别很大，提示端粒酶抑制剂可适用于多数但并非所有恶性肿瘤的治疗学研究。     

食管活检各级病变组织中Mcm5和PCNA的表达

目的研究食管癌发生发展过程中微小染色体维持蛋白5(Mcm5)表达的意义及与细胞增殖核抗原(PCNA)的关系.方法采用免疫组织化学S-P法检测22例食管正常黏膜(N)、19例不典型增生(DYS)、7例原位癌(CIS)及139例浸润癌(SCC)活检标本中Mcm5和PCNA的表达情况.结果①Mcm5和PCNA在食管由正常向癌转变的过程中,表达逐渐升高(P＜0.01),2者均与病变类型存在正相关关系,rs分别为0.574和0.479(P均＜0.001).②Mcm5的表达随着食管癌分化程度的降低而逐渐增高(rs=-0.219,P＜0.05),而PCNA的表达在Ⅰ、Ⅱ级鳞癌组织中逐渐升高,但在Ⅲ级鳞癌组织中降低,与分化程度无关(rs=-0.159,P＞0.05).结论Mcm5、PC-NA在食管癌变过程中能很好地反映细胞的增殖状况,Mcm5的表达可能与食管癌的预后有关.