双歧杆菌脂磷壁酸抗免疫衰老的实验研究

目的：探讨双歧杆菌抗衰老的分子机理。方法：在建立D-半乳糖诱导的衰老小鼠模型的同时，每日注射双歧杆菌LTA。检测各组小鼠体重增长曲线、胸腺形态、胸腺指数、用免疫组化方法检测胸腺c-fos、p16蛋白表达及用ELISA法检测外周血IL-2的含量。结果：与青年对照组小鼠相比，衰老模型组小鼠胸腺组织形态结构异常，体重、胸腺指数、胸腺c-fos蛋白表达与外周血IL-2含量显著下降，胸腺p16蛋白表达显著升高；而双歧杆菌LTA，能显著逆转上述这些变化。结论：双歧杆菌LTA具有抗衰老作用。     

甘肃党参水煎剂对D-半乳糖诱导衰老小鼠免疫功能的影响

目的 研究甘肃党参水煎剂对D-半乳糖诱导衰老小鼠免疫功能的影响.方法 采用D-半乳糖诱导亚急性衰老小鼠模型,测定每组小鼠的体质量,计算脾脏指数和胸腺指数,观察脾脏组织超微结构,采用免疫组化法检测CD138的表达,ELISA检测小鼠血清中IgG、IgM和补体C3、C4含量.结果 与正常对照组相比,衰老模型组小鼠的脾脏指数和胸腺指数显著降低(P＜0.01),与模型组比较,高、低剂量党参组和维生素E组小鼠的脾脏指数和胸腺指数显著升高(P＜o.ol).正常对照组脾小体中淋巴细胞的超微结构均正常,而模型组小鼠的脾脏超微结构有明显的损伤现象.低、高剂量党参组和维生素E组均使已受损伤的脾脏超微结构得以修复,其中高剂量党参组使受损的脾脏超微结构恢复到最接近正常水平.与正常对照组比较,衰老模型组小鼠脾脏组织中CD138的表达率较低(P＜0.01),小鼠血清中IgG、IgM和补体C3、C4含量显著减少(P＜0.01或P ＜0.05);与衰老模型组比较,正常对照组和高剂量党参组小鼠脾脏组织中CD138的表达率较高(P＜0.01),小鼠血清中IgG、IgM和补体C3、C4含量显著增加(P＜0.01或P＜0.05),而党参低剂量组和维生素E组无显著差异(P＞0.05).结论 甘肃党参水煎剂具有增强D-半乳糖诱导衰老小鼠免疫功能的作用.     

褪黑素对衰老小鼠脑组织NO和氧自由基生成的作用

观察褪黑素对D 半乳糖衰老模型小鼠NO生成和氧自由基的作用以探讨其抗衰老机制。D 半乳糖诱导昆明小鼠衰老同时每日腹腔注射外源性褪黑素 (5mg kg)连续 8周 ,测定小鼠不同脑区NO、NOS、SOD、MDA、脂褐素的变化。模型组NO、NOS、MDA 脂褐素水平明显升高 (P <0 0 1;P <0 0 1;P <0 0 1;P <0 0 5 ) ,SOD活性明显减弱 (P <0 0 1) ,给药 (D +MT)组则上述变化逆转。褪黑素抑制NO的过度生成及减轻脂质过氧化损伤是其抗衰老机制之一     

人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)gag基因疫苗的免疫原性

目的 :检测人免疫缺陷病毒 1型 (HIV 1)gag基因疫苗的免疫原性。方法 :分别以ELISA、荧光抗体染色和乳酸脱氢酶释放法 ,检测免疫小鼠血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量和淋巴细胞杀伤效应。结果 :血清抗体滴度、脾T细胞亚群的数量及淋巴细胞杀伤效应 ,重组质粒pVAXGAG免疫组与空载体pVAX1对照组相比较差异显著(分别为P <0 .0 5和P <0 .0 1)。结论 :HIV 1DNA疫苗质粒pVAXGAG在BALB/c小鼠中不仅可诱导特异性体液免疫 ,而且可诱导特异性细胞免疫。     

人免疫缺陷病毒Ⅱ型核心蛋白DNA疫苗的实验免疫研究

目的　检测HIV 2核心蛋白DNA疫苗诱导Balb c小鼠免疫应答的能力。方法　将表达HIV 2核心蛋白DNA疫苗质粒pVAXIgag肌注Balb c小鼠 ,分析CD4 、CD8 T淋巴细胞的数量、脾特异性CTL反应、血清中HIV 2的特异性抗体水平。结果　重组质粒pVAXI gag免疫组与空载体pVAXI及PBS对照组相比较差异显著 ,血清抗体滴度及淋巴细胞杀伤效应为P <0 .0 1,脾T细胞亚群的数量为P <0 .0 5。结论　HIV 2核心蛋白DNA疫苗能诱导Balb c小鼠产生特异性细胞免疫应答和体液免疫应答     

腹腔注射胶原蛋白肽增强糖皮质激素免疫抑制模型小鼠的免疫功能

目的观察腹腔注射胶原蛋白肽对糖皮质激素诱导的免疫抑制小鼠免疫功能的调节作用。方法采用糖皮质激素诱导的免疫抑制小鼠模型,连续7 d腹腔注射给予100、300、600 mg胶原蛋白肽/kg体质量。分别测量小鼠体质量、胸腺和脾脏质量,计算胸腺和脾脏指数;采用全自动血球计数仪检测外周血白细胞总数、中性粒细胞和淋巴细胞数、中性粒细胞和淋巴细胞百分比,采用流式细胞术检测CD4+/CD8+比值;采用MTT法检测刀豆蛋白A(ConA)诱导的脾脏T淋巴细胞增殖能力。结果与对照组相比,模型组小鼠中性粒细胞数及其百分比显著升高(P0.05),体质量、胸腺指数、脾脏指数、淋巴细胞数及其百分比、CD4+/CD8+比值、脾脏T淋巴细胞增殖能力显著降低(P0.05);腹腔注射胶原蛋白肽后,这些指标均向对照组水平恢复,并呈剂量依赖性关系;其中剂量最高600 mg/kg组的小鼠体质量、脾脏指数、淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+比值显著高于模型组,中性粒细胞百分比显著低于模型组(P0.05),与对照组相比无显著差异。结论腹腔注射胶原蛋白肽能够增强小鼠的免疫功能。     

当归多糖对衰老模型大鼠脾脏结构与功能的影响

目的 探讨当归多糖（ASP）对衰老模型大鼠脾脏结构与功能影响及其机制。 方法 SD大鼠随机分为正常对照组,ASP对照组,衰老模型组,ASP衰老模型组,每组10只。衰老模型组皮下注射D-半乳糖（120mg/kg）qd×42d;ASP衰老模型组注射D-半乳糖的剂量与时间同衰老模型组,第15天起腹腔注射ASP (100 mg/kg) qd×28d;正常对照组皮下注射等量生理盐水qd×42d;ASP对照组注射等量生理盐水qd×14d,第15天起腹腔注射ASP（同ASP衰老模型组)。药物注射完成后第2天,取脾脏测定脾指数,石蜡切片观察脾脏显微形态学;衰老β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色观察脾细胞百分率,CCK8测定脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力;流式细胞术检测脾细胞周期与活性氧簇（ROS）含量; ELISA检测脾细胞分泌TNF-α、GM-CSF能力与丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶(SOD)含量;Western blotting 检测衰老相关蛋白P53、P21、RB蛋白表达。 结果 与正常对照组比较,D-半乳糖致衰老模型组大鼠脾指数,脾脏白髓面积比例,脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,S期比例及TNF-α、GM-CSF的分泌能力,SOD活性明显降低;脾细胞的SA-β-Gal阳性率,G₁期与G₂/M期细胞比例,ROS、MDA含量,P53、P21、RB蛋白表达显著增高。与衰老模型组比较,ASP使D-半乳糖致衰老模型大鼠脾指数,脾脏白髓面积比例,脾细胞对刀豆蛋白A刺激的增殖能力,S期比例与TNF-α、GM-CSF的分泌能力,SOD活性明显提高;脾细胞SA-β-Gal阳性率,G₁期及G₂/M期细胞比例,ROS、MDA含量,P53、P21、RB蛋白表达有显著抑制作用。
结论 D-半乳糖复制的衰老模型大鼠脾脏结构与功能损伤明显,当归多糖对其致衰损伤有明确的保护作用。     

结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗免疫治疗作用的研究

目的:研究结核分支杆菌Ag85A DNA疫苗的免疫治疗作用。方法:用结核分支杆菌H37Rv腹腔内注射BALB/c小鼠 2个月后,将小鼠随机分为 5组,分别用生理盐水(A)、载体质粒(B)、卡介苗(C)、维卡菌苗(D)和 Ag85A DNA疫苗(E)免疫小鼠;用ELISA法检测血清抗体;免疫治疗2月和5月时,分别取肺、肝和脾脏观察病理改变、称取重量、作菌落计数、肺组织涂片及脾淋巴细胞转化试验。结果:DNA疫苗组抗原特异性抗体不同程度升高。免疫治疗2月时,各组鼠脾淋巴细胞转化率无显著差异;各治疗组肺组织涂片细菌数和肺菌落计数均比对照组不同程度地减少;C和B组的肺病变程度较轻。免疫治疗5月时,各治疗组鼠脾淋巴细胞转化率均显著增高;各组肺、脾细菌数无显著差别比和D组的肺未见明显病变。结论:DNA疫苗似乎具有一定的免疫治疗效果。     

表达HIV-1 gag-gp120嵌合基因的DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答

目的 :检测表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答效果。方法 :将真核表达质粒pVAXGE肌肉注射BALB C小鼠 ,观察免疫小鼠脾T淋巴细胞亚群的数量、特异性CTL杀伤率及小鼠免疫后不同时间点血清中IgG抗体滴度。结果 :重组质粒pVAXGE免疫组小鼠脾淋巴细胞进行了增殖 ,脾特异性CTL杀伤率显著高于对照组 (P <0 0 1) ;小鼠免疫后于第 8周血清抗体达到最高。结论 :表达HIV 1gag gp12 0嵌合基因的DNA疫苗质粒可诱导BALB C小鼠发生免疫应答     

不同来源乙肝表面抗原的细胞免疫学对比研究

目的　研究不同来源乙肝表面抗原诱导CD8 抗原特异性的细胞毒T淋巴细胞反应(CTL)的差异及T细胞产生细胞因子的能力 ,从而对各种来源乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)的免疫原性有更充分的评价。方法　不同来源HBsAg分别免疫BALB c小鼠 ,于免疫后不同时间制备脾脏单个核细胞 (MNC) ,再以相应的HBsAg体外刺激 ,酶联免疫方法 (ELISA)测定细胞因子分泌水平 ;以Na2 5 1CrO4标记靶细胞 ,测定CTL反应活性 ;应用流式细胞仪分析T细胞亚群。结果　HM HBsAg免疫小鼠 10d后的脾细胞产生IFN γ水平最高 ,而在免疫后 2 0d和 2 5d ,IL 2的水平显著高于其它各组 ,CD3 分子脾淋巴细胞显著高于其它各实验组 (P <0 .0 5) ;plasma HBsAg免疫小鼠的脾淋巴细胞产生IFN γ和IL 2水平较低 ,但在免疫 2 5d对P815 HBs的杀伤性最强 ;HM HBsAg和SSC HBsAg免疫后CD4 CD8- 脾淋巴细胞比例显著增高 (P <0 .0 5) ;CD4- CD8 细胞所占百分比各组间及与空白对照组间差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论　不同来源HBsAg诱导的细胞免疫反应类型和程度不同     

硒多糖对MCF-7乳腺癌小鼠的抗肿瘤作用研究

目的 探究硒多糖对MCF-7乳腺癌小鼠脾指数、胸腺指数、脾淋巴细胞转化率及SBP-1表达的影响,分析硒多糖对乳腺癌小鼠的抑瘤效果及作用机制。方法 将40只小鼠随机分为4组,每组10只,其中1组作为正常组,其余3组将MCF-7乳腺癌细胞悬液注射于小鼠左侧膈腧穴处建立乳腺癌模型,证明成瘤后予以给药,模型组（予等剂量的生理盐水）,硒多糖用药组（400 mg/kg硒多糖）、联合用药组（50 mg/kg环磷酰胺＋400 mg/kg硒多糖）,连续给药14 d。脱颈处死小鼠,测胸腺指数、脾指数,无菌条件下取脾脏研磨进行体外淋巴细胞培养,检测PHA诱导下的小鼠脾淋巴细胞转化率并应用免疫组化技术检测肿瘤组织中SBP-1的表达情况。结果 与正常组和模型组相比较硒多糖用药组、联合用药组的胸腺指数、脾指数及淋巴细胞转化率明显提高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与硒多糖用药组比较联合用药组的胸腺指数、脾指数及淋巴细胞转化率均有所提高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比硒多糖用药组及联合用药组的SBP-1蛋白表达均有所提高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与硒多糖用药组相比联合用药组的SBP-1蛋白表达有所增强,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 硒多糖可以通过改善MCF-7乳腺癌小鼠的免疫功能及增强SBP-1的表达来起到抗肿瘤作用,与环磷酰胺联合用药作用更显著。     

Treatment of D-Galactose Induced Mouse Aging with Lycium Barbarum Polysaccharides and Its Mechanism Study

We evaluated the effects of Lycium barbarum polysaccharides LBP) on D-galactose aging model mouse, and explored its possible mechanism. Kunming mice were randomly divided into the control group, the model group, the high-dose LBP group, and the low-dose LBP group. Except the control group, D-galactose was used for modelling. The drug was administrated when modelling. Mouse behavioural, learning and memory changes were observed, and the contents of lipid peroxidation (LPO), lipofuscin (LF) and monoamine oxidase B (MAO-B) in mouse brain tissue and the weight of immune organs were measured after 6 weeks. Compared with the control group, mouse weight gain in the model group reduced significantly. Compared with model group, after mice drank LBP, the times of electric shock was less than aging mice (in which, the high-dose LBP group, P<0.05), and electric shock incubation period was longer (P<0.01). On Day 45 after modelling and drug administration, the contents of LPO, LF and MAO-B in mouse brain tissue in the model group increased significantly, while those in the drug administration groups decreased significantly. The thymus index in the aging model group decreased significantly; the thymus index and the spleen index in the high-dose LBP group and the low-dose LBP group rebounded significantly (P<0.01). We concluded that LBP has an anti-aging effect on D-galactose induced aging model mouse, and its mechanism may be related with the alleviation of glucose metabolism disorder and the resistance of the generation of lipid peroxide and other substances, which damage cell membrane lipid.     

硒酸精氨酸对D-gal衰老小鼠细胞免疫功能的影响

目的：探讨硒酸精氨酸对D-gal衰老小鼠免疫功能的影响。方法：将试验小鼠分为正常组、模型组、低剂量给硒组（L-SeArg）和高剂量给硒组（H-SeArg），通过后颈背部皮下注射D-gal建立亚急性衰老模型，以灌胃方式加入硒酸精氨酸，观察硒酸精氨酸对脾指数、胸腺指数的影响，MTT法检测脾细胞增殖能力和NK细胞的杀伤活性、免疫荧光法观察CD40、CD40L的阳性表达率。结果：硒酸精氨酸能明显提高小鼠胸腺指数和脾指数，促进淋巴细胞转化，提高NK细胞的杀伤活性，增加CIM0、CD40L的阳性表达率。2个剂量给硒组中，低剂量硒酸精氨酸的影响最大，与模型组相比有统计学意义（P〈0．01）。结论：D-gal能导致小鼠细胞免疫功能下降，硒酸精氨酸能活化免疫细胞，提高小鼠机体的免疫力，延缓衰老。     

普洱茶膏抗小鼠衰老的保健作用

目的:观察普洱茶膏对D-半乳糖致衰老模型小鼠抗衰老的保健作用。方法:昆明种清洁级小鼠30只随机分成3组:正常对照组、D-半乳糖模型组及普洱茶膏组;D-半乳糖模型组及普洱茶膏组每天给予皮下注射5%D-半乳糖0.25ml·10g-1,持续6w。第2w后分别给予生理盐水及普洱茶膏(60mg·ml-1)0.5ml灌胃,连续干预4w后,测定血清、肝组织中SOD和MDA水平,并计算肾脏指数、脾脏指数和肝脏指数。结果:与对照组相比,模型组血清MDA含量明显升高(P0.05),而血清SOD活性以及肾脏、脾脏和肝脏指数均显著降低(P0.05);与模型组相比,普洱茶膏组可明显降低MDA含量(P0.05),并明显升高血清、肝组织中SOD的含量(P0.05)以及肾脏、脾脏和肝脏指数(P0.05)。结论:普洱茶膏具有良好的抗小鼠衰老的保健作用。     

香加皮杠柳苷对荷瘤小鼠的免疫调节作用

目的:研究香加皮杠柳苷(CPP)对荷瘤小鼠的免疫调节作用及其作用机制.方法:建立BALB/c小鼠H22皮下移植瘤,观察低、中、高剂量CPP(0.25、0.50、1.00 mg/kg)对荷瘤小鼠免疫器官的影响,应用流式细胞术检测各组小鼠脾T淋巴细胞亚群的分布,应用MTT法检测ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖活性,用ELISA试剂盒测定各组荷瘤小鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-2和IL-12的含量.结果:对照组荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数均明显低于未荷瘤正常小鼠(P<0.05),而CPP组荷瘤小鼠的胸腺指数及脾脏指数较对照组明显增高,甚至高于正常对照组(P<0.05).CPP对荷瘤小鼠体内CD8+T细胞数量无影响,但可明显上调CD3+、CD4+T细胞数及CD4+/CD8+比值,其中CD3+、CD4+细胞百分率与正常小鼠无差别(P>0.05),CD4+/CD8+比值高于正常小鼠(P<0.05).CPP可明显增强ConA诱导的荷瘤小鼠脾淋巴细胞的增殖能力,SI甚至超过正常对照组(P<0.05).不同剂量CPP组小鼠血清中TNF-α、IL-2和IL-12水平均较对照组明显增高(P<0.05),并随剂量增加呈升高趋势,至接近或超过正常小鼠水平.结论:CPP可保护荷瘤小鼠的免疫器官不受损害,并可明显提高CD4+T细胞百分率和CD4+/CD8+比值,增强荷瘤小鼠T细胞增殖能力,促进细胞因子TNF-α、IL-2和IL-12的产生,表明CPP具有显著的免疫增强作用.     

异体脂肪源干细胞移植对大鼠的抗衰老作用

目的从筋膜学的角度设计观察脂肪源干细胞(ADSCs)异体移植对衰老模型大鼠体内自由基和免疫功能的影响,探索一种新的抗衰老方法。方法30只SD大鼠随机分成空白对照组(A组)、模型组(B组)和治疗组(C组)。B、C组大鼠注射D-半乳糖(D-gal)复制亚急性衰老模型。C组大鼠在造模8周后,经尾静脉输入体外扩增培养的脂肪源干细胞3×106个。治疗2周后,检测各组大鼠血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、血清白细胞介素-2(IL-2)水平和脾脏指数。结果与空白对照组比较,模型组大鼠血清SOD、NO、IL-2水平及脾脏指数均显著性降低,血清MDA水平显著升高;移植ADSCs后,治疗组大鼠较模型组大鼠血清SOD、NO、IL-2水平及脾脏指数均有所提高,而MDA含量显著降低。结论异体移植ADSCs可有效增强大鼠机体清除自由基和抗氧化能力,提高机体免疫功能,从而延缓D-gal诱发的大鼠衰老。     

Advanced glycation in D-galactose induced mouse aging model.

It was first reported in China that injection of a low dose of D-galactose into mice could induce changes which resembled accelerated aging. The aging model shows neurological impairment, decreased activity of anti-oxidant enzymes, and poor immune responses. However, the underlining mechanism remains largely unknown. D-galactose is a reducing sugar that can form advanced glycation endproducts (AGE) in vivo. To investigate the role of AGE in this aging model, a group of 5-month-old C57 mice were injected daily with D-galactose, D-galactose modified AGE-lysine (AGE-lysine), L-glucose, L-lysine, or control buffer for 8 weeks. Two additional groups were treated with the AGE formation inhibitor, aminoguanidine. The results show that D-galactose, L-glucose, and AGE-lysine treated mice had a significant increase in serum AGE levels, memory latency time and error rate, and skin hydroxyproline content. Similar to aged controls, these mice also had a significant decrease in motor activity, lymphocyte mitogenesis, interleukin-2 (IL-2) production, and superoxide dismutase (SOD) enzyme activity. The aminoguanidine treated D-galactose-injected mice, however, showed no significant changes in these parameters in comparison with young controls. These data indicate that D-galactose and L-glucose form AGEs in vivo and that elevated AGEs may accelerate the aging process. The fact that both D-galactose and AGE treated mice resemble aged mice suggests that advanced glycation, at least partially, accounts for the mechanism of this aging model.     

三七皂苷Rg1上调SD大鼠大脑皮质巯醇抗氧化物(酶)发挥抗衰老作用

目的探讨三七皂苷Rg1抗衰老的分子机制。方法90只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组。采用侧脑室注射β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)联合腹腔注射D-半乳糖(D-gal)构建SD大鼠衰老模型,并同时给予三七皂苷Rg1预防性治疗,采用Morris水迷宫实验(MWM)进行行为学检测,用化学比色法检测大脑皮质谷胱甘肽还原酶(GR)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的含量。用免疫组织化学法和免疫印迹法检测大脑皮质中Caspase-3前体蛋白和Bcl-2的含量。结果衰老模型组与假手术组比较:逃避潜伏期明显延长(P0.05),在第Ⅲ象限逗留的时间明显减少(P0.05),跨越平台次数明显减少(P0.05),皮质GR和GSH-Px的含量降低(P0.05),Caspase-3前体蛋白阳性神经元数明显减少(P0.05),Caspase-3前体蛋白活化切割增加(P0.05);而三七皂苷Rg1治疗后:大鼠逃避潜伏期明显缩短(P0.05),在第Ⅲ象限逗留的时间明显增加(P0.05),跨越平台次数明显增加(P0.05),皮质GR和GSH-Px的含量升高(P0.05),Caspase-3前体蛋白阳性神经元数明显增加(P0.05),Caspase-3前体蛋白活化切割减少(P0.05)。而Bcl-2阳性神经元数及表达在3组之间没有显著差异(P0.05)。结论三七皂苷Rg1能通过上调衰老模型大鼠皮质内源性巯基抗氧化物(酶)GR和GSH-Px的含量,抑制凋亡相关蛋白Caspase-3前体蛋白的活化切割而改善学习记忆能力,对抗大鼠神经系统衰老。