缺血预处理及低温对幼兔心肌缺血/再灌注损伤的影响

目的：探讨缺血预处理(ischemic preconditioning,IP)及低温对幼兔心脏缺血／再灌注损伤的影响。方法：采用Langendorff离体心脏灌注模型,取3～4周龄幼兔心脏,分别给予不同次数的IP后使其在20℃低温下缺血或给予同样次数的IP后使其分别在不同低温下缺血。常温再灌注30min。记录心脏缺血／再灌注前后左心室功能指标,测定再灌注末心肌组织中ATP和丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)及Ca^2 -ATP酶的活性。结果：再灌注末,IP2组左心室各功能指标的恢复率及心肌组织的ATP含量及Ca^2 -ATP酶的活性均显著高于Con组和IP3组;SIP1、SIP2组的左心室各功能指标的恢复率及心肌组织的ATP含量均分别显著高于SConn1组和SCon2组。其心肌组织MDA含量亦分别低于SCon1组和SCon2组。结论：IP可减轻低温缺血的幼兔心肌缺血／再灌注损伤,其效应与IP的次数和低温程度有关。     

高钾液对心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究进展

高钾液可以通过不同环节发挥抗心肌缺血再灌损伤作用。能保护Ｎａ＾＋,Ｋ＾＋－ＡＴＰ酶活性而抑制钠、钙超负荷,防止或逆转心肌缺血性挛缩,促进缺血再灌注心肌舒缩功能的恢复,也能预防再灌注心律失常的发生。高钾液对冠脉血流量和心肌氧代谢也有一定的影响。     

高氧预适应对大鼠心肌缺血—再灌注时自由基的影响

为了解决高氧预适应（ＨｙｐｅｒｏｘｉｃｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇＨＯＰ）对大鼠心肌缺血－再灌注时自由基的影响,本实验将实验组大鼠放放高压氧舱内,每日吸８０－８５％氧气（１ａｔｍ）６ｈ,连续７ｄ。利用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ装置做成心肌缺血－再灌注模型,采用电子自旋共振技术测定自由基含量,实验动物随机分为二组,第一组为对照组;缺血１０ｍｉｎ,再灌注６０ｍｉｎ,第二组为ＨＯＰ组;缺血１０ｍｉｎ,再灌     

缺血预处理对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用研究

通过建立C57/B6雄性小鼠心肌缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)模型,探讨缺血预处理对小鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用。首先,将36只6~8周C57/B6雄性小鼠随机分为3组(n=12):假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)及缺血预处理组(Ipost组)。然后,利用苏木素伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色、脱氧三磷酸尿苷缺口末端标记(Td T-mediated d UTP-biotin nick end labeling,TUNEL)染色、免疫组化及蛋白质印迹方法,对比3组小鼠的心肌病理学改变、心肌细胞凋亡情况、梗死心肌边缘区微血管密度(microvessel density,MVD)的变化,以及肿瘤相关蛋白质PTEN(phosphatase and tensin homolog deleted from chromosome 10,即人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因的编码产物)、自噬相关蛋白质LC3I/II和腺苷酸活化蛋白激酶(5-AMP activated protein kinase,AMPK)的表达水平。结果显示,I/R组心肌组织细胞水肿、炎症细胞浸润等组织病理学变化情况较Sham组明显,而Ipost组中的情况相比I/R组有明显改善;同时,Ipost组心肌凋亡率高于Sham组,但显著低于I/R组(P0.01);Ipost组梗死心肌边缘区域的微血管密度显著高于I/R组(P0.01)。此外,缺血预处理后,PTEN的表达水平降低,AMPK磷酸化水平以及LC3I/II蛋白的表达水平均增强。由此可见,缺血预处理可减轻I/R损伤,减少心肌梗死面积,减轻心肌水肿,对心肌细胞有明显的保护作用,其机制可能与梗死心肌中PTEN表达下调、AMPK磷酸化水平增强、心肌细胞自噬增强和凋亡减少有关。     

高氧预适应对大鼠心肌缺血损伤时抗氧化酶的影响

抗氧化酶具有减轻心肌缺血再灌注损伤的作用,在抗氧化酶中,比较重要的是超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）,谷胱甘肽过氧化物酶（ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＰｅｒｏｘｉｄａｓｅ,ＧＳＨｐｘ）和过氧化氢酶（ＣＡＴ）。为了解高氧预适应（ＨｙｐｅｒｏｘｉｃＰｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ,ＨＯＰ）对大鼠心肌缺血损伤时抗氧化酶的影响,本实验将实验组大鼠放入高压氧舱内,每日吸８０－８５％氧气（１ａｔｍ,１５－２０％为氮气）６ｈ,连续７ｄ。利用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ装置做成心肌缺血再灌注模型。实验动物随机分为二个部分。第一部分可逆性心肌缺血（ＨＯＰＡ组与对照Ａ组）：缺血１０ｍｉｎ,再灌注６０ｍｉｎ。观察冠脉回流液中ＳＯＤ活力,检测心肌内抗氧化酶活力（ＳＯＤ,ＧＳＨｐｘ,ＣＡＴ）。第二部分不可逆性心肌缺血（ＨＯＰＢ组与对照Ｂ组）：缺血６０ｍｉｎ,再灌注６０ｍｉｎ。测定冠脉回流液中肌酸磷酸激酶（ＣＰＫ）含量,ＳＯＤ及心肌内抗氧化酶活力。结果表明：对于可逆性心肌缺血：ＳＯＤ,ＧＳＨｐｘ活力升高;对于不可逆性心肌缺血损伤：ＨＯＰ能减少ＣＰＫ释放,ＳＯＤ活力升高。     

高氧预适应对大鼠心肌缺血─再灌注时自由基的影响

为了解决高氧预适应（ＨｙｐｅｒｏｘｉｃｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇＨＯＰ）对大鼠心肌缺血再灌注时自由基的影响,本实验将实验组大鼠放入高压氧舱内,每日吸８０－８５％氧气（１ａｔｍ）６ｈ,连续７ｄ。利用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ装置做成心肌缺血再灌注模型,采用电子自旋共振技术测定自由基含量。实验动物随机分为二组,第一组为对照组：缺血１０ｍｉｎ,再灌注６０ｍｉｎ。第二组为ＨＯＰ组：缺血１０ｍｉｎ,再灌注６０ｍｉｎ。实验观察冠脉回流液中自由基ＰＢＮ加合物含量。结果表明：在再灌注过程中,１、５、１０ｍｉｎ３个时间点,ＨＯＰ组ＰＢＮ加合物含量较对照组明显减少。提示：ＨＯＰ能减少缺血再灌注时自由基的产生。     

缺血预处理对缺血/再灌注离体心脏的保护作用

目的：探讨连续多次短暂缺血预处理对缺血/再灌注损伤心肌的保护作用及机制。方法：采用大鼠离体心脏Lan-gendorff灌流模型,观察缺血预处理对心肌缺血/再灌注后不同时间点冠脉流出液中AST、CPK、UDH及冠脉流量,心肌组织中SOD、LPO以及再灌注性心律失常的影响。结果：缺血预处理可以减少缺血/再灌注损伤的心肌冠脉流出液中AST、CPK、LDH的含量,提高心肌SOD活性,降低LPO水平,并且抑制再灌注性心律失常的发生,提高再灌注期间的冠脉流量。结论：缺血预处理对心肌缺血/再灌注损伤具有一定保护作用。     

细胞因子在心肌缺血再灌注损伤中的作用机制

心肌缺血再灌注损伤(Myocardial Ischemic/Reperfusion Injury,MI/RI)已成为临床心肌梗塞病人血管再通后重要的死亡因素之一,对于这一过程中因细胞因子诱导炎症反应的的作用机制仍是目前研究的热点。本文综述了与MI/RI相关的细胞因子的作用及其机制,并就其相互作用进行探讨。     

缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤水通道蛋白-4表达的影响

目的探讨缺血预处理（IPC）对兔脊髓缺血再灌注损伤后水通道蛋白-4（AQP-4）表达的影响。方法日本大耳白兔72只,随机分为3组：假手术组（S组）、脊髓缺血再灌注损伤组（I／R组）和缺血预处理组（IPC组）。I／R组和IPC组阻断腹主动脉30min造成脊髓缺血再灌注损伤,IPC组在损伤前短暂阻断腹主动脉5min二次实施预处理,S组暴露肾动脉下腹主动脉但不阻断。分别于再灌注损伤后4h和24h进行神经功能评分,并取L4—6脊髓缺血节段,计算脊髓组织含水量,免疫组化法测定脊髓组织中AQP-4表达水平。结果与S组比较,I／R组神经运动功能评分降低,脊髓组织含水量增加,AQP-4表达增加（P〈0．05）。与I／R组比较,IPC组神经运动功能评分增高,脊髓组织含水量降低,AQP-4表达减少（P〈0．05）。结论IPC可抑制脊髓损伤后AQP-4的表达,进而减轻脊髓水肿,保护缺血再灌注损伤的脊髓。     

基质金属蛋白酶在心肌缺血再灌注损伤中的作用

肌缺血再灌注损伤是指缺血心肌组织在恢复血流供给后,其细胞代谢功能障碍及结构破坏反而加重的现象,主要表现在心肌收缩与舒张功能障碍、血管内皮功能障碍、微循环血流紊乱、细胞代谢失调、电解质平衡紊乱、细胞凋亡与坏死等,并伴随着氧自由基的大量产生和毒性损伤以及炎症反应的激活,是一个极其复杂的病理过程。基质金属蛋白酶（MMPs）及其组织抑制物（TIMPs）是心肌组织中多种细胞分泌的内源性细胞因子,其作用涵盖了细胞外基质降解、炎症反应激活、调节血管功能、影响细胞凋亡与存活等众多病理生理过程,而这些过程均在心肌缺血再灌注损伤中发挥着重要的作用。     

硬膜外注射吗啡对兔急性缺血再灌注后左心功能的影响

目的在兔急性心梗再灌注模型中通过硬膜外给予吗啡,探讨其对兔心肌急性缺血再灌注损伤的保护作用。方法采取开胸结扎LAD(left anterior descending,左前降支)的急性心肌梗死模型,结扎冠状动脉LAD 30min后,松开结扎线,再灌注4 h。新西兰兔22只随机分成2组:①硬膜外吗啡组:经硬膜外注入吗啡(0.25 mg/kg,配成0.5 mL溶液);②对照组:经硬膜外注入生理盐水0.5 mL。缺血再灌注后逐层关胸,4周后行超声心动图检查。结果缺血再灌注后4周,两组LVEDD和LVESD均明显增大,但以对照组为甚,组间比较差异有显著性(P<0.05);而LVEF和LVFS,在缺血再灌注后4周硬膜外吗啡组分别降低了9.36%和8.24%,对照组分别降低了13.53%和12.18%,对照组比硬膜外组更显著(P<0.05),左室心功能硬膜外吗啡组好于对照组(LVEF:69.73%vs.62.99%;LVFS:31.39%vs.26.59%;LVEDD:14.35 vs.16.96;LVESD:9.52 vs.12.01),差异有统计学意义(P<0.05)。结论硬膜外注射吗啡能改善缺血再灌注后左心功能,并对缺血再灌注心肌有明显的保护作用。     

前列地尔预适应对兔急性心肌缺血再灌注的早期保护作用及机制的实验研究

目的:通过建立日本大耳白兔急性心肌缺血再灌注模型,观察前列地尔对兔心肌缺血再灌注的早期保护作用,并初步探讨前列地尔药物预适应保护心肌的机制.方法:将40只日本大耳白兔随机分为缺血再灌注组(IR)、缺血预适应组(IP)、前列地尔预适应组(PGE1)及前列地尔+ KATP通道阻断剂格列本脲(GLI)组,分别测定各组血清肌酸激酶同工酶(CK-MB),肌钙蛋白I(cTnI),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA)含量;染色称重,测定心肌梗死范围;光镜下观察心肌组织学形态.结果:1、就四个实验组的肌酸激酶同.工酶(CK-MB)、肌钙蛋白Ⅰ(TnⅠ)测量值而言,IP组和PGE1组与IR组比较,IP组和PGE1组比IR组低,具有统计学意义(P＜0.05);GLI组与IR组比较,无统计学意义(P＞0.05).2、四个实验组的超氧化物歧化酶(SOD)测量值,IP组和PGE1组与IR组比较,IP组和PGE1组比IR组高,具有统计学意义(P＜0.05):GLI组与IR组比较,无统计学意义(P＞0.05):丙二醛(MDA)测量值IP组和PGE1组与IR组比较,IP组和PGE1组比IR组低,具有统计学意义(P＜0.05);GLI组与IR组比较,无统计学意义(P＞0.05);3、四个实验组的心肌梗死面积比较,各组的全心重与心室重比较,无统计学意义(P＞0.05);IP组和PGE1组与瓜组比较,IP组和PGE1组比IR组小,具有统计学意义(P＜0.05);GLI组与IR组比较,无统计学意义(P＞0.05).结论:前列地尔顸适应减少血清CK-MB、cTnⅠ 的漏出及心肌梗死的范围,并且提高心肌抗氧化能力,可以模拟缺血预适应,对急性心肌缺血再灌注损伤具有有效的保护作用,并且是通过KATP通道开放激活而发挥预适应样的保护作用的.因此将前列地尔预适应与冠状动脉旁路术、心肺旁路术、心脏瓣膜置换术及经皮穿刺冠状动脉腔内成形术等结合起来,广泛地应用于临床,具有乐观的前景.     

缺血预处理通过激活自噬保护肾缺血-再灌注损伤

目的:探讨缺血预处理对缺血-再灌注所致急性肾损伤的保护作用与可能机制。方法:将健康雄性SD大鼠18只随机分为三组:假手术组(Sham组)、肾缺血组(I/R组)、实验组,Sham组大鼠开腹后游离左侧肾蒂血管,不夹闭,观察60 min关闭腹部。I/R组大鼠开腹后切除右肾,左肾蒂血管分离,观察15 min后用无损伤动脉夹持续夹闭左肾蒂血管45 min后,关闭腹部,恢复左肾血流。实验组开腹后切除切除右肾,左肾蒂血管分离,行4个循环夹闭左肾蒂血管1 min/再灌注4 min预处理后,无损伤动脉持续夹闭45 min,关闭腹部,恢复左肾血流。比较各组大鼠术后尿素氮值(Burea nitrogen,BUN)与肌酐值(Serum creatinine,SCR)水平,肾组织病理学评分及微管相关蛋白轻链3(Microtubule-associated protein l light chain 3,LC3)和自噬基因Beclin-1的表达。结果:所有大鼠在实验过程无死亡。I/R组、实验组再灌注后4 h、24 h的BUN与SCr值显著高于Sham组(P0.05),肾脏组织病理学评分显著高于Sham组(P0.05),实验组以上指标均显著低于I/R组(P0.05);I/R组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1相对表达量显著高于Sham组(P0.05),实验组以上指标均显著低于I/R组(P0.05)。实验组大鼠再灌注后24h LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值、Beclin-1相对表达量与肾组织病理学评分、BUN、SCr值呈显著相关性(P0.05)。结论:缺血预处理可能通过激活自噬,减轻缺血-再灌注所致急性肾损伤,并改善肾功能。     

大鼠肢端缺血预处理对脑缺血后炎症反应的影响

目的通过观察肢端缺血预处理（1imbisehemicpreconditioning,LIP）对大鼠脑缺血性损伤后重要炎症因子表达的影响,探讨LIP诱导的脑缺血耐受与炎症反应之间的关系。方法选取72只SD大鼠,实验组（LIP组）30只、缺血组30只和对照组12只。实验组和缺血组设立5个时间点：6h、12h、24h、48h和72h,每点6只。通过线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞（middlecerebralarteryocclusion,MCAO）的局灶性脑缺血模型及LIP法建立脑缺血耐受模型,采用HE观察每组大鼠的脑组织形态学改变、QRT—PCR和ELISA方法检测脑组织中炎症因子IL-17及IL-6的表达变化。结果实验组脑组织学病理改变明显轻于缺血组。与缺血组相比：实验组的IL-17和IL-6的基因和蛋白表达在整体水平均呈下降趋势;mRNA水平提示实验组在缺血12h、24h和48h后脑组织中IL-17、IL-6的表达量显著减少（P〈0．01）;蛋白水平提示实验组在缺血24h和48h后脑组织中的IL-6以及在缺血12h、24h和48h后脑组织中IL-17的表达量均降低（P〈0．05）。结论LIP诱导脑缺血耐受,可以减轻脑缺血后的炎症反应,对缺血性脑损伤有一定的保护作用。     

肢体远程预处理通过上调机体抗氧化酶活性诱导兔脊髓缺血耐受

目的:证实抗氧化酶活性上调是肢体远程预处理(remote preconditioning,RPC)诱导兔脊髓缺血耐受效应的主要机制之一。方法:60只雄性新西兰大白兔随机分成对照组、远程预处理组、缺血组及RPC 缺血组(对照组n=6,余组n=18)。RPC组行双下肢短暂缺血2次(每次10min,间隔10min);缺血组仅行脊髓缺血模型;RPC 缺血组在远程预处理后1h行脊髓缺血;对照组为假手术组。对照组于脊髓缺血再灌注后48h行神经功能评分后取脊髓,作为对照。余三组分别于再灌注后6h、24h及48h评分后取材,各时间点各取6只。所有动物于缺血前、缺血20min、再灌注20min及再灌注6h采动脉血测血清抗氧化酶活性和丙二醛(MDA)含量;于取材后测定脊髓匀浆抗氧化酶活性和MDA含量。结果:再灌注后6h、24h及48h时对照组、远程预处理组及远程预处理 缺血组神经功能评分均明显高于缺血组(P<0.05)。血浆超氧化物歧化酶(SOD)活性和过氧化氢酶(CAT)活性在每个时间点RPC组均高于对照组,RPC 缺血组高于缺血组(P<0.05);其中缺血20min时,缺血组血浆SOD、CAT活性低于对照组,RPC 缺血组低于RPC组(P<0.05);而与缺血前相比,缺血20min时缺血组及RPC 缺血组SOD和CAT活性显著下降(P<0.05)再灌注24h和48h时,脊髓匀浆SOD、CAT活性对照组低于RPC组,缺血组低于RPC 缺血组(P<0.01);而MDA含量再灌注24h时对照组高于RPC组,缺血组高于RPC 缺血组(P<0.05)。脊髓匀浆SOD、CAT活性与神经功能评分具有显著相关性。结论:RPC诱导脊髓缺血耐受的机制可能为上调抗氧化酶活性,增强机体在缺血再灌注过程中清除氧自由基的能力,从而减少氧自由基介导的损伤,发挥脊髓保护作用。     

Proteomic analysis of hepatic ischemia/reperfusion injury and ischemic preconditioning in mice revealed the protective role of ATP5β

Hepatic ischemia/reperfusion (I/R) injury is an inevitable consequence during liver surgery. Ischemic preconditioning (IPC) has been shown to protect the livers from I/R injury, partially mediated by preservation of hepatic ATP contents. However, the precise molecular mechanisms of these events remain poorly elucidated. In this study, liver proteomes of the mice subjected to I/R injury pretreated with or without IPC were analyzed using 2‐DE combined with MALDI‐TOF/TOF mass analysis. Twenty proteins showing more than 1.5‐fold difference were identified in the livers upon I/R injury. Among these proteins, four proteins were further regulated by IPC when compared with nonpretreated controls. One of these proteins, ATP synthase β subunit (ATP5β) catalyzes the rate‐limiting step of ATP formation. The expression level of ATP5β, which was further validated by Western blot analysis, was significantly decreased upon I/R injury while turned over by IPC pretreatment. Change pattern of hepatic ATP corresponded with that of ATP5β expression, indicating that increasing hepatic ATP5β expression might be a reason for ATP‐preserving effect of IPC. In summary, this study provided new clues for understanding the mechanisms of IPC against I/R injury. The protective role of ATP5β might give evidences for developing new therapeutic approaches against hepatic I/R injury.     

Proteomic analysis of intestinal ischemia/reperfusion injury and ischemic preconditioning in rats reveals the protective role of aldose reductase

Intestinal ischemia/reperfusion (I/R) injury is a critical condition associated with high morbidity and mortality. Studies show that ischemic preconditioning (IPC) can protect the intestine from I/R injury. However, the underlying molecular mechanisms of this event have not been fully elucidated. In the present study, 2-DE combined with MALDI-MS was employed to analyze intestinal mucosa proteomes of rat subjected to I/R injury in the absence or presence of IPC pretreatment. The protein content of 16 proteins in the intestinal mucosa changed more than 1.5-fold following intestinal I/R. These proteins were, respectively, involved in the cellular processes of energy metabolism, anti-oxidation and anti-apoptosis. One of these proteins, aldose reductase (AR), removes reactive oxygen species. In support of the 2-DE results, the mRNA and protein expressions of AR were significantly downregulated upon I/R injury and enhanced by IPC as confirmed by RT-PCR and western blot analysis. Further study showed that AR-selective inhibitor epalrestat totally turned over the protective effect of IPC, indicating that IPC confers protection against intestinal I/R injury primarily by increasing intestinal AR expression. The finding that AR may play a key in intestinal ischemic protection might offer evidences to foster the development of new therapies against intestinal I/R injury.     

吸氧预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨吸氧预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法通过大鼠局灶脑缺血再灌注损伤模型,采用SOD、MDA测定、电镜及神经行为学检查的方法,观察吸氧预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤后SOD、MDA、神经行为学评分及脑组织病理变化。结果吸氧预处理组SOD活力高于对照组(P<0.05),MDA含量、神经行为学评分均低于对照组(P<0.05),脑组织超微结构损伤均减轻。结论吸氧预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用。