靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响

目的：观察靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响.方法：构建靶向survivin的siRNA真核表达载体,采用lipofec-tamineTM2000转染乳腺癌MCF-7细胞,采用MTT法检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺对MCF-7细胞增殖的影响;采用流式细胞术检测靶向survivin的siRNA联合三苯氧胺诱导MCF-7细胞凋亡的作用.结果：靶向survivin的siRNA和三苯氧胺均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导其一定程度的凋亡;当联合应用靶向survivin的siRNA和三苯氧胺时,上述作用得到显著加强（P＜0.05）.结论：利用RNA干扰技术阻断survivin基因的表达可以显著增强MCF-7细胞对三苯氧胺的敏感性,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的内分泌治疗中具有重要的潜在价值.     

靶向survivin的siRNA抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖并诱导其凋亡

目的 观察靶向survivin的siRNA对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法构建靶向survivin的siRNA真核表达载体,采用Lipofectamine^TM2000转染乳腺癌细胞MCF-7,采用半定量RTPCR、免疫组化技术检测转染前后MCF-7细胞survivin基因表达的变化;采用MTT法检测对MCF-7细胞增殖的抑制作用;采用TUNEL法检测诱导MCF-7细胞凋亡的作用。结果靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效抑制MCF-7细胞survivin基因的表达,在mRNA水平其表达抑制率为64．9％;在蛋白质水平其表达抑制率为79．7％;转染靶向survivin的siRNA真核表达载体可以显著抑制MCF-7细胞的增殖,细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为31．6％和33．0％;转染后24h可以诱导12．9％的细胞凋亡。结论利用RNA干扰技术阻断survivin基因的表达可以显著抑制MCF-7细胞的增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的价值。     

RNAi技术沉默survivin基因诱导MCF-7细胞凋亡的研究

目的:探讨RNA干扰技术沉默survivin基因表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:设计并合成靶向survivin的小分子干扰RNA(siRNA),在脂质体(lipidosome)的介导下转染人乳腺癌细胞株MCF-7,荧光倒置显微镜观察细胞的转染效率; MTT(四甲基偶氮唑盐)比色法分析检测各组癌细胞的存活率;流式细胞计数检测各组癌细胞周期和凋亡指数;Western Blot方法观察对MCF-7细胞survivin mRNA和蛋白质表达的抑制效率.结果:Survivin-siRNA能有效封闭survivin基因的表达,使survivin的mRNA相对水平明显降低(P＜0.05);Survivin-siRNA能明显抑制细胞增殖(P＜0.05);Survivin-siRNA使细胞G2/M期细胞百分比明显增加,S期的细胞百分比显著减少(P＜0.05).结论:利用RNA干扰技术沉默survivin基因的表达可以显著抑制MCF-7细胞的增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在乳腺癌的基因治疗中具有一定的研究价值.     

survivin—siRNA联合化疗药物对乳腺癌MCF-7细胞凋亡及逆转耐药的研究

目的观察靶向survivin的siRNA联合紫杉醇和表柔比星对乳腺癌MCF-7细胞凋亡及逆转耐药的影响。方法构建靶向survivin的siRNA表达质粒,转染乳腺癌MCF。7细胞,荧光定量聚合酶链反应（PCR）,Westernblot技术检测转染前后survivin基因表达的变化,CCK．8法检测靶向survivin的siRNA联合紫杉醇、表柔比星对MCF-7细胞药物敏感性的影响,利用流式细胞术检测细胞凋亡作用。结果survivin—siRNA-2能有效抑制survivinmRNA（0．30±0．03）和蛋白的表达（0．37±0．09）（P〈0．05）;紫杉醇[24、48h抑制率分别为（38．5±4．0）％、（41．7±6．3）％]、表柔比星[24、48h抑制率分别为（37．0±8．6）％、（40．6±12．1）％1均可抑制MCF-7细胞增殖并诱导部分细胞凋亡;当与survivin—siRNA联合时上述作用显著加强f紫杉醇24、48h抑制率分别为（76．0±2．9）％、（85．1±4．0）％;表柔比星24、48h抑制率分别为（74．6±5．6）％、（82．5±4．8）％1（P〈0．05）,并且细胞抑制率呈现时间、剂量依赖性。结论利用RNA干扰阻断survivin基因表达同时联合相应化疗药物可以显著增强MCF-7细胞对药物敏感性并促进其凋亡,该方法在乳腺癌治疗中具有潜在的临床应用价值。     

RNA干扰survivin对口腔表皮样癌细胞株 KB生长的抑制作用

 摘要：目的探讨RNA干扰技术沉默survivin基因对口腔表皮样癌细胞株KB增殖和凋亡的影响。方法化学合 成靶向survivin基因的小干扰RNA片段（siRNA）,脂质体法转染KB细胞。通过RT-PCR、蛋白印迹法分别检 测survivin mRNA和蛋白表达变化,流式细胞仪检测细胞生长周期和凋亡,MTT法检测转染后KB细胞增殖情 况。结果siRNA可以有效地降低KB细胞survivin mRNA和蛋白的表达;转染后KB细胞阻滞于G2/M期,凋亡增 加,增殖受抑制。结论应用RNA干扰技术沉默survivin 在KB细胞中的表达可以有效抑制该细胞增殖、促进 癌细胞凋亡,将survivin作为口腔癌基因治疗的靶点,通过RNA干扰技术对口腔癌进行基因治疗具有一定 的可行性。     

Survivin siRNA对人肺腺癌细胞SPCA1和SH77抑制作用的比较分析

背景与目的 Survivin是IAP家族的新成员,具有抑制凋亡和调节细胞增殖的双重作用,是迄今发现最强的凋亡抑制因子。本项研究的目的是通过将survivin的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体分别转染至肺癌细胞SPCA1和SH77,分析survivin siRNA对不同肺癌细胞的增殖抑制作用。方法构建靶向survivin的siRNA表达载体与pSi scrambled,经由脂质体法分别转染至肺癌细胞SPCA1和SH77。通过MTT法检测细胞增殖抑制,用流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期,利用半定量RT-PCR和Western blot印迹法分别检测细胞survivin mRNA及蛋白表达水平。结果 Survivin siRNA干预后,SPCA1和SH77细胞均出现凋亡,G0/G1期阻滞。实验组Survivin mRNA水平和蛋白表达水平比脂质体对照组明显减少。结论 Survivin基因特异性RNA干扰可以明显抑制肺癌SPCA1和SH77细胞的体外增殖并诱导明显的细胞凋亡。     

靶向Survivin的siRNA对胰腺癌细胞PC-2的放射增敏作用

目的采用RNA干扰技术阻断Survivin基因的表达,观察其诱导胰腺癌细胞凋亡及对放射的增敏作用。方法构建靶向Survivin的siRNA真核表达载体,采用lipofectamineTM2000转染胰腺癌细胞PC-2,采用半定量RT-PCR、免疫组化技术检测转染前后PC-2细胞Survivin基因表达的变化;采用流式细胞术检测其诱导PC-2细胞凋亡及对放射的增敏作用。结果靶向Survivin的序列特异性的siRNA可以有效地抑制PC-2细胞Survivin基因的表达,在mRNA水平其表达抑制率为81.25%;在蛋白质水平其表达抑制率为74.24%;转染靶向Survivin的siRNA真核表达载体48h后可以诱导7.03%的细胞凋亡;阻断Survivin基因的表达,可以显著提高PC-2细胞对放射的敏感性,靶向Survivin的siRNA联合放射可以诱导14.58%的细胞凋亡。结论本研究所构建的靶向Survivin的siRNA真核表达载体可以有效、特异地阻断Survivin基因的表达,阻断Survivin基因的表达可以诱导一定程度的PC-2细胞的自发凋亡,并显著增强其对放射的敏感性。靶向Survivin的RNA干扰技术在胰腺癌的基因治疗中具有重要的潜在价值。     

TSG101的下调对乳腺癌细胞的作用

目的:研究肿瘤易感基因101(tumor susceptibility gene 101,TSGl01)的下调对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞的作用及TSG101在乳腺癌组织中的表达.方法:应用脂质体法将靶向TSG101的小干扰RNA(smallinterfering RNA,siRNA)转染入乳腺癌细胞系MCF-7细胞中.分别使用MTT法、流式细胞仪、transwell小室法检测siRNA干扰后MCF-7细胞增殖能力、细胞周期、细胞凋亡率和细胞迁移能力的变化.使用免疫组织化学方法检测TSG101在54例乳腺浸润性导管癌及癌旁正常乳腺组织中的表达.结果:MTT结果显示,TSG101 siRNA转染后的MCF-7细胞与对照组相比,增殖能力减弱.细胞周期结果显示.TSG101 siRNA转染后的MCF-7细胞周期G0/G1期及S期比例(70.51±0.23;23.65±0.78)与对照组(59.15±0.77,34.96±0.45)、(59.21±0.68.34.89±0.30)相比,G0/G1期比例增多,S期比例减少.细胞凋亡结果显示,TSG101 siRNA转染后的MCF-7细胞(13.71±1.31)与对照组(4.37±0.87)、(6.00±0.08)相比,细胞凋亡率增加.细胞迁移结果显示,TSG101 siRNA转染后的MCF-7细胞(4.60±0.80)与对照组(24.47±1.90)、(23.80±2.20)相比,细胞迁移能力减弱.免疫组化实验结果显示,TSG101蛋白主要定位于乳腺癌细胞质和(或)细胞核内,呈棕黄色颖粒.54例乳腺癌组织中TSG101阳性表达40例(74.07%),TSG101在癌旁正常乳腺组织中不表达或呈微弱的胞质表达,TSG101在乳腺癌组织中的表达高于癌旁正常乳腺组织.结论:TSG101的下调能够抑制乳腺癌细胞系MCF-7细胞的增殖,诱导凋亡,阻滞细胞周期于G1/S期,并且降低其迁移能力.TSG101可能参与乳腺癌的发生、发展过程.     

β-榄香烯联合三苯氧胺抑制乳腺癌MCF-7细胞生长的实验研究

目的:研究β-榄香烯联合三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞生长有无协同抑制作用,并探讨其可能的机制.方法: 采用MTT法检测β-榄香烯联合三苯氧胺对MCF-7细胞的增殖抑制作用,流式细胞仪测定细胞周期和凋亡率,免疫组化SP法检测bcl-2、pS2表达变化.结果: 不同剂量的β-榄香烯联合治疗剂量的三苯氧胺,吸光度均值较单用三苯氧胺明显下降,相应 的细胞抑 制作用明显上升;流式细胞仪检测G0/G1期细胞比例增加,用药后凋亡率升高,bcl-2、pS2在联合用药后表达明显下调.结论:β-榄香烯使三苯氧胺对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用显著增强,提示榄香烯与三苯氧胺具有协同增效作用,其作用机制与影响细胞周期进程,协同促进凋亡,下调bcl-2、pS2表达有关.     

siRNA沉默c-FLIP基因表达与表柔比星联合应用对MCF-7细胞凋亡的影响

目的 探讨RNA干扰技术沉默c-FLIP基因表达联合应用表柔比星对人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的影响。方法 体外化学合成c-FLIP序列特异性双链小干扰RNA(siRNA),转染MCF-7细胞,应用Western blot方法检测c-FLIP蛋白的抑制水平、检测Caspase-8的表达差异;应用流式细胞术检测细胞凋亡的变化及表柔比星与c-FLIP-siRNA联合应用对细胞凋亡的影响。结果 c-FLIP-siRNA能有效地抑制c-FLIP蛋白的表达(P＜0.05),促进细胞的凋亡(P＜0.05)。c-FLIP-siRNA和表柔比星联合应用较单用表柔比星能明显促进MCF-7细胞的凋亡(P＜0.05)。结论 c-FLIP-siRNA能够促进MCF-7细胞的凋亡,并且能够增强表柔比星的抗肿瘤作用。