MTT比色法检测IL－2和杀伤细胞活性的研究

本文采用ＭＴＴ比色法测定了ＬＡＫ和ＴＩＬ细胞培养上清ＩＬ－２活性及ＬＡＫ细胞介导对体外培养的白血病细胞株的杀伤活性。结果表明ＬＡＫ细胞和ＴＩＬ细胞培养上清有较高的ＩＬ－２活性，可用于支持培养ＩＬ－２依赖株的生长；ＬＡＫ细胞对体外培养的白血病细胞株有明显的杀伤作用。其杀伤效应随效靶比例增加而增高；同时亦证明：活的白血病细胞数与ＭＴＴ甲赞形成产物呈直线相关性，提示通过ＭＴＴ法测定ＯＤ值能较好地反映活细胞数目及细胞毒效应。     

自身LAK和肿瘤细胞在TIL大量扩增中的作用

将肿瘤浸润淋巴细胞（ＴＩＬ）分别与自身ＬＡＫ细胞、肿瘤细胞以及后二者共同混合培养，结果均使ＴＩＬ的体外扩增能力和细胞毒活性大为提高，体外扩增有效期和高细胞毒活性持续时间均较单纯ＩＬ－２培养的ＴＩＬ延长。以与自身ＬＡＫ和肿瘤细胞混合培养的ＴＩＬ对自身肿瘤的杀伤活性提高最明显。     

IL－12对肿瘤病人PBMC增殖和杀瘤活性的实验研究

主要观察了ＩＬ－１２与ＩＬ－２联合对健康人和肿瘤病人ＰＢＭＣ增殖和体外杀瘤活性的影响。实验结果表明，单独应用ＩＬ－１０２对肿瘤病人ＰＨＡ活化ＰＢＭＣ增殖活性很小，如与低剂量ＩＬ－２合用，则可明显促进其增殖效应，表明ＩＬ－２可增强ＩＬ－１２的作用。与单用ＩＬ－１２相比，当ＩＬ－１２与低浓度ＩＬ－２合用时，健康人和肿瘤病人ＰＢＭＣ对Ｋ５６２细胞和Ｒａｊｉ细胞的杀伤活性均明显增强，且对Ｋ５６２细胞株杀伤活性明显强于对Ｒａｊｉ细胞株的杀伤活性。上述结果表明，ＩＬ－１２与ＩＬ－２合用对健康人和肿瘤病人ＰＢＭＣ增殖及杀瘤活性影响的格局基本一致。本实验为进一步研究ＩＬ－１２协同其它因子增强肿瘤病人ＬＭ和ＴＩＬ等免疫细胞抗肿瘤效应并进而使ＩＬ－１２过渡到临床肿瘤病人治疗提供了重要的实验依据。     

树突状细胞对LAK细胞抗人鼻咽癌细胞的促进作用

本研究对人血树突状细胞联合ＬＡＫ细胞和ＩＬ－２对人鼻咽癌细胞株Ｈｅｐ－２的抗肿瘤活性进行了体外观察。实验分为ＬＡＫ组，ＬＡＫ＋ＤＣ组和ＬＡＫ＋ＤＣ＋ＩＬ－２组；效靶比例分别采用１０：１和２０：１二种。３７℃，５％ＣＯ２，饱湿条件下培养４８ｈ后，用中性红摄入比色法检测细胞毒活性。     

T-AK细胞的细胞毒活性研究

探讨抗ＣＤ３单抗和ｒＩＬ－２共同激活诱生的Ｔ－ＡＫ细胞的细胞毒活性本质。方法：采用ＭＴＴ法分别检测Ｔ－ＡＫ细胞杀伤白血病细胞的活性及其构成。结论Ｔ－ＡＫ细胞为异质性细胞群体,其杀伤活性主体为ＣＤ３ＡＫ活性和ＬＡＫ活性。     

IL—12对肿瘤病人PBMC增殖和杀瘤活性的实验研究

主要观察了ＩＬ－１２与ＩＬ－２联合对健康人和肿瘤病人ＰＢＭＣ增殖和体外杀瘤活性的影响，实验结果表明，单独应用ＩＬ－１２对肿瘤病人ＰＨＡ活化ＰＢＭＣ增殖活性很小，如与低剂量ＩＬ－２合用，则可明显促进其增殖效应，表明ＩＬ－２可增强ＩＬ－２的作用，与单用ＩＬ－１２相比，当ＩＬ－１２与低浓度ＩＬ－２合用时，健康和肿瘤病人ＰＢＭＣ对Ｋ５６２细胞和Ｒａｊｉ细胞杀伤活性活性明显增强，且对Ｋ５６２细胞株杀伤活性明     

脂质体介导的IL—2基因疗法的建立及其免疫增强作用

用反相蒸发技术制备出包裹有ＩＬ－２ＤＮＡ的脂质体，将其直接注射至小鼠腹腔中，经１０ｄ后发现，腹腔细胞体外培养的上清中含有较高水平的ＩＬ－２，腹腔巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的活性明显增强，脾细胞体外增殖、脾细胞ＮＫ活性及体外诱导的ＬＡＫ活性均明显高于对照组；同时经脂质体转染ＩＬ－２基因的脾脏细胞具有较高的内源性ＬＡＫ活性。这表明，脂质体能将目的基因经腹腔途径直接转染体内细胞，表达出基因产物－ＩＬ－２。这种     

IL—2,IL—4和IL—7体外诱导人外周血淋巴因子激活的杀伤细胞效应…

比较了淋巴因子ＩＬ－２、ＩＬ－４和ＩＬ－７ 在体外诱导健康人外周血淋巴因子激活的杀伤（ＬＡＫ）细胞活性的效应。结果表明，ＩＬ－７可单独，亦可与ＩＬ－２、ＩＬ－４协同诱导ＬＡＫ细胞，而且ＩＬ－７诱导ＬＡＫ细胞的效应不被抗ＩＬ－２、抗ＩＬ－４所抑制。ＩＬ－７单独诱导的ＬＡＫ细胞活性高峰迟于ＩＬ－２或ＩＬ－４所诱导的活性高峰，且与增殖反应曲线一致。抗ＣＤ８抗体明显抑制ＩＬ－７诱导ＬＡＫ细胞的效应，而ＩＬ     

瘤体内注射IL－2基因后肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞的功能分析

将脂质体包裹的ＩＬ－２基因直接注射至Ｂ１６Ｆ１０黑色素瘤瘤体内，研究肿瘤细胞和肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）的功能变化。１０ｄ后，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ鉴定显示瘤体内注射ＩＬ－２基因后肿瘤细胞及ＴＩＬ中ＩＬ－２ｍＲＮＡ表达阳性；经Ｇ４１８筛选后的肿瘤细胞培养上清中可检测出ＩＬ－２；肿瘤细胞表面表达了较高水平的ＭＨＣⅠ类抗原（Ｈ－２Ｋ￣ｂＤ￣ｂ）；ＴＩＬ表面粘附分子ＬＡＦ－１表达也明显高于对照组，其杀伤Ｂ１６细胞的活性明显增强。结果表明瘤体内注射脂质体包裹的ＩＬ－２基因后，可在肿瘤原位将基因转移至肿瘤细胞及ＴＩＬ中，提高肿瘤细胞的ＭＨＣⅠ类抗原的表达，增强肿瘤细胞的免疫原性，并通过提高ＴＩＬ粘附分子的表达，共同促进ＴＩＬ的肿瘤特异性杀伤功能。     

T-AK细胞和IL-2脂质体联合硒酸酯多糖抗白血病效应的研究

目的研究抗ＣＤ３单克隆抗体与ＩＬ－２共同诱导的Ｔ－ＡＫ细胞和ＩＬ－２脂质体（Ｌ－ＩＬ－２）联合硒酸酯多糖（ＫＳＣ）对Ｌ１２１０小鼠白血病的治疗作用。方法用ＤＢＡ／２小鼠建立Ｌ１２１０白血病模型，正常小鼠脾细胞诱生制备Ｔ－ＡＫ细胞，按设计方案转输Ｔ－ＡＫ细胞和ＩＬ－２脂质体，ＫＳＣ灌胃，检测ＮＫ细胞活性、脾淋巴细胞增殖活性和ＩＬ－２诱生水平，观察荷瘤小鼠生存期。结果Ｌ１２１０白血病小鼠的免疫功能急剧降低，生存期为１６．４３±１．９２天；转输Ｔ－ＡＫ细胞（５×１０６）和Ｌ－ＩＬ－２（１０４Ｕ／ｋｇ）能部分逆转白血病小鼠低下的细胞免疫功能，生存期延长（２４．７８±３．９４天），并有１４．３％小鼠长期存活；ＫＳＣ（４０ｍｇ／ｋｇ）对Ｔ－ＡＫ／Ｌ－ＩＬ－２的抗白血病作用有明显的增强效应，荷瘤小鼠细胞免疫功能进一步增强，生命延长率、长期存活率分别提高３６％和９９．９％。结论硒酸酯多糖具有生物反应调节剂（ＢＲＭ）样作用；以应用Ｔ－ＡＫ细胞和ＩＬ－２脂质体为主体，硒酸酯多糖为辅佐的生物治疗方案对白血病小鼠具有显著的免疫抑瘤作用     

IL-2、IL-4和IL-7体外诱导人外周血淋巴因子激活的杀伤细胞效应的比较

比较了淋巴因子ＩＬ－２、ＩＬ－４和ＩＬ－７在体外诱导健康人外周血淋巴因子激活的杀伤 （ＬＡＫ）细胞活性的效应。结果表明，ＩＬ－７可单独，亦可与ＩＬ－２、ＩＬ－４协同诱导ＬＡＫ细胞，而且ＩＬ－７ 诱导ＬＡＫ细胞的效应不被抗ＩＬ－２、抗ＩＬ－４所抑制。ＩＬ－７单独诱导的ＬＡＫ细胞活性高峰迟于ＩＬ－ ２或ＩＬ－４所诱导的活性高峰，且与增殖反应曲线一致。抗ＣＤ８抗体明显抑制ＩＬ－７诱导ＬＡＫ细胞 的效应，而ＩＬ－７诱导ＬＡＫ细胞的效应不能被抗ＮＫＨ－１所抑制。提示：ＩＬ－７ 激活ＬＡＫ细胞的效应 机制不依赖ＩＬ－２和ＩＬ－４，并很可能成为肿瘤过继治疗中的重要淋巴因子。     

IL—2—绿脓杆菌外毒素融合蛋白增强杀伤细胞活性

实验证实了白细胞介素２－绿脓杆菌外毒素融合蛋白ＩＬ２－ＰＥ４０ＲＥＤＬＫ、ＩＬ２－ＰＥ４０ＫＤＥＬ、ＩＬ２－ＰＥ６６4GluＲＥＤＬＫ、ＩＬ２－ＰＥ６６4GluＫＤＥＬ对含高亲和力ＩＬ－２受体靶细胞的杀伤效应是借助于ＩＬ－２与其受体的特异性结合和ＰＥ的杀伤活性介导的，而且同一靶细胞对这些融合蛋白的敏感性有较大的差异，对人外周血ＰＨＡ体外活化的淋巴母细胞的杀伤活性，ＩＬ２－ｐＥ６６4GluＫＤＥＬ要比ＩＬ２－ＰＥ４０ＲＥＤＬＫ强约４０倍，还发现若将ＩＬ２－ＰＥ融合蛋白羧基末端的ＲＥＤＬＫ氨基酸突变为ＫＤＥＬ可增强其杀伤细胞的活性，对ＣｏｎＡ活化的小鼠脾母细胞的杀伤活性，ＩＬ２－ＰＥ４０ＫＤＥＬ要比ＩＬ２－ｐＥ４０ＲＥＤＬＫ强８倍。     

IL—2激活的杀伤细胞体内回输后的组织器官分布及意义

体内回输后的ＬＡＫ细胞不能有效地到达肿瘤部位是ＩＬ－２／ＬＡＫ的体内抗肿瘤效果欠佳的主要原因之一，因此研究ＩＬ－２激活的杀伤细胞体内回输后的组织器官分布对于优化ＩＬ－２／ＬＡＫ疗法的应用方案，提出治疗效果具有十分重要的意义，本文综合近来国内外的一些研究成果，重点归纳了ＩＬ－２激活的杀伤细胞体内回输后组织器官分布的研究方法，ＬＡＫ细胞、ＴＩＬ细胞的组织器官分布特点及其影响因素和临床意义。     

克隆化LAK细胞及其培养上清对白血病细胞的细胞毒和分化诱…

用半固体－液体两步法克隆的ＬＡＫ细胞不仅表现对ＮＫ敏感的Ｋ５６２细胞和ＮＫ抵抗的ＨＬ－６０细胞强烈的细胞毒性，在二次杀瘤过程中同样高的活性，而且ＬＡＫ细胞培养上清对白血病细胞系ＨＬ－６０和新鲜白血病细胞具有增殖抑制和分化诱导作用。然而不同杀伤活性的ＬＡＫ细胞培养上清对新鲜白血病细胞增殖的影响不同。结果表明ＬＡＫ细胞在直接杀伤白血病细胞的同时，还通过分泌一些活性因子间接影响白血病细胞的增殖和促进其分     

克隆化LAK细胞及其培养上清对白血病细胞的细胞毒和分化诱导作用

用半固体－液体两步法克隆的人ＬＡＫ细胞不仅表现对ＮＫ敏感的Ｋ５６２细胞和ＮＫ抵抗的ＨＬ－６０细胞强烈的细胞毒性，在二次杀瘤过程中表现同样高的活性，而且ＬＡＫ细胞培养上清对白血病细胞系ＨＬ－６０和新鲜白血病细胞具有增殖抑制和分化诱导作用。然而不同杀伤活性的ＬＡＫ细胞培养上清对新鲜白血病细胞增殖的影响不同。结果表明ＬＡＫ细胞在直接杀伤白血病细胞的同时，还通过分泌一些活性因子间接影响白血病细胞的增殖和促进其分化成熟，反映了ＬＡＫ细胞抗白血病作用的多向性。     

IL－2激活的杀伤细胞体内回输后的组织器官分布及意义

体内回输后的ＬＡＫ细胞不能有效地到达肿瘤部位是ＩＬ－２／ＬＡＫ的体内抗肿瘤效果欠佳的主要原因之一，因此研究ＩＬ－２激活的杀伤细胞体内回输后的组织器官分布对于优化ＩＬ－２／ＬＡＫ疗法的应用方案、提高治疗效果具有十分重要的意义，本文综合近年来国内外的一些研究成果，重点归纳了ＩＬ－２激活的杀伤细胞体内回输后组织器官分布的研究方法，ＬＡＫ细胞、ＴＩＬ细胞的组织器官分布特点及其影响因素和临床意义。     

人肿瘤浸润γδT细胞的抗肿瘤活性研究

目的 研究人直肠癌和结肠癌肿瘤浸润γδＴ淋巴细胞（γδＴＩＬＳ）体外抗肿瘤活性。方法 用固相抗体法体外扩增获得γδＴＩＬＳ，并用ＭＴＴ法和＾Ｈ－ＴｄＲ掺入实验体外观察γδＴＩＬＳ对同种异体和异种肿瘤细胞的细胞毒及增殖反应。结果 所获得γδＴＵＩＬＳ对所测定的肿瘤细胞显示出明显的细胞毒活性。该杀伤效应可为ＩＬ－２、ＩＬ－４，ＩＬ－１２，ＩＬ０１５，ＴＮＦ－γ所增强，而不受ＩＬ－１０，ＧＭ０－ＣＳＦ和     

胸腺因子D对LAK细胞活性诱导的影响

本文报道利用ＭＴＴ法和４小时５１Ｃｒ释放法，在有或无ＩＬ－２存在的情况下，研究了ＴＦＤ对正常人ＰＢＭＣ体外增殖、ＬＡＫ活性诱导的影响。结果表明：单纯ＴＦＤ不能促进静止的淋巴细胞增殖，也不能诱导出高活性的ＬＡＫ细胞，但可促使经ＩＬ－２活化的淋巴细胞进一步增殖如先用ＩＬ－２活化淋巴细胞２４小时，再加入ＴＦＤ联合诱导，第４天时，ＬＡＫ活性可达８１．３±６．５％，明显高于单用ＩＬ－２组（Ｐ＜０．０１）。     

rhIL-15和rhIL-2诱生的LAK细胞特性比较

目的：研究ｒｈＩＬ－１５激活的ＬＡＫ细胞的增殖、细胞毒作用及相关表型的变化。方法：通过用不同浓度的ｒｈＩＬ－１５和ｒｈＩＬ－２分别诱生 ＬＡＫ细胞，研究二者诱生的 ＬＡＫ细胞的增殖状况；当 ｒｈＩＬ－２和 ｒｈＩＬ－１５为 １５００ Ｕ／ｍｌ时，ＭＴＴ法检测 ＬＡＫ细胞的细胞毒作用，利用流式细胞仪检测细胞表面ＣＤ分子表达情况。结果：ＬＡＫ细胞的增殖对ｒｈＩＬ－２和ｒｈＩＬ－１５均具有时间和剂量依赖性，且无明显差异；终浓度为 １５００ Ｕ／ｍｌ时，ｒｈＩＬ－１５诱生的 ＬＡＫ细胞杀伤 Ｋ５６２细胞的能力强于 ｒｈＩＬ－２诱生的 ＬＡＫ细胞，而对Ｒａｊｉ细胞的杀伤活性，ｒｈＩＬ－２诱生的ＬＡＫ细胞却明显高于 ｒｈＩＬ－１５诱生的 ＩＡＫ细胞，且二者杀伤活性均具有时间依赖性；同时ｒｈＩＬ－１５诱生的ＬＡＫ细胞的ＣＤ３－ＣＤ５６＋细胞、Ｃｄ９４＋细胞百分率均高于ｒｈＩＬ－２诱生的ＬＡＫ细胞。结论：ｒｈＩＬ－１５在体内对ＮＫ细胞功能可能具有较强的调节作用。     

脂质体介导的IL－2基因疗法的建立及其免疫增强作用

用反相蒸发技术制备出包裹有ＩＬ－２ＤＮＡ的脂质体，将其直接注射至小鼠腹腔中，经１０ｄ后发现，腹腔细胞体外培养的上清中含有较高水平的ＩＬ－２，腹腔巨噬细胞杀伤肿瘤细胞的活性明显增强，脾细胞体外增殖、脾细胞ＮＫ活性及体外诱导的ＬＡＫ活性均明显高于对照组；同时经脂质体转染ＩＬ－２基因的脾脏细胞具有较高的内源性ＬＡＫ活性。这表明，脂质体能将目的基因经腹腔途径直接转染体内细胞，表达出基因产物──ＩＬ－２。这种靶细胞表达的基因产物可作用于体内免疫系统，调节机体的免疫功能。本文结果为细胞因子的基因治疗的研究提供了一种简便有效的方法。