重庆地区烟草青枯病菌生理小种的初步鉴定

从重庆市黔江区、酉阳县、武隆县烟田采集的烟草青枯病典型病株中,分离获得44个致病的青枯病菌株,并进行了生理小种的初步鉴定.根据在生理小种鉴另q寄主上的反应和烟叶浸润反应、黑色素产生试验,将44个菌株初步划为1号生理小种,其中35个菌株对所有鉴别寄主表现出高度致病性,在6个鉴别寄主上平均病情指数在90以上的菌株有10株,它们分布在黔江区水田乡、新华乡和武隆县黄莺乡、仙女山镇.     

广东烟草青枯病菌菌系研究

广东主要烟区南雄县和梅州市的烟草青枯病菌（Ｒａｌｓｔｏｎｉａｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）没有本质上的差异。供试的菌株对烟草、茄子、番茄、辣椒都有强致病力,均为小种１,对２个花生品种（汕油７１,蔓生型）的致病力均分化为３个类型。所有菌株都能利用３糖３醇产酸,为生化型Ⅲ。琼脂双扩散试验结果表明,绝大部分菌株都能与南雄菌株和大埔菌株的抗血清形成３条吻合相连的沉淀带,说明这两个烟草青枯病菌菌株的亲缘关系十分密切。     

大蒜粗提物对烟草青枯病菌的室内抑制作用测定

在实验室测定了大蒜乙醇和水提取物对烟草青枯病菌的抑菌效果.结果表明:大蒜提取物均对烟草青枯病菌有明显的抑制作用.且随大蒜提取物浓度的增大而增强;大蒜乙醇提取物对烟草青枯菌的抑制作用优于大蒜水提取物.0.2、0.3和0.4 g/mL浓度的大蒜乙醇提取物对烟草青枯痛菌的抑制率分别为65.56%、69.26%、75.93%;0.3和0.4g/mL浓度的大蒜水提取物的抑制率分别为61.85%和72.59%;大蒜水与乙醇提取物的有效抑制中浓度分别为0.14和0.08 g/mL.因此,可尝试以大蒜为原料研制植物保护剂来防治烟草青枯病.     

四种杀菌剂对烟草青枯病菌的毒力比较

为筛选对烟草青枯病菌更具抑菌作用的杀菌剂,采用"改良抑菌圈法"测定了4种杀菌剂对烟草青枯病菌的毒力。结果表明:4种杀菌剂抑菌率随浓度提高,青枯灵、农用硫酸链霉素和克菌康在1450.0、310.0和700.0 mg·L-1浓度下,72 h时抑菌率分别达到94.3%、89.1%和84.4%,辛菌胺醋酸盐的抑菌率在48 h时达到最高78.1%。4种药剂对烟草青枯病菌的毒力大小依次为农用硫酸链霉素辛菌胺醋酸盐青枯灵克菌康,前两者EC50分别为274.57 mg·L-1和148.25 mg·L-1。表明辛菌胺醋酸盐和农用硫酸链霉素是防控烟草青枯病较为理想的杀菌剂。     

福建烟草青枯菌演化型及生化变种鉴定研究

本研究尝试采用国际上新兴的青枯菌演化型分类框架并结合传统的生化变种鉴定方法,旨在探究福建省烟草青枯病菌系的构成,从而揭示青枯病的流行规律,为指导烟草青枯病的抗病育种提供理论依据。2008~2009年,分别于福建省南平、三明以及龙岩地区田间烟草病株上分离获得了45个烟草青枯病菌株。经青枯菌演化型复合PCR检测,45个菌株均能够扩增得到片段大小分别为144 bp和280 bp的两条特异性扩增条带,从而表明全部分离菌株均系青枯菌演化型I型即亚洲分支菌株。继而基于45个分离菌株对3种双糖和3种己醇氧化利用能力的检测结果,鉴定出其中43个菌株属于青枯菌生化变种III,1个菌株属于生化变种IV,1个菌株属于非标准型生化变种（能利用山梨醇和甜醇,不能利用3种双糖和甘露醇）。该研究结果部分揭示了造成国外引进的烟草品种青枯病抗性水平下降或丧失的可能原因。      

烟草青枯菌遗传多样性分析

【目的】阐明中国主要产烟省区烟草青枯菌的种内遗传多样性,揭示烟草青枯菌种内遗传多样性与烟草品种、地理来源等的关系,为指导烟草青枯病抗病育种及综合防治等提供理论依据。【方法】采用多位点序列分型（Multilocus Sequence Typing, MLST）研究方法对采自我国11个主要产烟省区的93株烟草青枯菌进行种内遗传多样性分析。【结果】93株供试菌株被分为51个序列型（Sequence Type, ST）,运用eBURST V3软件共享5/7基因标准可将所有供试菌株划分为4个亚群(group)与4个单一群（singleton）。【结论】实验结果表明,我国烟草青枯菌地理分布广泛,存在丰富的种内遗传多样性,但烟草青枯菌的组群划分与菌株的地理区域和烟草品种没有明显的相关性。      

湖北恩施地区烟草青枯菌的生理分化研究

本研究对湖北恩施烟区青枯病菌（Ralstonia solanacearum）的生理小种、生化型和演化型进行了鉴定,为湖北省烟草青枯病抗性品种的选育和利用提供了理论依据。从湖北恩施地区的8个县（市）采集青枯病感病烟株,通过平板稀释分离和特性性引物检测从中分离鉴定到54个具有致病性的烟草青枯菌菌株。采用注茎接种法将供试菌株分别接种青枯菌6个鉴别寄主,确定所有的菌株均属于生理小种1;基于青枯菌对3种双糖和3种己醇利用能力的检测结果,将54个菌株鉴定为生化型Ⅲ;经青枯菌演化型PCR检测,54个菌株均能扩增得到片段大小分别为280 bp和144 bp的两条特异性条带,这说明全部分离菌株均属于青枯菌演化型Ⅰ型。     

烟草青枯病菌生理分化的研究

1996年～1997年从福建和贵州两省采集分离30个菌株，在田间分区组用21个菌株做接种鉴定。依据它们在一套鉴别品种上的反应，可以区分为致病力强弱不同的4个苗系群，其中Ⅰ群最弱，Ⅳ群最强。福建省以Ⅲ群首系占优势，出现频率75％，贵州省则以Ⅳ群苗系占优势，出现频率达76．9％，该苗系对K326品种有很强的致病力，这是导致近年来该省部分地方K326品种成片枯死的主要原因。生理生化反应测定表明，30个菌株均能利用3种双情和3种已醇，但在硝酸盐还原上显示出有能否产气的明显差异。30个菌株在L-酪氨酸培养基上均能产生褐色素，但产生的量有明显差异。细菌素测定表明，30个菌株对指示窗的拮抗率达83．3％。     

拮抗烟草青枯病菌的内生细菌筛选、鉴定及定殖研究

从不同烟草品种的根茎叶组织中大量分离内生细菌,通过平板拮抗试验方法,筛选出拮抗青枯菌的内生细菌菌株16个。从中选择B7、H4-2、C3、DR8、D3、B8、33共7个拮抗菌,进行16S rDNA鉴定,并构建系统发育进化树,结果表明:H4-2、C3、DR8、B8、33与芽孢杆菌属(Bacillus)的菌株亲缘关系最近。利用B8菌株的抗链霉素菌株B8-5,研究其在土壤和烟草植株根、茎、叶中的定殖能力及其对烟草青枯病的防治效果。结果表明,B8-5可定殖于烟草根表土壤和体内,具有良好的宿主体内定殖与传导能力,田间对烟草青枯病的防治效果达66.64%。     

烟草种质资源抗青枯病筛选鉴定

参试260份烟草品种对青枯病抗性先做自然病圃初筛鉴定,从中选取表现R-LR和部份优质感病品种共n3份分菌系接种测定.结果表明,对青枯病Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型菌系反应R-LR的抗病品种有G3、反帝3号和G6等3份,这是迄今所发现抗病谱广且能抗强菌系的种质资源;抗Ⅰ、Ⅱ型菌反应R-MR,感Ⅲ型菌的品种有SPG117、OX2028和岩烟97等12份;抗Ⅰ型菌反应R-MR,感Ⅱ、Ⅲ型菌的品种有K326、K346、G80、RGll和Coker176等50份;对Ⅰ型菌反应为MS-HS的感病品种有中烟15、云烟87、春雷3号、大叶密目、大黄金和革新3号等195份,包括目前生产上的主栽品种NC89、云烟85、翠碧一号和红花大金元等.     

湖北恩施烟区烟草青枯菌致病力分析

为有效进行恩施烟区烟草青枯病的防控,本研究采用人工接种的方法鉴定了恩施烟区烟草青枯菌的致病性。根据红花大金元、K326和岩烟97三个烟草品种病害流行下曲线面积(AUDPC)数值进行聚类分析,将恩施地区烟草青枯菌划分为强、中、弱3种致病型,表明恩施烟草青枯菌是一个由弱到强连续变化的群体。3种致病型菌株在恩施南部和北部区域均有分布,其中恩施北部区域菌株致病力稍高于南部。     

湖北地区烟草青枯菌系统发育分析

本研究采用青枯菌演化型分类框架,对来源于湖北烟区的48个烟草青枯菌进行系统发育学分析并进行序列变种鉴定,以明确该地区烟草青枯菌的菌系分化。基于青枯菌内切葡聚糖酶基因(egl)和DNA蛋白修复基因(mutS)的系统发育学分析结果表明,48个供试菌株属于青枯菌亚洲分支(演化型Ⅰ)的3个序列变种,分别为序列变种15、17和44,未发现我国已报道的烟草青枯菌序列变种34。其中序列变种17和44为优势菌系,且均来源于恩施地区;序列变种15只包含来源于十堰地区的3个菌株。本研究表明湖北地区烟草上的青枯菌存在一定程度的遗传分化。     

烟草青枯病拮抗菌的筛选及抑菌活性的测定

为有效防治烟草青枯病,从贵州省青枯病迟发烟地和不发烟地土壤中筛选出15株拮抗菌,对拮抗菌的拮抗能力进行了鉴定。筛选出拮抗力较强的3个菌株(LCA-9、PCM-4、SXM-2),并对3菌株的抗菌物质进行了粗提,检验其抑菌活性。结果表明:3种菌的发酵分泌液对烟草青枯病均有一定的抑制作用,其中SXM-2发酵液的抑菌活性较大、效果较好。     

云南保山烟草青枯病的病原鉴定及发生规律

通过对保山烤烟大田烟株茎下部出现黑色坏死症状进行调查、鉴定,发现其主要原因为烟草青枯病菌(Ralstonia solanacearum E.F Smith)侵染。本文分析了该病发生流行与烤烟品种、土壤环境、气候条件及栽培管理等因素的密切关系,提出了农业综合防治烟草青枯病的措施。     

烟草青枯病拮抗内生菌的发酵条件

研究了发酵时间、发酵温度、菌龄、接种量、摇瓶转速、溶氧量对菌量的影响,以及烟草青枯病拮抗菌湘2-3发酵条件与菌量之间的关系,并运用正交试验确定了最佳发酵条件。结果表明:当发酵时间24h,发酵温度28℃,菌龄18h~22h,接种量4%,摇瓶转速210 r/min,溶氧量100mL/150mL时,湘2-3菌的发酵最好。     

基于致病基因靶点的PCR法特异性检测土壤青枯菌

利用分子生物学手段,以R.solanacearum染色体上的16S rDNA ITS以及毒性质粒携带的致病性相关基因fliC为靶点,分别设计5对序列特异性引物,筛选得到了特异性扩增16SrDNA ITS保守序列的引物对RaITS-1/2以及特异性扩增病菌fliC基因片段的引物对RalfliC-F/R.比较这两对引物的扩增灵敏度、稳定性和特异性可以发现,它们均能够稳定、快速、灵敏地检测青枯菌DNA,检测灵敏度可以达到10 fg DNA/μL.在此基础上成功构建了直接检测土壤青枯菌DNA的PCR检测技术体系.     

不同条件对烟草青枯雷尔氏菌生长的影响

青枯雷尔氏菌（Ralstonia solanacearum）是烟草青枯病的病原菌。为有效防治青枯病,研究了不同培养条件对青枯雷尔氏菌生长的影响;并测定了在不同pH、温度以及在培养基中添加不同浓度的N、P、K、Zn²⁺、Cu²⁺、Ca²⁺、Mg²⁺、HCO₃^-、SO₄^2-对青枯雷尔氏菌生长的影响。结果表明,青枯雷尔氏菌在偏酸和偏碱条件下生长较好,青枯雷尔氏菌最适生长温度为25~45 ℃;高浓度的Zn²⁺和Cu²⁺能够有效抑制青枯雷尔氏菌的生长,其他因素对青枯雷尔氏菌的生长无明显作用。     

白肋烟栽培土壤中青枯病菌的鉴定与生化型分析

为建立一套成本低廉、简单快速的分离检测土壤青枯病菌的方法,采用半选择性培养基(PCCG)和PCR技术相结合,从白肋烟栽培土壤中分离鉴定出12个菌株,并分析了这12个菌株的ITS序列 .结果表明:分离出的12个菌株ITS序列与青枯病菌同源性最高,达到92.6％,该方法适合于土壤中青枯病菌的分离鉴定.Hayward的青枯病菌生化型鉴定结果表明,这12个菌株均为生化型Ⅲ.