大鼠子宫肌层细胞诱导血管生成能力的研究

目的 评价子宫肌层细胞(MC)诱导血管生成能力.方法 由大鼠分离培养MC、主动脉平滑肌细胞(SMC)和血管内皮细胞(VEC)用于在体Matrigel结节试验,对比诱导血管生成能力:MC与SMC、VEC比较;MC、SMC及VEC与相应热坏死细胞比较;不同细胞数量MC比较;BrdU染色追踪MC在结节内转归(各组n=10)....     

大鼠血管平滑肌细胞的培养与鉴定

目的:改进大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)的培养方法。方法:采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果:镜下培养细胞呈典型的"谷-峰状"生长,免疫组化染色显示胞浆内-αactin阳性表达,锥虫蓝染色检测细胞传代成活率95%。结论:本法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs。     

高磷诱导大鼠血管平滑肌细胞钙化及其电镜表现

目的观察高磷条件体外培养的原代大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)是否发生钙含量的变化及其电镜下的微观表现。方法应用大鼠原代血管平滑肌细胞进行体外实验,将培养细胞分为对照组和高磷组。在培养的10d内观察细胞的形态学变化,并应用原子分光光度计检测细胞钙含量,应用电镜观察细胞的微观变化。结果对照组细胞VSMCs钙含量在10d内无明显增加,高磷组VSMCs钙含量在培养第8天后明显增加,与换液当天比较差异有统计学意义(P<0.01)。2组细胞电镜下第10天VSMCs细胞外基质中均可见大量胶原纤维,高磷组还可见高密度电子致密物呈颗粒状沿胶原纤维沉积。结论高磷条件可诱导体外培养的大鼠VSMCs细胞钙含量增加。电镜下高密度电子致密物呈颗粒状并沿胶原纤维沉积。     

改良大鼠血管平滑肌细胞的原代培养

目的探讨提高大鼠血管平滑肌细胞原代培养效率的方法。方法采取组织块贴壁法进行原代培养,高糖DMEM培养基中加入血小板源性生长因子-B(platelet-derived growth factor-b,PDGF-B),用细胞形态学及免疫组织化学法对血管平滑肌细胞鉴定。结果原代培养,4～6天可见细胞长出,2周可以传代;传代培养,1周可以传代1次。镜下可见细胞以梭形为主,呈"峰-谷"状生长,免疫组化染色可见细胞浆内有大量染成棕黄色的肌丝。结论在采用组织块贴壁法进行培养时,加入PDGF-B培养,可获得纯度高、活性好的血管平滑肌细胞,并缩短了培养周期。     

子宫腺肌病与血管生成研究进展

子宫腺肌病是指子宫肌层内存在着子宫内膜腺体和间质,并在激素的作用下发生出血、肌纤维结缔组织增生,形成局限性病变或弥漫病变,是育龄期妇女一种常见而难治的疾病。近年来,其发生率有逐年上升的趋势,因其以痛经、月经不调及不育为主要临床症状,严重影响着广大育龄妇女的身心健康和生活质量。目前,由于该病的发病原因尚未完全明了,现就子宫腺肌病的侵袭、血管生成的研究现状综述如下：     

大鼠血管平滑肌细胞分离培养的探讨

目的：培养大鼠血管平滑肌细胞。方法：手术显微镜下分离主动脉和肺动脉，再用翻转干涸法进行操作。结果：显微镜下分离组织，岢基本除净动脉纤维脂肪层和外膜，再用刀片轻刮内膜，可保证所贴组织块为地动脉中膜。传至第三代时，用台盼蓝检查细胞传代成活率９５％，光镜、电镜和免疫组化鉴定培养细胞，培养细胞纯度９６％。结论：贴块片简便易行、经济、又可以防止膜损伤，可为血管病理变化研究提供适宜的细胞。     

三氧化二砷诱导血管平滑肌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）诱导大鼠血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）调亡的作用。方法：建立大鼠ＶＳＭＣｓ增生模型。用四甲基偶氮唑蓝还原反应（ＭＴＴ法）、透射电镜、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术等方法观察Ａｓ２Ｏ３诱导ＶＳＭＣｓ凋亡的作用。结果：经Ａｓ２Ｏ３作用后ＶＳＭＣｓ出现典型的凋亡变化,透射电镜下可风细胞核仁消失,染色质浓缩聚集于核膜下。ＤＡ琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯形电泳条带。汉式细胞术检     

槲皮素对大鼠血管平滑肌肌张力的影响

[目的]观察槲皮素对血管平滑肌肌张力的影响并初步探讨其机制。[方法]Wistar大鼠,取胸主动脉,制成血管环,采用离体血管环灌流法,观察不同浓度的槲皮素对血管平滑肌肌张力的影响。[结果]对于内皮完整的血管环,低浓度（≤10-5mol.L-1）槲皮素可明显抑制去甲肾上腺素或氯化钾引起的血管收缩,且在一定浓度范围内呈剂量依赖性;对于去内皮的血管环,抑制作用则不明显;高浓度（〉10-5mol.L-1）槲皮素,无论是对于内皮完整的还是去内皮的血管环,均可使血管收缩,其收缩作用可被异博定阻断。[结论]槲皮素在低浓度时,对于非内皮损伤所致的高血压具有一定的降压作用;同时槲皮素可激活血管平滑肌L-型钙通道,因此高浓度则表现出相反作用。     

子宫内膜和子宫肌的雌激素、孕激素受体研究

作者用葡聚糖-活性炭分离方法,测定了36例子宫内膜和51例子宫肌的雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)。结果显示:子宫内膜ER和PR都高于子宫肌。配对资料表明:增殖期和分泌期子宫内膜ER和PR比子宫肌对应指标高。子宫内膜和子宫肌增殖期PR高于分泌期,ER也有类似差别,但无统计学意义(P>0.05)。子宫内膜ER和PR周期变化曲线与体内雌、孕激素变化相仿,但其高峰稍后于激素。提示子宫内膜和子宫肌的ER和PR含量与雌、孕激素在该部位作用大小和体内激素水平相平行,子宫内膜ER和PR伴随月经周期中雌、孕激素变化而呈有规律的周期性变化。     

CRH对人子宫平滑肌细胞Cx43磷酸化水平及细胞间隙连接通讯的影响

目的:探讨人类促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)对人子宫平滑肌细胞间隙连接蛋白43 磷酸化水平(P-Cx43)以及其对子宫平滑肌细胞间隙连接通道(GJIC)功能的影响。方法:原代培养人未孕子宫平滑肌细胞,给予不同浓度的CRH(0,5.85,58.5,585,5850 pmol/L)进行干预,采用Western印迹分别定量检测CRH各浓度组中子宫平滑肌细胞P-Cx43与非磷酸化Cx43蛋白(NP-Cx43)的表达;细胞划痕实验检测CRH各浓度组中GJIC的变化。结果:CRH各干预组子宫平滑肌细胞中P-Cx43蛋白的表达明显高于对照组,随着CRH干预浓度的递增,呈剂量依赖趋势,各组之间差异有统计学意义(P<0.01);而对照组和干预组之间NP-Cx43蛋白的表达差异无统计学意义(P>0.05);CRH干预后各浓度组荧光黄染料在子宫平滑肌细胞中传输的细胞数明显高于对照组,各组之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。同时,随着CRH干预浓度的递增,荧光黄染料传输至最远细胞级所需要的时间呈剂量依赖趋势,各组之间比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CRH可上调原代子宫平滑肌细胞中P-Cx43蛋白的表达,增强GJIC的功能。     

钙激活性CI-通道阻断剂对气道平滑肌细胞增殖的抑制作用

【目的】探讨钙激活性CI-通道阻断剂尼氟灭酸(NFA)对平滑肌细胞(ASMCs)增殖的影响及机制。【方法】采用[3H]-TdR掺入法检测不同剂量NFA对ASMCs增殖活性的影响。观察NFA及硝苯地平对组胺致ASMCs中[Ca2 ]i变化的影响。间接免疫荧光法观察NFA对ASMCs表达MAPK蛋白的影响。【结果】10μmol/L和50μmol/L NFA组细胞的活性明显低于对照组,并且高浓度50μmol/L NFA组比低浓度10μmol/LNFA组更显著,表现出剂量依赖性。对照组ASMCs胞浆和胞核呈现亮绿色荧光,胞膜周围较淡,加入激动剂组胺后,荧光亮度逐渐增强。相反,当同时存在NFA或硝苯地平干预时,镜下观察荧光强度变化不够明显。间接免疫荧光染色结果表明,培养24 h后,对照组中ASMCs细胞沿梭形胞浆出现大斑片状亮绿色荧光,而NFA干预组细胞表现为弱绿色荧光,胞浆内分布区域局限。【结论】NFA能有效抑制培养ASMCs的增殖活性,可能是通过阻断钙激活性CI-通道对[Ca2 ]i的正反馈效应,以及降低MAPK的表达来实现的。     

Inhibitory effect of iron on in vitro proliferation of smooth muscle cells

Background Iron is a biocorrodible metal that might be used in bioabsorbable stents.This study investigated the effects at the cellular and protein levels of soluble divalent iron （ferrous gluconate） and soluble trivalent iron （ferric chloride） on the proliferation of human aortic smooth muscle cell （HASMC） in vitro.Methods The water-soluble tetrazolium （WST-1） test was used to evaluate the effect of iron on proliferation of HASMC and Western blotting was used to measure the levels of signaling proteins involved in proliferative and apoptosis pathways.Results HASMC proliferation was inhibited in a concentration dependent manner after treatment with soluble divalent and trivalent iron at concentrations of 100-500 μmol/L.Western blotting analysis showed that the proliferating cell nuclear antigen （PCNA） expression following treatment with soluble divalent iron and trivalent iron at 100,300 and 500 μmol/L was reduced compared to the control.The PCNA expression decreased with increasing iron concentration and to a greater extent with the trivalent iron than with the divalent iron treatment group.The p53 expression was markedly increased in a concentration dependent manner in both iron treatment groups.Conclusion The soluble divalent iron and,to a greater degree trivalent iron,inhibited HASMC proliferation in a dosedependent manner,which may be attributed to reduction of PCNA expression and increase of p53 expression.     

Inhibitory effect of iron on in vitro proliferation of smooth muscle cells

at the cellular and protein levels of soluble divalent iron (ferrous gluconate) and soluble trivalent iron (ferric chloride) on the proliferation of human aortic smooth muscle cells (HASMC) in vitro.

Methods The WST-1 test was used to evaluate the effect of iron on proliferation of HASMC and Western blot was used to measure the levels of signaling proteins involved in proliferative and apoptosis pathways.

Results HASMC proliferation was inhibited in a concentration dependent manner after treatment with soluble divalent and trivalent iron at concentrations of 100-500μmol/L. Western blot analysis showed the proliferating cell nuclear antigen (PCNA) expression following treatment with soluble divalent iron and trivalent iron at 100, 300 and 500μmol/L was reduced compared to the control. The PCNA expression decreased with increasing iron concentration and to a greater extent with the trivalent iron than with the divalent iron treatment group. The p53 expression was markedly increased in a concentration dependent manner in both iron treatment groups.

Conclusions The soluble divalent iron and, to a greater degree trivalent iron, inhibited HASMC proliferation in a dose-dependent manner, which may be attributed to reduction of PCNA expression and increase of p53 expression.

     

反义c-myc寡核苷酸抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖

目的 观察反义c-myc寡核苷酸对大鼠气道平滑肌增殖的抑制作用。方法 大鼠气道平滑肌细胞原代培养，4－12代用于实验。利用Lipofectin将正义、反义及错配c-myc寡核苷酸导入大鼠气道平滑肌细胞，MTT法检测不同寡核苷酸对大鼠气道平滑肌细胞增殖的抑制作用，RT－PCR检测c-myc mRNA的表达，免疫组织化学染色检测c-myc蛋白的表达。结果 反义c-myc寡核苷酸可抑制大鼠气道平滑肌细胞增殖，且这种抑制作用呈浓度依赖性；反义c-myc寡核苷酸可降低c-myc mRNA的表达，同时降低了c-myc mRNA的翻译。结论 反义c-myc寡核苷酸可抑制大鼠气道平滑肌的增殖。     

黄芪舒张血管平滑肌的作用及机制

目的:探讨黄芪对血管平滑肌的舒张作用及其机制.方法:采用大鼠离体胸主动脉环灌流模型.在去除血管环内皮后,观察累积浓度黄芪对基础状态(基础组)、苯肾上腺素(PE)预收缩(苯肾上腺素组)、氯化钾预收缩(氯化钾组)的血管环的作用和黄芪对经无钙液(无钙液组)、无钙液加肝素(肝素组)、普萘洛尔(普萘洛尔组)预处理后的血管环的作用.结果:在血管内皮被去除后,黄芪对基础状态或氯化钾预收缩的血管环无影响;当黄芪浓度累积达(10-1、3×10-1、100、3×100)g/L时,对PE(3×10-7mol/L)预收缩的血管环产生剂量依赖性舒张作用(P<0.05).经无钙液预处理后,黄芪(3×100 g/L)对血管环的舒张作用未被阻断;但经无钙液加肝素预处理后,该作用被显著抑制(P<0.01);而普萘洛尔预处理不影响黄芪对PE预收缩血管环的舒张作用.结论:黄芪对去除内皮的血管具有舒张作用.其机制可能与阻断血管平滑肌细胞内质网上的三磷酸肌醇敏感的钙离子通道,抑制内钙的释放有关.     

大鼠趋化素样因子1对主动脉平滑肌细胞的趋化作用和增殖促进作用

目的:探讨大鼠趋化素样因子1(rat chemokine-like factor 1,rCklf1)对大鼠主动脉平滑肌细胞(aorticsmooth muscle cells,ASMC)的趋化作用和促增殖作用.方法:将rCklf1真核细胞表达载体瞬时转染293T细胞,收获培养上清液,分析rCklf1对大鼠ASMC的趋化作用.同时,用3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四唑(MTT)实验分析rCklf1真核细胞表达载体瞬时转染细胞上清液以及rCklf1在细胞内瞬时超表达对ASMC增殖的影响.结果:rCklf1真核细胞表达载体瞬时转染的293T细胞培养上清液对大鼠ASMC具有趋化作用,10倍稀释的转染上清液所趋化的细胞数是对照组的2.2倍,这种趋化作用可以被浓度为10μg/L的百日咳毒素(pertussis toxin, .PTX)抑制.同时,rCklf1对ASMC有促增殖作用,10倍稀释的rCklf1真核细胞表达质粒瞬时转染上清液和rCklf1在细胞内瞬时超表达均可以促进ASMC的增殖,光密度值分别为对照组的1.3和1.5倍.结论:rCklf1对大鼠ASMC具有促增殖作用和依赖于Gi蛋白偶联受体(Gi protein coupled receptor,GiPCR)的趋化作用,可能参与动脉粥样硬化的病理过程.     

天麻注射液对主动脉平滑肌细胞增殖的影响

在家兔主动脉血管平滑肌细胞离体培养基础上，应用细胞计数，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入及测定培养液中前列环素产物含量的方法。探讨天麻注射液及其有效成分天麻素对ＶＳＭＣ增殖的影响及作用机理。结果表明：天麻注射液能明显抑制ＶＳＭＣ数目的增长和细胞对＾３Ｈ－ＴｄＲ的摄取，并可增加ＰＧＩ２水解产物６－Ｋ－ＰＧＦ１α的释放，但天麻素却未发现上述抑制ＶＳＭＣ增殖作用，提示天麻注射液的抗ＶＳＭＣ增殖作用与天麻素无关，而ＰＧ