LOX-1介导ox-LDL诱导大鼠系膜细胞表达TGF-β1及分泌细胞外基质

目的:观察氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对大鼠肾小球系膜细胞表达血凝素样氧化低密度脂蛋白受体1(LOX-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)及分泌细胞外基质(ECM)的影响,并观察LOX-1抑制剂多聚肌苷酸(PIA)对ox-LDL上述作用的影响.方法:体外培养肾小球系膜细胞,RT-PCR检测不同浓度(0、25、50、100 μg/ml)ox-LDL组肾小球系膜细胞 LOX-1 mRNA的表达;RT-PCR观察空白组、ox-LDL组(50 μg/ml)和PIA组(50 μg/ml ox-LDL 250 μg/ml PIA)肾小球系膜细胞 LOX-1、TGF-β1 mRNA的表达,ELISA法检测上述3组肾小球系膜细胞培养上清中TGF-β1、纤连蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)的含量.结果:RT-PCR结果表明,25、50、100 μg/ml ox-LDL组LOX-1 mRNA表达明显高于0 μg/ml组(P＜0.05),其中50 μg/ml组表达最高;50 μg/ml ox-LDL组肾小球系膜细胞 LOX-1、TGF-β1 mRNA表达明显高于空白组和PIA组(P＜0.01).ELISA结果表明50 μg/ml ox-LDL组肾小球系膜细胞培养上清中TGF-β1 、FN、Col Ⅳ的含量明显高于空白组和PIA组(P＜0.05).结论:ox-LDL体外可促进大鼠肾小球系膜细胞表达LOX-1、TGF-β1及分泌细胞外基质,PIA可抑制ox-LDL的上述作用,提示LOX-1可能介导了ox-LDL对肾小球系膜细胞的损伤,参与了肾小球硬化的发生和发展.     

L158,809和西拉普利对系膜细胞基质蛋白分泌的影响

目的：观察并比较新型血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂(ARB)-L158，809和血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)～西拉普利对体外培养人肾小球系膜细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)、纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原分泌的影响。方法：体外培养人胎肾小球系膜细胞，首先观察不同葡萄糖浓度(5．6mmol和30mmol)和药物浓度(1μmol、10μmol、100μmol和500μmol)以及不同刺激时间(24h、48h和72h)对系膜细胞增殖的影响；然后将系膜细胞分为低糖(葡萄糖5．6mmol)对照组、高糖(葡萄糖30mmol)对照组、L158,809组(葡萄糖30mmol L158，809 10μmol)和西拉普利组(葡萄糖30mmol 西拉普利10μmol)，48h后测定系膜细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原含量(酶免法和放免法)。结果：与低糖对照组相比，高糖对照组系膜细胞增殖过度，细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层黏连蛋白和Ⅳ型胶原含量明显升高；而西拉普利组和L158，809组系膜细胞增殖和细胞上清液中TGF-β1、基质蛋白含量均明显低于高糖对照组。结论：高糖可刺激体外培养系膜细胞过度增殖，促进其对TGF-β1和多种基质蛋白的分泌，L158，809和西拉普利均可明显抑制高糖这种促增殖和促基质蛋白分泌的作用。     

L158,809和西拉普利对体外培养系膜细胞TGF-β1表达和细胞外基质蛋白分泌的影响

目的：观察血管紧张素受体拮抗剂(ARBs)L158，809和血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂西拉普利对体外培养人肾小球系膜细胞转化生成因子(TGF—β1)表达和纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ型胶原分泌的影响。方法：分别在不同葡萄糖浓度(5.6mmol／L和30mmol／L)和药物浓度(1、10、100和500μmol／L)下体外培养人肾小球系膜细胞，分别于24、48和72h后测定细胞增殖。然后将系膜细胞分为低糖(5．6mmol／L)对照组(LG)、高糖(30mmol／L)对照组(HG)、L158，809(10μmol／L)组和西拉普利(10μmmol／L)组，48h后，分别用RT-PCR法测定TGF-β1表达，ELISA和放射免疫法测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ胶原浓度。结果：与低糖对照组相比，高糖对照组系膜细胞过度增殖，细胞上清液中TGF-βl、纤维连接蛋白、层粘连蛋白和Ⅳ胶原浓度明显升高，TGF-βlmRNA表达也显升高；而L158，809组和西拉普利组TGF-β1和细胞外基质(ECM)蛋白水平明显低于高糖对照组，且TGF-β1mRNA水平亦表达明显降低。结论：高糖可刺激体外培养系膜细胞过度增殖，TGF-β1表达增高，ECM蛋白分泌明显增加，而L158，809和西拉普利均可抑制高糖环境下上述现象。     

银杏内酯B对大鼠肾小球系膜细胞TGF-β1及细胞外基质分泌的影响

目的观察银杏内酯B对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(MC)转化生长因子β1(TGF-β1)基因表达及纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)分泌增加的抑制作用。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为对照组、LPS刺激组、银杏内酯B高、中、低剂量组,分别于6、12、24h后ELISA法测定细胞培养上清液中TGF-β1、FN、LN、ColⅣ蛋白含量,荧光半定量RT-PCR法检测TGF-β1基因表达的变化。结果正常培养的大鼠肾小球系膜细胞可分泌一定量的FN、LN、ColⅣ及TGF-β1,LPS刺激后各成分分泌量均明显增加,银杏内酯B高、中、低剂量组在各个时间点相对于LPS刺激组各观察指标均受不同程度的抑制,并且银杏内酯B可抑制LPS刺激后TGF-β1mRNA的增高表达,而且这种抑制作用呈现剂量依赖效应。结论银杏内酯B能够抑制LPS刺激引起的系膜细胞分泌细胞外基质的增加,这种抑制作用可能通过TGF-β1调节。     

来氟米特干预肾小球系膜细胞Smad2的表达及Ⅳ型胶原分泌的体外研究

目的观察来氟米特(leflunomide,LEF)在转化生长因子β1(TGF-β1)刺激大鼠肾小球系膜细胞(GMC)表达Smad2及Ⅳ型胶原(ColⅣ)过程中发挥的作用。方法建立体外培养大鼠肾小球系膜细胞模型,经鉴定后第7代用于实验。按照对大鼠肾小球系膜细胞模型处理方式不同,实验分4组,对照组(只加培养液),TGF-β1组(TGF-β1 5 ng/ml),LEF-1组(LEF 5 ng/ml+TGF-β1 5 ng/ml)和LEF-2组(LEF 50 ng/ml+TGF-β1 5 ng/ml)。分别于15min、30min、1h、2h和6h收集标本,用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法测定细胞培养上清液的ColⅣ胶原蛋白表达量的变化。用间接免疫荧光法检测各组磷酸化Smad2(P-Smad2)蛋白表达的变化;采用荧光半定量RT-PCR法检测各组Smad2 mRNA表达的变化。结果在各时间点,TGF-β1刺激组ColⅣ分泌量高于对照组(P<0.05),LEF各组Ⅳ胶原分泌低于TGF-β1(P<0.05)。对照组P-Smad2蛋白有少量的表达;TGF-β1组表达升高,有统计学意义(P<0.05),与TGF-β1组相比,两LEF组P-Smad2表达下降,有统计学意义(P<0.05)。肾小球系膜细胞中,TGF-β1组Smad2 mRNA表达高于对照组。LEF-1组和LEF-2组Smad2 mRNA表达水平低于TGF-β1组(P<0.01)。但两LEF组间比较无统计学意义(P>0.05)。LEF干预作用有时间性,随时间延长,其LEF干预作用逐渐减弱。结论经TGF-β1刺激后,体外培养的大鼠肾小球系膜细胞磷酸化-Smad2表达及Ⅳ胶原分泌增加,来氟米特可降低Smad2表达和Ⅳ胶原分泌水平,减轻细胞外基质(ECM)的沉积,为来氟米特的肾脏保护作用提供实验依据。     

缬沙坦对高糖培养人系膜细胞的调节作用

目的:探讨缬沙坦在糖尿病肾病中的保护作用及其机制。方法:检测缬沙坦对细胞增殖的影响,并用RT-PCR方法测定药物剌激对体外培养人系膜细胞肾上腺髓质素(adrenomedullin,AM)、转化生长因子β-1(TGF-β1)mRNA表达的影响,同时检测细胞上清液AM、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、TGF-β1、层粘连蛋白(LN)和Ⅳ型胶原含量。结果:沙坦对高糖培养的人肾小球系膜细胞中TGF-β1,AngⅡ,AM、LN和Ⅳ型胶原合成分泌增多的变化具有明显的抑制作用,同时对于系膜细胞增殖过度亦有抑制作用,各组值与高糖对照组比较均差异有显著性(P<0.01)。结论:缬沙坦可通过抑制AngⅡ、TGF-β1的表达、分泌,继而抑制肾小球系膜细胞的增殖过度,并降低基质蛋白的生成和沉积,发挥其肾脏保护作用的。在TGF-β1的表达和分泌下降后,AM的表达和分泌也随之下降。     

肾炎康复片对TGF-β_1诱导下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的：观察肾炎康复片对转化生长因子-β1（transforming growth factor,TGF-β1）诱导下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质成分表达的影响。方法：体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组,TGF-β1刺激组,TGF-β1加肾炎康复片低剂量组（100 mg·L^-1）、中剂量组（200 mg·L^-1）、高剂量组（500 mg·L^-1）。分别利用甲基噻唑基四唑法（metyl thiazolyl tetronzolium,MTT）观察肾炎康复片对TGF-β1诱导细胞活力的影响;双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞上清I型胶原（Col I）、纤维连接蛋白（FN）的含量。结果：TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏系膜细胞活力,TGF-β1刺激组Col I、FN表达量较正常对照组明显升高（P〈0.05）;TGF-β1加肾炎康复片各剂量组的Col I、FN均低于TGF-β1刺激组（P〈0.05）。结论：肾炎康复片能抑制TGF-β1诱导的细胞活力及肾小球细胞外基质（ECM）的合成。提示抑制TGF-β1刺激GMC分泌细胞外基质是肾炎康复片治疗慢性肾小球疾病的重要机制之一。     

丹参酮Ⅱ A对人肾小管上皮细胞TGF-β_1/smad信号通路的干预作用

目的:探讨中药单体丹参酮ⅡA抗肾间质纤维化可能的作用机制。方法:将体外正常培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)随机分为空白对照组、转化生长因子(TGF-β1)组(TGF-β1,10 ng/ml)、丹参酮ⅡA低剂量组(丹参酮ⅡA 1μg/ml+TGF-β110 ng/ml)、丹参酮ⅡA中剂量组(丹参酮ⅡA 5μg/ml+TGF-β110 ng/ml)、丹参酮ⅡA高剂量组(丹参酮ⅡA 10μg/ml+TGF-β110 ng/ml),分别予相应的药物干预后吸取细胞上清液,用ELISA法检测Ⅲ型胶原的含量,细胞裂解后采用Western-blot法检测smad2和smad3的蛋白表达量。结果:与空白对照组比较,TGF-β1组的Ⅲ型胶原表达明显上升,加入丹参酮ⅡA后各剂量组的Ⅲ型胶原表达均下降,且呈剂量效应关系;TGF-β1组能促进smad2、smad3蛋白的表达,加入丹参酮ⅡA后各剂量组的smad2蛋白、smad3蛋白的表达量均低于TGF-β1组,但是无明显的剂量效应关系。结论:丹参酮ⅡA可以抑制TGF-β1诱导的Ⅲ型胶原的分泌,且可抑制由TGF-β1介导的smad2、smad3信号蛋白的表达,表明丹参酮ⅡA可能是通过抑制TGF-β1/smad信号通路中smad2、smad3蛋白的表达发挥其抗肾间质纤维化的作用。     

缓激肽对高糖环境下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的观察缓激肽(BK)对高糖浓度下肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响。方法采用体外培养的大鼠肾小球系膜细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测系膜细胞增殖,酶联免疫(ELISA)法测细胞外基质分泌。结果高糖(30.0 mmol/L)环境可促进肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。BK、ACEI(贝那普利)均抑制高糖环境下肾小球系膜细胞的增殖和Ⅳ型胶原的分泌(P<0.05)。结论高糖可促使肾小球系膜细胞增殖和Ⅳ型胶原的分泌。ACEI抑制肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌的作用机制可能与减少BK的降解有关。     

水飞蓟宾对转化生长因子β1诱导的人肾小管上皮细胞中结缔组织生长因子及Ⅲ型胶原表达的影响

目的:了解水飞蓟宾(silibinin)对转化生长因子(TGF)-β_1诱导的人近曲肾小管上皮细胞(HK-2)结缔组织生长因子(CTGF)表达及Ⅲ型胶原分泌的影响。方法:将体外培养的HK-2细胞分为3组:①对照组;②TGF-β_1组(TGF-β_1的终浓度为5 ng/ml);③TGF-pβ_1 水飞蓟宾组(TGF-β_1的终浓度为5 ng/ml,水飞蓟宾终浓度分别为5、10、20μg/m1)。48 h后,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内CTGFmRNA的水平,ELISA方法检测培养上清中胶原Ⅲ及CTGF的浓度。结果:与对照组比较,TGF-β_1刺激使HK-2细胞CTGF基因表达和蛋白分泌及Ⅲ型胶原分泌均显著增加(P<0.01)。与TGF-β_1组比较,加用5～20μg/ml水飞蓟宾可以抑制TGF-β_1刺激所诱导的CTGF基因表达和蛋白分泌及Ⅲ型胶原分泌(P<0.01),以20μg/ml水飞蓟宾效果最显著。结论:水飞蓟宾能部分抑制TGF-β_1诱导CTGF的基因和蛋白的表达及Ⅲ型胶原分泌,提示水飞蓟宾可能通过阻抑CTGF表达及减少细胞外基质的积聚,具有潜在的抗肾纤维化作用。     

茶多酚对高糖所致人肾系膜细胞活性氧、Ⅳ型胶原合成的影响

目的：探讨高糖对人肾小球系膜细胞活性氧、Ⅳ型胶原合成的影响及其茶多酚的干预作用。方法：系膜细胞在高糖(35mmoL／L D-糖)条件下加入或不加入茶多酚(20μg／ml)培养至36h．运用化学比色法，放射免疫法检测高糖作用后培养系膜细胞上清液中活性氧(SOD和MDA)、Ⅳ型胶原的含量以及加入茶多酚后其含量的改变：应用免疫细胞化学法检测高糖作用后系膜细胞内Ⅳ型胶原的表达以及加入茶多酚后其表达的改变。结果：高糖使系膜细胞上清液中SOD含量减少．MDA含量增加，使培养的系膜细胞上清液中及细胞内Ⅳ型胶原含量增加；茶多酚可提高上清液中SOD活性．降低MDA含量．抑制系膜细胞合成和分泌Ⅳ型胶原。结论：高糖致人肾小球系膜细胞活性氧产生增加．促进Ⅳ型胶原合成和分泌．茶多酚可有效干预高糖的作用．     

黄芪甲苷对高糖诱导人肾小球系膜细胞损伤的保护作用及其机制

目的研究黄芪甲苷( As-IV)对高糖诱导人肾小球系膜细胞( HMC)损伤的保护作用及其机制。方法用 HMC为目的细胞,实验分为正常对照组、甘露醇对照组、高糖组、Tempol(100μmol/L)组、转化生长因子-β(TGF-β)阻断剂SB431542(10μmol/L)组与 As-IV(25、50、100μmol/L)组。各组细胞培养48 h后,用MTT法检测HMC增殖状况,二氢二氯荧光素( DCFH-DA)法检测细胞内活性氧( ROS)含量, ELISA法检测细胞上清液中 IV 型胶原( Col Ⅳ)的表达, Western blot法检测细胞中转化生长因子-β1( TGF-β1)、p-Smad2/3、NADPH氧化酶4(NOX4)、瞬时受体电位阳离子通道蛋白6(TRPC6)蛋白的表达。结果与高糖组比较,Tem-pol组、SB431542组、As-IV 25、50、100μmol/L组均能显著抑制高糖诱导的细胞增殖,减少细胞内ROS及上清液中ColⅣ的含量,降低高糖诱导细胞内TGF-β1、p-Smad2/3、NOX4蛋白的高表达,并提高 TRPC6蛋白的表达( P <0.05, P <0.01)。结论 As-IV对高糖诱导HMC损伤具有保护作用,其机制可能与抑制细胞增殖,减少细胞内 ROS 生成,下调TGF-β1、p-Smad2/3、NOX4蛋白的表达及上调TRPC6蛋白的表达有关。     

三七总甙对氧化低密度脂蛋白诱导系膜细胞TGF-β1与单核细胞趋化蛋白-1表达的影响

目的 探讨三七总甙(PNS)对氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)诱导大鼠肾小球系膜细胞表达转化生长因子-β1(TGF-β1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及核转录因子-kB(NF-kB)活性的影响. 方法 体外培养大鼠肾小球系膜细胞,随机分为对照组、诱导组(OX-LDL 50μg/mL)和PNS 200,400,800μg/mL组.半定量RT-PCR检测TGF-β1与MCP-1的mRNA表达,ELISA检测TGF-β1与MCP-1蛋白含量.免疫细胞化学观察NF-kB p65核转位. 结果 OX-LDL诱导系膜细胞TGF-β1与MCP-1表达增强,NF-kB活化,p65核转位率增加.PNS干预后,TGF-β1与MCP-1表达及NF-kB p65核转位率较诱导组明显下降. 结论 PNS抑制OX-LDL诱导的系膜细胞TGF-β1与MCP-1表达;其机制可能与影响NF-kB核转位有关.     

阿魏酸哌嗪对TGF-β_1诱导下肾小球系膜细胞结缔组织生长因子表达及细胞外基质合成的影响

目的 探讨阿魏酸哌嗪(PF)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导下肾小球系膜细胞结缔组织生长因子(CTGF)及细胞外基质成分表达的影响及其意义.方法 将体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞(HBZY-1)分为正常对照组、TGF-β1刺激组、TGF-β1加50、100、200 ng/mL PF干预组.分别利用免疫细胞化学法检测各组细胞CTGF蛋白表达,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定细胞CTGF mRNA表达量,双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞上清Ⅰ型胶原(Col Ⅰ)、纤维连接蛋白(FN)的含量.结果 CTGF蛋白及mRNA、细胞上清Col Ⅰ、FN表达量在TGF-β1组较正常组明显升高(P<0.05),阿魏酸哌嗪组上述指标均低于TGF-β1组(P<0.05).结论 阿魏酸哌嗪能抑制TGF-β1诱导下肾小球细胞外基质(ECM)的合成.其机制可能与下调系膜细胞上CTGF的表达量及功能活性有关.     

肾上腺髓质素在人肾小管上皮细胞系对转化生长因子β1的拮抗作用

目的探讨肾上腺髓质素(AM)在人肾小管上皮细胞系(HK-2)对转化生长因子β1(TGF-β1)生物学效应的影响.观察系膜增生性肾小球肾炎患者血浆AM水平与肾小管间质病变的关系.方法体外细胞培养实验分为4组(1)TGF-β1组;(2)AM组;(3)AM+TGF-β1组;(4)对照组.以3H-TdR掺入法测定细胞增殖;细胞总胶原的合成和分泌以3H-脯氨酸掺入量及培养液内3H-羟脯氨酸放射性活性来判断;E1.ISA法检测培养液中的纤连蛋白(FN)含量;FN、Ⅳ型胶原和TIMP-1mRNA的表达采用RT-PCR法;25例系膜增生性肾小球肾炎患者血浆AM水平测定采用放射免疫法.并设对照组.结果(1)AM对TGF-β1的生长抑制作用无明显影响;(2)AM呈浓度依赖性抑制TGF-β1刺激的胶原合成和分泌,与TGF-β1组相比,AM(10-8mol/L)分别抑制了8%(P＞0.05)和30%(P＜0.05)的胶原合成和分泌,AM(10-7mol/L)则分别抑制了57%(P＜0.05)和64%(P＜0.01);并且AM明显抑制TGF-β1刺激的FN分泌,AM+TGF-β1组FN分泌(20ng/μl±5ng/μl)较TGF-β1组(28ng/μl±6ng/μl)降低了30%(P＜0.05);AM显著抑制TGF-β1刺激的Ⅳ型胶原、FN及TIMP-1mRNA的表达;(3)肾小管间质轻度病变组重度病变组患者血浆AM水平较对照组分别增加了1.2倍和2.2倍(P＜0.01),其中重度病变组较轻度病变组血浆AM水平高出0.5倍(P＜0.01).结论在HK-2细胞,AM具有拮抗TGF-β1促进细胞外基质沉积的作用;原发性肾小球肾炎患者血浆AM水平较正常人明显升高,且与小管间质病变程度有关.     

消渴颗粒剂对大鼠系膜细胞增殖和TGF-β1表达的影响

目的观察消渴颗粒剂对高糖刺激后系膜细胞增殖和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法培养正常大鼠系膜细胞,高浓度葡萄糖刺激系膜细胞,加入中药含药血清后,用MTT法和激光共聚焦显微镜分别观察系膜细胞增殖和TGF-β1的表达。结果消渴颗粒剂含药血清在48h可抑制高糖对大鼠系膜细胞的促增殖作用,在72、96 h可对抗高糖对系膜细胞增殖的抑制作用,96 h最为明显(P<0.05)。高糖刺激后TGF-β1在肾小球系膜细胞内表达增多,消渴颗粒剂明显减少系膜细胞内TGF-β1表达(P<0.05)。结论消渴颗粒剂可降低高糖致系膜细胞增殖,抑制高糖引起的TGF-β1过度表达,这可能是其防治糖尿病肾病的作用机制。     

TGF-β1对大鼠肾小球系膜细胞PAI-1表达的影响

目的：观察不同浓度重组人转化生长因子-β1（TGF-β1）对大鼠肾系膜细胞增殖情况和纤溶酶原激活物(PAI-1)抑制物表达水平的影响。方法：采用MTT和流式细胞仪检测细胞增殖,Western blotting和RT-PCR法检测PAI-1的表达水平。结果：与对照组相比,0.1和0.5 μg·L^-1 TGF-β1诱导肾小球系膜细胞增殖,增殖率分别为(146.6±10.2)%和(134.6±14.5)%,PAI-1 mRNA和蛋白表达增强;而5和25 μg·L^-1 TGF-β1诱导的细胞增殖率为(75.2±13.2)%和(67.5±11.1)%,PAI-1 mRNA和蛋白表达无明显变化。结论：低剂量TGF-β1促进大鼠系膜细胞增殖、诱导PAI-1表达;高剂量TGF-β1则抑制系膜细胞增殖。     

TGF-β1对大鼠肾小球系膜细胞XⅧ型胶原表达的影响

目的 探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)对XⅧ型胶原在大鼠肾小球系膜细胞中表达的影响，以及两者在大鼠抗Thy-1肾小球肾炎中的相互关系。方法 采用RT-PCR、Western blot法观察外源性TGF-β1阻对大鼠肾小球系膜细胞中中XⅧ型胶原表达的影响；制备大鼠抗Tny-1肾小球肾炎模型，应用免疫组织化学．ABC分别观察TGF-β1和XⅧ型胶原在大鼠肾组织中的表达，并对其染色强度作图像定量分析。结果外源性TGF-β1阻作用后，大鼠肾小球系膜细胞中胞中XⅧ型胶原的表达升高，并显示出一定的时间与浓度依赖性。大鼠抗Thy-1肾小球肾炎中TGF-β1阻的表达在1、3和5d仅有微量表达，第7天开始其表达明显且随时间增强；XⅧ型胶原和Ⅳ型胶原的表达趋势都与TGF-β1阻吻合，XⅧ型胶原的表达与TGF-β1阻的表达间具有显著的相关性。结论 XⅧ型胶原的表达与TGF-β1的作用相关，可能参与了肾小球肾炎的发生发展过程．并且可能在肾小球纤维化中纤维化中起一定的作用。     

肝细胞生长因子对高糖条件下系膜细胞基质降解酶系统及转化生长因子β1的影响

目的通过体外培养大鼠肾系膜细胞,研究肝细胞生长因子(hepatocyte grouth factor,HGF)对高糖条件下系膜细胞表达及分泌转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)及其抑制物金属蛋白酶组织抑制物-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)的影响,从而探讨HGF在糖尿病肾病中肾脏保护作用的机制。方法体外培养大鼠肾系膜细胞,分为正常对照组、高糖刺激组及HGF干预组,通过MTT比色测定不同时间、不同HGF浓度对大鼠肾系膜细胞增殖的影响;采用ELISA法测定细胞上清中MMP-9、TIMP-1、TGF-β1、HGF以及Ⅳ型胶原(Ⅳcol)的含量;以RT-PCR法检测系膜细胞MMP-9,TIMP-1、TGF-β1及HGF基因的表达。结果同正常对照组相比高糖刺激系膜细胞增生,HGF可以抑制高糖引起的系膜细胞增生。通过外源添加HGF可以显著抑制高糖条件下系膜细胞Ⅳcol、TIMP-1及TGF-β1的分泌,但对高糖条件下系膜细胞MMP-9的分泌则无显著影响。同高糖刺激组相比,外源HGF使系膜细胞MMP-9及HGF基因表达明显增强,而显著抑制系膜细胞TIMP-1及TGF-β1基因的表达。结论HGF对于高糖条件下的大鼠肾系膜细胞可能具有保护性作用,这一作用可能同以下途径有关:HGF抑制高糖刺激所导致的系膜细胞增生;HGF抑制TIMP-1mRNA表达及蛋白合成,促进MMP-9mRNA表达,从而调节MMP-9与TIMP-1之间的比例促进ECM降解;HGF显著抑制TGF-β1mRNA表达及蛋白合成,并且促使内源HGFmRNA表达增高,从而恢复TGF-β1与HGF之间的平衡。