降香提取物B3对斑马鱼模型促血管新生作用的研究

目的:评价降香提取物B3的促新血管生成作用及其机理。方法:采用转基因斑马鱼模型,通过观察转基因斑马鱼肠下血管(SIVs)新生模型及节间血管(ISVs)损伤模型来评价降香提取物B3的促新血管生成作用及其机理。结果:降香提取物B3能剂量依赖性地促进转基因斑马鱼SIVs区域的毛细血管出芽新生,30μg/ml效果最佳;能修复VEGF受体激酶抑制剂Ⅱ(VRI)诱导的ISVs区域血管损伤,且能上调VEGF受体激酶抑制剂Ⅱ诱导后的kdr、kdrl及flt-1等VEGF受体mRNA水平的下降。结论:降香提取物B3能通过调控VEGF受体mRNA水平以发挥其在转基因斑马鱼上的促血管新生效果,具有被开发为治疗性血管新生药物的潜力。     

通阳活血方在内皮细胞及斑马鱼模型上促血管新生作用及其机制的研究

目的:评价通阳活血方(GSE)在斑马鱼模型及内皮细胞模型上的促血管新生作用,并探讨其可能的作用机制。方法:采用VEGF受体抑制剂(VRI)诱导斑马鱼背部节间血管丢失和EA.hy926细胞毒性。利用内皮细胞标记绿色荧光的转基因斑马鱼Tg(Fli-1:EGFP),在荧光显微镜下在体观察通阳活血方的促血管新生作用。体外采用EA.hy926内皮细胞模型,用MTT法检测通阳活血益气方抑制VRI的细胞毒性作用。通阳益气活血方促血管新生机制研究则采用Real-time PCR的方法,在体检测斑马鱼体内内皮生长因子受体(VEGFR)的表达情况。结果:在斑马鱼模型上,模型组VRI明显抑制斑马鱼节间血管生成。与模型组相比,GSE处理后能够明显促进斑马鱼节间血管生长,其血管生长指数与模型组相比具有统计学差异(P0.01)。在细胞模型上,模型组VRI对内皮细胞EA.hy926的增殖具有抑制作用,而GSE药物处理后能够明显促进EA.hy926细胞增殖(P0.01)。Real-time PCR结果表明,模型组VRI显著抑制了斑马鱼体内VEGF受体的表达,GSE给药组flt1、kdr、kdrl表达量均明显增高(P0.01)。结论:通阳活血方在内皮细胞模型和斑马鱼模型上均具有血管新生作用,其机制可能与其上调VEGF受体flt1、kdr、kdrl的表达有关。     

中药对斑马鱼血管新生干预作用的研究进展

心血管疾病和恶性肿瘤等重大疾病的发生发展均有新生血管的参与,促进或抑制血管新生被认为是控制疾病发病进展的关键因素。中药因其良好的临床治疗效果、对血管新生显著的干预作用已成为研究的热点,斑马鱼模型作为理想的动物模型也为血管生成相关研究提供了良好的实验基础。基于斑马鱼动物模型实验,以中药单体、有效部位、复方及中成药等为研究对象,对中药干预斑马鱼血管新生的研究进展进行综述,旨在为斑马鱼实验模型的进一步开发应用以及中医药干预血管新生的深入研究提供参考。     

黄芪提取物对人脐静脉内皮细胞的促血管新生作用

目的:研究黄芪提取物(RAE)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的促血管新生作用。方法:以体外培养HUVEC为模型,XTT法及细胞计数法检测不同剂量黄芪提取物对细胞增殖的影响;细胞迁移实验检测加药后细胞迁移能力;采用Transwell chamber进行细胞侵入实验检测黄芪提取物对细胞侵入能力的影响;管形形成实验观察加入黄芪提取物后细胞分化情况。结果:XTT法检测HUVEC在黄芪提取物浓度为12.5μg/ml时产生最大增殖效应,增殖率为42.04%。细胞计数法测得在黄芪提取物浓度为25μg/ml时细胞数目比对照组增多124.64%。同时发现在黄芪提取物浓度为25μg/ml时能够最大能力地诱导细胞侵入和管形形成,其侵入率为66.68%,管形分枝点增值率为44.38%;而在浓度为12.5μg/ml时能够最大限度地诱导细胞迁移,迁移率为74.94%。结论:黄芪具有促进血管新生的作用。     

基于模式生物斑马鱼研究姜黄抗血管新生的作用及机制

目的 利用模式生物斑马鱼研究姜黄Curcuma longa抗血管新生作用,并采用网络药理学和分子对接技术探究姜黄抗血管新生的作用机制.方法 采用模式生物斑马鱼模型,考察姜黄挥发油、姜黄素以及姜黄水提液对斑马鱼节间血管生长的抑制作用,检测各给药组斑马鱼节间血管生成数,计算血管生成抑制率.利用网络药理学和分子对接技术预测姜...     

绿原酸对flila-EGFP转基因斑马鱼血管生成COX2-MMPs信号通路的调控作用

目的探讨绿原酸对flila-EGFP转基因斑马鱼血管生成COX2-MMPs信号通路的调控作用。方法将100个受精后22 h的flila-EGFP转基因斑马鱼胚胎随机分为空白组、阳性对照组及绿原酸高、中、低剂量组,每组20个。阳性对照组给予瓦他拉尼(PTK787)5 pg/mL干预,绿原酸高、中、低剂量组分别给予新鲜配置好的绿原酸200μg/mL、100μg/mL、50μg/mL干预。干预26 h后各组胚胎在体视显微镜(明场)和体视荧光显微镜下进行血管表型观察和拍照,然后将各组斑马鱼胚胎匀浆处理,利用Real-time PCR方法检测各组斑马鱼胚胎中COX-2 mRNA、MMP-9mRNA、MMP-2 mRNA表达水平。结果与空白组比较,绿原酸各组斑马鱼血管抑制明显;绿原酸各组及PTK787组COX-2 mRNA、MMP-9mRNA、MMP-2 mRNA表达水平均明显低于空白组,且绿原酸高剂量组明显低于绿原酸中剂量组,绿原酸中剂量组明显低于绿原酸低剂量组,差异均有统计学意义(P均0.05)。结论绿原酸能够抑制转基因斑马鱼胚胎新生血管生成的机制与下调COX2-MMPs信号通路,从而抑制MMP-9和MMP-2基因表达有关。     

黄斑明目浸膏对脉络膜新生血管的抑制作用北大核心CSCD

目的:探讨黄斑明目浸膏对脉络膜新生血管的抑制作用。方法:使用532 nm激光诱导脉络膜新生血管模型,小鼠随机分为3组,包括空白组、生理盐水组和黄斑明目浸膏组,造模成功后分别予不灌胃、生理盐水灌胃和黄斑明目浸膏灌胃。在激光造模后4、7、10、14 d使用FFA对渗漏面积进行评估,14 d时使用IB4染色评估CNV面积。结果:在激光术后2 w内,FFA溢漏面积逐渐变小,相比其他2组,黄斑明目浸膏组下降最快,14 d后IB4染色面积最小。结论:黄斑明目浸膏能够显著抑制小鼠脉络膜新生血管。     

白芷提取物促糖尿病溃疡新生血管成熟作用及机制研究

目的研究白芷提取物对自发2型糖尿病db/db(C57BLKS/J)小鼠皮肤溃疡新生血管成熟的影响与机制。方法选取8周龄雄性db/db小鼠随机分为模型组及白芷提取物组,同窝雄性db/m小鼠作为对照组。背部打孔法制备糖尿病溃疡小鼠模型。白芷提取物组以白芷提取物1.8 g/kg ig给药,对照组和模型组ig等量生理盐水,连续给药21 d。记录创伤后2、4、7、11、14、21 d小鼠创面大致情况;对创伤后11 d各组小鼠创面进行HE、免疫组化、免疫荧光染色观察创面组织形态、新生血管数量与成熟情况以及创面叉头转录因子(FOXO1)、血管生成素-2 (Ang-2)在创面组织中的定位表达;体外根据不同干预条件,将内皮细胞分为正常糖浓度缺氧组、高糖缺氧组、高渗缺氧组、高糖缺氧+白芷提取物组。并将不同干预条件下内皮细胞与周细胞共培养,观察白芷提取物干预高糖缺氧下内皮细胞对周细胞趋化作用及体外管状结构形成的影响。Western bloting法检测各组创面组织及内皮细胞中FOXO1、p-FOXO1、Ang-2蛋白水平及其上游蛋白激酶B (Akt)蛋白及磷酸化蛋白水平。结果创伤后4、7、11、14、21 d,白芷提取物组创面愈合速率、创面恢复大致情况、创面组织中血管形成数量及新生血管成熟情况明显优于模型组(P0.05);白芷提取物组中FOXO1和Ang-2蛋白表达水平明显高于模型组(P0.05),白芷提取物组中p-Akt、p-FOXO1蛋白表达均低于模型组(P0.05);体外实验中白芷提取物干预高糖缺氧下内皮细胞后,细胞中FOXO1和Ang-2蛋白表达水平明显降低(P0.05),p-Akt,p-FOXO1蛋白表达明显增加(P0.05);此外,白芷提取物能提高高糖缺氧下内皮细胞对周细胞的趋化作用,促进高糖缺氧下内皮细胞与周细胞体外管状结构形成。结论白芷提取物能促进新生血管形成与成熟,从而提高db/db小鼠创面愈合速率和质量,其作用机制可能与下调FOXO1/Ang-2通路,实现内皮细胞对周细胞募集及管状结构形成有关。     

脑脉利颗粒对斑马鱼血管新生的促进及对血小板聚集性血栓形成的预防作用研究

目的初步研究脑脉利颗粒对斑马鱼血管新生的促进作用与机制,及其对血小板聚集性血栓形成的预防作用,为临床用药提供更有价值的理论支持。方法通过对斑马鱼肠下血管面积、肠下血管出芽数、总RNA浓度和纯度、心脏红细胞染色强度等指标,评价脑脉利颗粒对斑马鱼血管新生的促进作用和血小板聚集性血栓形成的预防作用。结果脑脉利颗粒在250和500μg/ml浓度时有显著的血管新生促进作用,且在500μg/ml浓度时能明显上调VEGFR1基因表达(P0.01),在1 000μg/ml浓度时有显著的血栓形成预防作用(P0.01)。结论脑脉利颗粒具有显著的血管新生促进作用,机制可能与上调VEGFR1的表达有关,且对血栓形成有显著的预防作用。     

蛤蚧水煎液对斑马鱼血管生长的作用

目的:观察蛤蚧水煎液对斑马鱼血管生长的作用。方法:选用转基因斑马鱼Tg(fli-1:EGFP),建立正常血管生长模型和内皮细胞生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(VRI)诱导的血管损伤模型,将蛤蚧分为蛤蚧身、蛤蚧尾和蛤蚧全体并使用不同浓度的水煎液进行干预,观察斑马鱼肠下静脉(SIVs)和节间血管(ISVs)的情况。结果:斑马鱼正常血管生长模型中,蛤蚧身、蛤蚧尾和蛤蚧全体水煎液各浓度组与对照组的肠下静脉平均出芽数、平均交叉数和血管直径无明显差异(P0.05)。斑马鱼血管损伤模型中,与正常组比较,VRI组及蛤蚧身、蛤蚧尾水煎液各浓度组的完整型血管明显减少,缺陷型血管增多,差异具有统计学意义(P0.01);与VRI组比较,蛤蚧身水煎液1 mg·L~(-1)、10 mg·L~(-1)、30 mg·L~(-1)、100 mg·L~(-1)各浓度组的完整型血管明显增多,差异具有统计学意义(P0.01);与VRI组比较,蛤蚧尾水煎液各浓度组的完整型血管明显增多,差异具有统计学意义(P0.01)。蛤蚧身、尾水煎液各组缺陷型血管与VRI组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论:蛤蚧水煎液不能促进斑马鱼正常血管生长,但对VRI诱导的斑马鱼血管损伤有保护作用,且蛤蚧尾效果更好。     

瓜蒌不同部位对斑马鱼促血管生成及心脏保护作用

目的采用斑马鱼模型探讨中药瓜蒌不同部位对心脏保护和促血管生成作用,为阐明瓜蒌的药效物质基础及作用机制提供研究基础。方法瓜蒌药材粉碎后用70%乙醇提取、浓缩,然后分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。以TG(VEGFR2∶GFP)系荧光转基因斑马鱼为模型动物,将瓜蒌总样和不同萃取部位设置不同质量浓度,观察他们对斑马鱼体节间血管(intersegmental vessels,ISV)数和心率的影响。结果 10μg/mL正丁醇萃取物和1μg/mL水层样品具有促进斑马鱼体间血管数生成活性;石油醚萃取物和总样对特非那定引起的心脏毒性具有明显的改善作用。结论瓜蒌能促进斑马鱼的血管生成并具有心脏保护作用。     

丹参提取物对大鼠心肌缺血后血管新生的保护作用研究

目的 血管新生是治疗缺血性心脏病(ischemic heart disease, IHD)非常有效的一种方法。本研究的主要目的是探究丹参提取物对大鼠心肌缺血后血管新生的保护作用及其机制。方法 48只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、丹参提取物组和阳性药组,每组12只。手术结扎左冠状动脉前降支(left anterior descending, LAD)建立心肌缺血模型,造模成功后丹参提取物组以浓度为0.292 8 g/kg的丹参提取物药液灌胃,阳性药组以浓度为1 mg/kg瑞舒伐他汀药液灌胃,模型组、假手术组给予生理盐水灌胃。干预28天后通过超声评估心功能,通过激光多普勒评估心脏血流的变化。体外实验采用氧—葡萄糖剥夺法(oxygen-glucose deprivation, OGD)损伤人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs),通过CCK-8实验和Matrigel成管实验评估丹参提取物对HUVECs的保护作用,通过Western blots检测通路蛋白的表达变化。结果 丹参提取物不仅可以改善心肌缺血大鼠的心功...     

血府逐瘀汤促血管新生中VEGF通路的作用研究

目的:探讨VEGF通路在血府逐瘀汤促血管新生中的作用.方法:运用血清药理学方法,以1.25％,2.5％,5％的血府逐瘀汤含药血清和空白血清诱导处理血管内皮细胞ECV304,分别采用MTT比色法,Boyden小室迁移法和体外成血管实验检测内皮细胞增殖、迁移和成血管能力,并通过酶联免疫法、免疫组化和RT-PCR检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR2)分泌和表达的情况.结果:1.25％含药血清除了能提高体外成血管能力外,对其余指标均无影响;2.5％含药血清明显促进内皮细胞增殖、迁移及成血管,并能显著提高VEGF及VEGFR2的表达;5％含药血清仅上调胞内VEGF的表达,进而促进内皮细胞的迁移和黏附.结论:血府逐瘀汤通过上调VEGF-VEGFR2途径,诱导内皮细胞增殖、迁移和血管形成,部分说明了药物促血管新生的作用机制.     

斑马鱼心脏损伤模型的建立及桔梗提取物对其心脏损伤的干预作用研究

目的:建立阿霉素诱导的斑马鱼心脏损伤模型,观察桔梗提取物对其心脏损伤的干预作用。方法:选取受精后48 h心脏特异表达绿色荧光转基因Tg(cmlc2:EGFP)斑马鱼,随机分为正常组和阿霉素低、中、高剂量组。干预24 h后,观察各组斑马鱼生存情况,计算生存率。荧光显微镜下观察各组斑马鱼心脏相关指标,包括心脏形态、心率,测量并记录静脉窦和动脉球(SV-BA)距离。确定建立斑马鱼心脏损伤模型的阿霉素用量。另取斑马鱼随机分为正常组、模型组(阿霉素10 μmol/L)和桔梗提取物低、中、高剂量(阿霉素10 μmol/L联合20、40、80μg/mL桔梗提取物)组,分别干预24 h后,观察各组斑马鱼生存情况,计算生存率。荧光显微镜下观察各组斑马鱼心脏收缩和舒张形态,测量并计算各项心脏功能指标,包括心率、SV-BA距离、每搏输出量、心输出量。结果:阿霉素各剂量组斑马鱼生存率均为100%;与正常组比较,10 μmol/L、20 μmol/L阿霉素诱导后斑马鱼活动能力受到限制,心包出现水肿,心率下降(P0.05),SV-BA距离增加(P0.05)。选取10 μmol/L阿霉素建立斑马鱼心脏损伤模型。与模型组比较,中、高剂量桔梗提取物能够缓解斑马鱼心包水肿,提高心率(P0.05),缩短SV-BA距离(P0.05),提高每搏输出量及心输出量(P0.05)。结论:阿霉素10 μmol/L处理24 h可成功并安全建立斑马鱼心脏损伤模型,桔梗提取物对心脏损伤斑马鱼的心脏功能具有一定的保护作用。     

速效救心丸对大鼠心肌梗死模型血管新生作用的影响

目的:研究速效救心丸对实验性心肌梗死大鼠心脏的促血管新生作用.方法:利用sD大鼠冠状动脉结扎法结造成急性心梗(AMI)模型,观察速效救心丸对AMI大鼠心梗面积及梗死边缘区心肌微血管密度的变化.结果:速效救心丸高、低剂量组与模型组梗死面积比较,均有极显著性差异(P＜0.01),且有一定的剂量依赖性,与阳性对照组作用相似;速效救心丸高、低剂量组与假手术组相比较,其心肌梗死边缘区的平均血管面密度(MVD)均明显增多(P＜0.05),速效救心丸高剂量组与阳性对照组作用相似,但速效救心丸高、低剂量组比较无统计学意义上的差异(P＜0.05).结论:速效救心丸对实验性心肌梗死大鼠的心脏有明显的促血管新生作用.     

靛玉红抗斑马鱼胚胎血管生成活性机制研究

目的:研究靛玉红抗血管生成作用及相关机制。方法:以tgfli1:eGFP(+/-)斑马鱼为模型,实验分空白对照组、二甲基亚砜组、靛玉红组(15μM、30μM、90μM)、阳性SU5416对照组,在12hpf时加药,于48hpf时在荧光显微镜下观察其体节间血管生成情况,并进行定量分析。运用整体原位杂交的方法和RT-PCR技术检测flk1基因的表达情况。结果:与空白对照组相比,靛玉红各浓度组体节间血管长度有显著性差异(P<0.01),并呈剂量依赖性抑制;与空白对照组相比,靛玉红对斑马鱼胚胎flk1mRNA表达有明显抑制作用,并随浓度的增高而增加。结论:靛玉红(15μM～90μM)具有抑制斑马鱼胚胎体节间血管生成的作用,其机制可能是通过阻断VEGF/VEGFR2信号通路的某个环节来发挥作用。     

黄芪提取物对大鼠心肌梗死后心肌组织血管新生的作用

目的:观察黄芪提取物对大鼠心肌梗死后心肌组织血管新生的作用,并分析其可能作用机制。方法:采用冠状动脉左前降支结扎造模方法成功复制大鼠心肌梗死模型后,随机将大鼠分为模型组、黄芪提取物低、中、高剂量组(10,20,40 mg·kg^-1·d^-1),另设假手术组,各组大鼠数量均为8只。黄芪提取物各治疗组给予上述对应的各药物剂量ig给药,模型组及假手术组大鼠ig给予20 mL·kg^-1·d^-1的生理盐水,连续饲养4周后采用苏木精-伊红(HE)染色,Masson染色,电镜法分析心肌梗死大鼠左心室心肌组织和血管病理学变化,免疫组化染色分析心肌组织中血管内皮生长因子(VEGF)及CD34蛋白的表达变化。结果:与假手术组比较,模型组大鼠心肌组织结构紊乱,心肌细胞坏死严重,完整的微血管数量明显减少(P<0.05),胶原含量显著增加(P<0.01),内皮细胞缺失明显(P<0.05)。与模型组比较,黄芪提取物各组大鼠心肌组织结构相对规整,胶原含量明显下降(P<0.05),新生的血管数量明显增多(P<0.05),内皮细胞形态相对完整,数量也明显增多(P<0.05),VEGF及CD34蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结论:黄芪提取物可明显改善大鼠心肌梗死后心肌组织的紊乱状态,促进受损心肌组织中新生血管数量的增加。     

益气活血方对实验性心肌梗死大鼠促血管新生机制研究

1 现代中医学对冠心病的认识 由《诸病源候论·心病诸侯》中"心为诸脏主而藏神,其正经不可伤,伤之而痛为真心痛"一句,可以推断出,在中医领域,冠心病心肌梗死隶属于"胸痹心痛","厥心痛"等疾病."急性心肌梗死"在国家标准《中医临床诊疗术语》中所对应的中病名为"厥(真)心痛",其病机主要由于内因久患胸痹之疾,心气亏虚,心阳渐衰,心阴血不足,寒、痰、瘀血内阻,外因寒冷、饱食、酗酒、劳累或喜怒不节等,徒生气血逆乱,心脉猝然闭阻,营气不从,逆陷于心而成瘀血内结,气滞于内致热结不散,痰瘀互结,形成心体失营,脉络瘀阻,治疗上"益气化瘀通络"是急性心肌梗死的重要治则.中医认为,气血具有相关性,气血相生,血脉同源.因此,心肌梗死后促心肌内微血管新生的前提条件是保证气血的流畅.     

促新生血管生成的抗肿瘤中药

当前抗癌中药的使用已成为中医治癌的重要手段;同时由于肿瘤是血管依赖性疾病,抗新生血管生成已成为肿瘤的标准治疗方式;研究表明黄芪、当归、人参、红景天、淫羊藿、丹参、莪术、三七、赤芍、柴胡、葛根、瓜蒌、白果、党参等抗癌中药具有促新生血管生成作用;此外,降香、鹿茸、肉桂、川芎、红花等中药也可能具有促新生血管生成作用,这些中药在肿瘤临床治疗中宜谨慎使用,在怀疑有或已有明确肿瘤病灶时当作禁忌;当然,这些中药可以在中医理论指导下用于治疗性血管生成,如用于缺血性心脑血管疾病、组织修复相关疾病的治疗.     

基于促斑马鱼血管生成的不同产地巴戟天比较分析

目的:通过研究不同产地巴戟天提取物对斑马鱼破损节间血管生长的影响,探讨不同产地巴戟天的地域性差异。方法:建立PTK787诱导的节间血管损伤斑马鱼模型,研究来自广东、广西和福建等12个不同产地巴戟天提取物对斑马鱼节间血管生长的影响,检测给药组斑马鱼节间血管生成数、生成长度,计算血管相对生成率,并在主成分分析的基础上以血管相对生成率为指标,采用SPSS 17.0统计软件对实验数据进行聚类分析。结果:巴戟天提取物对斑马鱼破损节间血管的生长具有修复促进作用,且广东高要、广东郁南等地巴戟天提取物促斑马鱼血管生长效果明显优于其他产区,节间血管生成数平均达到9条,生成长度平均在448~504μm,相对生成率达7.9%~8.86%。聚类分析结果显示,12个不同产地巴戟天被聚为四大类,广东德庆与广东高要,广西苍梧与广西岑溪,广东郁南与广西苍梧等地理位置相近的产地均能较好的聚到一起。结论:不同产地巴戟天在促血管生成作用上存在明显的地域性差异,相关研究为巴戟天道地药材的质量评价提供基础数据。