三七总皂甙对动物脑缺血性损伤的保护作用

观察三七总皂甙（ＳａｐｏｎｉｎｓｏｆＰａｎａｘｎｏｔｏｇｉｎｓｅｎｇＰＮＳ）对小鼠全脑缺血和大鼠局灶性脑缺血（ＭＣＡＯ）的影响。结果发现ＰＮＳ（５０、１００ｍｇ．ｋｇ－１×３ｄ,ｉｐ）明显延长断头或ｉｖ饱和ＭｇＣｌ２后喘息持续时间。ＰＮＳ２００ｍｇ．ｋｇ－１术前３０ｍｉｎ或ＭＣＡＯ术后１５ｍｉｎｉｐ能减少ＭＣＡＯ术后２４ｈ脑梗塞面积,改善神经功能障碍及行为异常,减轻神经细胞缺血性损害。提示ＰＮＳ对缺血性脑损伤有保护作用。     

TrkA介导电针抑制局灶性脑缺血再灌注大鼠模型神经元Src磷酸化的作用

目的探讨电针通过TrkA通路对脑缺血再灌注损伤诱导的Src磷酸化的影响。方法采用改良的血管内线栓技术制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,电针大鼠"水沟"、"承浆"穴,侧脑室注射TrkA受体及下游信号通路的拮抗剂,K252a拮抗TrkA的作用、Wortmannin拮抗PI-3K的作用、U0126拮抗MEK的作用;免疫组织化学技术检测缺血侧大脑皮层、海马Src磷酸化。结果脑缺血再灌注损伤诱导大鼠皮层和海马神经元Src磷酸化水平异常增加,与对照组相比,差异显著(P0.05);电针抑制脑缺血再灌注损伤引起的Src磷酸化异常增加水平,与缺血再灌注组相比电针能明显减少Src磷酸化水平(P0.05);分别脑室注射TrkA抑制剂、PI-3K抑制和MEK抑制剂预处理后,能有效翻转电针对皮层神经元Src磷酸化异常增加的抑制作用,统计学处理有显著性差异(P0.05)。结论电针减少缺血再灌注导致的Src磷酸化,通过激活TrkA/PI-3K和TrkA/MAPK通路抑制Src的活性,发挥神经保护作用。     

双丹胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用研究

目的：观察双丹胶囊对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑梗死体积、自由基变化的影响,探讨双丹胶囊对脑缺血损伤的保护作用。方法：复制大鼠中动脉缺血再灌注模型,分别给药干预,在给药后观察行为学、脑梗死率、脑指数、脑含水量、SOD、MAD等指标。结果：双丹胶囊可改善动物的神经行为学评分,明显降低动物的脑梗死率、脑指数、脑含水量、提高脑组织SOD活性、降低MDA含量,并成剂量依赖。结论：双丹胶囊对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

bFGF对脑缺血再灌注大鼠海马及顶叶皮质神经元的保护作用

目的本实验应用大脑中动脉栓塞（MCAO）模型,观察bFGF对脑缺血再灌注损伤后海马及顶叶皮质中Wnt通路抑制因子Dickkopf-1（DKK-1）和Wnt通路中pCatenin的表达作用的影响,以探讨Wnt通路对缺血性脑损伤的作用机制,为临床治疗缺血性脑血管病提供实验依据。方法应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞1h再灌注损伤24h,采用免疫组织化学SABC法及RT-PCR法检测海马及顶叶皮质CA1区神经元β-Catenin和DKK-1mRNA的表达。结果正常sham组,大鼠海马组织DKK-1 mRNA表达较少,β-Catenin阳性产物在细胞质内有所表达;I／R组,DKK-1 mRNA表达明显增多,β-Catenin在胞质内表达明显减少;bFGF组,大鼠海马组织DKK-1 mRNA表达较I／R组明显减少,而海马细胞质内β-Catenin表达较I／R组明显增加。结论bFGF抑制缺血神经元凋亡,参与DKK-1 mRNA和β-Catenin的调节,对缺血神经元有保护作用。     

黑木耳多糖对急性脑缺血/再灌注损伤影响的研究

目的:观察黑木耳多糖(APP)对急性脑缺血大鼠的保护作用并探讨其相关机制。方法:成年雄性SD大鼠给予不同浓度的AAP灌胃20d,每天1次,腹腔注射银杏叶提取物(ginkgo biloba extract,EGb671)作为阳性对照,20d后实施右侧大脑中动脉栓塞(MCAO)建立局灶性脑缺血模型。MCAO60min后复灌,复灌24h后进行Longa神经功能损伤评分,并用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死面积。复灌48h后用TUNEL免疫组化检测神经元凋亡,测定脑组织线粒体内活性氧簇(ROS)的生成量判断氧化应激水平。结果:黑木耳多糖能降低神经功能损伤评分,减小脑梗死面积,减少神经元凋亡,并且能够使缺血复灌脑组织线粒体ROS生成显著减少。高剂量AAP组的凋亡神经元数量、ROS生成量和阳性对照组相比有显著性差异。结论:黑木耳多糖能够对抗大鼠的局灶性脑缺血损伤,其保护作用和减轻氧化应激水平有关,并优于银杏叶提取物。     

参芎注射液对脑缺血再灌注大鼠的神经元保护作用

目的:观察参芎注射液对大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白/免疫球蛋白结合蛋白(GRP78/Bip)表达的影响.方法:100只雄性SD大鼠随机分为正常组、假手术组、脑缺血再灌注组、参芎治疗组;后两组根据再灌注时间不同各分为6、12、24、72 h四个亚组;采用大鼠大脑中动脉线栓法制备局灶性脑缺血再灌注模型.TUNEL法观察细胞凋亡情况;免疫组化和RT-PCR法检测各实验组中缺血周围区GRP78/Bip的表达.结果:TUNEL法表明参芎治疗组大鼠大脑神经细胞凋亡程度较缺血再灌注组明显减轻.免疫组化和RT-PCR检测均发现各时间点缺血再灌注组大鼠GRP78/Bip表达高于假手术组及正常组;脑缺血再灌注组及参芎治疗组GRP78/Bip的表达于缺血后12 h最高,72 h恢复至正常水平,且均呈现先升高后降低的趋势;各时间点缺血再灌注组GRP78/Bip表达均高于参芎治疗组.结论:再灌注损伤后12 h内出现GRP78/Bip表达升高.参芎注射液可以下调其表达,从而可能通过减轻内质网应激而减轻缺血再灌注损伤起到神经元保护的作用.     

高压氧对脑缺血再灌注海马CA_1区神经元凋亡作用的研究

目的和方法 :应用TUNEL检测技术 ,对沙土鼠前脑缺血 2 0min后再灌注 3d模型 ,用HBO治疗连续 3d。观察HBO作用下海马CA1区神经元凋亡变化 ,研讨HBO对脑缺血再灌注损伤的疗效及其机理 ,为临床应用HBO治疗疾病提供理论依据。结果 :沙土鼠脑缺血再灌注 3d后海马CA1区大量神经元凋亡 ,HBO治疗组凋亡细胞数明显减少 (P <0 .0 1) ,并以 0 .2 5MPaHBO治疗组为佳。结论 :HBO治疗对海马神经元损伤有保护作用 ,减少神经元凋亡 ,为高压氧治疗缺血性损伤的疗效机理之一     

大鼠脑缺血再灌注损伤后神经元和星形胶质细胞的动态变化及Cyclin D1表达的差异

目的研究大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后神经元和星形胶质细胞表达量的动态演变及各自cyclin D1的表达差异。方法建立大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）再灌注模型,随机分为再灌注后1d组,3d组,7d组,14d组和假手术组,应用流式细胞术检测各组再灌注后不同时间点神经元和星形胶质细胞数量变化及各自cyclin D1的表达。结果缺血侧梗死边缘区皮质星形胶质细胞的表达增加,而神经元的表达下降,与假手术组比较有明显差异（P〈0．05）;神经元和星形胶质细胞中各自cyclin D1的表达在再灌注7d、14d后表达上调,且星形胶质细胞中的cyclinD1增加更明显,与假手术组比较有统计学差异（P〈0．05）。结论大鼠脑缺血再灌注后,缺血侧梗死边缘区皮质星形胶质细胞和神经元的cyclinD1表达均有不同程度的上调,星形胶质细胞的cyclin D1表达上调比神经元的更为显著。     

丹参酮Ⅱ A与丹皮酚配伍对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用研究

研究丹参酮ⅡA与丹皮酚配伍(简称双丹配伍)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑梗死体积、自由基变化的影响,探讨双丹配伍对脑缺血损伤的保护作用.方法:复制大鼠中动脉缺血再灌注模型,分别给予双丹配伍干预,观察和评价受试动物行为学、脑梗死率、脑指数、脑含水量、SOD、MAD等指标的变化.结果:①双丹配伍的各试药组均具有明显改善局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠的神经行为学评分,降低脑梗死率、脑指数、脑含水量、提高脑组织SOD活性、降低MDA含量;②双丹配伍各组中1∶3配伍组的总体药效作用优于1∶2和1∶4组,但数据未见统计学差异;③双丹配伍尾静脉注射的药效作用明显优于预先灌胃组.结论:双丹配伍脂质体给大鼠口服和注射对脑缺血再灌注损伤具有显著保护作用.     

Primary Culture of Hippocampal Neurons from P0 Newborn Rats

The physiological properties of hippocampal neurons are commonly investigated, especially because of the involvement of the hippocampus in learning and memory. Primary hippocampal cell culturing allows neuroscientists to examine the activity and properties of neurons at the individual cell and single synapse level. In this video, we will demonstrate how to isolate and grow primary hippocampal cells from newborn rats. The hippocampus may be isolated from each newborn animal in as short as 2 to 3 minutes, and the cultures can be maintained for up to two weeks. We will also briefly demonstrate how to use these hippocampal neurons for ratiometric calcium imaging. While this protocol describes the process for the hippocampus, with little to no modification, it can be applied to other regions of the brain.Open in a separate windowClick here to view.^{(46M, flv)}     

Protective Effects of Pyridoxal Phosphate Against Glucose Deprivation-Induced Damage in Cultured Hippocampal Neurons

Abstract: When hippocampal cultures were deprived of glucose, massive release of lactate dehydrogenase (LDH), an indicator of neuronal death, occurred via NMDA receptor activation. Addition of pyridoxal phosphate (PLP; 1 and 10 µ M ) inhibited this LDH release in a concentration-dependent manner. Prior exposure to PLP evoked more potent inhibitory effects on LDH release compared with those treated at the onset of glucose deprivation. Furthermore, PLP inhibited the reduction of intracellular content of pyruvate induced by glucose deprivation, which was accompanied by the reversal of intracellular ATP depletion. A noteworthy elevation of extracellular glutamate in response to glucose deprivation was completely reversed by addition of PLP. Aminooxyacetic acid, a potent inhibitor of PLP-dependent enzymes, antagonized the effects of PLP on LDH release, pyruvate production, and ATP formation. These results suggest that PLP protects neurons from glucose deprivation-induced damage by enhancing the formation of energy-yielding products and relieving extracellular load of glutamate. The observed phenomena further indicate that PLP might be used prophylactically against neuronal death induced by metabolic disorders.     

天麻素对胃癌细胞活力和凋亡的影响

目的:探讨天麻素在体外对人胃癌细胞SGC-7901细胞活力和凋亡的影响。方法:培养人胃癌细胞株SGC-7901,随机分为正常组、对照组和实验组,再按不同时间点分为6、12、24、48、72 h 5个亚组,每个亚组8孔细胞。实验组按2 mg/m L加入天麻素,对照组加入等量生理盐水,正常组不作其它处理。运用MTT法检测不同时间点细胞活力,运用TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果:天麻素对人胃癌细胞SGC-7901具有增殖抑制和促进凋亡作用,并具有时间依赖关系。正常组、对照组之间细胞活力及凋亡比较均无统计学意义(P0.05)。在6 h、12 h、24 h、48 h、72 h时间点,实验组的细胞活性分别为0.41±0.05、0.42±0.07、0.43±0.06、0.47±0.07、0.52±0.08,对照组分别为0.44±0.07、0.49±0.12、0.50±0.09、0.69±0.11、0.72±0.12,实验组细胞活力较对照组降低(P0.05),实验组的凋亡指数分别为7.12±0.65、10.48±1.26、15.37±1.69、17.52±2.33、33.62±3.65,对照组的凋亡指数分别为1.08±0.05、3.41±0.56、6.09±0.91、9.52±1.14、11.57±1.18,实验组较对照组凋亡显著增加(P0.05)。结论:天麻素可降低人胃癌SGC-7901细胞的活力并增加细胞的凋亡,可能具有抗肿瘤的作用。     

天麻中天麻素含量的影响因子研究

应用高压液相色谱技术,对产地、品种、以及炮制方法等因素对天麻中天麻素含量的影响进行了比较分析.结果表明,炮制对天麻药材中天麻素的含量影响最大.对不同炮制方法的比较分析结果显示,蒸制法可显著提高天麻素的含量.本文还讨论了天麻素在炮制过程中形成的可能机理.     

天麻素抑制脂多糖诱导的BV-2小胶质细胞炎症反应及机制研究

目的:研究天麻素对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞炎性反应的影响,并探讨其潜在的作用机制。方法:BV-2小胶质细胞分为对照组、LPS组和天麻素组。LPS和天麻素处理24 h后,MTT和LDH试验检测细胞活性。ELISA实验检测炎性因子白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量。Western blot检测细胞中Iba-1和TLR4的表达,以及IκBα的降解和NFκB-P65的核转位情况。结果:LPS刺激后,BV-2细胞活性下降(65.46±3.70%),LDH释放量增加(264.54±17.78 U/L),各炎性因子水平也显著升高。给予天麻素处理后,细胞活性升高(74.33±4.22%),LDH释放量减少(173.88±15.23 U/L),炎性反应降低。同时,天麻素显著抑制LPS诱导的BV-2细胞Iba-1升高,降低了LPS处理后细胞TLR4的升高,IκBα的磷酸化水平和P65的核转位。结论:天麻素可以提高BV-2细胞活性,缓解LPS诱导的炎症反应。其作用机制可能是通过抑制BV-2细胞的过度活化,调控TLR4/NFκB信号通路,最终减少炎症因子的表达。     

天麻素对CUS大鼠抑郁样行为和海马BDNF/GDNF水平的影响

目的:探讨天麻素对慢性不可预见应激(CUS)大鼠抑郁样行为的改善作用及对海马脑源性神经营养因子(BDNF)及胶质原纤维酸性蛋白(GDNF)表达的影响。方法:将64只SD大鼠随机分为对照组(Sham),Sham+天麻素低、中、高剂量组,模型组(CUS),模型(CUS)+天麻素低、中、高剂量组,每组8只。对照组每天腹腔注射生理盐水(1 m L/kg),连续14天;Sham+天麻素低、中、高剂量组每天腹腔注射不同剂量的天麻素(50、100或者200 mg/kg),连续14天;模型组接受CUS造模,并且在造模结束后每天腹腔注射生理盐水(1 m L/kg),连续14天;模型+天麻素低、中、高剂量组在CUS造模结束后每天腹腔注射不同剂量的天麻素(50、100或者200 mg/kg),持续14天。随后,通过糖水偏好实验和强迫游泳实验检测各组大鼠的抑郁样行为,在行为学检测结束后处死大鼠,通过Elisa检测海马GFAP和BDNF的表达情况。结果:(1)慢性不可预见应激(CUS)可以导致明显的抑郁样行为,包括糖水偏好减少(P0.05)和强迫游泳不动时间增加(P0.01),CUS组大鼠海马GFAP和BDNF水平下降(P0.01)。(2)一定剂量(100和200 mg/Kg)天麻素干预可以缓解CUS大鼠的抑郁行为,CUS与CUS+GAS(M)组(P0.05)以及CUS与CUS+GAS(H)组之间(P0.01)存在显著性差异。(3)中高剂量的天麻素可以恢复CUS大鼠海马的BDNF和GDNF水平,CUS与CUS+GAS(M)组(P0.05)以及CUS与CUS+GAS(H)组之间(P0.05)的BDNF和GDNF水平存在显著性差异。结论:天麻素可以缓解CUS模型大鼠抑郁样行为,恢复CUS模型大鼠海马的BDNF和GDNF水平。     

RP58 Regulates the Multipolar-Bipolar Transition of Newborn Neurons in the Developing Cerebral Cortex

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Highlights? RP58 regulates neuronal migration independently of cell cycle exit ? RP58 is involved in the regulation of axonal and dendritic development ? RP58 is essential for multipolar-to-bipolar transition of neurons ? RP58 controls neuronal migration by regulating the Ngn2-Rnd2 pathway     

触觉剥夺后豚鼠桶状皮质DCX 阳性细胞的实验研究*

目的:观察豚鼠单侧触觉剥夺后豚鼠两侧桶状皮质的DCX阳性细胞数量的差别,探讨触觉剥夺对豚鼠桶状皮质神经发生的影响。方法:12只健康豚鼠随机分为2组,每组6只,制作豚鼠单侧(右侧)触觉(胡须)剥夺模型,之后常规饲养1月和2月灌注取材,用免疫组化和免疫荧光双标法观察同一只豚鼠两侧桶状皮质的DCX阳性细胞情况并比较其数量差异。结果:DCX免疫组织化学染色显示两实验组大脑皮层barrel区DCX阳性细胞数实验侧均明显多于对照侧;NeuN免疫组织化学染色显示两实验组动物大脑皮层barrel区两侧NeuN阳性细胞数差别无统计学意义;DCX和NeuN免疫荧光双标染色显示两实验组大脑皮层barrel区均可见双标细胞存在。结论:触觉剥夺后豚鼠两侧桶状皮质的DCX阳性细胞数具有明显差异性,可能是神经再生的表现。     

艾芬地尔对异氟烷所致发育期海马神经元毒性的保护作用

目的:通过体外实验探讨艾芬地尔对异氟烷所致发育期海马神经元毒性的保护作用。方法:从出生一天的大鼠海马获取神经元并体外培养5天。这些神经元被随机分入4组,包括对照组(control组)、异氟醚组(Iso组)、艾芬地尔(Ifen组)和艾芬地尔+异氟烷组(Ifen+ISO组)。使用MTT法检测细胞活力及细胞损伤程度。使用TUNEL染色法检测细胞凋亡。使用Western blot法检测神经元中NMDA受体亚基NR2B和活化caspase-3的表达水平。结果:与对照组比较,在2.4%异氟烷暴露后1小时神经元的细胞活力显著下降(P0.05)。同时,在2.4%异氟烷暴露后神经元的凋亡指数也显著升高(P0.05)。Western blot结果显示,异氟烷暴露可显著升高神经元活化caspase-3和NR2B的表达水平(P0.05)。然而,使用NR2B拮抗剂艾芬地尔(20μM)不仅可显著减少异氟烷所致的NR2B表达水平增高,也可缓解异氟烷造成的神经元凋亡和细胞损伤(P0.01)。结论:异氟烷可导致发育期神经元NR2B表达水平增高,而使用NR2B受体拮抗剂艾芬地尔可有效抑制NR2B的表达水平从而减少异氟烷所致神经元毒性。