反义寡聚脱氧核糖核苷酸对猪促卵泡刺激素受体表达的影响

目的 :本研究旨在评价反义寡聚脱氧核糖核苷酸 (ODN)对促卵泡刺激素受体 (FSHR)mRNA表达的调节作用。　方法 :转染FSHR的CHO细胞系的mRNA水平用反转录 竞争性PCR方法进行定量测定。　结果 :结果显示用 10 μmol/L反义ODN可导致mRNA表达显著上升 ,2 4h后mRNA水平从 0 89± 0 0 6pg/ μg总RNA升至 1 6 4±0 0 8pg/ μg总RNA(P <0 0 5 )。用 0 33μmol/L反义ODN进行脂转染也得到相同结果 ,mRNA水平从 0 95± 0 0 8pg/ μg总RNA升高至 1 5 3± 0 0 7pg/ μg总RNA。这可能是由于FSHR蛋白翻译被抑制后上行调节mRNA合成所致 ,无义ODN对FSHRmRNA的表达没有任何作用。　结论 :本文结果提示针对猪FSHR翻译起始位点的反义ODN能上行调节猪FSHRmRNA的表达水平。     

c-myc对大鼠黄体细胞人绒毛膜促性腺激素诱导的孕酮和雌二醇生成的影响

应用离体细胞体外孵育法研究了反义ｃ ｍｙｃ寡脱氧核苷酸（反义ｃ ｍｙｃＯＤＮ）对大鼠黄体细胞人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）诱导的孕酮（Ｐ）和雌二醇（Ｅ２）生成的影响及其与外源性ｃＡＭＰ和Ｃａ２＋的关系。结果发现，反义ｃ ｍｙｃＯＤＮ能呈剂量相关方式抑制黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ２的生成。在浓度分别为１０和５μｍｏｌ／Ｌ时的抑制作用即具有显著意义（Ｐ＜０．０５）；而无义ｔａｔ寡脱氧核苷酸则无此作用。反义ｃ ｍｙｃＯＤＮ对黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ２产生的抑制作用能被加入１０－４ｍｏｌ／Ｌ二丁酰ｃＡＭＰ逆转，钙离子通道阻断剂维拉帕米对此种抑制作用具有协同效应。结果提示，ｃ ｍｙｃ癌基因参与黄体细胞ｈＣＧ诱导的Ｐ和Ｅ２生成的调控。     

瘦素、神经肽Y对离体人卵巢颗粒细胞分泌功能的影响

目的　探讨瘦素、神经肽Y(NPY)对离体人卵巢颗粒细胞雌、孕激素生成的影响。　方法　将来自体外受精 胚胎移植的 2 5例离体人卵巢颗粒细胞纯化后 ,在不同浓度瘦素 (1、10、10 0 μg/L)、NPY(1× 10 -8、1× 10 -7、1× 10 -6mol/L)单独或与人绒毛膜促性腺激素 (hCG ,0、2 0IU/L)联合作用下体外培养 ,采用放射免疫方法测定培养液中雌二醇 (E2 )、孕酮(P)的水平。　结果　 (1)无论单独或与hCG联合不同浓度瘦素组E2 、P水平均无显著性差异 (P >0 .0 5 ) ;(2 )NPY浓度 1× 10 -7mol/L时 ,E2 水平显著低于空白对照组 (P <0 .0 5 ) ,但与hCG联合组显著高于单独组 (P <0 .0 5 ) ;(3)NPY浓度 1× 10 -7mol/L、瘦素浓度 10 μg/L组 ,E2 水平明显高于相应浓度NPY单独作用组 (P <0 .0 5 )。　结论　 (1)瘦素不直接影响体外培养颗粒细胞E2 、P的分泌 ,可能通过影响其它因子的作用而间接调节卵巢功能 ;(2 )NPY单独作用时 ,对颗粒细胞E2 的分泌有一定抑制作用 ,但当hCG存在时作用消失 ,说明在正常月经周期中NPY对黄体的生成和维持可能无明显不利影响 ;(3)瘦素可能阻断NPY对颗粒细胞分泌E2 的抑制作用 ,表明二者可能对卵巢功能有相互协调作用。     

阿黑皮素原相关肽对大鼠离体黄体细胞孕酮生成的影响

采用体外孵育大鼠黄体细胞的方法,观察了β-EP,β-LPH,α-MSH 和 ACTH 等阿黑皮素原(POMC)相关肽对孕酮分泌的影响,结果表明:β-EP(10~(-6),10~7,10~(-6)mol/L)可明显促进黄体细胞基础孕酮分泌,呈剂量-效应依赖关系,孕酮含量分别由对照组36.56±8.63pmol/10~6细胞上升为52.90±18.31(P<0.01),73.86±18.21和80.37±9.86pmol/10~6细胞(P<0.01);β-EP(10~(-7)mol/L)还能加强hCG 致孕酮生成作用,孕酮含量由47.30±11.57上升为63.34±9.32pmol/10~6细胞(P<0.01);纳络酮(10~(-6)mol/L)可完全阻断β-EP 的作用。与β-EP 不同,β-LPH(10~(-6)mol/L)抑制基础和 hCG 诱导的孕酮分泌;α-MSH(10~(-6)mol/L)对基础孕酮分泌无明显影响,但能加强 hCG 致孕酮生成作用;ACTH 对大鼠黄体细胞孕酮分泌无明显影响。实验显示:某些 POMC 相关肽,尤其是β-EP 可能以旁分泌的方式参与黄体细胞孕酮分泌的调节。     

反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞c-myc、增殖细胞核抗原蛋白表达的影响

目的　研究反义c myc、增殖细胞核抗原 (PCNA)基因片断对血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖的作用。　方法　使正义、反义及错配反义c myc、PCNA ,分别作用于体外培养的VSMCs ,应用蛋白印迹和免疫组化法测定并经计算机图像分析 ,观察其对c myc、PCNA蛋白表达的影响。　结果　 10μmol/L浓度的反义c myc、PCNA作用于VSMCs后 1～ 5d ,相应c myc和PCNA蛋白表达减弱 ,计算机图像分析表明其表达产物与对照组相比 ,差异有显著意义 (P <0 0 5 ) ,而正义和错配反义寡核苷酸无此效应 (P >0 0 5 )。　结论　反义c myc、PCNA寡核苷酸可通过阻遏其相应基因表达进而抑制蛋白表达及VSMCs增殖。     

胰岛素对卵巢颗粒细胞黄体生成素/绒毛膜促性腺激素受体表达的影响

目的 :研究胰岛素 ( INS)对猪卵巢颗粒细胞黄体生成素 /绒毛膜促性腺激素( L H/ CG)受体表达的影响 ,探讨高胰岛素血症可能在多囊卵巢综合征 ( PCOS)卵泡发育停滞中的作用。方法 :采用逆转录聚合酶链反应 ( RT-PCR)及其蛋白免疫印迹 ( Westernblot)法分别对加药处理的 4组猪卵巢颗粒细胞检测 LH/ CG受体的 m RNA及其蛋白表达。结果 :RT-PCR结果表明卵泡刺激素 ( FSH) +INS组 ( 0 .2 47± 0 .0 44)与 FSH组( 0 .1 61± 0 .0 2 3 )相比 L H/ CG受体 m RNA表达明显增强 ( P<0 .0 5) ;FSH+L H+INS组( 0 .2 40± 0 .0 3 0 )与 FSH+L H组 ( 0 .1 2 1± 0 .0 1 3 )相比 ,L H/ CG受体 m RNA表达明显增强 ( P <0 .0 1 )。 Western blot结果表明 FSH +INS组 ( 570 2 .3± 81 5.9)、与 FSH组( 3 81 3 .0± 3 48.5)相比 L H/ CG受体蛋白表达明显增强 ( P<0 .0 5) ;FSH+L H+INS组( 5898.8± 93 3 .8)与 FSH+L H组 ( 2 42 1 .0± 3 41 .5)相比 L H/ CG受体蛋白表达明显增强 ( P<0 .0 1 )。结论 :INS可以协同 FSH及 L H增强卵巢颗粒细胞 L H/ CG受体的表达 ,推测高胰岛素可能通过增强 L H+CG受体表达使 PCOS患者发育至窦状卵泡阶段的卵泡颗粒细胞过早黄素化 ,导致卵泡发育停滞。     

结缔组织生长因子反义寡核苷酸对肾小管上皮细胞纤溶酶原激活物抑制物1表达的影响

目的探讨结缔组织生长因子(CTGF)反义寡核苷酸(ODN)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)mRNA表达和蛋白产生的影响,以明确CTGF在肾脏细胞外基质(ECM)降解中的作用。方法体外培养人近曲小管上皮细胞(HKC),以脂质体介导方法将CTGF反义ODN转染细胞。以TGF-β1(5μg/L)刺激HKC不同时间后,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测PAI-1mRNA表达;流式细胞仪法检测胞内PAI-1蛋白合成;Western印迹方法检测HKC分泌到上清中的PAI-1蛋白含量。结果TGF-β1可诱导HKC高表达CTGF和PAI-1。转染后6h,CTGF反义ODN可显著抑制TGF-β1诱导的HKCPAI-1mRNA表达。转染后24h,CTGF反义ODN可明显抑制胞内PAI-1蛋白合成,并减少了HKC分泌到胞外的PAI-1。结论CTGF在肾小管间质纤维化时ECM降解中起了关键调控作用,其反义ODN的导入可能是延缓肾小管间质纤维化的有效手段之一。     

白细胞介素-1β对离体大鼠黄体细胞孕酮分泌及钠-钾三磷酸腺苷酶活性的影响

为探讨白细胞介素 -1β(IL -1β)对黄体细胞甾体激素分泌的影响及其与黄体细胞膜钠 -钾三磷酸腺苷酶 (Na+ -K+ ATPase)活性变化的关系 ,本研究以经孕马血清促性腺激素 -人绒毛膜促性腺激素 (PMSG-h CG)处理的未成年雌性 Wistar大鼠为模型 ,制备了黄体细胞悬液。用放射免疫测定 (RIA)和定磷法分别测定了 IL -1β对离体大鼠孵育的黄体细胞孕酮 (P)分泌及黄体细胞膜 Na+ -K+ ATPase活性。结果表明 ,IL-1 β(1 ng/ ml)可显著抑制离体孵育的黄体细胞基础 P及 h CG诱导的 P分泌 ,并可使黄体细胞膜 Na+ -K+ATPase活性明显降低。 IL -1β引起的 P分泌减少和 Na+ -K+ ATPase活性降低之间呈显著正相关。提示 Na+ -K+ ATPase活性降低可能是 IL-1 β抑制 P分泌的因素之一     

反义核酸对放疗诱导前列腺癌细胞VEGF高表达的抑制作用

目的 :探讨放疗过程中病人血清血管内皮生长因子 (VEGF)升高的机制 ,以及VEGF反义硫代寡核苷酸(AS ODN)对前列腺癌细胞VEGF表达分泌的抑制作用。　方法 :动态观察前列腺癌病人放疗期间血清VEGF变化 ;体外照射培养的前列腺癌PC3M细胞 ,观察放疗对肿瘤细胞VEGF表达分泌的诱导作用及AS ODN的抑制效应。　结果 :前列腺癌病人血清VEGF浓度在放疗开始后逐渐升高 ,15d左右达到峰值后开始下降 ,到 6 0d时基本恢复到正常。前列腺癌细胞受X线照射后VEGF的分泌较对照组明显升高 ,AS ODN加照射组癌细胞VEGF分泌量较单纯照射组显著下降 (P <0 .0 1)。　结论 :放疗可刺激前列腺癌细胞中VEGF的表达分泌 ,VEGFAS ODN对放疗诱导的VEGF高表达有较好的抑制作用     

转化生长因子-α表皮生长因子受体反义寡聚核苷酸抑制人大肠癌细胞增殖的研究

目的 　探讨转化生长因子-α（TGF-α）、表皮生长因子受体（EGFR）反义寡脱氧核苷酸(ASODN)对人大肠癌细胞株HR8348的作用。　方法　将TGF-α、EGFR反义寡核苷酸经脂质体包裹后转染人大肠癌细胞（浓度均为10 μmol/L）。采用四唑蓝比色法（MTT法）、细胞周期分析、裸鼠体内接种等方法测定瘤细胞体内外增殖的变化。结果　TGF-α反义ODN、EGFR反义ODN均可明显抑制HR8348的增殖（抑制率分别为80.0%、82.5%）,并使裸鼠体内成瘤率下降（均为20.0%;对照组为100.0%）。G0/G1期细胞数明显增多（分别为63.9%、67.1%;对照组为31.1%）,S期细胞数相应减少（分别为35.6%、32.6%;对照组为53.9%）。结论　TGF-α反义ODN、EGFR反义ODN均能有效抑制大肠癌细胞的体内外生长增殖。     

Effects of leptin and neuropeptide Y on function of human ovarian granulosa cells in vitro

Objective: To investigate the effects of leptin and neuropeptide Y on steroidogenesis of human ovarian granulosa cells in vitro. Methods: Human ovarian granulosa cells were isolated from follicular fluid obtained during oocyte retrieval of in vitro fertilization-embryo transfer program and cultured for 2 days with various concentration of leptin(1,10,100 ng/ml) or neuropeptide Y (1×10-6, 1×10-7, 1×10-8 mol/L) alone or both,or with the combination of human chorionic gonadotropin (hCG 0, 20 IU/L). The medium was collected for estradiol (E2) and progesterone (P) measurements. Results: (1)Whether hCG existed or not, the adding of leptin did not alter estradiol and progesterone production by human granulosa cells (P>0.05).(2) Only when the concentration of neuropeptide Y was at 1×10-7mol/L,estradiol level was lower than that in the control (P<0.05).(3) The levels of estradiol in neuropeptide Y (1×10-7mol/L) plus hCG group were significantly higher than those with neuropeptide Y alone(P<0.05). (4) In the absence of hCG, the levels of estradiol in neuropeptide Y (1×10-7mol/L)plus leptin (10 ng/ml) group were significantly higher than those with neuropeptide Y(1×10-7mol/L)alone(P<0.05).Conclusions: (1)Leptin alone produced no direct effect on secretion of E2 and P from granulosa cells in vitro.(2)Neuropeptide Y alone may inhibit the secretion of E2, but the inhibition would probably be blocked with the presentation of hCG.(3)Leptin probably blocked the inhibition of neuropeptide Y on E2 secretion, and this may indicate that there were some coordination between leptin and neuropeptid Y on the level of ovarian function.     

内皮素－1对大鼠黄体细胞孕酮生成的影响

我们采用黄体细胞孵育的方法，观察了内皮素－１对离体黄体细胞孕酮生成的影响。发现内皮素－１能抑制黄体细胞孕酮的基础分泌及人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）刺激下的孕酮分泌。内皮素－１加入孵育的黄体细胞悬液１５分钟后，即发生明显地抑制孕酮分泌作用（Ｐ＜０．０１）。人内皮素－１的抗血清能反转内皮素－１的上述作用。实验结果提示，内皮素－１可能为一种卵巢内调节肽，它通过抑制黄体细胞的孕酮生成，参与黄体退化过程的调节     

内皮素－1对大鼠黄体细胞孕酮生成的影响

我们采用黄体细胞孵育的方法，观察了内皮素－１对离体黄体细胞孕酮生成的影响。发现内皮素－１能抑制黄体细胞孕酮的基础分泌及人绒毛膜促性腺激素（ＨＣＧ）刺激下的孕酮分泌。内皮素－１加入孵育的黄体细胞悬液１５分钟后，即发生明显地抑制孕酮分泌作用（Ｐ＜０．０１）。人内皮素－１的抗血清能反转内皮素－１的上述作用。实验结果提示，内皮素－１可能为一种卵巢内调节肽，它通过抑制黄体细胞的孕酮生成，参与黄体退化过程的调节     

表皮生长因子与人绒毛膜促性腺激素共同作用对大鼠卵巢颗粒细胞功能的影响

为阐明表皮生长因子（ＥＧＦ）对卵巢功能的调节作用，本实验用培养的大鼠卵巢颗粒细胞观察了ＥＧＦ与人绒毛膜促性腺激素（ｈＣＧ）共同作用对细胞增殖、甾体激素与ｃＡＭＰ生成的影响。结果：ＥＧＦ可明显抑制ｈＣＧ刺激的孕酮生成，并呈剂量依赖性，而对ｈＣＧ刺激的雌二醇生成无影响；ＥＧＦ对ｈＣＧ刺激的颗粒细胞ｃＡＭＰ生成具有增强作用，使ｃＡＭＰ生成增加；ＥＧＦ能刺激颗粒细胞增殖，使３Ｈ ＴｄＲ掺入增加，ｈＣＧ不影响ＥＧＦ的这种作用。提示ＥＧＦ与ｈＣＧ对卵巢功能的影响既有相互作用，又有各自的作用。     

四种合成人抑制素α亚基片段对大鼠黄体细胞孕酮分泌的影响及与蛋白激酶A系统的关系

应用大鼠黄体细胞离体培养方法，观察４种人工合成人抑制素α亚基Ｎ末端片段：Ｐ￣(２２)（７～２８）、Ｐ￣(３２)（１～３２）、Ｐ￣(３２)－Ｔｙｒ（１～３２－Ｔｙｒ）和Ｐ￣(２９)（３７～６５）对基础孕酮及绒毛膜促性腺激素（（ｈＣＧ）和卵泡刺激素（ＦＳＨ）致孕酮分泌作用的影响。结果表明：（１）４种α片段（１００ｎｇ）均显著抑制大鼠黄体细胞的基础孕酮分泌。除Ｐ￣(２２)无抑制作用外，其余３种片段不同程度地减弱ｈＣＧ和ＦＳＨ刺激的孕酮分泌。（２）４种α片段也显著抑制Ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ（１００ｎｍｏｌ／Ｌ）、ｄｂｃＡＭＰ（２０ｎｍｏｌ／Ｌ）及蛋白激酶Ａ（ＰＫＡ）（１０μｇ）刺激基础孕酮分泌效应。表明各α片段对ＰＫＡ系统从受体水平到ｃＡＭＰ环节，直到ＰＫＡ水平均有抑制作用，α片段抑制孕酮分泌与ＰＫＡ系统有关。     

Interaction between porcine granulosa and thecal cells in steroidogenesis in an amnion dual chamber culture system

IntroductionInordertoinvestigatetheovariansteroidogenicfunction,scientistsusedtocul-turegranulosacellsorthecalcellsinvit-roLl~5].Thereisagrowingawarenessthatinvivogranulosaandthecalcellsintheovaryareseparatedjustbyabasementmetnbrane.Bothtypesofcellsareimportantduringthefollicledevelopmentandovummaturation,interact-ingoneachother.The"twocells"theoryhasbeenknownformorethantwentyyears['].Thesinglecellculturewitheithergranulosacellsorthecalcellswasnotaperfectmodelforinvitrostudy,Itisnecessarytoe…