急性白血病细胞p53、C-Myc基因表达

采用３ＨｄＡＴＰ标记基因探针，ＤＮＡＲＮＡ斑点杂交及免疫组化技术分析急性白血病细胞中ｐ５３、ＣＭｙｃ基因的ＲＮＡ水平表达。结果：４０例白血病细胞中３４例ＣＭｙｃＲＮＡ表达水平升高，粒、淋白血病细胞之间无显著差异。ｐ５３ＲＮＡ表达在１３例急粒和８例急淋白血病细胞中为正常水平，３２例急粒中１９例表达低下或缺失。提示：白血病细胞中存在ｐ５３、ＣＭｙｃ基因的表达异常，部分病例中２种基因表达有互补性。     

反义核酸对人白血病HL—60细胞中c—myc基因表达的抑制

研究两个反义核酸（１８ｍｅｒ，２１ｍｅｒ）对人白血病ＨＬ－６０细胞中ｃ－ｍｙｃ基因表达的抑制作用。用ＨＬ－６０活细胞计数，ＲＮＡ含量的ＲＴ－ＰＣＲ测定和ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的免疫组化染色检查，结果：两个反义核苷酸都以抑制ＨＬ－６０细胞的增殖，增殖抑制率为１１－７５％。反义核酸还抑制ｃ－ｍｙｃＲＮＡ和Ｍｙｃ蛋白的表达，而对ｃ－ｍｙｃ基因正常表达的红白血病细胞Ｋ５６２的增殖和ＰＨＡ刺激的人淋巴细胞的增殖     

bcl－2反义RNA对白血病细胞株程序化死亡的调变

探讨内源性ｂｃｌ－２蛋白水平降低对白血病细胞程序化死亡的调变。方法采用基因转染技术，观察ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ介导的靶基因抑制，对足叶乙甙诱发人Ｔ淋巴细胞白血病（ＣＥＭ）细胞株程序化死亡的影响。结果反义ｂｃｌ－２基因瞬时表达能有效地降低ＣＥＭ内源性Ｂｃｌ－２蛋白水平，并使其对足叶乙甙的细胞毒效应更为敏感；再则，足叶乙甙杀伤ＣＥＭ过程中总是伴有大量细胞凋零小体与梯状脱氧核糖核酸片段（ｌａｄｄｅｒＤＮＡ）形成，尤其是以ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ阳性表达的ＣＥＭ作为靶细胞时，其梯状ＤＮＡ诱生量明显高于阴性对照，达４０％左右。结论足叶乙甙杀伤白血病细胞的主要机理之一是诱导程序化细胞死亡，并受靶细胞内源性ｂｃｌ－２蛋白的调变。     

原癌基因c－fos和c－jun在血管平滑肌细胞增殖调控中的作用

体外培养大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ），通过３Ｈ－ＴｄＲ参入实验和ＲＮＡ印迹分析，观察内皮素－１对ＶＳＭＣＤＮＡ合成、原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ表达及ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ对ＶＳＭＣ增殖的影响。结果表明，内皮素－１作用于ＶＳＭＣ１２小时，３Ｈ－ＴｄＲ参入开始增加，２４小时达到峰值。在内皮素－１作用下，原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ的表达活性在３０分钟达到高峰，３／小时后恢复到原来水平。将可合成ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ的表达载体导入ＶＳＭＣ，外源性ｃ－ｊｕｎ基因在ＶＳＭＣ中大量表达并显著抑制细胞增殖。本文提示，原癌基因ｃ－ｆｏｓ和ｃ－ｊｕｎ在ＶＳＭＣ增殖调控中起着重要作用。     

反义bcl－2基因瞬时表达对白血病细胞程序化死亡的影响

反义ｂｃｌ－２基因瞬时表达对白血病细胞程序化死亡的影响陈协群，王文亮，黄高升，王成济（西京医院血液科西安７１００３３病理学教研室，生物化学教研室）关键词ｂｃｌ－２基因，反义ＲＮＡ，ＣＥＭ细胞株，程序化细胞死亡中图号Ｒ７３３．７程序化细胞死亡（ｐｒｏｇ...     

急性白血病细胞p53基因表达

目的：检测急性白血病细胞内ｐ５３基因表达情况。方法：３Ｈ－ｄＡＴＰ标记基因探针的斑点杂交。结果：急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）表达ｐ５３ＲＮＡ水平与正常对照类似，急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中５９．４％表达低水平ｐ５３或表达缺失，ｐ５３表达缺失在Ｍ４、Ｍ５中多见。结论：急性白血病细胞中存在ｐ５３ＲＮＡ表达异常。     

生物素标记核酸探针检测白血病患者c—myc原癌基因的表达水平

用两种方法制备生物素ｃ－ｍｙｃ癌基因探针，通过ＲＮＡ－ＤＮＡ斑点杂交技术，检测了白血病３０例和２种白血病细胞株中ｃ－ｍｙｃ原癌基因的ＲＮＡ表达水平，结果显示，白血病细胞株，急性白血病和慢性粒细胞性白血病急性变患者的ｃ－ｍｙｃ的ＲＮＡ表达水平明显高于正常人和患其它血液病的患者，提示ｃ－ｍｙｃＲＮＡ水平的判定可提供一些有意义的临床信息，同时探讨了生物素和光敏生物素标记核酸探针的优越性。     

生物素标记核酸探针检测白血病患者c－myc原癌基因的表达水平

用两种方法制备生物素ｃ－ｍｙｃ癌基因探针，通过ＲＮＡ－ＤＮＡ斑点杂交技术，检测了白血病３０例和２种白血病细胞株中ｃ－ｍｙｃ原癌基因的ＲＮＡ表达水平。结果显示，白血病细胞株、急性白血病和慢性粒细胞性白血病急性变患者的ｃ－ｍｙｃ的ＲＮＡ表达水平明显高于正常人和患其它血液病的患者，提示ｃ－ｍｙｃＲＮＡ水平的判定可提供一些有意义的临床信息；同时探讨了生物素和光敏生物素标记核酸探针的优越性。     

小儿急性淋巴细胞白血病bcl—2和c—myc转录水平表达及其意义

采用原位分子杂交方法，检测了５４例小儿急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）的ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ和ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达水平，并与患儿临床表现进行对比分析，结果表明：小儿ＡＬＬｂｃｌ－２ＭＲＮＡ和ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达与非白血病对照组比较普遍增高，呈显著性差异（Ｐ〈０．０１）；ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ与ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达水平呈明显相关（ｒ＝０．８０４８，Ｐ〈０．０１）；两者的表达水平表明复发病例明显高于初诊病     

胃癌高表达基因gcys-18的部分cDNA克隆

目的：分离克隆测序胃癌高表达基因ｇｃｙｓ－１８的部分ｃＤＮＡ．方法：采用ｍＲＮＡ差异展示技术从胃癌ＧＣ７９０１与胃粘膜ＧＥＳ－１细胞株中分离出一差异表达基因片段,对其命名,并进行克隆、测序及ＧｅｎＢａｎｋ检索;以此片段作探针与细胞株总ＲＮＡ进行打点杂交．结果：从差示ＰＣＲ电泳凝胶中分离出大小为４１６ｂｐ的差异表达片段,命名为ｇｃｙｓ－１８;ＲＮＡ打点杂交证实ｇｃｙｓ－１８在ＧＣ７９０１中呈高表达,     

急性白血病c—myc反义核酸基因治疗的实验研究

ｃ－ｍｙｃ基因是调控细胞增殖与分化的癌基因,在急性白血病细胞株及急性白血病、恶性淋巴瘤患者细胞中出现高表达,是影响这些恶性肿瘤发生、发展的重要基因之一。反义核酸治疗恶性肿瘤在技术上具有高效、简便、不需载体等特点,原理是根据碱基互补,将具有特异序列的反义寡核苷酸导入肿瘤细胞与靶基因上的相应部位结合,抑制和阻断相应基因的转录表达。　目的　应用针对ｃ－ｍｙｃ基因的两个反义核酸１５ｍ ｅｒ和１８ｍ ｅｒ作用于急性白血病细胞株和原代细胞,研究反义核酸对白血病细胞的生长、增殖,ｃ－ｍｙｃ ｍ ＲＮＡ 表达以及Ｐ６５ ｃ－ｍｙｃ蛋白表达率的改变,以及对细胞凋亡、分化方面的影响。　方法　采用锥虫蓝染色法测定细胞的拒染率,绘制细胞的生长曲线,用０．８％ 甲基纤维素半固体培养法进行克隆形成试验;用流式细胞仪检测在反义核酸作用前后的Ｐ６５ ｃ－ｍｙｃ 蛋白及凋亡率;用ＲＴ－ＰＣＲ 法检测ｃ－ｍｙｃｍ ＲＮＡ 的表达相对水平;电镜观察凋亡细胞的超微结构;ＤＮＡ 电泳分析凋亡片段;光镜下瑞特染色、ＮＢＴ染色观察细胞分化水平,流式细胞仪检测分化抗原表达,同时ＲＴ－ＰＣＲ检测分化细胞的ｍ ＲＮＡ 表达;ＭＴＴ 法检测反义核酸与化疗药物对细胞联合作用后对     

原癌基因c—fos和c—jun在血管平滑肌细胞增殖调控中的作用

体外培养大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）。通过＾３Ｈ－ＴｄＲ参入实验和ＲＮＡ印迹分析，观察内皮素－１对ＶＳＭＣＤＮＡ合成，原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ表达及ｃ－ｊｕｎ反义ＲＮＡ对ＶＳＭＣ增殖的影响，结果表明，内皮素－１作用于ＶＳＭＣ１２小时，＾Ｈ－ＴｒＲ参入开始增加，２４小时达到峰值，在内皮素－１作用下，原癌基因ｃ－ｆｏｓ与ｃ－ｊｕｎ的表达活性的３０分钟达到高峰３小时后恢复到原来水平，将可合成ｃ－     

Quox-1基因在人类白血病骨髓细胞中的表达

Ｑｕｏｘ－１是从５ｄ胚龄鹌鹑的ｃＤＮＡ文库中克隆的同源盒基因,属于ＣｌａｓｓⅠＨｏｘ基因家族的特别成员,至今未分离出其人类同源基因。用免疫细胞化学技术（ＳＰ法）检测了４２例人白血病患者骨髓细胞的Ｑｕｏｘ－１表达。结果发现１０例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ）全部阳性,染色部位在细胞核,而在慢性髓性白血病（ＣＭＬ）、慢性淋巴细胞性白血病（ＣＬＬ）、急性髓细胞白血病（ＡＭＬ,包括Ｍ１～Ｍ７）中表达低甚至不表达,这为进一步从相应肿瘤中筛选、克隆Ｑｕｏｘ－１的人类同源基因提供了可能的肿瘤模型,并为临床诊断ＡＬＬ提供了一种参考指标。     

Quox—1基因在人类白血病骨髓细胞中的表达

Ｑｕｏｘ－１是从５ｄ胚岭鹌鹑的ｃＤＮＡ文中克隆的同源盒基因,属于Ｃｌａｓｓ １ Ｈｏｘ基因家族的特别成员,至今未分离出其人类同源基因。用免疫细胞化学技术（ＳＰ法）检测了４２例人白血病患者骨髓细胞的Ｑｕｏｘ－１表达,结果发现１０例急性淋巴细胞性白血病（ＡＬＬ）全部阳性,染色部位在细胞核,而在慢性髓性白血病（ＣＭＬ）、慢性淋巴细胞性白血病（ＣＬＬ）,急性髓细胞白血病（ＡＭＬ,包括Ｍ１￣Ｍ７）中表达低甚     

反义细胞周期素D1基因转导肾小球系膜细胞

目的：建立外源基因转导肾小球系膜细胞的基因转移系统，为系膜增殖性肾小球疾病的机制和治疗研究提供条件。方法：利用基因重组技术构建反义Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１逆转录病毒表达载体，重组体经Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染第３代包装细胞，建立了能持续分泌假病毒颗粒的无性细胞系，重组病毒经ＤＥＡＥ－葡聚糖转导肾小球系膜细胞，并对系膜细胞转录表达Ｃｙｌｉｎ Ｄ１反义ＲＮＡ水平进行原位杂交分析。结果：建立的无性细胞系上清中病     

白血病细胞耐药性与Bcl-2和Bax-alpha表达水平的关系

目的 研究白血病细胞耐药性Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ－ａｌｐｈａ阳性率及表达水平关系。方法 选择难治或复发的化疗耐药白血病ＡＭＬ－２患者和初治化疗敏感白血病ＡＭＬ－２患者各１０例，分离白血病细胞，应用流式细胞术比较分析化疗耐药白血病细胞与化疗敏感白血病细胞内Ｂｃｌ－２和Ｂａｘ－ａｌｐｈａ阳性率和表达水平的关系。结果 耐药组和敏感组中Ｂｃｌ－２细胞的阳性率和相对荧光强度均无统计学差异；而Ｂａｘ－ａｌｐｈａ阳     

MRP基因表达对NSCLC术后化疗的影响

目的 探讨多药耐药性相关蛋白基因－ＭＲＰ基因（ｍｕｌｔｉ－ｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｇｅｎｅ）对肺癌患者术后化疗疗效的影响。方法 应用原位分子杂交结合免疫组化技术检测３５例非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＳ）根治术后化疗患者石蜡组织标本中肺癌细胞ＭＲＰ基因ｍＲＮＡ表达,并回顾性随访。结果 ３５例ＮＳＣＬＣ患者肺癌细胞均有不同程度的ＭＲＰ基因ｍＲＮＡ表达,其表达水平     

反义细胞周期D1蛋白抑制肾小球系膜细胞增殖研究

目的探讨细胞周期蛋白（Ｃｙｃｌｉｎ）Ｄ１在肾小球系膜细胞增殖机制中的作用。方法应用免疫组织化学方法检测ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白在系膜细胞内表达;建立了表达ＣｙｃｌｉｎＤ１反义ＲＮＡ的逆转录病毒载体基因转移系统;利用ＭＴＴ法、流式细胞术对基因转录的系膜细胞的增殖状况进行观察。结果（１）体外培养的系膜细胞核内存在ＣｙｃｌｉｎＤ１蛋白;（２）外源基因经逆转录病毒载体高效转导系膜细胞,并高效表达反义ＲＮＡ;（３）反义ＣｙｃｌｉｎＤ１转导后的系膜细胞对内皮素１刺激的增殖反应不明显,而正常细胞（１８小时０２５９±００８０,６小时０１００±０００７）和空载体转导细胞（１８小时０２７８±００２０,６小时００９７±０００８）有显著效应（Ｐ＜００１）;（４）反义ＣｙｃｌｉｎＤ１抑制细胞从Ｇ１期进入Ｓ期。结论ＣｙｃｌｉｎＤ１是肾小球系膜细胞周期Ｇ１期进展的关键调控蛋白,反义ＣｙｃｌｉｎＤ１基因转导系膜细胞能明显抑制内皮素１的促增殖作用。     

急性白血病患者免疫学表型分析

采用间接免疫荧光技术对４９例急性白血病患者进行免疫学表型分析，结果为２４例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）中，共发现Ｔ－ＡＬＬ和Ｃ－ＡＬＬ各８例，Ｎ－ＡＬＬ６例，前Ｂ－ＡＬＬ和Ｂ－ＡＬＬ各１例，２５例急性非淋巴细胞白血病中，有２例Ｍ４和３例Ｍ５表达ＣＤ１４。２４例ＡＬＬ均不表达ＣＤ１３或ＣＤ３３。     

ＲＮＡｉ沉默ＰＥＬＰＩ／ＭＮＡＲ基因对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的作用

【目的】 构建脯氨酸－谷氨酸－亮氨酸富集蛋白１（ＰＥＬＰ１）基因慢病毒表达载体,研究沉默ＰＥＬＰ１／雌激素受体非基因组活性辅助调节因子（ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ）基因表达对子宫内膜癌细胞增殖和周期的作用及机制。【方法】 构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ＲＮＡｉ慢病毒表达载体,并转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞,Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ和ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。使用普通培养基和加入Ｅ２的培养基培养各组细胞,ＭＴＴ检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞生长周期情况;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＥＲ下游靶基因ｃ－ｆｏｓ,ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的蛋白表达水平。【结果】 成功构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ＲＮＡｉ慢病毒表达载体,转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞,转染后 ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ｍＲＮＡ的表达和蛋白的表达分别下降８６％和６５％（Ｐ ＜ ０．０５）。转染后Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞与对照组相比增殖抑制（Ｐ ＜ ０．０５）, 细胞周期Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增加,Ｓ期细胞比例减少 （Ｐ ＜ ０．０５）。加入雌激素后,三组细胞的生长速度加快,细胞Ｓ期的比例增加,转染组增殖抑制明显（Ｐ ＜ ０．０５）,Ｓ期比例降低（Ｐ ＜ ０．０５）。转染组ＥＲ下游基因ｃ－ｆｏｓ、ｃｙｃｌｉｎ－Ｄ１蛋白水平均显著降低（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 在子宫内膜癌细胞中沉默ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ的表达能能抑制细胞生长、使细胞阻滞在Ｇ１期,下调ＥＲ靶基因蛋白表达,ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ有望成为子宫内膜癌治疗的潜在靶点。